Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Механизмы лекарственных, токсических и алкогольных повреждений печени 9
1.2. Гепатопротекторы и механизмы их действия 26
1.3. Характеристика растений, входящих в состав "Гепатона" 33
Глава 2. Материалы и методы исследования 40
2.1. Реактивы и оборудование 40
2.2. Объекты исследования 40
2.3. Описание моделей повреждения 41
2.4. Методы изучения механизмов действия "Гепатона" 42.
Глава 3. Фармакотерапевтическая эффективность "Гепатона" при повреждениях печени 45
3.1. Влияние "Гепатона" на течение острого повреждения печени, вызванного введением парацетамола 45
3.2. Влияние "Гепатона" на течение острого повреждения печени, вызванного введением тетрациклина 57
3.3. Влияние "Гепатона" на течение острого повреждения печени, вызванного введением этанола 73
3.4. Влияние "Гепатона" на течение хронического токсического гепатита, вызванного введением четыреххлористого углерода 84
Глава 4. Обсуждение полученных результатов 93
Заключение 104
Выводы 106
Фактические рекомендации 107
Список литературы 108
- Гепатопротекторы и механизмы их действия
- Описание моделей повреждения
- Влияние "Гепатона" на течение острого повреждения печени, вызванного введением тетрациклина
- Влияние "Гепатона" на течение хронического токсического гепатита, вызванного введением четыреххлористого углерода
Введение к работе
Актуальность темы. Поражения печени являются широко распространенной патологией и занимают ведущее место в структуре заболеваемости и смертности населения. Заболевания гепатобилиарной системы часто склонны к хронизации патологического процесса, длительному течению, нарушающему трудоспособность людей, что переводит проблему из разряда медико-биологических в категорию медико-социальных (Ивашкин В.Т., Буеверов А.О., 2007; Оковитый СВ., 2006; Подымова С.Д., 2005; Полонский В.М., 2005; Хазанов А.И., 2007).
Причинами развития заболеваний печени могут быть вирусы, гормональные и метаболические нарушения, неправильное питание, хронические болезни желудочно-кишечного тракта и др. На высоком уровне находится заболеваемость печени токсической и аллергической этиологии вследствие увеличения числа алкогольных интоксикаций, неконтролируемого широкомасштабного применения лекарственных препаратов, загрязнения окружающей среды, в том числе воды и продуктов питания, чужеродными химическими соединениями (Ивашкин В.Т., 2007; Маевская М.В., 2006; Подымова С.Д., 2005; Полонский В.М., 2005; Полунина Т.Е., 2006; Хазанов А.И., 2007; Шульпекова Ю.О., 2006; Bjornsson Е., Olsson R., 2005; Kirn J., 2005).
В настоящее время ассортимент лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени и желчевыводящих путей, насчитывает более 1000 наименований. Среди такого многообразия препаратов выделяют группу так называемых гепатопротекторов, действие которых направлено на восстановление гомеостаза в печени, повышение устойчивости органа к действию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерационных процессов в печени (Буеверов А.О., 2003; Винницкая Е.В., 2004; Ильченко Л.Ю., 2007; Машковский М.Д., 2006; Оковитый СВ., 2006). Несмотря на то, что
арсенал гепатозащитных препаратов с каждым годом расширяется за счет появления новых как синтетических, так и природных средств, на их долю приходится всего около 10% от общего числа препаратов, применяемых для фармакологической коррекции заболеваний печени (Ильченко Л.Ю., 2007; Королева Л.Р., 2005; Лопаткина Т.Н., 2007; Оковитый СВ., 2006; Подымо-ва С.Д., 2005; Радченко В.Г., 2004). Поэтому остается высокой потребность в гепатопротекторных средствах, повышающих резистентность печени к действию ксенобиотиков, и нормализующих ее метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции (Буеверов А.О., 2003; Винницкая Е.В., 2004; Машковский М.Д., 2006; Оковитый СВ., 2006; Осипова А.С., 2005).
Особый интерес представляют гепатопротекторы растительного происхождения. Последние имеют широкий диапазон действия и обладают такими важными преимуществами, как низкая токсичность, высокая эффективность, ценовая доступность, взаимозаменяемость и возможность длительного применения без выраженных побочных проявлений (Корсун В., 2004; Лопаткина Т.Н., 2007; Николаев СМ., 2003; Осипова А.С, 2005; Соколов С.Я., 2000).
В отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН разработано гепатопротекторное средство, условно названное "Гепатон". Оно представляет собой сумму сухих фи-тоэкстрактов семи видов лекарственных растений: плоды шиповника (Rosa sp.) - 30%, плоды боярышника (Crataegus sp.) - 20%, корневища и корни девясила высокого (Inula helenium L.) - 10%, цветки ромашки аптечной (Matricaria recutita L.) - 10%, листья мяты перечной (Mentha piperita L.) -10%, трава зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) - 10% и корни солодки уральской (Glycyrrhiza uralensis Fisch.) - 10%.
Цель исследования. Целью настоящей работы явилась оценка фар-макотерапевтической эффективности комплексного растительного, средства "Гепатон" при повреждениях печени.
Задачи исследования. Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:
Изучить гепатопротекторное влияние "Гепатона" на течение острых повреждений печени, вызванных введением парацетамола, тетрациклина гидрохлорида и этанола.
Изучить гепатопротекторное влияние "Гепатона" на течение хронического токсического гепатита, вызванного введением четыреххлори-стого углерода (CCU).
Установить основные механизмы гепатопротекторного действия "Гепатона".
Научная новизна работы. В работе впервые проведено исследование влияния комплексного растительного средства "Гепатон" при повреждениях печени различной этиологии. Установлено, что данное средство обладает фармакотерапевтической эффективностью при острых лекарственных и алкогольных повреждениях печени, а также при хроническом ССЬр гепатите. Одним из основных аспектов в механизме гепатозащитного действия "Гепатона" является его ингибирующее влияние на процессы пере-кисного окисления липидов и стабилизирующее действие на мембранные структуры гепатоцитов. Благодаря этому купируются цитолитический и хо-лестатический синдромы, а также стимулируются дезинтоксикационная, внешнесекреторная и синтетическая функции печени.
Практическое значение работы. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать "Гепатон" для дальнейшего доклинического и клинического изучения с целью его применения в качестве эффективного гепатозащитного средства в комплексной фармакотерапии и профилактике заболеваний печени.
Материалы по проведенным экспериментальным исследованиям фармакотерапевтической эффективности "Гепатона" включены в заключительный отчет Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по проекту № 21.1.3. «Регуляция свободно-
радикальных процессов при повреждениях органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины», утвержденному Президиумом СО РАН.
Полученные в работе данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета.
Внедрение результатов научных исследований. Поданы заявки на
предполагаемое изобретение «Гепатопротекторное средство растительного
происхождения» (№ 2006124093/15 (053802)) и на «Способ получения средст
ва, обладающего гепатопротекторной активностью» (№
2007153671/15(018793)).
Основные положения, выносимые на защиту:
"Гепатон" оказывает гепатопротекторное влияние, стимулируя регенераторные процессы при острых повреждениях печени, вызванных введением парацетамола, тетрациклина и этанола.
"Гепатон" тормозит процессы фиброгенеза при хроническом токсическом гепатите, вызванном введением четыреххлористого углерода.
В основе гепатозащитного влияния "Гепатона" лежат его способности ингибировать процессы перекисного окисления липидов, повышать активность антиоксидантной защиты и обеспечивать стабилизацию мембранных структур гепатоцитов, что ведет к купированию синдромов цитолиза и холестаза, нормализации внешнесекреторной, дезинтоксикаци-онной и синтетической функций печени.
Апробация материалов диссертации. Основные результаты исследований были доложены и обсуждены на:
научно-практической конференции, посвященной 80-летию Д.Ш. Федорова (Улан-Удэ, 2005);
IV региональной межвузовской конференции (Чита, 2005);
научно-практической конференции «Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии» (Иркутск — Аршан, 2005);
международной научной конференции Дорно-орнийн анагаах ухаа-ны хосолмол тогтолцоо (Улан-Батор, 2005);
The Second International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (Ulaanbaatar, 2006);
научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.м.н. Базарона Э.Г. (Улан-Удэ, 2006);
ежегодных научных сессиях Восточно-Сибирского государственного технологического университета по секции: «Химия биологически активных веществ» (Улан-Удэ, 2005, 2006);
в Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» (Улан-Удэ, 2006).
Связь задач исследования с проблемным планом медицинских и фармацевтических наук. Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с программой «Регуляция сво-боднорадикальных процессов при повреждениях органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины» (№ гос. per. 21.1.3.), утвержденной 21.02.2004 г. Президиумом СО РАН.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 2 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.
Структура и объем диссертации. Работа изложена на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 285 источников, из которых 133 иностранных автора. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 24 рисунками.
Гепатопротекторы и механизмы их действия
В России в настоящее время группа гепатопротекторов включает в себя более 40 лекарственных средств (Справочник Видаль, 2007). Их действие направлено на восстановление гомеостаза в органе, повышение его устойчивости к влиянию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерационных процессов в печени (Буеверов А.О., 2001; Королева Л.Р., 2005; Ушкалова Е.А., 2004). Группа гепатопротекторов включает вещества различных химических групп с разнонаправленным воздействием на метаболические процессы. По происхождению выделяют растительные, животные, фосфолипидные и ли-посомальные препараты, а также различные синтетические и полусинтетические препараты, содержащие эссенциальные фосфолипиды. Гепатопро-тективной активностью обладают также анаболические стероиды, антиок-сиданты, витамины, гормоны, адаптогены, препараты, влияющие на активность микросомальных ферментов (Ильченко Л.Ю., 2007; Лопаткина Т.Н., 2007; Осипов А.С., 2006).
Помимо происхождения гепатопротекторы отличаются и по механизму действия: 1) антиоксиданты, которые при взаимодействии со свободными радикалами ксенобиотиков образуют малоактивные радикалы, неспособные продолжать цепные реакции и инициировать перекисное окисление липидов. К ним относят растительные полифенолы (легалон, силибор, катерген, фламин, конвафлавин), витамины (токоферол, ретинол, пан-тотеновая кислота, витогепат и сирепар), тиолы (цистеин, ацетилци-стеин, малотилат); 2) средства, осуществляющие репарацию мембран гепатоцитов и непосредственно, включающиеся в фосфолипидную структуру мембран (фосфолипидные препараты, эссенциале, липостабил); 3) стимуляторы метаболических процессов, являющиеся стимуляторами регенерации печеночной паренхимы (витамины, аминокислоты и нуклеозиды); 4) ингибиторы микросомальных ферментов печени, действие которых обусловлено уменьшением образования токсичных метаболитов гепа-тотропных ядов и ослаблением их повреждающего действия на печень (дитиокарб, метирапона тартрат) (Гундерманн К.-Й., 2002; Ивашкин В.Т., Буеверов А.О., 2002; Новожеева Т.П., Канов Е.В., 1995; Саратиков А.С. и соавт., 2002; Руководство..., 2005; Хныченко Л.К., Бульон В.В., 2002).
Фармакологическое действие гепатопротекторов обусловлено анти-оксидантным эффектом и потенцированием эндогенных антиоксидантных систем гепатоцитов, ингибированием фофсфолиполиза с уменьшением продукции лизофосфатидов и восстановлением нормального спектра фос-фолипидов мембран, улучшением депонирования ионов Са+, а также улучшением матриксной и барьерной функций цитолеммы, мембран митохондрий, эндоплазматического ретикулума и лизосом. При этом гепатозащит-ные средства улучшают обмен белков, липидов, углеводов, а также антитоксическую, экскреторную, холеретическую и другие функции печени, устраняют гиперферментемию, стимулируют процессы регенерации (Венгеровский и соавт., 2000; Шульпекова Ю.О., 2007). В фармакотерапии повреждений печени большой удельный вес занимают лекарственные препараты растительного происхождения.
Растительные препараты составляют более половины всех зарегистрированных в России гепатопротекторов. Интерес к ним обусловлен разнообразием механизмов их протективного действия, широким спектром применения, достаточно полной и легкой ассимиляцией в организме человека, относительно высокой безопасностью с минимумом побочных эффектов, хорошей переносимостью и доступными ценами (Белобородова Э.И., 2003; Королева Л.Р., 2005; Ушкалова Е.А., 2004).
Среди растительных гепатопротекторов основную долю занимают препараты, содержащие флавоноиды расторопши пятнистой (Silybum marianum), действующим веществом которой является силимарин - смесь четырех изомерных соединений - силикристина, силидианина, силибини-наи изосилибина. Силибинин превалирует по количественному содержанию (60-70%) и имеет наиболее высокую биологическую активность. Он обладает выраженными антифибротическими, противовоспалительными, иммуномодулирующими и регенерирующими свойствами, в основе которых лежит гепатопротекторное, мембраностабилизирующее и антиокси-дантное действие (Ильченко Л.Ю., Карлович Т.И., 2007; Ушкалова Е.А., 2004; Farghuli Н., et al, 2000; Pradhan S.C., Girish С, 2006).
Гепатопротективная активность силимарина доказана при экспериментальных повреждениях печени у животных (Ильченко Л.Ю., Карлович Т.И., 2007), вызванных парацетамолом, этанолом, Д-галактозамином и другими токсическими веществами, а также на модели частичной гепатэкто-мии (Sailer R., et al, 2001). Основными фармакологическими эффектами силимарина считается антиоксидантная активность и регенерирующая функция. Антиоксидантный эффект обусловлен его взаимодействием со свободными радикалами в печени и превращением их в менее агрессивные соединения. Тем самым прерывается процесс перекисного окисления липидов и не происходит дальнейшего разрушения клеточных структур. Силимарин также плотно взаимодействует с компонентами клеточной мембраны гепа-тоцита, предотвращая изменения липидной фракции (Muriel P., Mourelle М., 1990). Противовоспалительная активность силимарина обусловлена инги-бированием синтеза лейкотриенов и прерыванием 5-липооксигеназного пути воспаления. Силимарин может проникать внутрь клеточного ядра, взаимодействовать с РШС-полимеразой, приводя к увеличению количества рибосом и повышенному синтезу структурных и функциональных белков (Sonnenbichler J., Zetl I., 1986). Антифибротическое действие силимарина связано с ингибированием нуклеинового фактора кВ, протеинкиназы и замедлением активации звездчатых ретикулоцитов (Gebhardt R., 2002). Про-тективное действие силимарина при токсических, лекарственных и алкогольных поражениях печени обусловлено его взаимодействием с транспортными белками мембраны гепатоцитов и, таким образом, предотвращением попадания токсических веществ внутрь клетки. При алкогольных поражениях печени силимарин способен блокировать выработку ацетальдеги-да, а также обладает антирадикальными свойствами. Благодаря этим свойствам силимарин способствует сохранению депо глутатиона печени, что позволяет ей поддерживать нормальную дезинтоксикационную функцию. Применение силимарина с потенциально гепатотоксичными лекарствами уменьшает или предотвращает нежелательные эффекты последних благодаря его антиоксидантнои активности и антиапоптотическому действию (Ильченко Л.Ю., Карлович Т.И., 2007). Силимарин является действующим веществом препаратов под коммерческими названиями Гепарсил, Легалон, Карсил, Силибор, Силимарин, Сибектан, Силегон и др. Он также входит в состав комбинированных препаратов Гепабене, Гепатофальк-планта, Гал-стена.
Описание моделей повреждения
Для оценки гепатозащитного действия "Гепатона" были выбраны следующие модели повреждения печени: Модель острого парацетамолового повреждения печени вызывали введением белым крысам внутрижелудочно парацетамола (ацетаминофена) в виде водной суспензии с Tween-80 (1:10) в дозе 250 мг/кг, 1 раз в сутки в течение 2 дней (Руководство..., 2005). "Гепатон" вводили внутрижелудочно в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней. Исследования проводили через 1, 3 и 7 суток от начала опытов.
Модель острого тетрациклинового повреждения печени вызывали введением белым крысам внутрижелудочно тетрациклина гидрохлорида в виде водной взвеси с Tween-80 (1:10) в дозе 1000 мг/кг массы ежедневно в течение 7 дней (Руководство..., 2005). "Гепатон" вводили 1 раз в сутки в течение 21 дня в дозе 50 мг/кг внутрижелудочно, начиная с первого дня введения тетрациклина. Функциональное состояние печени животных оценивали в динамике через 7, 14 и 21 сутки от начала эксперимента.
Модель острого алкогольного повреждения печени вызывали внут-рижелудочным введением белым крысам 40% водного раствора этилового спирта в объеме 7 мл/кг массы крыс 1 раз в сутки в течение 21 дня (Руководство..., 2005). "Гепатон" вводили крысам 1 раз в сутки внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг в течение всего эксперимента.
Модель хронического токсического гепатита у белых крыс линии Wistar вызывали внутрижелудочным введением 50% (v/v) масляного раствора тетрахлорметана в объеме 0,2 мл/100 г массы 2 раза в неделю в течение 1 месяца (Руководство..., 2005). "Гепатон" вводили крысам внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг, начиная с 15 дня от начала эксперимента, 1 раз в день в течение 30 суток. Исследования проводили через 30 и 45 суток от начала эксперимента. Во всех экспериментах крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в соответствующем объеме по аналогичным схемам введения "Гепатона". Интактной группе крыс также вводили очищенную воду в эквиобъемных количествах.
В качестве препарата сравнения использовали растительный гепато-протектор карсил в изоэффективной дозе 100 мг/кг, представляющий собой смесь флавонолигнанов, выделенных из плодов расторопши пятнистой (Ильченко Л.Ю., Карлович Т.И., 2007).
Биохимические показатели отражают метаболизм и функцию печени. Их изменения несут специфическую информацию о глубине функционального расстройства печени. В наших исследованиях определяли активность индикаторных ферментов цитолитического синдрома аланинами-нотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотрансферазы (АсТ), экскреционного фермента - маркера холестаза - щелочной фосфатазы (ЩФ); концентрацию Р-липопротеидов и общего билирубина с использованием стандартного набора реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли по унифицированному способу по биу-ретовой реакции (Меньшиков В.В. и соавт., 1987).
Активность перекисного окисления липидов контролировали посредством определения содержания появляющихся на ранних этапах ПОЛ диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови и вторичного продукта ПОЛ -малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови и в гомогенате печени. Определение МДА в сыворотке крови (Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И., 1981) и в гомогенате печени (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977) проводили спектрофотометрйчески по изменению концентрации ТБК-активных продуктов общепринятым методом. Численные значения выражали в концентрационных единицах МДА, определяемых по разнице поглощения исследуемых проб при длинах волн 532 нм и 580 нм. Концентрацию ДК в сыворотке крови определяли спектрофотомет-рическим методом (Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983). ДК экстрагировали смесью гептан-изопропанол в соотношении 1:1, отбирали гептано-вую фазу и измеряли оптическую плотность при 233 нм. Функцию антиоксидантной системы печени оценивали по уровню активности каталазы в сыворотке крови (Королюк М.А. и соавт., 1988) и супероксиддисмутазы (СОД) в плазме крови (Чевари С. и соавт., 1985), а также по содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) в крови (Anderson R.J, 1989), Для оценки морфофункционального состояния печени подопытных животных использовали ряд гистологических и гистоэнзимологических методик. Для гистологического исследования кусочки печени крыс фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, смеси Карнуа с последующей заливкой в парафин (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982). Срезы окрашивали гематоксилином-эозином (Меркулов Г.А., 1969; Елисеев В.Г. и соавт., 1967). Для оценки функционального состояния печени животных подсчитывали количество гепатоцитов в одном миллиграмме ткани и оценивали с помощью метода щелочной диссоциации фиксированных тканей (Молодых О.П. и соавт., 2000). Подсчет числа клеток производили в камере Фукса-Розенталя. Концентрацию клеток рассчитывали по формуле (Луш-никова Е.Л. и соавт., 2000): C=AxVxl 0-3/3,2xm, где С - число клеток в 1 мг ткани; А - среднее число клеток в отделе камеры; 3,2x10-3 - объем камеры (ммЗ); m - масса образца (мг); V - конечный объем суспензии (мл). Концентрацию клеток определяли в 10 повторах. Для оценки состояния окислительно-восстановительных процессов и углеводного обмена в печени подопытных животных использован ряд гис-тоэнзимологических методов. Свежезамороженные срезы окрашивали на содержание гликогена - ШИК-реакцией и активность сукцинатдегидроге-назы (СДГ) - тетразолиевым синим (по Нахласу) (Меркулов Г.А., 1969; Саркисов Д.С., 1996). Полученные данные обработаны статистически с использованием U - критерия Манна-Уитни (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2001). Различия считали существенными при Р 0,05.
Влияние "Гепатона" на течение острого повреждения печени, вызванного введением тетрациклина
Тетрациклины подавляют выработку транспортных белков, обеспечивающих выведение фосфолипидов из гепатоцита, что приводит к развитию жировой дистрофии печени. Также их гепатотоксичное действие связано с прогрессирующей деструкцией малых междольковых протоков, приводящих к внутрипеченочному холестазу (Ивашкин В.Т., 2002; Полунина Т.Е., 2006).
Повреждение печени крыс высокими дозами тетрациклина сопровождалось появлением на 7 сутки опыта признаков развития острого токсического гепатита (табл. 3.2.1). При этом у крыс контрольной группы развивалась гиперферментемия (АсТ и АлТ увеличились в 3,5 и 2 раза соответственно), уровень ЩФ повысился на 60%, концентрация р-липопротеидов, содержание холестерина и общего билирубина повысились почти в 2 раза по сравнению с показателями у интактных крыс. Интенсивность цитолити-ческого и холестатического синдромов у животных контрольной группы сохранялась на высоком уровне в течение всего периода эксперимента.
Курсовое введение "Гепатона" в дозе 50 мг/кг оказывало выраженное гепатопротекторное действие, о чем свидетельствовало уменьшение признаков цитолитического синдрома: активность АлТ в сыворотке крови животных опытной группы на 7, 14 и 21 сутки опыта снижалась соответствен но на 14, 34 и 18%; АсТ - на 22 и 59% (7 и 14 сутки) по сравнению с аналогичными данными в контроле. Уменьшалась выраженность синдрома холе-стаза: активность щелочной фосфатазы к 7, 14 и 21 суткам снижалась на 49, 45 и 46% соответственно, содержание общего билирубина в сыворотке крови - на 46, 28 и 23% по сравнению с контролем. Отмечалось положительное влияние фитосредства и на липидный обмен: содержание холестерина соответственно срокам исследования снижалось на 26, 31 и 53%, а 3-липопротеидов - на 22, 21 и 30% по сравнению с таковыми у, животных в контрольной группе.
Как следует из данных, приведенных в таблице 3.2.2, повреждение печени белых крыс сопровождалось индукцией процессов ПОЛ, на что указывало повышение в сыворотке крови и в гомогенате печени продуктов пе-роксидации. Наиболее высокая интенсивность ПОЛ наблюдалась на 14-е сутки эксперимента. Так, в контрольной группе содержание МДА в гомогенате печени увеличивалось в 5 раз, в сыворотке крови - в 1,7 раза, содержание ДК в сыворотке крови - в 10 раз по сравнению с показателями у животных интактной группы. В эти же сроки наблюдения активность СОД и катал азы снижалась на 26 и 55% соответственно, а концентрация восстановленного глутатиона уменьшалась в 1,5 раза. Такая же тенденция сохранялась и на 21 сутки эксперимента.
Установлено, что курсовое введение "Гепатона" в дозе 50 мг/кг на 7 сутки опыта оказывало умеренное антиоксидантное действие, о чем свидетельствовало снижение концентрации МДА в гомогенате печени на 25% по сравнению с данными у животных контрольной группы. Более выраженное антиоксидантное действие испытуемого средства было обнаружено при исследовании на 21 сутки опыта. Так, концентрация МДА и ДК в сыворотке крови, а также активность СОД и концентрация восстановленного глутатиона у животных опытной группы к указанному сроку достигала значений у интактных животных, тогда как у крыс контрольной группы ряд показа телей свидетельствовал об активации процессов ПОЛ.
При патоморфологическом исследовании печени крыс, получавших только тетрациклин, уже на ранних сроках наблюдения отмечались умеренно выраженные гемодинамические нарушения, в паренхиме органа отчетливо прослеживались белково-дистрофические изменения различной распространенности в дольке. Белковая дистрофия сопровождалась появлением единичных некротизированных гепатоцитов. В некоторых случаях отмечалась дискомплексация печеночных балок. На 14 сутки исследования в печени животных контрольной группы наблюдались выраженные нарушения микроциркуляции в виде полнокровия центральных и портальных вен и капилляров с выраженной клеточной инфильтрацией вокруг них (рис. 3.2.1). Наблюдаемые очажки дистрофически измененных гепатоцитов различной степени выраженности были диффузно распределены по печеночной дольке. Наблюдались участки гепатоцитов, со слабо выраженной белковой, мелко- и среднекапельной жировыми дистрофиями (рис. 3.2.2). В зоне портальных трактов усиливалась мезенхимально-клеточная инфильтрация.
В печени животных, получавших "Гепатон" на фоне введения тетрациклина, на 14 сутки наблюдались менее выраженные структурные изменения по сравнению с контролем: не отмечалось нарушений микроциркуляции, были слабо выражены дистрофические процессы (рис. 3.2.3). Гликоген в гепатоцитах был расположен равномерно, и его содержание было значительно выше такового в печени животных контрольной группы (рис. 3.2.4). О репаративных процессах в клетках печени животных, получавших "Гепатон", свидетельствовала также высокая активность СДГ по сравнению с таковой в контроле (рис. 3.2.5). Рис. 3.2.1 Печень животных контрольной группы. Тетрациклиновый гепатит, 14 сутки опыта. Полнокровие центральных и портальных вен, капилляров. Клеточная инфильтрация портальных трактов. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 10x10
Печень животных контрольной группы. Тетрациклиновый гепатит, 14 сутки опыта. Мелко- и среднекапельная жировая дистрофия ге-патоцитов. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40x10. Рис. 3.2.3 Печень животных опытной группы. Тетрациклиновый гепатит, 14 сутки опыта. Зернистая дистрофия гепатоцитов. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40x10. Рис. 3.2.4 Печень животных контрольной группы (верх снимка), печень животных опытной группы (низ снимка). Тетрациклиновый гепатит, 14 сутки опыта. Содержание гликогена в клетках печени животных, получавших "Гепатон", выше по сравнению с таковым у животных контрольной группы. ШИК-реакция. Увеличение 4x10. Рис. 3.2.5 Печень животных контрольной группы (верх снимка), печень животных опытной группы (низ снимка). Тетрациклиновый гепатит, 14 сутки опыта. Активность СДГ в печени животных, получавших "Гепа-тон", выше по сравнению с таковой в контроле. Окраска тетразолиевым синим. Увеличение 4x10. Наиболее выраженные структурные изменения в паренхиме печени животных контрольной группы наблюдались на 21 сутки введения тетрациклина: отмечалось нарушение микроциркуляции (рис. 3.2.6), гепатоциты с выраженной белковой и средне- и крупнокапельной жировой дистрофией были диффузно локализованы в паренхиме органа. В гепатоцитах, подверженных дистрофическим изменениям, уменьшалось содержание гликогена и снижалась активность СДГ. На месте очагов некротизированных гепато-цитов отмечалось разрастание соединительно-тканных элементов (рис. 3.2.7).
В печени животных, получавших "Гепатон", на 21 сутки исследования изменения были выражены в меньшей степени по сравнению с контролем: синусоидальные пространства в печени были незначительно расширены, гепатоциты были подвержены слабо выраженной зернистой дистрофии (рис. 3.2.8). В паренхиме органа не выявлялась жировая дистрофия, характерная для контроля. О репаративных процессах в печени свидетельствовало увеличение количества двуядерных и гипертрофированных гепатоцитов, повышение активности СДГ. Подтверждением этому служили также данные ШИК-реакции: содержание гликогена в печени животных, получавших "Гепатон", было значительно выше такового в контроле (рис. 3.2.9).
Влияние "Гепатона" на течение хронического токсического гепатита, вызванного введением четыреххлористого углерода
Выбор модели хронической интоксикации четыреххлористым углеродом обусловлен тем, что основными механизмами повреждения- печени являются активация ПОЛ и нарушение ионного гомеостаза, что характерно для гепатотоксичности большинства ксенобиотиков. При длительном введении белым крысам тетрахлорметана развивается хронический гепатит, который сопровождается выраженной гиперферментемией, свидетельствующей об интенсивности цитолиза, развитием холестаза, нарушением ли-пидного обмена, диспротеинемией и мезенхимально-воспалительной реакцией (Полонский В.М., 2005; Шерлок Ш., Дули Дж., 1999).
Как следует из таблицы 3.4.1, на 30-е сутки наблюдения под влиянием тетрахлорметана отмечалось повышение активности трансаминаз в сыворотке крови АлТ и АсТ в 6,5 и 8,8 раз соответственно, ЩФ - в 2 раза, холестерина - в 1,8 раз, концентрации (3-липопротеидов - в 1,5 раза, показателей тимоловой пробы - в 5,5 раз, содержание общего билирубина - в 6 раз; содержание общего белка уменьшилось на 10% по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.
При курсовом введении "Гепатона" в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг через 30 суток от начала экспериментов у животных опытной группы наблюдалась тенденция к снижению активности ферментов — АлТ и АсТ на 18 и 15% соответственно по сравнению с контролем. Уменьшалась выраженность синдрома холестаза, о чем свидетельствовало снижение активности ЩФ почти в 2 раза по сравнению с анало гичными данными в контрольной группе. На фоне введения "Гепатона" уровень р-липопротеидов соответствовал таковому у животных в интактнои группе, тогда как у крыс контрольной группы он был повышен в 1,5 раза, что являлось свидетельством положительного влияния на липидный обмен испытуемого средства (табл. 3.4.1).
На 45 сутки наблюдения от начала эксперимента под влиянием "Ге патона" у животных опытной группы активность трансаминаз (АлТ и АсТ) и щелочной фосфатазы снижалась на 25, 39 и 22% соответственно, концентрация билирубина — на 34% за счет прямой фракции по сравнению с ана логичными данными в контроле. Такая же благоприятная динамика отмечалась в содержании холестерина и р-липопротеидов в сыворотке крови. Также "Гепатон" способствовал устранению дислипопротеинемии и нормализации белково-синтетической функции печени, свидетельством чему являлось снижение показателей тимоловой пробы на 49% и повышение концентрации общего белка в сыворотке крови животных опытной группы по сравнению у крыс в контрольной группе (табл. 3.4.2).
. Данные, приведенные в таблице 3.4.3, свидетельствуют о том, что длительное введение четыреххлористого углерода сопровождалось индукцией процессов перекисного окисления липидов и снижением активности эндогенной антиокислительной системы организма. Так, на 30 сутки введения тетрахлорметана отмечалось повышение содержания ДК и МДА в сыворотке крови белых крыс соответственно в 2,4 и 1,6 раза, а МДА в гомогенате печени животных - в 1,8 раза по сравнению с данными у животных в контрольной группе. Одновременно с этим снижалась активность каталазы и СОД на 44 и 40% соответственно, а также содержание восстановленного глутатиона - на 34% по сравнению с показателями у крыс интактной группы. На 45 сутки эксперимента концентрация ДК и МДА в сыворотке крови и в гомогенате печени животных контрольной группы повышались в 1,9; 1,8 и 1,4 раза соответственно по сравнению с данными в интактной группе. Активность каталазы и СОД снизилась на 40 и 18% соответственно, а содержание восстановленного глутатиона - на 13% по сравнению с показателями у крыс интактной группы.
На фоне введения "Гепатона" животным опытной группы на 30 и 45 сутки наблюдения отмечалось снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 31 и 24%, снижение концентрации МДА в сыворотке крови и в гомогенате печени белых крыс на 23 и 17% и на 29 и 27% соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Наряду с этим, "Гепатон" повышал активность антиоксидантной защиты: при его курсовом назначении через 30 суток активность каталазы и СОД в сыворотке крови возрастала на 26 и 22%, через 45 суток - на 33 и 13% соответственно. Также под влиянием испытуемого средства повышалось содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови на 19 и 13% соответственно срокам наблюдения по сравнению с аналогичными данными в контроле.
Гибель белых крыс, подвергнутых интоксикации тетрахлорметаном и не получавших "Гепатон", составляла через 2 недели 30% и через месяц -50% животных контрольной группы. В группе крыс, подвергнутых инток сикации четыреххлористым углеродом и получавших испытуемое средство, погибло 20% экспериментальных животных.
Патоморфологические исследования показали, что длительная интоксикация тетрахлорметаном (30 дней) сопровождалась развитием выраженных структурных нарушений печени животных. Так, в печени крыс контрольной группы отмечались значительные по площади лимфоидно-гистиоцитарные инфильтраты, сочетающиеся с появлением признаков «баллонной» дистрофии гепатоцитов, фиброзная ткань заполняла дольки печени, создавая ложные дольки и вокругдольковые пространства (рис. 3.4.1), что указывало на хронизацию процесса и развитие фиброзно-цирротических изменений в ткани печени. Кроме того, в печени животных контрольной группы было установлено отсутствие гликогена, значительное содержание липофусцина, снижение активности окислительно-восстановительных ферментов (снижение содержания СДГ), что свидетельствовало об активации процессов ПОЛ.
Курсовое введение "Гепатона" на фоне хронического гепатита оказывало выраженное гепатопротекторное действие, о чем свидетельствовало уменьшение выраженности структурных изменений печени. В частности, на фоне введения испытуемого средства обнаруживались единичные мелкоочаговые лимфоидно-гистиоцитарные инфильтраты; существенно уменьшалось количество гепатоцитов, подвергшихся некрозу и баллонной дистрофии; не наблюдалось разрастания тяжей соединительной ткани (рис. 3.4.2), повышалось содержание гликогена, увеличивалась активность СДГ и уменьшалось содержание липофусцина в гепатоцитах, что свидетельствовало об ингибировании процессов ПОЛ.
