Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЯБЛОК, МЕТОДЫ ИХ АНАЛИЗА, ВЫДЕЛЕНИЯ, ОЧИСТКИ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
1.1. Химический состав яблок 10
1.2. Разработка технологии биологически активных веществ из растительного сырья 12
1.2.1. Технология выделения и очистки гидрофильной фракции биологически активных веществ из яблок 14
1.2.2. Технология выделения и очистки тритерпеноидов 16
1.3. Методы анализа биологически активных веществ из яблок 18
1.3.1. Методы анализа аминокислот 19
1.3.2. Методы анализа пектиновых веществ 22
1.3.3. Методы анализа фенольных соединений 24
1.3.4. Методы анализа тритерпеноидов 28
1.4. Фармакологическая активность биологически активных веществ из яблок 30
1.4.1. Фармакологическая активность гидрофильной фракции биологически активных веществ из яблок 31
1.4.2. Фармакологическая активность тритерпеноидов 35
Выводы к литературному обзору 39
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования 40
2.2. Методы исследования 41
2.2.1. Методы выделения и стандартизации випома 42
2.2.2. Технология кислотного гидролиза и анализ связанных аминокислот шрота яблок 42
2.2.3. Исследование антирадикальной активности випома 46
2.2.4. Методы выделения и анализа помала 47
2.2.5. Методы выделения пектиновых веществ 48
2.2.6. Стандартизация лекарственных форм випома и помала 49
2.2.7. Биофармацевтические исследования випома и лекарственных форм на его основе 50
ГЛАВА 3. СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОДУКТОВ НИНГИДРИНОВОЙ РЕАКЦИИ
3.1. Исследование спектральных характеристик продуктов реакции а-аминокислот 52
3.2. Оптимизация условий проведения реакции а-аминокислот 55
3.3. Исследование аналитических возможностей предлагаемого метода 58
Выводы к главе 3 65
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА КОМПЛЕКСНОЙ ТЕХНОЛОГИИ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ ОТХОДОВ ЯБЛОК
4.1. Разработка технологии получения випома 66
4.1.1. Оптимизация технологии экстрагирования випома 66
4.1.2. Стандартизация випома 68
4.1.3. Исследование стабильности випома по срокам хранения 71
4.1.4. Анализ а-аминокислот шрота яблок после кислотного гидролиза 73
4.1.5. Биофармацевтическое исследование випома 74
4.1.6. Исследование фармакологической активности випома 75
4.2. Разработка технологии помала 80
4.2.1. Оптимизация процесса экстрагирования помала 80
4.2.2. Выделение и очистка помала 82
4.2.3. Стандартизация помала 83
4.2.4. Исследование стабильности помала по срокам хранения 84
4.3. Технологическая схема по комплексной переработке шрота яблок 86
Выводы к главе 4 88
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТІСА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НА ОСНОВЕ СУБСТАНЦИЙ ИЗ ШРОТА ЯБЛОК
5.1. Разработка лекарственных форм на основе випома 89
5.1.1. Разработка технологии раствора випома 89
5.1.2. Разработка технологии гранул випома в капсулах 93
5.1.3. Разработка технологии мази випома 98
5.1.3.1. Исследование ранозаживляющей активности мази випома 105
5.2. Разработка технологии гранул помала в капсулах 109
Выводы к главе 5 118
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ 120
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 122
ПРИЛОЖЕНИЯ 140
- Химический состав яблок
- Материалы исследования
- Исследование спектральных характеристик продуктов реакции а-аминокислот
Введение к работе
Актуальность темы. Актуальной проблемой современного здравоохранения является разработка технологии эффективных лечебно-профилактических средств, обладающих низкой токсичностью.
Особую ценность представляет переработка отходов растительного сырья кондитерской, пищевой, фармацевтической промышленности. Например, из промышленных отходов травы чабреца разработан лекарственный препарат «Тери-серп», а из промышленных отходов плодов облепихи - «Гипурам», содержащие тритерпеноиды и обладающие гиполипидемическим, противоатеросклеротиче-ским, кардиотоническим, иммуномодулирующим и антиаллергическим действием. С этой точки зрения исследование промышленных отходов растительного сырья является актуальной задачей фармации.
Промышленные отходы яблок содержат ценные в биологическом отношении вещества: тритерпеноиды, полифенолы, пектины, аминокислоты и другие кислоты, углеводы, витамины. Однако яблоки, как сырьевой источник для выделения биологически активных веществ (БАВ), в современной медицинской практике не применяются.
Ранее была предложена технология получения субстанции из шрота яблок, содержащей тритерпеноиды и являющейся аналогом терисерпа по фармакологической активности. Однако следует отметить, что, после выделения целевого продукта, в сырье остаются ценные БАВ: полифенолы, аминокислоты, пектины и др. Так, полифенолы и аминокислоты обладают антиоксидантной, антирадикальной, гепато- и радиопротекторной, желчегонной активностью, усиливают регенеративные процессы. Пектины характеризуются энтеросорбционным и гиполипидемическим действием.
Таким образом, одной из актуальных задач фармации является разработка технологии по комплексной переработке шрота яблок для получения суммарных очищенных субстанций БАВ.
Не менее актуальной задачей фармации является разработка технологии лекарственных форм (ЛФ) на основе полученных субстанций, а также разработка доступных и точных методов стандартизации субстанций и ЛФ на их основе.
Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является разработка технологии комплексной переработки шрота яблок для вьщеления и очистки субстанций БАВ и разработка ЛФ на их основе.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
разработать технологию выделения, очистки и методы анализа гидрофильных БАВ;
разработать технологию выделения, очистки и методы анализа суммы тритерпеноидов;
разработать технологии ЛФ на основе гидрофильных БАВ и суммы тритерпеноидов;
исследовать фармакологическую активность полученных субстанций и ЛФ;
исследовать стабильность разработанных субстанций и ЛФ по срокам хранения;
- разработать НТД на полученные субстанции и ЛФ на их основе.
Научная новизна. Впервые разработана технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая последовательно получать гидрофильные БАВ и сумму тритерпеноидов.
Разработана технология гидрофильных БАВ под условным названием «Ви-пом» с содержанием 0,533±0,005 % аминокислот, 1,750±0,010 % фенольных соединений, 2,76±0,02 % пектиновых веществ. Целевой продукт обладает антирадикальной, желчегонной, гепатопротекторной, гипохолестеринемической активностью и ранозаживляющим действием. Способ получения випома защищен патентом № 2339391 РФ от 27.11.2008 г.
Разработана технология суммы тритерпеноидов под условным названием «Помал» с выходом 4,92±0,04 % и с содержанием тритерпеновых веществ не менее 80 %. Помал характеризуется гиполипидемической, гипохолестеринемической активностью и является аналогом лекарственного средства (ЛС) терисерп, для которого установлено гиполипидемическое, противоатеросклеротическое, антилито-генное, кардиотоническое, антиаллергическое и иммуномодулирующее действие.
Разработаны технологии раствора випома (корригированной ЛФ), гранул випома в капсулах и мази випома, соответствующих требованиям ГФ XI.
Раствор випома и гранулы випома в капсулах могут быть рекомендованы для лечения заболеваний сердечно-сосудистой и гепатобиллиарной систем. Мазь випома характеризуется оптимальными тиксотропными свойствами и обладает выраженной ранозаживляющей активностью.
Разработан доступный и достаточно точный метод количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах, основанный на спектрофотометрии продуктов нингидриновой реакции.
На основе гиполипидемического средства - помала разработана технология гранул помала в капсулах, соответствующих требованиям ГФХІ.
Практическая значимость и внедрение результатов работы. На основании проведенных исследований разработаны:
- способ получения випома, защищенный патентом № 2339391 РФ от
27.11.2008 г;
лабораторный регламент ЛР-СШЯ-01-08 на производство випома (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);
лабораторный регламент ЛР-СШЯ-02-08 на производство помала (утвержден ОАО НПГ «Сады Придонья» 28.12.2007 г);
проекты ФСП на випом и его ЛФ (раствор випома, гранулы випома в капсулах и мазь випома);
проекты ФСП на помал и его ЛФ - гранулы помала в капсулах;
методические рекомендации «Отходы промышленной переработки (шрот) яблок ОАО НПГ «Сады Придонья» - богатый источник ценных биологически активных веществ» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 30.11.2007 г);
методические рекомендации «Использование нингидриновой реакции для количественного определения се-аминокислот в различных объектах» (утверждены Комитетом по здравоохранению Администрации Волгоградской области 21.06.2007 г);
Материалы методических рекомендаций размещены на официальных сайтах Волгоградского государственного медицинского университета (ВолГМУ) (). Комитета по здравоохранению Администрации Волгоградской области () и используются с 2007 г в лекционных курсах и лабо-
раторньгх занятиях при подготовке провизоров и интернов разных специальностей на кафедрах фармакологии и биофармации ФУВ, фармацевтической и токсикологической химии (ГОУВПО «ВолГМУ»), фармацевтической и токсикологической химии с курсом аналитической химии (ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет»), фармацевтической и аналитической химии (ГОУ ВПО «Дальневосточный государственный медицинский университет»), фармации (ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет»), фармацевтической технологии (ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия»).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «ВолГМУ» по проблеме «Фармация» кафедры фармацевтической технологии и биотехнологии (№ государственной регистрации 012007 06751).
Апробация работы и публикации. Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на Всероссийском научном форуме «Инновационные технологии медицины XXI века» (Москва, 2006), 3-й Международной выставке «О ходе реализации приоритетного национального проекта Здоровье» (Москва, 2007), 14-й Международной фармацевтической выставке «Аптека-2007» (Москва, 2007), итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ (2002-2006, 2008), региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области (2003, 2004,2006).
По материалам исследований диссертационной работы опубликовано 19 научных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых ВАК журналах. Новизна проведенных исследований подтверждается защитой патента РФ.
Основные положения, выносимые на защиту:
технология комплексной переработки шрота яблок, позволяющая получать субстанции БАВ - випом и помал;
технология ЛФ на основе полученных субстанций - раствора випома, гранул випома в капсулах, мази випома и гранул помала в капсулах;
методики количественного определения аминокислот в растительном сырье, субстанциях, ЛФ и лекарственных препаратах;
- прогноз и исследование взаимосвязи между антирадикальной и другими видами фармакологической активности субстанций из шрота яблок.
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (главы 2-5), общих выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 186 страницах машинописного текста (из них 47 страниц приложений), содержит 41 таблицу, 19 рисунков, 186 библиографических источников, из которых 41 на иностранных языках.
Химический состав яблок
Яблоня - самая распространенная плодовая культура стран с умеренным и субтропическим климатом. Из 10 тысяч разновидностей яблони, описанных в помологических атласах, только более 100 имеют промышленное значение [29,144].
Свежие яблоки содержат 83-86 % воды, 13 % безазотистых экстрактивных веществ, 0,4 % белка, 1,3 % клетчатки, воск, фурфурол, углеводы, витамины, ка-ротиноиды, микро- и макроэлементы, эфирное масло, тритерпеноиды, пектины (от 0,8 % у летних сортов до 1,4 % у зимних), фенольные соединения и органические кислоты (аскорбиновая, винная, фолиевая). Семена содержат до 33 % жирного масла, около 0,6 % амигдалина, эфирное масло, фитонциды [29, 119, 184].
Шрот яблок содержит до 5 % пентациклических тритерпеноидов (в пересчете на абсолютно сухое сырье), среди которых преобладает кислота урсоловая. Кроме того, в кожице яблок обнаружена кислота 2а-гидроксиурсоловая [119, 183]. Из яблок сорта Аппигса, растущих на юге Италии, выделен новый тритер-пеноид урсанового ряда - кислота 1а;19а-дигидроксиурсоловая, названная кислотой аннуркоевой. Установлено, что выделенное вещество характеризуется выраженной антиоксидантной (АО) и антирадикальной (АР) активностью в опытах in vitro [148].
В яблоках содержатся 17 а-аминокислот, из которых 7 незаменимых. В кожице и семенах преобладает кислота глутаминовая (17,8 г и 33,9 г на 100,0 г белка, соответственно), в мякоти - кислота аспарагиновая (20,0 г на 100,0 г белка) [139]. В результате кислотного гидролиза шрота яблок получены образцы пектинов, обогащенные а-аминокислотами, в том числе незаменимыми, которые могут быть использованы в качестве средств для лечебно-профилактического питания [136, 138, 139].
Различные сорта яблок содержат кислоту аскорбиновую и полифенольные соединения, присутствие которых, в основном, обусловливает высокую АО и АР активности яблок и продуктов их переработки [147, 161, 162].
В яблоках сорта Кермерриан и французских сидорных сортах методом ВЭЖХ определено содержание фенольных веществ (производные кислоты окси коричной, флаван-3-олы, флавонолы и дигидрохалконы). Установлено, что в яблоках доминируют флаван-3-олы, особенно процианидины [164, 180].
Несмотря на различия в полифенольном составе отдельных сортов яблок, кожица наиболее богата данными соединениями, особенно кверцетином и рутином [159, 175, 180]. В то же время, в мякоти всех сортов яблок преобладают фла-ван-3-олы и кислоты гидроксикоричные, содержание которых составляет от 86 до 95 % от общего количества полифенольньгх соединений [158]. Ценным источником полифенолов является также сердцевина яблок, в которой содержание указанных БАВ более чем в 5 раз выше, чем в мякоти [179]. Установлено, что по мере созревания яблок содержание веществ с Р-витаминной активностью увеличивается до 103-224 мг % [86]. Однако не удалось выявить корреляции между АО активностью яблок и содержанием отдельных классов полифенольньгх соединений, входящих в их состав [175]. По-видимому, АО активность яблок в большей степени обусловлена присутствием гидроксикоричных кислот, а не флавоноидов [107, 130, 134].
Особый интерес с точки зрения промышленного производства представляют отходы яблок - шрот. Так, установлено, что после производства яблочного сока в шроте остается значительная часть ценных БАВ (органические кислоты, пектиновые вещества, полифенолы и др.) [150].
На этом основании, Schieber А. с соавт. исследовали полифенольный состав шрота яблок [179]. На подготовительном этапе авторами выделена сумма полифенольньгх соединений экстрагированием сырья разбавленной минеральной кислотой с последующей очисткой извлечения адсорбцией, элюированием полифенолов метанолом, сгущением под вакуумом и сублимационной сушкой. Методом ВЭЖХ установлено, что очищенная сумма полифенолов содержит не менее 11,8% фенольных соединений, среди которых преобладает флоридзин - 40,4 мг/г, гликозиды кверцетина - 24 мг/г, кислота хлорогеновая - 14,3 мг/г, и незначительное количество процианидинов. Это видимо, связано с гидролизом и окислением процианидинов в процессе выделения и очистки полифенолов. Образующиеся побочные продукты прочно связываются с сорбентом. Анализ очищенной фракции полифенольньгх соединений проведен суммарно при 280 нм (катехины, проантоцианидины, дигидрохалконы и бензойные кислоты), 320 нм (гидроксико ричные кислоты) и 370 нм (флавоноиды), которые для ряда веществ не соответствуют их максимальным значениям поглощения [179]. Так, w кислот кофейной и феруловой, относящихся к классу гидроксикоричных кислот, составляют 309 и 310 нм, соответственно, а - рутина, содержащегося в яблоках в значительных количествах, - 358 нм [38, 107]. Поэтому, полученные авторами данные позволяют лишь приближенно оценить суммарное содержание полифенолов в гидролизате.
В состав яблок также входит группа летучих веществ, образующихся в процессе их ферментации при хранении и переработке. Методом газовой хроматографии (ГХ) в сочетании с масс-спектроскопией (МС) идентифицированы следующие соединения: этил-2-метилбутират, этилацетат, этилбутират, этилгекса-ноат, этилпропионат, 2-метилбутилацетат, которые обеспечивают характерный аромат яблок [174].
Таким образом, шрот яблок является богатым источником получения гидрофильной фракции БАВ, представленной аминокислотами, пектиновыми веществами, фенольными соединениями, а также тритерпенових веществ. Перечисленные БАВ характеризуются широким спектром фармакологической активности, низкой токсичностью и поэтому представляют значительный интерес для современной фармации.
Неотъемлемой стадией производства лекарственных средств (ЛС) природного происхождения является экстрагирование БАВ.
Материалы исследования
Материалы для выделения и анализа биологически активных веществ из шрота яблок
1. Вода очищенная (ФС 42-2619-97).
2. Диализная пленка купрофан (ТУ-6-06:И39-78).
3. Калия бихромат (ГОСТ 4220-75).
4. Кислота серная (ГОСТ 4207-77).
5. Кислота соляная (ГОСТ 3118-77).
6. Кислота феруловая (производство «Sigma», США).
7. Натрия гидрокарбонат (ГОСТ 4201-79).
8. Нингидрин (ТУ 6-09-2737-73).
9. Промышленные отходы (шрот) яблок сокового производства ОАО НПГ «Сады Придонья», Волгоградская область, п. Сады Придонья.
10. Хлороформ (ТУ 2631-020-11291058-96).
11. Этанол 96 % (ГОСТ 5962-67).
Материалы для разработки технологии лекарственных форм на основе биологически активных веществ из шрота яблок
1. Аэросил (ГОСТ 14922-77).
2. Глицерин дистиллированный (ФС 42-2202-99).
3. Крахмал картофельный (ГОСТ 7699-78).
4. Метилцеллюлоза МЦ-16 (ТУ 2231-107-05742755-96).
5. Натрия альгинат (ФС 42-3383-97).
6. Натрий карбоксиметилцеллюлоза (ТУ 2231-034-07507908-01).
7. Поливиниловый спирт (ТУ 6-05-190-87).
8. Сахароза (ФС 42-77-72).
9. Сорбит (ФС 42-2660-99).
В работе нами использованы следующие методы исследования:
- методы выделения и очистка биологически активных веществ из шрота яблок: ремацерация, кислотный гидролиз, отстаивание, метод замены растворителя, фильтрование, центрифугирование, сгущение, сушка [75];
- методы приготовления лекарственных форм на основе выделенных биологически активных веществ: растворение, влажное гранулирование [75];
- физические методы анализа: определение плотности [18];
- физико-химические методы анализа: определение значения водородного показателя [18]; количественное определение аминокислот, основанное на спек-трофотометрии продуктов нингидриновой реакции [90]; непосредственное спек-трофотометрическое определение суммы фенольных соединений; биофармацевтические исследования випома и его лекарственных форм (ЛФ) [125]; определение антирадикальной активности випома на модели гашения хемилюминесценции [78]; изучение структурно-механических свойств мазей випома [63]; количественное определение суммы тритерпеноидов, основанное на спектрофотометрии продуктов их взаимодействия с кислотой серной концентрированной [108];
- химические методы анализа: определение сухих веществ [19], реакции подлинности на тритерпеноиды (Сальковского, Либермана-Бурхарда, Чугаева) [108];
- методы определения технологических характеристик лекарственных форм на основе випома и помала проведены согласно ГФ XI [20];
- фармакологические методы исследований: определение эффективности заживления ожогов у экспериментальных животных (метод разработан проф. Но-вочадовым В.В. с соавт.), определение желчегонной активности по методу Лит-винчук М.Д. и Новосилец З.И. [53], определение гепатопротекторной активности на модели экспериментального токсического гепатита [46], определение гипохо-лестеринемической активности на модели экспериментальной гипохолестерине-мии [46].
- изучение стабильности випома, помала и ЛФ на их основе проводили в условиях естественного хранения в различных видах упаковки, в защищенном от света месте при температуре не выше 25 С. Каждые 6 месяцев определяли показатели качества субстанций и ЛФ на их основе [18, 19, 20].
- статистическая обработка экспериментальных данных проведена в соответствии с требованиями ГФ XI с помощью ПЭВМ [19].
В целом, исследования диссертационной работы проведены в соответствии с требованиями GLP (Good Laboratory Practice).
Экстрагирование из шрота яблок випома проведено нами методом пятикратной ремацерации горячей водой очищенной. Полученное извлечение очищали отстаиванием и процеживанием с последующим сгущением.
Випом стандартизовали по следующим показателям: органолептические свойства, значение рН, плотность, содержание сухих веществ, суммарное содержание аминокислот, фенольных соединений и пектиновых веществ.
Для количественного определения суммы аминокислот в випоме нами разработан метод анализа, основанный на спектрофотометрии продуктов нингидри-новой реакции (см. главу 3).
Шрот яблок, после выделения випома, сушат до остаточной влажности 15 % и далее используют в технологии помала.
Исследование спектральных характеристик продуктов реакции а-аминокислот
В анализе аминокислот методами бумажной (БХ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ) часто используют 0,2 % раствор нингидрина в ацетоне. Для количественного определения аминокислот с помощью аминокислотных анализаторов используют растворы нингидрина в диметилсульфоксиде (ДМСО) [3, 27, 44].
На этом основании нами изучены спектральные характеристики продуктов реакции а-аминокислот с нингидрином (ацетоновый раствор и раствор в ДМСО) в диапазоне 200-600 нм [41, 66]. Для проведения реакции к 1 мл 2 % раствора соответствующей а-аминокислоты мы прибавляли 1 мл свежеприготовленного ОД % раствора нингидрина в ацетоне или в ДМСО и нагревали при температуре 100 С до появления сине-фиолетовой окраски [44]. Цистеин и тирозин, вследствие их низкой растворимости в воде, мы использовали в виде 0,04 % растворов. После полного охлаждения продукты разбавляли водой в различных соотношениях до получения значений оптической ПЛОТНОСТИ Хщах от 0,4 до 1,0.
Нами установлено, что продукты большинства а-аминокислот с раствором нингидрина в ацетоне характеризуются 3 максимумами поглощения в диапазонах 220-237 нм, 254-260 нм, 398-402 и 560-570 нм. Исключение составляет пролин, продукты реакции которого имеют Лщ лишь в УФ-области при 300 и 340 нм.
В спектрах продуктов реакции се-аминокислот с раствором нингидрина в ДМСО мы обнаружили 3 максимума поглощения при 250±2 нм, 400-405 нм и
560-570 нм, а для пролина наблюдаются Лщах только в УФ-области при 300 и 340 нм.
Для выяснения аналитических возможностей реакции нами изучены спектральные характеристики чистого раствора нингидрина в ацетоне и ДМСО в диапазоне 220-570 нм (табл. 3).
Анализ данных табл. 3 свидетельствует, что сам нингидрин в исследованных растворителях поглощает в тех же диапазонах, в которых поглощают и продукты его реакции с а-аминокислотами, поэтому при анализе нами получены заведомо завышенные результаты.
Для качественного и количественного анализа аминокислот также используют водные растворы нингидрина [18, 49, 127]. На этом основании нами исследованы спектральные характеристики водного раствора нингидрина. С этой целью мы нагрели 0,2 % водный раствор нингидрина при температуре 100 С в течение 15 мин и после охлаждения провели его спектральный анализ. Установлено, что водный раствор нингидрина имеет интенсивное поглощение в диапазоне 220-300 нм, но совершенно не поглощает в диапазоне от 370 до 600 нм (рис. 1).
На основании вышеизложенного нами исследованы спектры поглощения продуктов реакции 20 а-аминокислот с водным раствором нингидрина. К 1 мл 2 % раствора а-аминокислоты мы добавили 1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина и нагрели при температуре 100 С до появления сине-фиолетовой окраски [44]. Цистеин и тирозин мы использовали в виде 0,04 % растворов, вследствие их низкой растворимости в воде. После полного охлаждения продукты реакции разбавляли водой до получения значений оптической ПЛОТНОСТИ Хщах от 0,3 до 1,0, и изучали их спектральные характеристики в диапазоне 350-600 нм (рис. 2).
