Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1 Патогенез атеросклероза. Роль липопротеинов 14
1.1.1 Факторы риска развития атеросклероза 14
1.1.2 Роль липопротеинов
1.1.2.1 Липопротеины низкой плотности 16
1.1.2.2 Липопротеины высокой плотности 17
1.1.3 Обратный транспорт холестерина 19
1.2 ABCA1 транспортер 21
1.2.1 Болезнь острова Танжер 23
1.2.2 Варианты гена АВСА1 24
1.2.3 Функции ABCA1 транспортера 27
1.2.4 Роль ABCA1 транспортера в макрофагах 28
1.2.5 ABCG1 транспортер 29
1.2.6 Индукция транскрипции гена АВСА1 30
1.2.7 Пути деградации белка АВСА
1.3 Роль колониестимулирующего фактора макрофагов М-CSF 35
1.4 Матричная металлопротеиназа-9 36
1.5 Ядерные рецепторы 38
1.5.1 Семейство PPAR 39
1.5.1.1 Формы PPAR 39
1.5.1.2 PPAR 40
1.5.1.3 Роль PPAR в макрофагах з
1.5.2 Семейство LXR 43
1.5.2.1 Формы LXR 43
1.5.2.2 Регуляция экспрессии LXR 44
1.5.2.3 Роль LXR в макрофагах 45
1.5.2.4 Антиатерогенные и противоспалительные эффекты LXR 45
ГЛАВА 2. Материалы и методы 48
2.1 Характеристика обследованных групп 48
2.2 Выделение ДНК из периферической крови человека 51
2.3 Полимеразная цепная реакция и рестрикционный анализ
2.3.1 Идентификация варианта R219К гена АВСА1 53
2.3.2 Идентификация варианта (-17)G С гена АВСА1 54
2.3.3 Идентификация варианта 319ins G гена АВСА
2.3 Выделение фракции моноцитов периферической крови 57
2.4 Оценка уровня мРНК генов АВСА1, LXRa, LXRJ], PPARy и ММР-9 57
2.5 Измерение уровня белка АВСА1 62
2.6 Статистическая обработка данных 63
ГЛАВА 3 Результаты и обсуждение 65
3.2 Анализ вклада вариантов гена АВСА1 (R219K, 319ins G, (-17)G C) в развитие атеросклероза 69
3.2 Уровень мРНК гена АВСА1 в макрофагах, активированных М-CSF исследуемых групп 72
3.3 Измерение уровня белка ABCА1 в макрофагах, активированных М-CSF 75 3.4 Уровень мРНК гена ММР-9 в макрофагах, активированных М-CSF в исследуемых группах 79
3.5 Уровень мРНК генов ядерных рецепторов LXRa, LXRfi,PPARy в макрофагах, активированных М-CSF 83
3.6 Корреляция между содержанием липидов в плазме крови и уровнем мРНК АВСА1, LXRa, LXRfi, PPARy, ММР-9 и уровнем белка АВСА1 90
Выводы 93
Список литературы 94
- Липопротеины высокой плотности
- Индукция транскрипции гена АВСА1
- Идентификация варианта R219К гена АВСА1
- Уровень мРНК генов ядерных рецепторов LXRa, LXRfi,PPARy в макрофагах, активированных М-CSF
Липопротеины высокой плотности
Как уже было сказано выше, липопротеины играют ключевую роль в атерогенезе. Нарушения липидного обмена, проявляющиеся при различных дислипопротеинемиях, влияет на патогенез заболеваний, ассоциированных с атеросклерозом. Формирование обогащенных липидами пенистых клеток является одним из инициирующих моментов патогенеза атеросклероза.
Атерогенными свойствами обладают ЛПНП и липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП). ЛПНП образуются из ЛПОНП в процессе липолиза. ЛПНП относятся к классу липопротеинов с плотностью в интервале 1.019-1.063 г/мл и размером частиц 20-25нм (Badimon et al., 2009). Частицы ЛПНП состоят из гидрофобного ядра, содержащего триглицериды и эфиры холестерина и гидрофильной оболочки из фосфолипидов и свободного холестерина. В качестве белковой компоненты ЛПНП содержит молекулу белка апо B100, которая является лигандом для мембранных рецепторов (Levitan et al., 2010). Из общего количества апо В100 (примерно 1 г/л плазмы) подавляющая часть его (около 96%) находится в составе ЛПНП и только около 4% относится к ЛПОНП (Орехов, 2013).
ЛПНП играют важную роль в процессе нормального клеточного функционирования, но в высоких концентрациях и, в особенности после окисления или карбонилирования (Yang et al., 2012), способствуют образованию атеросклеротических бляшек. За последние несколько десятилетий было доказано, что окисленные формы ЛПНП является более важным фактором в возникновении и прогрессии атеросклероза, чем неизмененные формы ЛПНП (Yang et al., 2012). Изначально ЛПНП накапливаются в интиме преимущественно за счет связывания с компонентами межклеточного вещества — протеогликанами. В интиме липопротеины, связанные с протеогликанами, могут вступать в химические реакции. Основную роль играют: окисление и неферментативное гликозилирование, что приводит к образованию смеси окисленных ЛПНП, причем окисляются как липиды, так и белковый компонент. После окисления ЛПНП становятся более токсичными и играют основную роль в развитии и прогрессии атеросклероза (Mitra et al., 2011). Продуктами окисления липидов являются гидроперекиси, лизофосфолипиды, оксистерины и альдегиды. Окисление аполипопротеинов ведет к разрыву пептидных связей и соединению боковых цепей аминокислот с продуктами расщепления жирных кислот (4-гидроксиноненалем и малоновым диальдегидом). Стойкая гипергликемия при сахарном диабете способствует неферментативному гликозилированию аполипопротеинов и собственных белков интимы, что также нарушает их функции и увеличивает вероятность атерогенеза (Орехов, 2013).
Кроме того, окисленные формы ЛПНП могут индуцировать апоптоз эндотелиальных клеток (Yang et al., 2012). В настоящее время известно, что токсические эффекты, индуцированные окисленными формами ЛПНП, присутствуют на всех стадиях атеросклероза от его начала до острого тромбоза (Mitra et al., 2011). Окисленные ЛПНП также приводят к разрыву фиброзного покрытия атероматозной бляшки через активирование секреции MMP (Hagemann et al., 2012).
Миграцию лейкоцитов, в основном моноцитов и лимфоцитов, в интиму обеспечивают расположенные на эндотелии рецепторы — молекулы адгезии VCAM-1 и ICAM-1 (из суперсемейства иммуноглобулинов) и Р-селектины. Окисленные ЛПНП также способствуют хемотаксису лейкоцитов. В интиме моноциты дифференцируются в макрофаги, которые, за счет опосредованного рецепторами эндоцитоза липопротеинов, образуют, обогащенные липидами, пенистые клетки. Также при поглощении модифицированных липопротеинов макрофаги выделяют цитокины и факторы роста, способствующие развитию атеросклеротической бляшки (Орехов, 2013).
Липопротеины высокой плотности были описаны как класс липопротеинов, обладающий антиатерогенными свойствами, такими как: антиокислительные, антиапоптотические, противовоспалительные, поддержание функций эндотелиальных клеток и обеспечение ОТХ из периферических тканей к печени. Частицы ЛПВП являются ключевыми акцепторами холестерина из нагруженных липидами макрофагов и, таким образом, играют важную роль в поддержании баланса холестерина в артериальной стенке и уменьшении провоспалительного ответа обогащенных холестерином макрофагов (Ono, 2012). Считается, что именно участие ЛПВП в ОТХ является одной из важнейших функций, обусловливающих антиатерогенные свойства этого класса липопротеинов.
ЛПВП являются самыми мелкими липопротеиновыми частицами с плотностью в интервале 1,063-1,210 г/мл и размером частиц 8-1 1 н м . В зависимости от величины плотности ЛПВП подразделяются на 2 подкласса – ЛПВП-2 и ЛПВП-3 (Липовецкий, 2000). На долю ЛПВП приходится 20-30% общего холестерина крови, но из всех липопротеидов именно эти частицы содержат наибольшее количество фосфолипидов и белка. В состав ЛПВП входят восемь аполипопротеинов. Среди них основными являются апо AI и апо АII. Содержание первого составляет около 67% и второго — около 22% от общего количества белка. Остальная часть приходится на долю минорных аполипопротеинов, среди которых в первую очередь следует отметить аполипопротеины семейства С (CI, СII и СIII) (Климов, Никульчева, 1999).
Также важную роль в ОТХ из макрофагов играют обедненные липидами частицы, содержащие апо Е, которые продуцируют макрофаги. Последние исследования показали значительное снижение ОТХ in vivo у мышей дикого типа, к которым добавляли макрофаги линии мышей, дефицитных по апо Е (Zanotti et al., 2011).
Клинические и эпидемиологические исследования продемонстрировали обратную связь между концентрацией холестерина ЛПВП (Х-ЛПВП) в плазме крови и развитием атеросклероза (Gordon et al., 1989; Miller et al., 1975; Miller et al., 2007). Увеличение уровня Х-ЛПВП на 1мг/дл (0.026мМ) ассоциировано со снижением риска развития коронарной болезни сердца на 2% у мужчин и на 3% у женщин (Gordon et al., 1989). Однако недавние исследования показали, что более точным прогнозирующим параметром риска развития атеросклероза является не концентрация Х-ЛПВП в плазме крови, а уровень транспорта холестерина из периферических клеток (Brown et al., 2010; Khera et al., 2011).
Индукция транскрипции гена АВСА1
Группой исследователей была секвенирована промоторная, 5`-нетранслируемая область гена ABCA1 и первый интрон гена ABCA1 (Zwarts et al., 2002). Было идентифицировано 12 вариантов гена ABCA1, из которых с ИБС ассоциировались: (-191)С G, 69T C, (-17)G C (rs2740483), 319ins G (rs1799777) (Zwarts et al., 2002). Аллель (-17)C ассоциировалась с пониженным относительным риском развития ИБС, а аллель 319G (319ins G) – с меньшей степенью атеросклеротических повреждений артерий. Также было показано, что ни один из этих вариантов гена АВСА1 не коррелировал с уровнем Х-ЛПВП в плазме крови. Исследователями из Китая Liu и соавт. была выявлена более высокая частота аллели (-191)C ((-191)С G) в группе пациентов с ИБС по сравнению с контрольной группой, что согласуется с результатами работы Zwarts и соавт. (Liu et al, 2005). В проспективном исследовании, проведенном в Дании, была показана ассоциация между носительством аллели (-191)С ((-191)С G) гена АВСА1 и снижением риска развития ИБС, что противоречит результатам исследования Zwarts и соавт. (Jensen et al, 2007). Jensen и соавт. не показали корреляцию между вариантом (-191)G ((-191)С G) гена ABCA1 и уровнем липидов в плазме крови. Исследование не обнаружило также ассоциации варианта (-17)G ((-17)G C) гена ABCA1 с развитием ИБС, в отличие от результатов Zwarts и соавт. (Jensen et al, 2007).
С момента открытия гена ABCA1 были идентифицированы также варианты в его кодирующей области, приводящие к аминокислотным заменам в молекуле белка АВСА1 транспортера и ассоциированные с относительным риском развития атеросклероза (Clee et al., 2000; Probst et al., 2004; Singaraja et al., 2003; Wang et al., 2006). Многочисленные эпидемиологические исследования подтверждают наличие ассоциации между однонуклеотидными заменами в кодирующей области гена АВСА1, приводящими к аминокислотным заменам в молекуле белка, R219K (G655A) (rs2230806) и I883M (A2648G) (rs2066714) с риском развитием атеросклероза (Ma et al., 2011; Song et al., 2013; Yin et al., 2014). Согласно последним данным, в европейской популяции аллель 219К встречается у 27% индивидуумов (Balcerzyk et al., 2008; Frikke-Schmidt et al., 2008; Porchay-Balderelli et al., 2009). Носительство 219К аллели ассоциируется с уменьшением локального и диффузного коронарного атеросклероза, снижением риска развития и замедлением прогрессирования ИБС. У носителей 219К аллели был выявлен повышенный уровень Х-ЛПВП (Clee et al., 2000). Согласно результатам метаанализа 42 исследований, включившего 12251 пациентов с атеросклерозом и 19548 представителей контрольной группы, было показано, что вариант 219К (R219K) гена ABCA1 в европейской популяции является атеропротективным (OR (K vs. R) = 0.77 (95% ДИ: 0.71 – 0.84), p 0.01) (Yin et al., 2014). Однако данные об ассоциации варианта 219К гена АВСА1 с концентрацией липидов плазмы крови весьма противоречивы. Во многих исследованиях была выявлена ассоциация аллели К219 гена ABCA1 с увеличенным уровнем Х-ЛПВП и/или с пониженным уровнем ТГ в плазме крови. Однако не была показана ассоциация с риском развития или степенью атеросклеротического поражения артерий (Benton et al., 2007; Mantaring M. et al., 2007). В исследовании Cenarro и соавт. антиатерогенность К219 аллели гена ABCA1 была показана только для курящих индивидуумов (Cenarro et al., 2003), а в работе Kakko и соавт. – для женского пола (Kakko et al., 2003). В некоторых исследованиях не было установлено ассоциации варианта R219K гена ABCA1 ни с уровнем липидов в плазме крови, ни с атеросклерозом (Brousseau et al., 2001; Lutucuta et al., 2001; Saleheen et al., 2007; Frikke-Schmidt et al., 2008). В настоящее время продолжаются исследования, направленные на поиск вариантов в регуляторных и кодирующих областях гена ABCA1 и изучение их роли в развитии атеросклероза.
ABCA1, относящийся к суперсемейству АТФ-связывающих кассетных транспортеров, осуществляет транспорт холестерина из макрофагов на апо AI (Yvan-Charvet et al., 2010). Концентрация ABCA1 в печени является критической составляющей в биогенезе ЛПВП (Voloshyna, Reiss, 2011). В -клетках ABCA1 необходим для поддержания гомеостаза холестерина и секреции инсулина (Brunham et al., 2007), в нейронах ABCA1 поддерживает моторную функцию и синаптические функции (Karasinska et al., 2009).
ABCA1 опосредованный перенос холестерина на апо AI может происходить как на плазматической мембране, так и на зрелых эндосомах с последующим освобождением комплекса апо AI -холестерин путем экзоцитоза (Yvan-Charvet et al., 2010).
У мышей с нокаутом гена АВСА1 наблюдалось замедление ОТХ, что объясняет чрезвычайно низкий уровень ЛПВП в плазме крови и повышенное содержание нагруженных липидами макрофагов (Voloshyna, Reiss, 2011). При этом, исследования, выполненные на ABCA1 дефицитных мышах, показало, усиление атеросклероза (Aiello et al., 2002) и снижение уровня транспорта холестерина в печень и желчь на 50% (Wang et al., 2007 - a; Voloshyna, Reiss, 2011).
Сокращение уровня клеточного ABCA1 в интима-медии артерий посредством воздействия антисмысловых ABCA1 олигонуклеотидов приводило к значительному снижению транспорта клеточного холестерина и фосфолипидов на апо AI (Wang et al., 2007 - a; Voloshyna, Reiss, 2011). Следует заметить, что апо AI-опосредованный транспорт холестерина увеличивается при гиперэкспрессии ABCA1 к а к в а д и п о ц и т а х , т а к и в м а к р о ф а г а х ( Wang et al., 2007 - a; Voloshyna, Reiss, 2011).
Идентификация варианта R219К гена АВСА1
После денатурации при 95С в течение 10 мин проводили 45 циклов амплификации в следующем температурно-временном режиме: плавление - 95 С 30 с, отжиг-синтез - 60С 30 с. В результате проведения ПЦР с использованием зонда на кДНК исследуемого гена и соответствующего референсного гена АСТВ получали кинетические кривые, отображающие накопление ПЦР-продукта (Рисунок 11). Измерения для каждой пробы проводили в трех экземплярах. Относительное содержание мРНК генов АВСА, LXR, LXR, PPAR и ММР-9 рассчитывали методом стандартных кривых. Стандартная кривая строилась в каждом эксперименте как для исследуемого гена, так и референсного гена АСТВ (Рисунок 12).
Количество мРНК АВСА, LXR, LXR, PPAR и ММР-9 нормировали по отношению к мРНК эндогенного гена АСТВ, т.е. делили количество мРНК исследуемых генов, рассчитанное с использованием CFX96 (BioRad, США), на количество мРНК АСТВ. Относительное содержание мРНК исследуемых генов рассчитывали методом стандартных кривых согласно методическим указаниям фирмы-изготовителя
Относительный уровень белка ABCA1 в макрофагах определяли методом вестерн-блоттинга. Для выделения мембранной фракции макрофаги лизировали в растворе следующего состава: 150 мМ NaCl, 1 % Triton X-100, 50 мМ Tris, pH 8, 0,5% дезоксихолат натрия, 0,1% SDS, включающем коктейль из ингибиторов протеаз (Roche, США). Количество общего белка определяли по методу Бредфорд с использованием реагентов фирмы «Силекс» (Россия) на спекртрофотометре SmartSpecTMPlus (BioRad, США). Равные количества белка макрофагальных лизатов смешивали с 4х буфером Лаемли (200мМ Tris-HCl pH 6,8, 400 мМ -меркаптоэтанол, 4 % додецилсульфат, 0,01 % бромфенол, 40 % гицерол (Laemmli et al., 1970) в соотношении 2 объема белка/1 объем буфера, после чего кипятили в течение 5 мин. при температуре 1000С. После кипячения пробы (5мкг на лунку), а также маркер молекулярного веса (Thermo Fisher Scientific, США), наносились на полиакриламидный гель (SDS-PAGE) с последующим проведением электрофореза в 1Х трисглициновом буфере (5Х стоковый раствор содержит: 25мM Tris-HCl pH 8,8, 250 мM глицина (pH 8,3), 0,1 % додецилсульфата). После этого с использованием прибора для полусухого переноса Semi-dry (Хеликон, Москва) проводился перенос белка с полиакриламидного геля на PVDF мембрану (Millipore, Massachusetts, США) с использованием буфера для переноса (39 mM глицина, 48 мМ Tris-HCl pH 8,8, 0,037 % додецилсульфата, 20 % метанола). Далее согласно молекулярному весу белка ABCA1 и -актина мембрану разрезали и полученные фрагменты однократно промывали в растворе PBS, после чего производили их «забивку» 5% разведенным в растворе PBS обезжиренным сухим молоком в течение 1 часа при комнатной температуре. После «забивки» фрагмент PVDF мембраны, содержащий ABCA1, инкубировали с первичными кроличьими поликлональными антителами к ABCA1 (1:1000; ab7360, Abcam, Великобритания), а фрагмент PVDF мембраны, содержащий -актин, с антителами к -актину (1:10000; ab8227, Abcam, Великобритания) в течение ночи при +4 0С. После этого трижды промывали в холодном растворе PBS фрагменты мембраны и инкубировали их в течение 1 часа при комнатной температуре со вторичными антикроличьими антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (1:3000; ab6721, Abcam, Великобритания). Затем снова трижды промывали холодным PBS. Далее связанные с соответствующим белком на обоих фрагментах мембраны вторичные антитела идентифицировали с использованием набора Amersham ECL Plus System (Amersham Biosciences, Великобритания) с использованием фотопленки CEA (Швеция).
Данные вестерн-блоттинга анализировали с помощью программы ImageJ (Версия 1.38a для Windows, http://rsb.info.nih.gov/ij/). Содержание ABCA1 нормировали к содержанию -актина.
Статистический анализ данных был проведен с использованием пакета программ Statistica 6.0. Для качественных данных определяли частоты встречаемости в %. Проверку соответствия полученного распределения генотипов равновесию Харди-Вайнберга осуществляли при помощи непараметрического критерия 2. Соответствие полученных данных нормальному распределению проверялось с помощью критериев Шапиро-Уилка или Колмогорова-Смирнова в зависимости от размера выборки. Для сравнения количественных данных использовали метод дисперсионного анализа ANOVA для нескольких групп и непараметрический метод U-теста Манна-Уитни. Значения p 0.05 считались статистически значимыми. Для определения относительного риска использовали показатель соотношения шансов (odds ratio, OR), рассчитываемый по формуле где a – количество пациентов, имеющих более редкую аллель, b – количество пациентов, не имеющих более редкую аллель, c – количество индивидуумов из контрольной группы, имеющих более редкую аллель, d – количество индивидуумов из контрольной группы, не имеющих более редкую аллель. Для определения корреляции между количественными характеристиками пользовались корреляционным анализом по Спирмену. Коэффициент корреляции r 0.5 при р 0.05 означал положительную и статистически значимую корреляцию между признаками, а отрицательное значение r соответствовало обратной корреляции.
Средние величины в тексте диссертации и в таблицах приведены в виде среднего значения ± стандартное отклонение. В случае достоверных различий дополнительно приведены значения медианы (минимум – максимум).
Уровень мРНК генов ядерных рецепторов LXRa, LXRfi,PPARy в макрофагах, активированных М-CSF
Известно, что ядерные рецепторы, такие как PPAR и LXR/LXRB модулируют атерогенез на различных его стадиях - от аккумуляции липидов макрофагами до локального воспалительного ответа (Soumian et al., 2005). Несмотря на наличие большого количества информации о роли LXR, LXR и PPAR как противовоспалительных и антиатерогенных медиаторах, в настоящее время практически нет данных о роли экспрессии данных генов в развитии атеросклероза.
Поэтому мы провели определение уровня мРНК этих транскрипционных факторов в макрофагах, активированных колониестимулирующим фактором М-CSF.
Было показано статистически значимое снижение содержания PPARy мРНК в макрофагах, после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что уменьшение уровня мРНК PPARy может быть ассоциировано с развитием атеросклероза.
Как было продемонстрировано ранее, PPAR вносит вклад в процесс регуляции дифференциации моноцитов в макрофаги (Tontonoz et al., 1998). В литературе существуют значительные противоречия относительно роли PPAR в развитии атеросклероза. Наши данные согласуются с результатами, в которых было отмечено снижение уровня экспрессии PPAR в атеросклеротических бляшках (Soumian et al., 2005) и в макрофагах, коррелировавшее с прогрессией атеросклероза (Giaginis et al., 2011). С другой стороны, было показано значительное повышение содержания PPAR в макрофагах человека при атеросклерозе (Amoruso et al., 2009). В исследовании Pucci и соавт. было отмечено повышение экспрессии гена PPARy как в моноцитах, так и в атеросклеротических бляшках (Pucci et al., 2011). Однако данное увеличение уровня мРНК гена PPARy было показано на фоне приема статинов, которое не наблюдалось у лиц, вошедших в наши выборки. В работе Sueyoshi и др. (Sueyoshi et al., 2010) также было выявлено, что уровень PPARy мРНК в атероматозных бляшках был достоверно выше, чем содержание PPARy мРНК в интиме сосуда. Таким образом, вышеприведенные исследования ставят вопрос о том, является ли повышение экспрессии PPARy положительно модулирующим фактором развития атеросклероза, фактором, негативно влияющим на атерогенез или не имеющим прямой патофизиологической роли в этом процесс. В пользу того, что повышение экспрессии гена PPARy имеет положительное влияние на развитие атеросклероза, свидетельствуют данные о том, что активация PPAR способствует дифференциации моноцитов человека в антивоспалительные М2 макрофаги (Bouhlel, 2007). Кроме того, существование положительной корреляции между уровнем мРНК гена PPARy и маркерами М2 макрофагов в атеросклеротических бляшках также может служить доказательством данного предположения (Bouhlel, 2007). В недавно проведенном мета-анализе, было показано, что снижение экспрессии гена PPARy на фоне носительства аллельного варианта 12А (Р12А) гена PPARy, повышает риск развития ССЗ (Wu et al., 2012). Вышеизложенные результаты дают возможность предположить, что экспрессия PPARy может быть связана с формированием атеросклеротических бляшек и PPAR участвует в ранних стадиях развития атеросклероза у человека.
В настоящей работе для определения роли изменения уровня экспрессии LXRa, LXR/] у лиц с атеросклерозом мы провели анализ уровня мРНК LXRa и LXR/3 в макрофагах пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой.
LXR играют ключевую роль в патогенезе атеросклероза, регулируя экспрессию важных генов, вовлеченных в липидный гомеостаз и воспалительную реакцию в макрофагах (Bensinger et al., 2008; Oosterveer et al., 2010). Более того установлено, что LXR ингибируют атеросклероз in vitro и in vivo (Calkin et al., 2012). При этом было продемонстрировано, что активация LXR увеличивает ОТХ за счет усиления экспрессии транспортеров ABCA1 и ABCG1 в макрофагах, что отражает механизм LXR-зависимой защиты от атеросклероза (Calkin et al., 2012). Кроме того, в мировой литературе есть данные, указывающие на то, что не только ОТХ из макрофагов является средством реализации антиатерогенного потенциала LXR. В отсутствии транспортеров АВСА1 и ABCG1 активация LXR приводила к снижению степени тяжести атеросклеротического повреждения сосудов и уменьшению воспаления у ЛНП -/- мышей с АВСА1 -/- и ABCG1-/- в макрофагах (Kappus et al.,2014). В целом, наши результаты согласуются с этими данными, указывающими на то, что влияние LXR может не вносить существенного вклада на уровень АВСА1 и антиатерогенный потенциал LXR может реализоваться путем влияния на воспалительные процессы (Kappus et al.,2014).
В нашем исследовании установлено сниженное содержания мРНК LXR/3 в макрофагах, активированных M-CSF, после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой, в то время как в содержании мРНК LXRa разница не показана, что может свидетельствовать о влиянии экспрессии LXR/3 в развитии атеросклероза.
В недавней работе Shchelkunova с соавторами было показано, увеличение экспрессии гена LXR/3 в макрофагах, нагруженных модифицированными ЛПНП, по сравнению с контрольными макрофагами (Shchelkunova et al., 2013). Необходимо отметить, что взаимодействие с модифицированными ЛПНП существенно усиливает воспалительный потенциал макрофагов и дальнейшую аккумуляцию липидов. Также влияние повышенной концентрации эфиров холестерина в клетке на уровень экспрессии генов ядерных рецепторов LXR подтверждаются в работе Albrehch и соавторов. Так, в атеросклеротических бляшках сосудов уровень мРНК гена LXRa был повышен по сравнению со здоровыми артериями (Albrecht et al., 2004). Таким образом, данные о взаимосвязи уровня экспрессии генов LXR и уровня холестерина в клетке могут объяснять снижение содержания мРНК LXR/3 в макрофагах после 5 суток культивирования у пациентов с атеросклерозом по сравнению с контрольной группой наблюдаемое в нашем исследовании.
