Изучение биологических свойств рекомбинантных штаммов Salmonella Enteritidis, экспрессирующих НВс-антиген вируса В с эукариотического и прокариотического промоторов [Электронный ресурс] Донин Михаил Васильевич

Содержание к диссертации

стр.

ВВЕДЕНИЕ 3-6

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Состояние вакцинопрофилактики

против гепатита В на современном этапе 7-9

1.2. Пути усовершенствования стандартной

рекомбинантной вакцины против гепатита В 9-11

1.3. Стратегия иммунотерапии хронической

формы гепатита В 11 -25

ГЛАВА 2. Собственные исследования

1. Материалы и методы исследования 26-40

2. Влияние плазмид на биологические

характеристики гибридных штаммов Salmonella 41 -49

2.3 Определение минимальной ингибирующей
концентрации ампициллина для гибридных

штаммов сальмонеллы 50

2.4. Определение концентрации вакцинных
штаммов в суппозиториях и динамика их

сохранности в свечевом препарате 51 - 52

2.5 Определение кинетики размножения
исследуемых штаммов сальмонеллы в

жидкой питательной среде 52-54

2.6 Возможность проведения санитарно-
бактериологического контроля препаратов на

основе штамма-носителя S. Enteritidis (Е-23) 54 - 64

2.7. Исследование персистенции штаммов

в организме лабораторных животных 64-70

2.8 Определение антител к НВс антигену

в сыворотке мышей 70 - 73

2.9 Изучение взаимодействия штамма Salmonella
Enteritidis Е-23 и его дериватов с культурой

фагоцитов человека в системе in vitro 73-77

2.10 Исследование влияния НВс-антигена,
экспрессируемого с эукариотического промотора
на поведение вирулентного штамма

Salmonella Enteritidis 1791 77-83

Обсуждение 84-88

Выводы 89-90

Список литературы 91 - 104

Введение к работе

По данным ВОЗ число инфицированных вирусом гепатита В составляет 2000 миллиона человек, а число носителей - 350 млн. человек (в том числе 5 миллионов в России). Ежегодно в мире 1 миллион человек погибает от патологии связанной с развитием гепатита В [25].

Для профилактики гепатита В с 1986 года в календарь прививок введена рекомбинантная вакцина. Она состоит из HBs - антигена вируса гепатита В, главным образом S-белка, синтезированного генно-инженерным путем в дрожжевых клетках или культуре клеток яичников китайского хомячка (СНО), который после очистки сорбируется на гидрооксиде алюминия или фосфате алюминия, в качестве адъювантов [131, 133]. Вакцина создаёт защиту на 5 лет [31]. Однако, около 10-15% населения земли толерантны к её действию и не формируют в ответ на введение защитного иммунного ответа [38].

В 5-10% случаев острая форма гепатита В переходит в хроническую, осложнениями которой являются цирроз и первичный рак печени [117, 134]. Переход острой формы в хроническую связан с недостаточностью клеточного иммунного ответа, в стимуляции которого основная роль принадлежит НВс-антигену [10, 11, 50]. Это приводит к необходимости создания вакцины терапевтического действия. Использование рекомбинантной профилактической вакцины в терапевтических целях не принесло желаемого успеха [27, 37, 60, 113], особенно если учесть что основная роль в активации клеточного иммунного ответа при гепатите В принадлежит НВс-антигену.

Учитывая особенности биологии вируса гепатита В, вакцина на основе НВс-антигена может быть представлена только в виде вакцины нового поколения: ДНК или векторной. В обоих типах вакцины в качестве вектора, обеспечивающего доставку вакцины, может выступать аттенуированная Salmonella, так как при этом способе доставки вакцинного препарата возможно использование естественного пути иммунизации, что на много удешевит вакцинный препарат. Благодаря работам Schodel F. с соавторами [44, 109, 112] имеются значительные наработки в создании векторной вакцины на основе

аттенуированных штаммов S. Typhimurium и S. Typhi. Однако не имеется данных о свойствах экспериментальной ДНК-вакцины, переносимой представителями рода Salmonella.

По этому целью нашего исследования явилось сравнительное изучение биологических свойств аттенуированных штаммов Salmonella Enteritidis (Е-23) и Salmonella Typhimurium (Т-10), а так же их гибридных вариантов, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического (векторная вакцина) и эукариотического (ДНК-вакцина) промоторов.

В задачи настоящего исследования входило:

1. Исследовать влияние гибридных плазмид, детерминирующих синтез НВс - антигена с прокариотичнского и эукариотического промотора на фенотипические свойства штаммов.

2. Исследовать возможность сохранения жизнеспособности изучаемых штаммов в процессе изготовления свечевой формы и её хранения до момента иммунизации.

3. Изучить персистенцию штаммов в организме экспериментальных животных после их ректальной иммунизации свечевой формой, содержащей изучаемые штаммы.

4. Изучить способность штаммов сальмонелл, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического и эукариотического промоторов,

. индуцировать выработку специфических антител против НВс-антигена, после ректальной иммунизации экспериментальных животных.

5. Изучить характер взаимодействия штаммов сальмонеллы, экспрессирующих НВс-антиген с прокариотического и эукариотического промоторов с культурой моноцитов человека в системе in vitro.

6. Исследовать возможность проведения санитарно-бактериологического контроля препаратов на основе аттенуированных мутантов Salmonella Typhimurium Т-10 и Salmonella Enteritidis Е-23.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Аттенуированный мутант Salmonella Enteritidis Е-23 и его гибридные варианты сохраняют жизнеспособность в процессе приготовления и хранения свечевой формы препарата, не изменяя при этом основных фенотипических характеристик.

2. Ректальная иммунизация мышей гибридными штаммами Salmonella Enteritidis Е-23 не вызывает длительной контаминации окружающей среды.

3. НВс-антиген ограничивает персистенцию Salmonella в лимфоидной ткани как в системе in vivo, так и в системе in vitro независимо от вирулентности Salmonella.

4. Препараты, содержащие гибридные штаммы на основе Salmonella Enteritidis Е-23 могут подвергаться санитарно бактериологическому контролю по схеме контроля нестерильных лекарственных средств

Научная новизна:

Впервые было показано, что штамм Salmonella Enteritidis, несущие плазмиду, экспрессирующую НВс-антиген с эукариотического промотора, имеют ограниченную персистенцию как в культуре моноцитов in vitro, так и в лимфоидной ткани in vivo независимо от вирулентности штамма.

Практическая значимость работы:

Дополненная схема санитарно - бактериологического контроля нестерильных лекарственных средств может быть использована разработчиками векторных и ДНК - вакцин на основе суа сгр мутантов сероваров S. enterica, и, в частности, используется в настоящее время в работе НПО "Вектор".

По теме диссертации опубликовано:

4 журнальных статьи

4 тезисов

Материалы диссертации были доложены: Материалы работы дважды докладывались на конференциях;

1. 13 Европейский конгресс клинической иммунологии и инфекционных болезней. Глазго 2003.

2. I Международная конференция «Молекулярная медицина и биобезопасность». Москва 2004.

Похожие диссертации на Изучение биологических свойств рекомбинантных штаммов Salmonella Enteritidis, экспрессирующих НВс-антиген вируса В с эукариотического и прокариотического промоторов [Электронный ресурс]

Изучение свойств штаммов Escherichia coli M-17 и bacillus subtilis 1719 на модели экспериментального дисбиозаГайдеров Андрей Александрович

Экспериментальное изучение антагонистических свойств штамма бактерий Bacillus pumilus "Пашков"Гринько Ольга Михайловна

Сравнительное изучение иммунобиологических свойств вакционного штамма B.abortus R-1096 Сафина Гульнара Миннирашитовна

Конструирование и изучение иммунобиологических свойств рекомбинантных штаммов Escherichia coli и Vibrio cholerae, продуцирующих протективные антигены - В-субъединицу холерного токсина и адгезин CFA/IКобкова Ирина Михайловна

Изучение молекулярно-биологических свойств вариантов вакцинного штамма Francisella tularensis с делетированными генами системы рекомбинации recA и recDЛапин, Александр Александрович

Бактериофаг АР22, лизирующий клинические штаммы Acinetobacter baumannii: выделение и изучение молекулярно-биологических свойствПопова, Анастасия Владимировна

Разработка нового стимулятора роста микроорганизмов и изучение его влияния на их биологические свойства на примере некоторых вакцинных штаммов бактерийПанова Наталья Викторовна

Конструирование вакцинных штаммов Francisella tularensis, экспрессирующих протективные антигены Ag85B и ESAT-6 Mycobacterium tuberculosis, и изучение их иммунобиологических свойствКравченко Татьяна Борисовна

Получение и изучение свойств протеазы, синтезируемой Bacillus subtilis Хазиев Артур Фатыхович

Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического примененияФеоктистова Наталья Александровна