Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы
1.1. Распространенность туберкулеза в России и за рубежом 13
1.2. Особенности течения туберкулезного процесса 14
1.3. Проблема лекарственной устойчивости 15
1.4. Современные подходы к антибактериальной терапии туберкулеза 18.*
1.5. Оценка эффективности противотуберкулезной терапии 35
1.6. Заключение 35
Глава II. Методы и объем исследований
2.1. Экспериментальный раздел 37
2.1.2. Общетоксическое действие спарфлоксацина 40
2.1.2.1. Острая токсичность спарфлоксацина 40
2.1.2.2. Хроническая токсичность спарфлоксацина 42
2.1.3. Эффективность спарфлоксацина при лекарственно-устойчивом туберкулёзе в эксперименте 45
2.1.3.1. Активность спарфлоксацина в отношении микобактерий туберкулеза (чувствительных и устойчивых к основным противотуберкулезным препаратам) in vitro в сравнении с ломефлоксацином 47
2.1.3.2. Сравнительная эффективность различных доз спарфлоксацина в лечении генерализованного туберкулезного воспаления у мышей, вызванного лекарственно-устойчивыми микобактериями туберкулеза, в сравнении с ломефлоксацином 47
2.1.3.3. Эффективность лечения противотуберкулезными препаратами модели генерализованного туберкулезного воспаления у мышей, вызванного лекарственно-устойчивыми микобактериями туберкулеза.. 49
2.1.3.4. Эффективность противотуберкулезного действия спарфлоксацина в комбинации с основными противотуберкулезными препаратами 50
2.1.4. Анализ данных 51
2.2. Клиш-іческий раздел 51
2.2.1. Критерии включения / исключения больных 52
2.2.2. Периодизация исследования и проводимые мероприятия 54
2.2.3. Критерии оценки эффективности и безопасности 57
2.2.4. Статистические методы 58
Глава III. Результаты доклинических исследований спарфлоксацина
3.1. Общетоксическое действие 59
3.1.1. Острая токсичность 59
3.1.2. Хроническая токсичность 65
3.2. Эффективность спарфлоксацина при лекарственно-устойчивом туберкулёзе в эксперименте 84
3.2.1. Активность спарфлоксацина в отношении микобактерий туберкулеза (чувствительных и устойчивых к основным противотуберкулезным препаратам) in vitro в сравнении с ломефлоксацином 84
3.2.2. Сравнительная эффективность различных доз спарфлоксацина в лечении генерализованного туберкулезного воспаления у мышей, вызванного лекарственно-устойчивыми микобактериями туберкулеза, в сравнении с ломефлоксацином 85
3.2.3. Эффективность лечения противотуберкулезными препаратами модели генерализованного туберкулезного воспаления у мышей,вызванного лекарственно-устойчивыми микобактериями туберкулеза 90
3.2.4. Эффективность противотуберкулезного действия спарфлок сацина в комбинации с основными противотуберкулезными препа ратами 94
Глава IV. Результаты клинических исследований
4.1. Исследуемые пациенты 98
4.2. Оценка эффективности 101
4.3. Оценка безопасности 111
Глава V. Обсуждение результатов
5.1. Экспериментальный раздел 114
5.1.1. Токсикологические исследования 114
5.1.2. Противотуберкулезная активность и эффективность применения спарфлоксацина при лечении экспериментальной модели туберкулеза 116
5.1.3. Заключение по доклиническим исследованиям 120
5.2. Клинический раздел 121
Выводы 128
Практические рекомендации 129
Список литературы 130
- Особенности течения туберкулезного процесса
- Активность спарфлоксацина в отношении микобактерий туберкулеза (чувствительных и устойчивых к основным противотуберкулезным препаратам) in vitro в сравнении с ломефлоксацином
- Эффективность спарфлоксацина при лекарственно-устойчивом туберкулёзе в эксперименте
- Эффективность противотуберкулезного действия спарфлок сацина в комбинации с основными противотуберкулезными препа ратами
Введение к работе
По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), туберкулёз занимает первое место в списке социально-значимых и социально-обусловленных заболеваний, являясь ведущей причиной смерти от инфекционных заболеваний [12, 20, 53, 83, 133], лидируя среди причин смерти от единичного инфекционного агента — микобактерии туберкулеза {Mycobacteria tuberculosis — МБТ) [12, 20, 53, 66, 133, 196]. По данным ВОЗ ежегодно в мире регистрируют около 8,4 миллиона новых случаев заболевания туберкулезом и, примерно, 3 миллиона человек умирают от этого заболевания. Необходимо принимать во внимание, что туберкулезный процесс в 87,7% случаев затрагивает, преимущественно, людей трудоспособного возраста. По прогнозу ВОЗ к 2030 году ожидается 199—241 млн. новых случаев заболевания, от 67 до 87 млн. из которых закончатся летальным исходом [83,133, 196].
В настоящее время, проблема лечения туберкулеза широко обсуждается как в мировом сообществе, так и в России. ВОЗ разработаны программы борьбы с распространением туберкулеза в мире. Соблюдение рекомендаций ВОЗ должно позволить снизить распространенность туберкулеза, в частности, форм устойчивых к стандартным режимам терапии [3, 26, 36, 52, 53, 56,151, 196].
Важной проблемой в лечении туберкулеза являются пациенты с непереносимостью противотуберкулезных препаратов первого ряда [15, 27, 35, 156, 173]. Наиболее частыми побочными эффектами противотуберкулезной терапии являются гепатотоксичность и кожные реакции. Три основных препарата (изо-ниазид, рифампицин, пиразинамид) обладают гепатотоксичностью. Потребность в отмене, по крайней мере, одного основного препарата из-за развития побочных эффектов возникает в 26% случаев [1, 7, 27, 35, 42, 156, 173]. Так как пациентам с непереносимостью препаратов первой линии требуется комбинированная терапия не менее чем тремя активными препаратами, необходимо подбирать высокоэффективные средства, обладающие минимальным токсичес 8 ким профилем с адекватной переносимостью больными и хорошей совместимостью с основными противотуберкулезными препаратами (ПТП) [37, 68].
Глобальное увеличение числа штаммов МБТ с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ) к основным ПТП [3, 19, 59, 82, 83, 84, 96, 118, 119, 164, 185], связанная, в первую очередь, с назначением неадекватной противотуберкулезной терапии и непереносимость препаратов первой линии противотуберкулёзной терапии [3, 49, 143, 173] может вызвать большие проблемы при лечении и требует модификации стандартных режимов терапии.
Среди недавно разработанных препаратов фторхинолонызаняли важное место в лечении туберкулеза легких, демонстрируя активность в отношении МБТ. Клинически значимым свойством фторхинолонов также является низкая частота развития нежелательных явлений, что делает их средствами выбора при лечении случаев непереносимости препаратов первой линии терапии [84, 118]. Но, в свою очередь, к фторхинолам первого и второго поколений у МБТ постепенно вырабатывается устойчивость, которая, в настоящее время, может достигать 17% [50]. Кроме того, фторхинолонам свойственна перекрестная устойчивость как внутри генерации, так и между поколениями, что существенно затрудняет выбор препарата для терапии туберкулеза.
Среди применяющихся в коротких курсах для лечения неспецифических инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания фторхинолонов, высокую антимикобактериальную активность в исследованиях in vitro и in vivo, продемонстрировал спарфлоксацин. Он не обладает перекрестной устойчивостью с другими фторхинолонами и имеет широкий спектр антибактериальной активности в отношении грамположительной и грамотрицательной флоры. Фармакокинетические свойства спарфлоксацина обеспечивают высокую степень биодоступности и хорошее проникновение в ткани и альвеолярные макрофаги. Э га его свойства явились основой для рассмотрения спарфлоксацина в качестве противотуберкулезного фторхинолона, использование которого может расширить возможности современной химиотерапии туберкулеза легких. В литературе встречаются единичные исследования, посвященные изучению спарфлоксацина для лечения туберкулеза. Но они носят спорадический, а не системный характер, не позволяют создать достоверную картину как эффективности, так и безопасности применения препарата в длительных курсах терапии туберкулеза легких. Не проведено адекватных исследований токсических свойств препарата, обосновывающих возможность его применения в длительных режимах химиотерапии. Не определен режим его использования в комплексной химиотерапии туберкулеза легких. В связи с недостаточной изученностью препарата, международными и Российскими регуляторными органами не выдавалось разрешение на клиническое применение спарфлоксацина для лечения туберкулеза легких.
Особенности течения туберкулезного процесса
Высокая распространенность туберкулеза послужила основой для отрицательного патоморфоза туберкулезного процесса, когда казеозный вариант воспаления стал доминировать в течении туберкулеза (до 45%). Регистрируются острые, распространенные, вплоть до генерализации формы, частота которых колеблется от 60 до 81% [22, 46, 49, 51, 53]. Соколовой Г.Б. и соавт. были проанализированы 1400 историй болезни больных с впервые диагностированным лекарственно-устойчивым туберкулезом легких в период с 2000 по 2005 гг. Острое начало и прогрессирование туберкулеза наблюдалось у 79,3%, распространенные процессы в легких — у 91,2%, деструктивные изменения - у 88,9% больных [49]. Процесс с таким течением стали диагностировать не только при классических острых формах туберкулеза (милиарном и казеозной пневмонии), но и при других формах. Это послужило основанием для объединения больных с подобным течением туберкулезного процесса под единым названием «остропрогрессирующий туберкулез легких» (ОПТЛ). Понятие ОПТЛ объединяет различные клинические формы туберкулеза: казеозную пневмонию, варианты диссемини-рованного туберкулеза, включая милиарный, остротекущий инфильтративный туберкулез, фиброзно-кавернозпый туберкулез при развитии казеозной пневмонии в интактных участках легочной ткани. Среди больных ОПТЛ показатели смертности высоки и составляют 67% [25, 53,111]. Выявление ОПТЛ имеет большое значение, так как подавляющее большинство больных первоначально госпитализируютсяs по поводу различных острых респираторных заболеваний или пневмонии.
Кроме того, у 20—28% больных ОПТЛ химиотерапия неэффективна из-за наличия большого количества лекарственно-устойчивых к ПТП форм МВТ туберкулеза, что требует особого подхода при назначении лечения данных больных [2, 3,10]. Развитие лекарственной устойчивости связано с преимущественным выживанием части микробной популяции, имеющей механизмы защиты против антибактериального агента. В каждой популяции находится незначительное число мутантных клеток (около 10б—109), устойчивых к какому-либо препарату. При проведении химиотерапии погибают чувствительные микробные клетки, а устойчивые размножаются. В результате происходит замещение чувствительных клеток устойчивыми [53,106]. Подразделение МВТ на чувствительные и устойчивые к ПТП проводится на основании клинико-лабораторных исследований. Критерием чувствительности является минимальная подавляющая концентрация препарата (МПК), не дающая расти МВТ в стандартных условиях. Устойчивыми считаются МВТ, сохраняющие способность к росту при определенных концентрациях противо туберкулезных препаратов в питательной среде. Согласно определению ВОЗ [53, 96, 196], лекарственно-устойчивый туберкулез — это случай туберкулеза с выделением МВТ, устойчивых к одному и более ПТП. Существует несколько понятий, связанных с устойчивостью МВТ к ПТП [22, 24, 31, 53, 59]. Общая лекарственная устойчивость — распространенность лекарственной устойчивости среди всех случаев туберкулеза вне зависимости от предыдущей лекарственной терапии в определенный год, в определенной стране. Первичная лекарственная устойчивость — наличие устойчивых штаммов МВТ у нелеченных больных. Приобретенная (вторичная) лекарственная устойчивость — наличие устойчивых штаммов МВТ у больных получавших ПТП в прошлом в течение месяца Первичная устойчивость является менее тяжелой формой, чем приобретенная, и чаще бьгеает к одному препарату, а приобретенная устойчивость обычно определяется к двум и более ПТП. Уровень устойчивости (то есть МПК анти-биотиков) ниже при первичной, чем при приобретенной устойчивости. Первичная устойчивость существенно не влияет на исход лечения впервые выявленных больных туберкулезом [59]. Монорезистентность — устойчивость к одному РІЗ противотуберкулезных препаратов, чувствительность к другим препаратам сохранена. Полирезистентность — устойчивость к двум и более препаратам. Множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) — устойчивость к изониазиду и рифамшщшгу (двум наиболее эффективным препаратам), независимо от наличия или отсутствия устойчивости к другим ПТП. Сверхустойчивость — МЛУ в сочетании с устойчивостью к фторхииолонам и одному из инъекционных средств (канамицин, амикацин, капреомицин). Перекрестная устойчивость — устойчивость к близким по химической структуре препаратам.
Распространенность лекарственной устойчивости Лечение больных с тяжелыми формами туберкулеза представляет значитель ную сложность, поскольку в подавляющем числе наблюдений причиной развития туберкулезного процесса по остропрогрессирующему варианту является МЛУ МБТ к основным ПТП. Готовцева А.И. и Чуканов В.И. установили, что у больных стабильной формой фиброзно-кавернозного туберкулеза легких МЛУ МБТ к ПТП определяется в 48,6%, при прогрессирующем течении с осложнениями — в 87,5 % случаев [9]. Общий показатель заболеваемости туберкулезом с МЛУ МБТ к ПТП составляет 1,7 на 100 тыс. населения, с тенденцией к увеличению. Первичная МЛУ в 2006 году возросла на 1% и составляет, в среднем, по России 9,4%. У 20,3% бактериовыделителей состоящих на учете на конец 2006 года выявлена МЛУ МБТ, что на 8,6% выше, чем в 2005 году [28, 61]. Первичная МЛУ в 1999 г. зарегистрирована, в среднем по России, у 6,7% больных туберкулезом, с колебаниями по отдельным территориям от 1,3% (Ивановская область) до 47,1% (Северно-Осетинская республика), так как не везде идентичные условия бактериологических исследований. Частота первичной МЛУ МБТ составляет: к изониазиду — 22,2%, рифампицину — 5,7%, этам-бутолу - 16,7%, стрептомицину — 76,5%, канамицину — 12,7%, протионамиду — 10,9% [20]. Частота развития вторичной МЛУ составляет, в среднем, 28,3%, с разбросом от 0,4% (Орловская, Ульяновская обл., Хабаровский край) до 56,0% (Смоленская обл.). Частота развития вторичной МЛУ МБТ составляет: к изониазиду — 92,2%, рифампицину - 95,7%, этамбутолу — 86,7%, стрептомицину — 100%, канамицину — 72,7%, протионамиду — 60,0% [28]. Национальные исследования лекарственно-устойчивого туберкулеза в развитых странах подтвердили значительное снижение эффективности лечения туберкулеза в последние годы, в основном, за счет роста числа МБТ с МЛУ. Авторы отмечают, что истинное состояние глобальной лекарственной устойчивости МБТ практически неизвестно [119, 120, 133, 196]. Показатели первичной устойчивости, по данным различных авторов, к одному препарату и более составляет до 40,6%, а МЛУ к двум препаратам и более — до 26,5%. Распростра
Активность спарфлоксацина в отношении микобактерий туберкулеза (чувствительных и устойчивых к основным противотуберкулезным препаратам) in vitro в сравнении с ломефлоксацином
Целью исследованрія явилась оценка противотуберкулезррой актргерюсга спар-флоксацина in vitro в ОТНОШЄНИРІ чувствительных и лекарстверіріо-устойчррвьіх МБТ, в сравненрш с ломефлоксацршом. Для опытов ріспользовали субстанцрш спарфлоксацирра и ломефлоксацррна. Тест-культуры: 1) H37R.V — лабораторный штамм M.tuberculosis, высоковиру-лентный, чувствительный к основным ПТП. 2) Культуры M.tuberculosis, выделенные РІЗ мокроты больных (4 штамма: 128, 117, 116, 70) с различной устойчиво-стью к основным ПТП. Крштеррш ОЦЄНКРР — уровнрі минрімальной подавляющей РР бактерицррдной концентрацрш (МПК, МБ К). Определение МПК РІ МБК проводрілрр стандартным методом серрійньгх разведсрірій в СООТВЄТСТВРІЄ с требованріями Фармакологического комрітета РФ. Для определения МПК и МБК в ТЄЧЄРІРІЄ 2 недель тест-культуры выращивали в жидкой питательной среде ШКОЛЬНРІКОВОЙ, С добавлением различных концептрацрій спарфлоксацррна или ломефлоксацина (8; 4; 2; 1; 0,5; 0,25; 0,125; 0,063 мкг/мл). Через 2 НЄДЄЛРІ РІЗ ОДНОЙ половины пробрірок приготавлрівали мазкрі PI окрашргвали PIX ПО Црілю-Нрільсену. В мазках ПОДСЧРІ-тьгеалрі количество МБТ и, на основанріи получеріньгх результатов, определяли МПК препарата, при которой наблюдалось подавленріе РГХ роста. Содержимое второй половиріьі пробрірок дважды отмьівалрі фрізиологаческим раствором PI засевалрі на плотные прггательные среды. Жизнеспособность МБТ, после воздействия препарата, оценргвалрі по способности их к росту на среде Lowenstein-Jensen. Полное отсутствие роста культуры оцершвалрі как МБК препарата. Изучерше зффектрівнострі действрія различных доз спарфлоксацина, в сраврге ний со стандартной дозой ломефлоксацииа, оценивалась in vivo, на модели генерализованного туберкулёзного процесса у самцов белых аутбредных мышей Swiss, вызванного устойчивым диким штаммом МБТ N128, выделенным от больного, не получавшего ранее терапию фторхинолонами (#=70) и культивированного в бульоне Дюбо.
Дикий штамм МБТ проявлял устойчивость к ри-фампицину (25 мкг/мл), изониазиду (1 мкг/мл), стрептомицину (50 мкг/мл) и канамицину (50 мкг/мл). Введение препаратов осуществлялось согласно следующей схемы: группа 1 — спарфлоксацин (6,3 мг/кг); группа 2 — спарфлоксацин (12,5 мг/кг); группа 3 — спарфлоксацин (25 мг/кг); группа 4 — спарфлоксацин (50 мг/кг); группа 5 — спарфлоксацин (100 мг/кг); группа 6 — ломефлоксацин (400 мг/кг); группа 7 — контрольное вещество (1% водная суспензия крахмала). Сравнительную эффективность различных доз спарфлоксацина, а также ломефлоксацииа, оценивали спустя 30 дней, когда животных эвтаназировали, про-ВОДИЛРІ патоморфологическое, гистологические и микробиологические исследования внутренних органов. Эффективность химиотерапии оценивали по степени пораженности генерализованным туберкулезным процессом легких (гистологическая характеристика процесса, объемная плотность очагов поражения) и селезенки (гистологическая характеристика процесса, число эпителиоидноклеточных гранулем), высеваемо-сти МБТ из гомогената селезенки, которую обрабатывали описанным выше способом. По микробрюлогическим критериям вычисляли индекс эффективности, как отношение разницы показателей контроля и опыта к контролю. Для гистологических исследований кусочки ткани легких и селезенки фиксрі-ровали в 10% забуфереином по ЛРІЛИ формалине. После фиксации материал заливали в парафиновые блоки, из которых делали ступенчатые срезы. В гасто-логргческих препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, при увелргче-нии хЮО подсчитывали в поле зрения количество эпителиоидноклеточных гранулем в селезенке, а при увеличении ХІ25 — объемную плотность очагов туберкулезной пневмонии. Эксперимент по изучению лечебного эффекта спарфлоксацина проводили в сравнении с другими противотуберкулезными препаратами на модели генерализованного туберкулеза у мышей линии BALB/c («=220). Модель генерализованного туберкулёза воспроизводили инокуляцией животным дикого штамма N128, выделенного от больного с МЛУ МБТ к ПТП, который ранее не получал лечение фторхинолонами. Дикий штамм МБТ проявлял устойчивость к рифампицину (25 мкг/мл), изониазиду (1 мкг/мл), стрептомицину (50 мкг/мл) и канамицину (50 мкг/мл). Введение препаратов осуществлялось согласно схемы исследования (табл.2.6.). Влияние тестируемых препаратов на степень выраженности одного из сопутствующих туберкулезному процессу симптомов — спленомегалии, оценивалось по разнице значений показателя средней выборочной массы селезенки в разных исследуемых группах. Эффективность противомикробного действия, в отношении исследуемого штамма N128 МБТ, определялась путем подсчета количества жрізнеспособньїх МБТ в селезенке, которую обрабатывали описанным выше способом. Подсчет КОЕ в легочной ткани не проводился, ввиду достаточности проведения анализа бактерицидной активности на селезенке.
Изучение эффективности действия спарфлоксацина в комбинации с основными используемыми противотуберкулезными препаратами оценивалась in vivo, на модели генерализованного туберкулёзного процесса у самцов белых аутбред-ных мышей Swiss. Тестирование проводилось на двух культивированных в бульоне Дюбо штаммах МБТ: высокочувствительном к ПТП лабораторном штамме H37Rv и устойчивом диком N128, выделенном от больного туберкулезом, не получавшего ранее лечение фторхинолонами. Дикий штамм МБТ проявлял устойчивость к рифампицину (25 мкг/мл), изониазиду (1 мкг/мл), стрептомицину (50 мкг/мл) и канамицину (50 мкг/мл). Б исследовании с каждым РІЗ штаммов МБТ участвовало 55 мышей. Введение препаратов осуществлялось согласно следующей схеме: группа 1 (контрольное вещество) — 1% водная суспензия крахмала; группа 2 — изонріазид (25 мг/кг); группа 3 — рифампицин (25 мг/кг); группа 4 — спарфлоксации (50 мг/кг); группа 5 — изониазид (25 мг/кг) и спарфлоксации (50 мг/кг); группа 6 — рифампицин (25 мг/кг) и спарфлоксации (50 мг/кг); группа 7 — изониазид (25 мг/кг) и рифампицин (25 мг/кг); группа 8 — изониазид (25 мг/кг) с рифампи-цином (25 мг/кг) и спарфлоксацином (50 мг/кг).
Эффективность спарфлоксацина при лекарственно-устойчивом туберкулёзе в эксперименте
Исследование токсичности спарфлоксацина, при однократном внутрибрю-шинном введении, было ограничено диапазоном доз от 85 (однократная терапевтическая доза для крыс) до 1400 мг/кг. Анализ данных не позволил рассчитать конечное значение ЛД50 тестируемого вещества, поскольку увеличение его дозы ограничено максимальным объемом однократного внутрибрюшинного введения для данного вида лабораторных животных. Экспериментально установленное приближенное значение ЛД50 тестируемого вещества для данного пути введения для самцов и самок — более 1400 мг/кг массы тела. Все исследуемые группы животных переживали введение одинаково хорошо. Проявлений симптомов интоксикации не отмечено.
Статистических отличий в показателе массы тела, между группами получавшими тестируемое и контрольное вещества на протяжении исследования, не обнаружено (ANOVA). Макроскопическое патологоанатомического исследования крыс показало, что однократное внутрибрюшинное введение спарфлоксацина в тестируемых дозах не вызывало патологических изменений во внутренних органах. В табл.3.3. представлены результаты исследования острой токсичности на крысах при внутрибрюшинном введении. Введение испытуемых доз переносилось животными хорошо. После введения максимальной дозы (4340 мг/кг) отмечалась потеря аппетита, по сравнению с животными контрольной группы. Гибели животных на протяжении всего исследования не выявлено. Исходя из полученных данных установлено, что значение ЛД50, независимо от пола, лежит выше уровня максимальной исследуемой дозы (более 4340 мг/кг массы тела). Введение более высоких доз препарата не представлялось возможным ввиду непроходимости концентрированной суспензии через зонд. В табл.3.4. представлены результаты исследования острой токсичности на крысах при внутрижелудочном введении. Статистических отличий в показателе массы тела, между группами получавшими тестируемое и контрольное вещества на протяжении всего исследо-вания, не обнаружено (ANOVA). Макроскопическое патоморфологическое исследования крыс показало, что однократное внутрижелудочное введение спарфлоксацина в тестируемых дозах не вызывало патологических изменений во внутренних органах.
У всех животных, которым вводили спарфлоксацин в дозе 285 и 570 мг/кг, в период с 20-го по 35-й дни курса введения, регистрировались симптомы кишечной диспепсии; пик расстройств приходился на 23-25 дни. К 35-му дню введения симптомы кишечной диспепсии постепенно исчезали. Б ходе проведения еженедельных клинических осмотров других симптомов интоксикации не выявлено. Животные оставались активными, опрятными, охотно поедали корм (табл.3.5.). Статрістических различий в показателях средних выборочных значений массы тела, между группами получавшими тестируемое вещество и коптро-лем, не выявлено. Анализ проводился критерием Ньюмена-Кейсла. Динамика изменения массы тела во всех группах до конца исследования была положительной (табл.3.6.). Б ходе исследования, на 30-й день, зарегистрирована смерть подопытного животного. Некропсия обнаружила травму пищевода, полученную зондом в момент введения. Смертности подопытных животных от интоксикации тестируемым препаратом не зарегистрировано. К моменту завершения введения препаратов, у животных получавших спарфлоксацин, а также у животных контрольной группы, по сравнению с группой интактных животных, наблюдалось некоторое снижение спонтанной двигательной активности и эмоционального поведения (по числу актов уринации и дефекации), которое не зависело от доз препаратов. По окончании восстановительного периода эти изменения в поведении крыс продолжали оставаться у животных как контрольной, так и опытных групп, а у интактных животных не наблюдались.
Эффективность противотуберкулезного действия спарфлок сацина в комбинации с основными противотуберкулезными препа ратами
В исследовании принято, что 1-м днем является день начала введения тестируемых препаратов (группы 2-7) и контрольного вещества (группа 1), после развития у экспериментальных животных генерализованного туберкулезного воспаления. К началу периода введения (1-й день) у всех подопытных животных наблюдались клинические признаки заболевания: животные были малоактивны, сонливы, часто чихали, с обильными выделениями из полости носа.
В контрольной группе к 14-му дню, по сравнению с лечебными группами, общее состояние животных заметно ухудшилось: мыши стали малоподвижными, пугливыми, сонливыми, чихали, были заметны выделения РІЗ полости носа, часто гнойного характера. Дальнейшее ухудшение общего состояния животных контрольной группы заключалось в потере аппетита, снижении массы тела, обильных выделениях гнойного характера из носовой полости, хрипах при вдохе и затруднении дыхания. Гибель животных наблюдалась только в группе контроля: в период с 1-го по 30-й дни введения погибло, в общей сложности, 8 животных из 10. Анализ данных (табл.3.31) свидетельствует о том, что внутрижелудочное введение всех тестируемых веществ приводит к значимому, по сравнению с контролем, антимикобактериальному действию. Кроме того, бактерицидное действие, оказываемое вводимыми в составе комбинированной терапии исследуемыми препаратами, оказалось более выраженным, по сравнению с действием веществ вводимых раздельно. Установлено, что в отношении чувствительного к ПТП штамма МБТ (H37Rv) наиболее выраженным противомикробным действием обладала комбинация вводившаяся группе 8 (изониазид с рифампицином и спарфлоксацином), уменьшившая ЧРІСЛО КОЕ на 72,3%, по сравнению с результатами до начала введения (день 0). Меньшей эффективностью, по сравнению с группой 8, обладала комбинация вводившаяся группе 5 (изониазид со спарфлоксацином), снизившая число КОЕ на 66,0%. Одинаково наименее эффективными, среди тестируемых, оказались комбинации, вводившиеся подопытным животным из группы 6 (рифампицин со спарфлоксацином) и группы 7 (изониазид с рифампицином), снижавшие число КОЕ на 59,2% и 57,7 %, соответственно.
Эффект монотерапии изониазидом соответствует монотерапии спарфлокса 97 цином, что согласуется с данными исследований Truffot—Pernot о равной противотуберкулёзной активности 50 и 100 мг/кг спарфлоксацина и 25 мг/кг изониазида на модели туберкулёза мышей. Сочетание спарфлоксащіна с изониазидом характеризуется сипергидным эффектом взаимодействия. В отношении устойчивого к ПТП штамма МБТ (N128), введение тестируемых веществ и их комбинаций подопытным животным, к 30-му АНЮ исследования, сопровождалось значимым, по сравнению с контролем, снижением числа КОЕ во всех подопытных группах, за исключением группы 4, получавшей рифампи-цин (табл.3.32). Наилучший результат по угнетению микробной активности устойчивого штамма МБТ N128, демонстрировала комбинация изониазида с рифампицином и спарфлоксацином, уменьшившая число КОЕ МБТ на 63,6%, по сравнению с результатами до начала введения. Эффективными были комбинации спарфлоксацина с изониазидом (группа 5) и рифампицином (группа 6), в которых число КОЕ снизилось на 57,4% и 48,9%, соответственно. Антимикобактериальный эффект в группах 2 (изониазид), 3 (спарфлоксацин) и 7 (изониазид с рифампицином), был сопоставимым и составил 39,9%, 34,0% и 42,4%, соответственно. В исследование включено 60 больных туберкулезом легких, полностью соответствующих критериям включения. Лица мужского пола, в возрасте 19—51 лет составили 43 (71,7%) пациента, лица женского пола — 17 (28,3%), в возрасте 20 6 лет. У 16 (26,7,0%) больных выявлен инфильтративный туберкулез легких, у 15 (25,0%) — фиброзно-кавернозный, у 9 (15,0%) —диссеминированный, у 9 (15,0%) — казеозная пневмония, у 11 (18,3%) — туберкулема легких (табл.4.1).
