Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Тритерпеноиды, строение, классификация, биологическая активность 8
1.2. Теоретически обоснованный синтез лекарственных веществ с заданными фармакологическими свойствами 12
1.3. Туберкулез, лечение, механизмы действия противотуберкулезных средств 17
1.3.1. Препараты, применяемые для лечения туберкулеза 19
1.4. Таблетированные лекарственные формы. Современное состояние вопроса 21
1.4.1. Прессуемые вещества, их влияние на качество таблеток 22
1.4.2. Роль вспомогательных веществ в создании таблеток 23
1.4.3. Исследования по таблетированию лекарственных веществ 25
Заключение по обзору литературы 25
Глава 2. Материалы и методы исследования 28
2.1. Объекты исследования 28
2.2. Технологические методы исследования 28
2.2. Физико-химические методы исследования 33
2.3. Биологические методы 34
2.3.1. Объекты исследования 34
2.3.2. Острая токсичность 35
2.3.3. Определение гепатотоксичности 35
2.3.4. Определение чувствительности микобактерий туберкулеза 35
2.3.5. Определение антимикробной активности 37
2.3.6. Определение перекисного окисления липидов in vitro 37
2.3.7. Определение перекисного окисления липидов in vivo 37
2.4. Методы статистической обработки результатов 39
Глава 3. Технологические исследования сырья 40
3.1. Технологические исследования сырья коры березы 40
3.1.1. Изучение товароведческих и технологических характеристик вторичных отходов коры березы 40
3.2. Технология суммарного тритерпеноидного фитокомплекса из коры березы и выделение субстанции бетулина 42
3.2.1. Получение суммарного фитокомплекса из коры березы 42
3.2.2. Выделение субстанции бетулина из суммарного фитокомплекса 44
Глава 4. Теоретическое прогнозирование фармакологического действия и технология направленного синтеза производных бетулина 53
4.1. Общая .методика теоретического прогнозирования 53
4.2. Прогнозирование биологического действия бетулина и его синтетических производных 65
4.3. Технология синтеза дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобета) 75
Выводы к главе 79
Глава 5. Исследование биологической активности бетулина и его синтетического дихлорциклопропанового производного (циклобета) 80
5.1. Изучение общетоксического действия бетулина и циклобета 80
5.1.1. Острая токсичность 80
5.1.2. Определение гепатотоксичности бетулина и циклобета 81
5.2. Противотуберкулезная активность циклобета 82
5.3. Влияние циклобета на микрофлору кишечника 86
5.4. Подбор оптимальной дозы циклобета 88
Выводы к главе 90
Глава 6. Исследование механизма действия нового дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобета) 91
6.1. Изучение перекисного окисления липидов in vitro 91
6.2. Изучение перекисного окисления липидов in vivo 92
Выводы к главе 96
Глава 7. Исследования по разработке состава и технологии таблеток дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобета) 97
7.1. Изучение основных физико-химических и технологических свойств субстанции циклобета и прогнозирование способа получения таблеток 97
7.2. Разработка оптимальных условий гранулирования и таблетирования субстанции циклобета 101
7.3. Разработка состава и технологической схемы производства таблеток циклобета. 107
7.4. Стандартизация таблеток циклобета 112
Выводы к главе 116
Общие выводы 117
Литература 119
Приложение 129
- Тритерпеноиды, строение, классификация, биологическая активность
- Выделение субстанции бетулина из суммарного фитокомплекса
- Противотуберкулезная активность циклобета
- Стандартизация таблеток циклобета
Введение к работе
Актуальность темы. Изыскание эффективных лекарственных средств на основе природных соединений для профилактики и лечения различных заболеваний относится к числу актуальных проблем современной фармации. Лекарственные препараты, содержащие тритерпеноиды и соответствующие фитокомплексы, обладают широким спектром биологического действия, который связан с влиянием этих соединений на различные группы ферментных систем (каталазу, пероксидазу, карбоксипептидазу, ацетилхолинэстеразу и т.д.). Заслуживает внимания свойство природных тритерпеноидов служить исходным материалом для полусинтеза производных с наиболее выраженным фармакотерапевтическим эффектом. Такой опыт уже имеется в отношении производных глицирризиновой кислоты, создание которых позволило использовать тритерпеноиды солодки в медицинской практике.
Другой перспективной моделью для реализации усиления терапевтического воздействия и расширения спектра фармакологического эффекта являются тритерпеноиды, выделенные из коры березы, в частности, бетулин. Бетулин по химической структуре представляет собой 20(29)-лупен-3(5,28-'диод. Вещество обладает антисептическими свойствами, т.е. может быть использовано как предмет компьютерного прогноза биологической активности, причем в социально значимом и востребованном направлении получения производных, обладающих противотуберкулезным действием.
Использование современных компьютерных технологий при исследовании структурных особенностей отдельных классов природных веществ открывает перспективы теоретического прогнозирования антибактериальных препаратов с ожидаемой активностью с минимальными затратами финансовых и трудовых ресурсов.
Указанные выше направления подтверждают актуальность проводимых исследований.
Цель и задачи исследования. Цель настоящих исследований -разработка таблетированной лекарственной формы для синтезированного на основе целенаправленной химической модификации мажорного тритерпеноида коры березы (бетулина) высокоэффективного антимикробного соединения. Для реализации данной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Предложить оптимальную технологическую схему выделения чистого бетулина (20(29)-лупен-3(3,28-диола) из экстракта коры березы.
-
Теоретически обосновать возможность синтеза на основе бетулина нового вещества с заданным фармакологическим действием.
-
Разработать оригинальный вариант синтеза нового дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобет), разработать его технологическую схему.
-
Исследовать токсичность бетулина и циклобета на здоровых животных.
-
Изучить действие циклобета на микобактерии туберкулеза.
-
Установить основные составляющие механизма действия циклобета in vitro и in vivo.
-
Разработать состав и технологию лекарственной формы, содержащей циклобет и обеспечивающей его противотуберкулезный эффект.
-
Разработать методику качественного и количественного определения дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобета) в таблетках.
Научная новизна
Разработан оптимальный способ выделения индивидуального бетулина из
суммарного экстракта коры березы. Теоретически обоснована возможность
синтеза дихлорциклопропанового производного бетулина с
противотуберкулезным действием. Впервые осуществлен синтез 19-(2,2-дихлоро-1-метил-циклопропил)-лупан-3,28-диола, который получил рабочее название циклобет. Установлена низкая токсичность бетулина и циклобета, соответствующая по шкале токсичности практически нетоксичным веществам. Впервые изучено влияние циклобета на микобактерии туберкулеза. Выявлено, что по своему противотуберкулезному действию циклобет не уступает аналогичному влиянию официнальных лекарственных препаратов (в частности, рифампицина). Отмечено, что в противотуберкулезном действии циклобета существенное место принадлежит усилению прооксидантной активности. Разработан состав и технология таблетированной лекарственной формы, содержащей циклобет. Установлены особенности технологии производства данного БАВ. Разработана методика контроля качества полученных таблеток
5 Практическое значение работы
Проведенные исследования выявили противотуберкулезную активность циклобста. Результаты исследований могут служить экспериментальным обоснованием для разработки на основе полученного БАВ новых лекарственных средств для терапии больных туберкулезом, т.е. настоящие исследования посвящены социально значимому направлению в медицине.
Внедрение результатов исследования в практику
Проведена апробация и внедрение результатов исследований на
предприятиях: Институт цитологии и генетики РАН и НПР информационных
систем и технологий «Сплайн» - акты внедрения научной разработки по
наработке субстанции циклобет и использовании методики получения
дихлорциклопропановых производных; ООО Квантум Фармасьютикалс - акт
внедрения научной разработки на способ прогнозирования
противотуберкулезной активности органических молекул, ОАО «Ирбитский ХФЗ» - акт апробации технологии таблеток циклобет. Новизну исследований подтверждает наличие соответствующей приоритетной справки Российского агентства по патентам и товарным знакам Российской Федерации на изобретение: «Дихлорциклопропановое производное пентациклического тритерпеноида бетулина, обладающее противотуберкулезным действием». Разработан проект технических условий на «Производное бетулина из внешней коры березы с мягким туберкулостатическим эффектом, биологически активная добавка».
Основные положения, выносимые на защиту
1. Результаты апробации технологической схемы выделения чистого бетулина
из суммарного препарата путем перекристаллизации в бутаноле.
-
Способ синтеза нового соединения - циклобет - с заданным противотуберкулезным действием путем межфазного дихлорциклопропанирования.
-
Результаты исследований острой токсичности и гепатотоксичности бетулина и циклобета.
-
Данные исследования по противотуберкулезной активности дихлорциклопропанового производного бетулина (циклобета), связанной с прооксидантным эффектом.
5. Результаты исследования и разработки . состава таблетированной лекарственной формы, содержащей циклобет.
Апробация и публикация результатов исследования
Результаты работы доложены на Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г. Москва, 2001-2004 гг.), а также на 54-й, 56-й, 58-й, 59-й региональных конференциях по фармации, фармакологии и подготовке кадров ПятГФА (г. Пятигорск, 1999 г., 2001 г., 2003 г., 2004 г.). По теме диссертации опубликовано 10 работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (№ государственной регистрации 01.99.0010422).
Объем и структура диссертации
Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 таблицами и 16 рисунками. Состоит из введения, 7 глав (одна из которых посвящена обзору литературы, 6 - собственным исследованиям), общего заключения, выводов и списка литературы.
Тритерпеноиды, строение, классификация, биологическая активность
Тритерпеноиды - наиболее распространенные представители класса терпеноидов, которые изучаются уже более 100 лет. В современной классификации практикуется разделение тритерпеноидов на три сложные группы: 1) амбреина и сквалена; 2) тетрациклические тритерпеноиды; 3) пентациклические тритерпеноиды. В свою очередь третья группа, наиболее многочисленная, подразделяется на три подгруппы: группа а-амирина, группа Р-амирина и группа лупеола. Это деление, по мнению некоторых ученых, например, де Майо (de Mayo), произвольно. Сейчас установлена единая биогенетическая схема для всех тритерпеноидов с 30 атомами углерода [88]. При этом исходят из того, что их предшественником является либо сквален, либо эквивалентная ему система (Рис. 1.).
Анализ доступной литературы показал, что группа лупеола, несмотря на достаточную распространенность в природе, является малоизученной.
Разнообразие физико-химических свойств, особенности структуры, характер и состав углеводной цепи определяют значительный спектр биологической активности тритерпенов [40, 41]. Генетически и по структуре эти соединения близки к физиологически важной группе стероидных гормонов [85].
Тритерпеноиды участвуют в регуляции жизнедеятельности растительных и животных организмов на уровне изменения состояния молекулярных механизмов, клеток, органов и всего организма. Это обусловлено, по-видимому, влиянием тритерпеноидов на состояние мембран клеток [46].
О биологической активности бетулина известно с 1899 г., когда отметили антисептические свойства бетулина и рекомендовали его для стерилизации пластырей и бинтов [69]. Бетулин использовали также для снятия зуда. Бетулин, лупеол и бетулиновая кислота идентифицированы в эфирном экстракте из коры В. utilis, используемой в индийской медицине также в качестве антисептика [5].
Большинство тритерпеноидов обладают незначительной токсичностью. Для различных групп этих соединений LD50 превышает 22,5 мг/кг при внутривенном и 350 мг/кг при пероральном введении. Исключение составляют гликозиды из календулы лекарственной, внутривенное и подкожное введение которых вызывает токсичное и побочное действие [124].
Учитывая широкий спектр биологического действия тритерпеноидов, ряд российских и зарубежных групп ученых из США, Индии и других стран проводят фармакологическое изучение группы лупана. В ходе работ выяснено, что экстракты из растений, содержащие тритерпеноиды этой группы проявляют противогриппозную [67], противоязвенную [105, 57], антистрессорную, ангиопротекторную [Ю4], антиэкссудативную, антиокислительную [59] виды активности. В настоящее время пентациклические тритерпены ряда лупана, а так же их производные, привлекли внимание ученых-онкологов Химического факультета Государственного Университета Миссисипи, Национального Центра химиотерапевтического лечения рака, Университета Каролины и ряда других НИИ США. Ими было установлено, что бетулиновая кислота, полученная из коры Ziziphus mauritiana, обладала антимеланомной цитотоксической активностью без побочных эффектов [13]. В 1972 году в Фармацевтическом колледже университета Аризоны было выяснено, что хлороформный экстракт Alnus oregona обладает противоопухолевой активностью по отношению к опухоли Walker 256. Были идентифицированы две составляющие экстракта: лупеол и бетулин, которые, по-видимому, обуславливают эту активность [99, 66]. В нашей стране проблемой противоопухолевой активности бетулиновой кислоты и ее производных занимались в Тихоокеанском институте биоорганической химии в 1977 году. Было выяснено, что даммарановые тритерпеноиды способны влиять на природу и скорость деления яйцеклетки морского ежа [116].
Бетулиновая кислота проявляет цитостатическую активность против carcinoma cell line-115 толстой кишки [38]. Бетулин, бетулиновая кислота и лупеол оказывают ингибирующее действие на вирус Эпштейна-Барра. Высокой ингибирующей активностью по отношению к этому вирусу в лимфобластоидных клетках Раджи обладают эритродиол и бетулиновая кислота [19]. Диацетат бетулина, другие ацилоксипроизводные с С 18, тозилоксипроизводные являются активными компонентами противоопухолевых средств [90].
Группа российских ученых показала, что биологически активные вещества на основе бетулина, выделенного из сульфатного мыла, такие как окси- и ацетильные производные, оказывали выраженный канцеростатический эффект на карциносаркому Уокера и асцитную опухоль Эрлиха [52].
Американскими учеными было установлено, что производные лупана обладают активностью по отношению к цитопатогенному действию ВИЧ, которая основана на ингибировании образования транскриптазы, что делает возможным использование этих производных для профилактики и лечения СПИДа [117]. Бетулиновая и платановая кислоты из Syzigium claviflorum являются ингибиторами репликации ВИЧ, причем эффект тритерпенов направлен на уровне клетки или вируса [91].
В ПятГФА на кафедре технологии лекарств проводились работы, направленные на выделение тритерпеноидного комплекса из коры березы. Были найдены оптимальные условия для экстракции фитокомплекса, разработаны лекарственные формы на его основе [110]. Установлено наличие в составе экстракта бетулина, лупеола, бетулинового альдегида, бетулиновой кислоты, лупенона, урсоловой кислоты, олеаноловой кислоты и т.п. Бетулин и бетулиновая кислота из комплекса направленно не выделялись и не изучались.
На кафедре биологической химии ПятГФА проф. Василенко Ю.К. с соавторами осуществлялось изучение влияния этого комплекса на функции печени и желчного пузыря. Была установлена гиполипидемическая, антилитогенная и гепатозащитная активность экстракта, превышающая влияние соответствующих официнальных препаратов. Сумма тритерпеноидов также благоприятно воздействовала на жировую дистрофию печени [125].
Бетулин, лупеол и бетулиновая кислота проявляют бактериостатическую активность против Escherichia coli, Salmonella typhi, Shigella flexneri и Staphylococcus aureus [24].
В работе [47] изучено влияние шести тритерпеноидов, в том числе бетулина, его диацетата и аллобетулина, на резистентность организма к повреждающим воздействиям и установлено, что заслуживает внимания гастропротекторная активность бетулина.
Таким образом, анализ литературных данных, касающихся различных видов биологической активности тритерпеноидов, показал высокую фармакологическую активность этой группы природных соединений. Следовательно, поиск перспективных лекарственных средств на основе тритепеноидов, в частности, бетулина, может быть оправдан.
Выделение субстанции бетулина из суммарного фитокомплекса
Нами была проведена сравнительная оценка методов выделения и очистки субстанции бетулина из суммарного хлороформного экстракта "Бетуленол". Анализ доступной литературы показал, что имеющиеся способы выделения этого соединения трудоемки и дорогостоящи.
Выделение бетулина экстракцией ацетоном и гексаном. Способ применялся финскими учеными Era V., Jaaskelainen P., Ukkonen К. для получения бетулина с целью его дальнейшего превращения в соответствующие полиуреаты (1980 г.) Выход чистого бетулина в пересчете на исходную сумму тритерпеноидов составляет 34,02-35,35 %. Метод представляется достаточно трудоемким. Выделение бетулина методом хроматографии на колонке с оксидом алюминия. Методика предложена Г.А. Толстиковым в 1967 году. Выход бетулина - ок. 21 %. Способ трудоемок, требует значительных количеств сорбента и растворителя для элюирования. Требуется дополнительное время для регенерации сорбента и растворителей.
Получение бетулина путем перевода его в дшщетат с последующим гидролизом. Метод описан Pasich J. в 1964 году и Г.А. Толстиковым в 1967 г. Выход сырого бетулина составил 45-50 %, но чистота полученной субстанции невысока (разброс Тпл. составил 5С).
Особого внимания заслуживает метод получения бетулина методом прямой кристаллизации из суммарного препарата. При этом используются различные органические растворители (бензол, толуол, гексан, ЧХУ и пр.)
Нами была разработана новая методика выделения бетулина путем трехкратной перекристаллизации из бутилового или изопропилового спирта, отличающаяся от известных методов высокой степенью чистоты целевого продукта.
Для этого мы растворяли 10,0 суммарного препарата в 100 мл н-бутанола при нагревании и перемешивании. Добавляли 1,0 активированного угля, кипятили в течение 10 мин с обратным холодильником. По истечении времени проводили горячее фильтрование раствора. Фильтрат помещали в прохладное место на 24 часа. Выпавшие кристаллы отделяли от маточного раствора и сушили в сушильном шкафу при 100 С 30 мин. Полученное вещество перекристаллизовывали еще дважды по вышеописанной методике. Тпл .= 252С.
Проводилась проба смешения с заведомо чистым образцом бетулина (Sigma) - депрессии температуры плавления не наблюдалось.
Проведена хроматография в тонком слое сорбента (ТСХ). Полученная хроматограмма представлена на рис. 2. Rf для испытуемого образца и заведомо чистого бетулина составило 0,74. Посторонних пятен на хроматограммах не обнаружено, т.е. полученный бетулин имеет хроматографическую чистоту.
Анализируя причины более эффективной экстракции бетулина бутанолом по сравнению с менее полярными гексаном и ацетоном, мы пришли к выводу, что бутанол обладает большей тропностью (сродством) по отношению к спиртам с углеводородным остатком средней длины.
Таким образом, предложена технологическая схема выделения чистой субстанции бетулина из суммарного фитокомплекса коры березы, представленная на рис. 6.
Противотуберкулезная активность циклобета
Среди многообразия инфекционной патологии туберкулез является одной из наиболее распространенных и вместе с тем наиболее опасных для человека хронических инфекций. В течение последних лет в Российской Федерации отмечается резкое ухудшение эпидемиологической ситуации по туберкулезу, что проявляется ростом показателей заболеваемости и смертности [92].
Основным методом лечения больных туберкулезом является химиотерапия. В настоящее время по рекомендации ВОЗ требуется одновременное применение 4 и даже 5 противотуберкулезных препаратов. В последние годы, однако, появилась тенденция к затяжному течению и хронизации процесса с развитием лекарственной устойчивости у возбудителя заболевания (Селицкая Р.П.). Первичная лекарственная устойчивость регистрируется почти у четверти впервые выявленных больных туберкулезом легких, вторичная - у 30-40 %, а среди пациентов-хроников устойчивость достигает 70% (Северин Е.С., Зыкова И.Е., Хомяков Ю.Н.). Эти показатели свидетельствуют о недостаточной эффективности проводимой терапии. Одной из главных причин снижения эффективности химиотерапии являются побочные реакции на противотуберкулезные препараты. В результате комплексного клинико-лабораторного исследования установлено, что побочные реакции чаще развиваются на конкретный противотуберкулезный препарат, а именно на изониазид, рифампицин, стрептомицин. В их структуре 45,7% составляют токсические реакции, 37 % -аллергические реакции, в 17,3% случаев отмечаются реакции смешанного типа [93].
Однако остается актуальной проблема сокращения сроков химиотерапии и уменьшения лекарственной нагрузки на организм больного (Селицкая Р.П). Применение рациональных схем антибактериальной терапии направлено на устранение инфекционного компонента, но при этом часто сохраняются, а иногда и усугубляются нарушения функционирования иммунной системы макроорганизма, что в свою очередь оказывает негативное влияние на исход заболевания (Литвинов В.И.).
Таким образом, рост заболеваемости туберкулезом сопровождается появлением устойчивых форм микобактерий на фоне снижения резистентности макроорганизма и развитии побочных токсико-аллергических реакций на основные противотуберкулезные препараты, что затрудняет проведение эффективной химиотерапии. Сложившаяся ситуация побуждает искать новые вещества, перспективные для лечения туберкулезной инфекции. Для стандартных противотуберкулезных препаратов ранее установлены следующие пороговые концентрации (в скобках указаны обозначения препаратов в таблице 12) (работа проводилась на базе Пятигорского туберкулезного диспансера):
- стрептомицин - 10 мг/мл (1);
- изониазид - 2 мг/мл (2);
- канамицин - 45 мг/мл (3);
- рифампицин - 20 мг/мл (4);
- этамбутол - 7,5 мг/мл (5);
- протионамид - 30 мг/мл (6);
- хлорциклопропановое производное бетулина - не устанавливалось (Б).
Как следует из экспериментальных данных, исследуемое вещество проявляет выраженную противотуберкулезную активность, причем в девяти случаях из двадцати наблюдалось полное ингибирование роста МБТ, в пяти случаях - активность на уровне официнальных препаратов, а в одном случае - отсутствие активности.
Испытание циклобета на противотуберкулезную активность показало, что в 45% случаев произошло угнетение микобактерии туберкулеза (рис 12.) Полученные результаты этих опытов послужили основанием для продолжения исследований по выявлению механизма действия производного.
В числе особенностей следует отметить легкость растворения вещества в спирте этиловом и других органических растворителях, что значительно облегчает проведение эксперимента и, безусловно, является положительным кинетическим фактором.
Стандартизация таблеток циклобета
Качественное определение в таблетках проводили после экстракции циклобета хлороформом из измельченной таблеточной на содержание хлорид-иона и на тритерпеновое ядро. Содержание хлорид-иона определяли по реакции с нитратом серебра после сжигания соединения в муфельной печи. Наличие тритерпенового ядра определяли спектрофометрическим методом в УФ-области (максимум поглощения раствора циклобета 245±2 нм).
Определение количественного содержания циклобета в таблетках проводили методом спектрофометрии, разработанным профессором Э.Т. Оганесяном с соавторами для тритерпеноидов, т.к. в основе производного лежит ядро бетулина, а максимум поглощения в УФ-области спектра при 310 нм не изменяется при введении в молекулу терпена различных замещающих групп. Описание методики для чистой субстанции дано в главе 2 (2.2.20).
Около 0,040 (точная навеска) порошка десяти растертых таблеток растворяли в 30 мл хлороформа и отфильтровывали в мерную колбу вместимостью 100 мл, остаток промывали дважды хлороформом (по 30 мл), отфильтровывали через тот же фильтр и доводили до метки хлороформом. 1,0 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворитель удаляли нагреванием на водяной бане. К сухому остатку добавляли 5 мл концентрированной серной кислоты и нагревали на водяной бане до полного растворения остатка. После охлаждения доводили объем раствора до метки концентрированной серной кислотой. Раствор перемешивали, термостатировали при 70С в течение 1 часа, перемешивали и после охлаждения определяли оптическую плотность раствора относительно концентрированной серной кислоты на спектрофотометре в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 310 нм.
Параллельно проводили определение оптической плотности водного раствора стандартного образца калия бихромата относительно воды на спектрофотометре в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 310 нм.
Содержание цикл обета в таблетках (X) вычисляли по формуле
Из данных таблицы видно, что количественное содержание циклобета соответствует требованиям Государственной Фармакопеи по показателю «количественное содержание действующих веществ».
С целью установления срока годности таблеток циклобета были наработаны таблетки, которые мы исследовали методом искусственного старения [56]. Использование метода позволило значительно сократить время, необходимое для установления срока годности.
Таблетки фасовали по 10 шт. в банки с навинчивающимися крышками и закладывали в термостат при предельной температуре 60С. Определение проводили на трех партиях. Наблюдение за качеством таблеток проводили по показателям, предусмотренным НД. Показатели качества таблеток в процессе «ускоренного старения» определяли через промежутки времени, равные 11,5 сут. Окончанием экспериментального хранения считали истечение 3,5 года срока годности при температуре 20 С. (68 сут.), используя правило Вант-Гоффа о 2-4 кратном росте скоростей химических реакций при увеличении температуры на 10 С. Расчеты проводили, руководствуясь указаниями Временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре [56]. Результаты определения основных показателей качества таблеток представлены в табл. 26
Из анализа приведенных данных (табл. 26) следует, что таблетки циклобета после хранения в течение 3,5 лет соответствуют требованиям нормативной документации (Государственная фармакопея, статья «Таблетки»), и срок годности может быть установлен 3,5 года.
