Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Современные представления об этиологии и патогенезе атеросклероза 10
1.2. Современные лекарственные препараты, предназначенные для профилактики и лечения атеросклероза 28
1.3. Характеристика комплексного растительного средства «Камфора-25» 40
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований
2.1. Состав и соотношение отдельных компонентов в растительном средстве «Камфора-25» 49
2.2. Описание экспериментальных моделей дислипопротеидемий и методов исследования 50
ГЛАВА 3. Фармакологическая активность многокомпонентного растительного средства «Камфора-25»
3.1. Изучение противовоспалительной активности растительного средства «Камфора-25» 59
3.1.1. Изучение антиэкссудативной активности растительного средства «Камфора-25» 60
3.1.2. Изучение влияния растительного средства «Камфора-25» на процессы альтерации в очаге воспаления 61
3.1.3. Влияние растительного средства «Камфора-25» на про- лиферативную фазу воспаления 62
3.2. Изучение влияния растительного средства «Камфора-25» на систему гемостаза 63
3.3. Изучение иммуномодулирующего влияния растительного средства «Камфора-25» 69
3.3.1. Влияние растительного средства «Камфора-25» на состояние клеточного иммунитета 71
3.3.2. Влияние растительного средства «Камфора-25» на состояние гуморального иммунитета 72
3.3.3. Изучение влияния растительного средства «Камфора-25» состояние макрофагального иммунитета 73
3.4. Изучение антиокислительных и мембраностабилизирующих свойств растительного средства «Камфора-25» 74
3.5. Влияние растительного средства «Камфора-25» на желчевыделитель- ную и желчеобразовательную функцию печени белых крыс 78
3.6. Изучение антистрессорной активности растительного средства «Камфора-25» 82
ГЛАВА 4. Фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства «Камфора-25» при экспериментальных дислипопротеи- демиях
4.1. Гиполипидемическое действие растительного средства «Камфора-25» при твиновой гиперлипопротеидемии 85
4.2. Гиполипидемическое действие растительного средства «Камфора-25» при этаноловой гиперлипопротеидемии 88
4.3. Гиполипидемическое и гипогликемическое действие растительного средства «Камфора-25» при гиперлипопротеидемии, вызванной введением адреналина гидрохлорида 91
4.4. Гиполипидемическое действие «Камфоры-25» при экспериментальной гиперлипидемии, вызванной введением гидрокортизона ацетата 94
4.5. Гиполипидемическое действие «Камфоры-25» при гиперлипидемии у белых крыс, вызванной атерогенной диетой 98
ГЛАВА 5. Обсуждение результатов 104
Заключение 121
Выводы 123
Литература 124
- Современные лекарственные препараты, предназначенные для профилактики и лечения атеросклероза
- Описание экспериментальных моделей дислипопротеидемий и методов исследования
- Изучение влияния растительного средства «Камфора-25» на систему гемостаза
- Гиполипидемическое действие растительного средства «Камфора-25» при этаноловой гиперлипопротеидемии
Введение к работе
Актуальность темы. По данным Всемирной организации
здравоохранения (ВОЗ), количество заболеваний сердечно - сосудистой системы имеет тенденцию к неуклонному росту. От сердечно-сосудистой патологии в мире ежегодно умирает более 15 млн. человек, причём большинство из них не доживает до 65 лет (Е.И.Чазов, 2002). В настоящее время смертность населения трудоспособного возраста в структуре болезней системы кровообращения составляет 78 %, из них 51 % и 27 % приходятся на долю коронарной болезни сердца (КБС) и мозгового инсульта соответственно (Р.Г.Оганов и соавт., 2002; Я.О. Oganov е1 а1., 1992). Известно, что среди причин и основных патогенетических механизмов, приводящих к развитию указанных нозологических форм, ведущее место занимает атеросклероз (Р.Г.Оганов, 1994).
Атеросклероз является единственной болезнью человека, генетически предназначенной каждому и, поэтому, несомненно, представляет сегодня большую и прямую опасность для всего человечества (Д.М.Аронов, 2000; В.С.Жданов и соавт., 2002).
На сегодняшний день доказано, что атеросклеротические изменения сосудов наблюдаются у 90% мужчин и женщин старше 40 и 50 лет соответственно. В настоящее время в РФ не наблюдается тенденции к снижению смертности от КБС, как это происходит в странах Запада, где интенсивно проводятся мероприятия по профилактике атеросклероза (К Руога1а е1 а1., 1994). Напротив, речь идет о сверхсмертности с ежегодной убылью населения в пределах 700-800 тысяч человек в год (Д.М.Аронов, 2002). Если подобная ситуация продолжится, то «...к 2016 г. в России будет насчитываться 134 млн. жителей, что на 11,6 млн. меньше, чем сейчас» (из речи министра здравоохранения РФ Ю.Л.Шевченко на 1У(ХХ) Всероссийском Пироговском съезде врачей, 2001) (М.А.Гуревич, 2003).
Сегодня очевидно, что атеросклероз - это многофакторное заболевание, ведущая роль в развитии которого принадлежит нарушениям липид- ного и углеводного обмена, индукции свободнорадикального окисления липидов, дисфункции эндотелия, повышенному тромбогенному потенциалу плазмы (Е.И.Чазов, 2000).
В современных условиях проблема антиатеросклеротической эффективности различных средств и методов лечения оказалась более сложной, чем первоначальные представления о роли нормализации уровня атероген- ных липидных и липопротеиновых фракций (В.И.Метелица и соавт., 1996). Вышеуказанное обосновывает необходимость дальнейшего поиска, разработки, внедрения и совершенствования мер по предупреждению и лечению атеросклероза и его осложнений. Одним из главных звеньев данного комплекса мероприятий является изучение новых лекарственных средств, влияющих на этиопатогенетические механизмы развития атеросклероза. Исходя из этого, препараты, применяемые для профилактики и лечения атеросклероза, должны отвечать следующим требованиям: нормализовать уровень атерогенных фракций липопротеидов, повышать уровень антиатеро- генного холестерина липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП), снижать интенсивность свободнорадикального окисления липидов, активизировать антиоксидантный потенциал, оказывать корригирующее влияние на иммуногенез и воспалительные реакции, препятствовать развитию атерот- ромбоза.
Несмотря на широкий выбор антиатеросклеротических и гиполипи- демических препаратов, противоатеросклеротические средства не всегда оказывают желаемый эффект и довольно часто вызывают тяжелые побочные реакции. В связи с этим, весьма важной проблемой является поиск новых, активных и малотоксичных лекарственных средств, предотвращающих развитие дислипопротеидемий различного генеза и предназначенных для ранней адекватной терапии и замедления прогрессирования атеросклеротического процесса. В этом плане перспективными являются средства растительного происхождения. В настоящее время лекарственные растения продолжают оставаться одними из перспективных источников получения новых биологически активных соединений. Препараты растительного происхождения менее токсичны, обладают более мягким действием, что обусловлено родством метаболизма растительной и животной клетки (С.Г.Аксиненко и соавт., 2002).
Эти обстоятельства обосновывают актуальность поиска новых эффективных нетоксичных антиатеросклеротических средств растительного происхождения. Объектом наших исследований явилось 25-ти компонентное растительное средство, составленное по рецептурным прописям тибетской медицины («Чжуд-ши»..., 2001).
Целью исследования явилось определение фармакологических свойств и оценка фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства «Камфора - 25» (условное название) при экспериментальных дислипопротеидемиях. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:
- изучить фармакологическую активность комплексного растительного средства «Камфора-25»;
оценить фармакотерапевтическую эффективность растительного средства «Камфора-25» при экспериментальных дислипопротеидемиях;
выявить основные механизмы гиполипидемическо- го/антиатеросклеротического действия растительного средства «Камфора- 25».
Научная новизна. Впервые проведено фармакологическое изучение нового комплексного растительного средства «Камфора-25», разработанного по рецептурным прописям тибетской медицины. Установлено, что «Камфора-25» обладает антиоксидантным, мембраностабилизирующим, противовоспалительным, антиагрегантным, иммуномодулирующим, антистрессорным и желчегонным действиями. Наряду с этим показано, что указанное средство снижает свертывающий потенциал и активизирует противосвертывающую систему крови. При оценке гиполипидемического действия растительного средства «Камфора-25» впервые выявлено, что указанное многокомпонентное растительное средство в значительной степени снижает содержание в крови общих липидов, содержание в крови общего холестерина, триацилгли- церидов, (3-липопротеидов, холестерина липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП), повышает концентрацию холестерина антиатерогенных липопротеидов (липопротеиды высокой плотности - ЛПВП), а также снижает индекс атерогенности при экспериментальных дислипопротеидемиях. Ведущими механизмами в фар- макотерапевтической эффективности «Камфоры-25» являются ее антирадикальная, противовоспалительная, иммуномодулирующая, мембраностабили- зирующая и желчегонная активности.
Практическое значение. Материалы исследований включены в отчет по доклиническому изучению «Камфоры-25», рекомендованной в качестве биологически активной добавки (БАД) для лечения и профилактики атеросклероза.
Полученные данные о высокой фармакотерапевтической эффективности «Камфоры-25» при экспериментальных дислипопротеидемиях позволяют рекомендовать данное гиполипидемическое растительное средство в комплексной терапии и профилактике атеросклеротических поражений сосудов, при ишемической болезни сердца, гипертонической болезни, при сахарном диабете, ожирении различной степени, нарушениях липидного и углеводного обменов, а также в гериатрической практике.
Основные положения, выносимые на защиту:
многокомпонентное растительное средство «Камфора-25» снижает степень выраженности гиперлипопротеидемии при экспериментальных дислипопротеидемиях;
«Камфора-25» снижает уровни содержания холестерина и триа- цилгицеридов сыворотки крови, уменьшает концентрацию в крови атероген- ных липопротеидов и повышает содержание антиатерогенных липопротеидов, нормализует липидный и углеводный обмены;
«Камфора-25» обладает выраженным противовоспалительным действием, положительно влияет на состояние клеточного и гуморального иммунитета, снижает активность макрофагального иммунитета;
указанное средство обладает антистрессорной активностью, снижает свертывающий потенциал крови;
ведущим механизмом антиатеросклеротического действия «Кам- форы-25» является ее желчегонное, противовоспалительное, иммуномодули- рующее действия. Наряду с этим, указанное растительное средство повышает антиокислительный потенциал организма и обладает антирадикальными свойствами.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены
на:
научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (Улан-Удэ, 2003);
4-ой Международной конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки» (Самара, 2003);
XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004);
1-ой электронной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологий и техники» (Москва, 2004);
Ш Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2004).
Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН. Тема исследований связана с выполнением междисциплинарного интеграционного проекта СО РАН № 146 «Разработка лекарственных профилактических препаратов для медицины»; проекта № 62 «Фундаментальные основы и реализация», утвержденных Постановлением Президиума СО РАН от 21.02.2003 г.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследований, фармакологическую характеристику и фармакотерапевтическую эффективность гиполипидемического средства, обсуждение результатов, заключения, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 2 микрофотографиями. Библиографический указатель содержит 291 источник, из них отечественных- 170, иностранных - 121.
Современные лекарственные препараты, предназначенные для профилактики и лечения атеросклероза
Среди прочих факторов риска на развитие атеросклероза влияют переедание, избыток жиров, преобладание в диете мяса, сахара, отсутствие или дефицит грубоволокнистой пищи (Г.Г.Базазьян, 1982). Роль алиментарного фактора в развитии атеросклероза была выдвинута учеными Н.Н.Аничковым и С.С.Халатовым (1913), которые разработали инфильтрационно-комбинационную теорию атеросклероза. Они определили атеросклероз, как хроническое заболевание, характеризующееся первичным отложением липидов в стенке артерий, вторичным реактивным разрастанием соединительной ткани, и, как следствие - образованием склеротических утолщений - бляшек. Сегодня является несомненным то, что экзогенно-индуцированная постпрандиальная гиперлипидемия, т.е. гиперли- пидемия после приема пищи, участвует в развитии и прогрессировании атеросклероза и КБС .А.ВгесИу й а1., 1994; Б-Кагре е! а1., 1994; ГС.Мато а1., 1998; М.8.\ет1;гаиЬ et а1., 1996). Атерогенность постпрандиальной ги- перлипидемии обусловлена повышенным образованием в кишечнике хило- микронов, обогащенных триацилглицеридами и накоплением в плазме крови образующихся после их липолиза ремнантов (Б .Егкекпз, 1993). Циркулирующие в постпрандиальной плазме ремнанты обогащены эфирами холестерина, способны проникать в артериальную стенку и поглощаться моноцитами, макрофагами и /или ГМК, превращая их в «пенистые клетки» (О.В.ЕПуегзгт!:, 1979). Таким образом, выраженность и длительность пост- прандиальной гиперлипидемии, связанная с нарушениями процессов абсорбции и транспорта пищевых липидов, влияет на развитие атеросклероза (М.Г.Бубнова, Р.Г.Оганов, 2004; Н.В.Перова и соавт., 1995; А.М.Оойо ег а1., 1991).
Помимо липопротеидной инфильтрации, большую роль в развитии атеросклероза играют функциональные изменения эндотелия. Эндо- телиальная дисфункция включает в себя наличие дисбаланса между релаксацией и констрикцией, между анти- и протромбогенезом, антипролиферацией и пролиферацией (В.Моисеев и соавт., 2003; В.8.Се1ета]ег е1 а1., 1993; О.В. Мапсни е1 а1., 1996). Также известные модели атеросклероза основаны на теории Р.Росса - «ответа на повреждение», согласно которой атеросклероз начинается с повторного повреждения эндотелия в местах гемодинамического стресса. Дальнейший процесс сопровождается активацией эндотелиоцитов и выделением молекул адгезии, которые опосредуют прилипание тромбоцитов, лейкоцитов и их активацию на обнаженной субэн- дотелиальной поверхности, отложение клеточного «мусора» и солей кальция на стенке артерий и миграцию макрофагов в интиму. В результате происходит образование «пенистых клеток» макрофагального происхождения, миграция и пролиферация ГМК, синтез и депонирование внутриклеточного матрикса, фиброзирование ткани. Присутствие в эндотелиальной выстилке обширных участков деэндотелиализации позволило результатами многих исследований объяснить, что под « повреждением» эндотелия в настоящее время понимают не механическую денудацию, а сложный комплекс изменений внутриклеточного метаболизма, приводящих к « дисфункции» эндотелиальных клеток. Сюда можно отнести изменение барьерной функции, нарушение регуляции сосудистого тонуса, фибринолитической активности, иммунологических и провоспалительных параметров клеток. Последствиями «дисфункции» эндотелиальных клеток могут являться нарушенная реактивность сосудов и вазоспазм, адгезия, трансмиграция и накопление в интиме клеток гематогенного происхождения, нарушения пролиферативной/ секреторной функции сосудистых ГМК, а также нарушение процесса регенерации самих эндотелиальных клеток, экспрессия ими различных цитокинов - интерлейкин-1(ИЛ-1), фактор некроза опухоли -2(ФНО-2); хемокинов- хемоаттрактант-протеин моноцитов, МСР-1, ИЛ-8; факторов роста (А.С.Симбирцев, 1999; В.П.Шичкин, 1998; А.Вез\уа1., 2001).
В результате повреждения клеток эндотелия облегчается проникновение частиц ЛПНП в стенку артерий, где ЛПНП окисляются или подвергаются химическому превращению. Многие исследователи большую роль в возникновении и развитии атерогенеза придают модифицированным ЛПНП (Г.П.Арутюнов, 1999; М.Зутер, 2003; А.А.Лякишев, 2002; Н.В.Перова, 2004). При развитии в организме окислительного стресса, вне зависимости от его природы, наблюдается усиление окисления ЛПНП, которое может индуцироваться свободными и связанными ионами переменной валентности, клеточными ферментными механизмами генерации активированных кислородных метаболитов (НАДФН-оксидаза, миелопероксидаза, Ж)-синтаза и др.). Окисление ЛПНП приводит к изменению их химического состава, сопровождающееся снижением содержания свободных жирных кислот, полным исчезновением антиоксидантов, значительным повышением содержания продуктов окисления (гидроперекисей, диенов, оксистеролов); изменению физических и биологических свойств, в частности повышению аффинности окисленных ЛПНП к скевенджер-рецепторам, определяя высокую эффективность их захвата и деградации макрофагами. Стимуляция миграции макрофагов или моноцитов из кровотока в стенку артерий служит ключевым процессом для развития атеросклероза. Модифицированные ЛПНП могут вызывать реакцию, сходную с воспалением (1.В.МиЫез1ет, 2000). Очевидно, что воспалительный компонент имеет существенное значение в этиопатогенезе атеро- склеротического поражения сосудов и их осложнений (А.П.Ребров, И.В.Воскобой, 2004). По Р.ЫЬЬу (2001), воспаление присутствует на всех стадиях атерогенеза: на самых ранних этапах в месте предполагаемого формирования бляшки обнаруживается скопление циркулирующих лейкоцитов, которые мигрируют через эндотелий в интиму, превращаясь в макрофаги. Моноциты-макрофаги накапливают липиды, а также продуцируют цитоки- ны, факторы роста, различные прокоагулянты и фибринолитические компоненты, вызывая дальнейшее прогрессирование процесса. Воспалительные реакции включают адгезию лейкоцитов к эндотелию, миграцию внутрь сосудистой стенки с последующим превращением в «пенистые клетки», которые стимулируют пролиферацию ГМК и формирование бляшки (P. Libby, 2001).
Описание экспериментальных моделей дислипопротеидемий и методов исследования
Эксперименты выполнены на 350 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-300 г.; 120 мышах линии СВА и Fl (СВА х С57 В1/6) с исходной массой 18-20 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария при одинаковом уходе и питании, световом и температурном режиме, со свободным доступом к воде (И.А.Западнюк, и соавт., 1974). Экспериментальные исследования проводились в соответствии с Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Кроме того, были использованы 1 % суспензия эритроцитов из свежей донорской крови в физиологическом растворе (1:10). Суспензию готовили путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе и центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут; эритроциты барана в качестве антигена в различных концентрациях.
Экспериментальные гиперлипидемии индуцировали в соответствии с Методическими указаниями (Руководство..., 2001; В.Е.Рыженков и соавт., 2000):
1. Однократным внутрибрюшинным введением поверхностно- активного вещества Tween-80 в дозе 250 мг/кг; однократным внутрибрюшинным введением адреналина гидрохлорида- в дозе 1,5 мг/кг; однократным внутрибрюшинным введением гидрокортизона ацетата в дозе 5 мг/100 г; однократным внутрижелудочным введением 40 % раствора этанола в дозе 9 г/кг массы животного (А.Н.Климов, В.Е.Рыженков, 1988; Методические..., 1988). Растительное средство «Камфора-25» вводили лабораторным животным превентивно до введения Tween-80, 40 % этанола, гидрокортизона ацетата и адреналина гидрохлорида в течение 7 дней в форме отвара в объеме 10 мл/кг массы. Последнее введение «Камфоры-25» осуществляли одновременно с индуцированием дислипопротеидемий. Животным контрольной группы вводили эквиобъемное количество дистилированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали «Тан» - сердечно-сосудистый фитосбор № 5, выпускаемый МНПО «Байкалфарм» и рекомендуемый для лечения и профилактики атеросклероза и гипертонической болезни 1-П стадии. В состав указанного фитосбора входят: трава хвоща полевого, трава зверобоя продырявленного, трава сушеницы топяной, трава пустырника, листья мать-и-мачехи, плоды шиповника и плоды укропа. Фитосбор № 5 животным вводили в форме отвара в эквиобъемных количествах по аналогичной схеме.
Исследования осуществляли через 12 часов после введения Т\уееп-80, через 18 часов после введения этанола, через 30 минут после введения адреналина гидрохлорида и через 5 часов после введения гидрокортизона ацетата.
2. Экспериментальную гиперлипидемию вызывали у крыс путем назначения атерогенной диеты в течение 12 недель. Крысы ежедневно внутри- желудочно получали холестерин в дозе 0,1 г/100 массы, 1 мл/100 г массы 3,5 %-ной жирности молоко и 30000 ЕД/100 г витамина Б2. (Методические..., 1988; Руководство..., 2001). «Камфору-25» вводили ежедневно внутрижелу- дочно в форме отвара в объеме 10 мл/кг на протяжении всего эксперимента. Отвар препарата сравнения («Тан» № 5) вводили по аналогичной схеме в эквиобъемных количествах. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в аналогичных условиях.
При исследовании специфической гиполипидемической активности растительного средства «Камфора-25» в сыворотке крови определяли содержание общего холестерина (ОХС), триацилглицеридов (ТГ), фракции Р липопротеидов ((З-ЛП), холестерина липопротеидов высокой плотности (ХСЛПВП), холестерина липопротеидов низкой плотности (ХСЛПНП), холестерина липопротеидов очень низкой плотности (ХСЛПОНП), индекса ате- рогенности (ИА) и отношение ХСЛПНП к ХСЛПВП, используя унифицированные лабораторные методы исследования с помощью диагностических биохимических наборов фирм «Human», «Olvex Diagnosticum», «Roche», «Вектор Бест».
Для оценки противовоспалительной активности растительного средства «Камфора-25» определяли его влияние на фазы воспалительного процессы: экссудацию, альтерацию и образование грануляционно-фиброзной ткани в соответствии с Методическими рекомендациями (Руководство..., 2001). Изучение антиэкссудативной активности испытуемого фитосредства проводили на моделях острого асептического воспаления задней конечности животного. Асептическое воспаление моделировали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3 % раствора формалина (Руководство..., 2001). Выраженность отека оценивали он- кометрическим методом по разнице между объемами здоровой и отечной лапки. Оценку влияния растительного средства «Камфора-25» на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Ф.Тринус и соавт. (1975): стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали белым крысам под кожу в области спины в асептических условиях. Образовавшиеся гранулемы взвешивали в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания (при 70 0 С в течение 24 часов до достижения постоянного веса). Для оценки влияния изучаемого растительного средства на процессы альтерации воспалительный процесс моделировали по методу Menkin (И.А.Ойвин, С.Л.Шетель, 1961) путем подкожного введения белым крысам в область спины 0,5 мл 9 % раствора уксусной кислоты; одновременно внутри- брюшинно вводили раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. Площадь некротизи- рованной ткани оценивали планиметрическим методом путем нанесения контуров некроза на прозрачную пленку. В данной серии экспериментов в качестве препарата сравнения использовали калефлон в дозе 100 мг/кг (Д.М.Машковский, 2002).
Изучение влияния растительного средства «Камфора-25» на систему гемостаза
Механизм гиперлипидемического действия поверхностно - активного детергента Т\уееп-80 обусловлен его способностью связывать липиды липо- протеидов плазмы крови, образуя мицеллы, изолированные от действия фермента липопротеидлипазы (А.Н.Климов, В.Е.Рыженков, 1988). При этом нарушается обмен липидной части липопротеидов между кровью и тканями («дефицит липидов»). Последнее по механизму обратной связи стимулирует липолиз в жировой ткани, усиление синтеза триацилглицеридов и холестерина в печени и, в конечном итоге, усиленное образование ЛПОНП или пре-(3-ЛП. Также следует отметить, что существует прямая корреляция между усилением скорости биосинтеза холестерина и увеличением его содержания в сыворотке крови. Все это способствует развитию гиперлипидемии (А.Н.Климов и соавт., 1974).
Эксперименты выполнены на белых крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 230-250 г. Экспериментальную дислипопротеидемию вызывали путем внутрибрюшинной однократной инъекции детергента Тшееп- 80 в дозе 250 мг/кг. Испытуемое средство вводили животным в форме отвара в объеме 1 мл/100 г массы в течение 7 дней и за 1 час до введения Тшееп-80. Контрольной группе крыс вводили эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. Исследования проводили через 12 часов после введения детергента. Предварительно животные голодали в течение 10-12 часов.
В сыворотке крови определяли содержание общего холестерина (ХС), триацилглицеридов (ТГ), 3- липопротеидов и ХСЛПВП по общепринятым методам. Содержание ХС в липопротеидах низкой плотности (ЛПНП) и ли- попротеидах очень низкой плотности рассчитывали по формуле Фридвальда: ХСЛПОНП = ТГ/5; ХСЛПНП = ОХС - (ХСЛПВП + ХСЛПОНП). Для определения атерогенных свойств крови рассчитывали индекс атерогенности (ИА) по формуле: ИА = ОХС - (ХСЛПВП + ХСЛПОНП) / ХСЛПВП. Кроме того, рассчитывали отношение: ХСЛПНП / ХСЛПВП.
Как следует из таблицы 4.1.1, под воздействием детергента Т\уееп-80 у животных развивается выраженная дислипопротеидемия, которая сопровождается повышением в 2,1 раза содержания в крови триацилглицеридов, ХСЛПНП - на 34 %, ХСЛПОНП - в 2,2 раза, (3-липопротеидов - на 48 %, индекса атерогенности - в 1,9 раза, отношения ХСЛПНП/ХСЛПВП - на 75 % по сравнению с данными у животных интактной группы. Наряду с этим, при введении указанного детергента в сыворотке крови животных на 29 % снижается содержание антиатерогенных липопротеидов - ХСЛПВП.
При профилактическом назначении «Камфоры-25» у животных с экспериментальной твиновой гиперлипидемией происходит нормализация ли- пидного обмена. В частности, содержание триацилглицеридов снижается на 46 %, ХСЛПНП - на 46 %, ХСЛПОНП - на 47 %, р-липопротеидов - на 18 %, индекса атерогенности - в 2,1 раза, более, чем в 2 раза - отношение ХСЛПНП/ХСЛПВП. Также отмечается тенденция к повышению в крови ХСЛПВП (на 23 %) по сравнению с соответствующими показателями у животных контрольной группы. Таким образом, «Камфора-25» благоприятно влияет на липидный обмен при экспериментальной дислипопротеидемии, вызванной указанным детергентом. Выявленное резкое повышение концентрации триацилглицеридов в крови при введении указанного детергента связано с усилением биосинтеза последних в печени. Снижение содержания триацилглицеридов в сыворотке крови при назначении испытуемого фитосредства можно объяснить торможением биосинтеза жирных кислот и, возможно, ингибирующим действием на липолиз, стимуляция которого является одним из важных условий развития гиперлипидемии, вызванной действием детергента Т\уееп-80. При оценке влияния «Камфоры-25 на показатели ПОЛ и антиокси- дантной защиты организма (АОЗ) при твиновой гиперлипидемии было установлено, что под влиянием испытуемого растительного средства содержание малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови крыс снижается по сравнению с контролем на 40 и 28 % соответственно, а активность каталазы повышается по сравнению с соответствующими данными у животных контрольной группы на 52 % (табл. 4.1.2). Таким образом, «Камфора-25» снижает интенсивность свободнорадикальных реакций, повышает антиокислительный потенциал и тем самым препятствует переокислению липопротеидов сыворотки крови. Указанные свойства исследуе мого фитосредства могут лежать в основе профилактики дислипопротеиде- мий различного генеза. тальной твиновой гиперлипидемии у белых крыс Влияние «Камфоры-25» на показатели ПОЛ и АОЗ при эксперимен Умеренное, но регулярное потребление этанола вызывает значительное повышение уровня липидов крови, особенно гипертриацилглицериде- мию (4 и 5 типы гиперлипидемий). Возможным механизмом действия алкоголя является следующий: в печени этанол через высокотоксичный продукт ацетоальдегид превращается в уксусную кислоту, которая переходит в аце- тил-КоА. При этом на деградацию этанола используется большая часть окислительной потенции печени. Этанол вызывает увеличение в гепатоцитах НАДН и ионов водорода (ЬГ). Повышение отношения НАДН Н УНАД подавляет окисление жирных кислот. В то же время, в жировой ткани стимулируется липолиз и усиливается выброс свободных жирных кислот в кровь, которые не окисляются в печени, а реэстерифицируются в триглицериды. У хронических алкоголиков наблюдается вызванное алкоголем подавление активности липопротеидлипазы и тем самым задержка удаления хиломикронов и повышение в сыворотке крови триацилглицеридов; при этом синтез апо- белков часто бывает подавлен ацетоальдегидом. У лиц, пьющих регулярно и много, наблюдается гораздо чаще увеличение содержания ХСЛПВП, чем гипертриацилглицеридемия, преимущественно за счет субфракций ХС ЛПВП2 и ХСЛПВПз. Физиологическая роль ХСЛПВП3 заключается в акцептировании холестерина с ЛПОНП и ЛППП сосудистого русла, клеточных мембран и эндотелиоцитов, в результате чего образуются более крупные частицы ЛПВП2, которые способствуют передаче холестерина либо клеткам печени, либо ЛПНП, уменьшаясь при этом в размерах (Г.Х.Божко, 1990).
В связи с этим, представляет определенный интерес изучение влияния данного средства на уровень липидов при этаноловой модели гиперли- пидемии.
В эксперименте использовали белых крыс-самцов линии М аг с исходной массой 220-230 г. Этанол в виде 40% раствора вводили однократно, внутрижелудочно в дозе 9 г/кг массы после 24 часового голодания (В.Е.Рыженков и соавт., 2000). Опытной группе животных в течение 7 дней до введения этанола внутрижелудочно 1 раз в сутки вводили изучаемое средство в форме отвара в объеме 10 мл/кг. Последнее введение «Камфоры- 25» осуществляли за 30 минут до введения этанола. Животные контрольной группы по аналогичной схеме получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Исследование липидного состава крови животных осуществляли натощак через 16 часов после введения этанола.
Гиполипидемическое действие растительного средства «Камфора-25» при этаноловой гиперлипопротеидемии
Противовоспалительное действие растительного средства «Камфора- 25» приобретает особо важное значение в свете воспалительной теории атеросклероза. Как известно, синтезируемые моноцитарными клетками ю-9- лейкотриены в отличие от со-3-лейкотриенов с противовоспалительным действием, усиливают воспаление, активируя любые очаги даже асептического воспаления (микроочаги воспаления в местах фиксации на эндотелии комплексов антиген-антитело) (В.Н.Титов, 2001). В условиях альтерации интимы сосудов согласно «ответа на повреждение», изучаемое средство, по всей видимости, препятствует эндотелиальной «дисфункции» и способствует ускорению репарации поврежденных участков эндотелия и восстановлению их структурной и функциональной целостности. В частности, под влиянием средства «Камфора-25» снижается интенсивность экссудативных процессов на модели формалинового отека. Также используемое средство значительно уменьшает выраженность альтерации и ускоряет регенерацию поврежденной ткани.
В настоящее время на одно из первых мест в патогенезе атеросклероза выдвигается роль иммунного воспаления. Известно, что модифицированные липопротеиды (переокисленные) в большом количестве присутствуют в интиме сосудов уже на ранних стадиях атерогенеза и формируют стимул для моноцитарной, Т- и В- клеточной миграции в места своего отложения и продукции антител in situ (В.А.Нагорнев и соавт., 2000). В атероскле- ротических бляшках присутствует большое число СД4+ Т-клеток и макрофагов, что позволяет рассматривать атеросклеротическую бляшку как результат иммунного воспаления в сосудистой стенке при атеросклерозе (M.I.Cybulsky, M.A.Jr. Gimbrone, 1991). У пациентов с гиперхолестеринеми- ей и гиперлипопротеидемией в большинстве случаев выявляется повышенный уровень гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора и основного фактора роста фибробластов в сыворотке крови (О.С.Сабурова и соавт., 2003). Известно иммуносупрессирующее действие ЛПНП. Длительно циркулирующие в крови ЛПНП становятся, по сути, «инородными телами» и вызывают активацию нейтрофилов, которые модифицируют макромолекулы JI11H11 (В.А.Нагорнев и соавт., 2000; T.Moslinger et al., 2000). Клетки ретикулоэндотелиальной системы, моноциты и макрофаги удаляют ЛПНП из крови путем неспецифического фагоцитоза. На клеточной мембране макрофагов модифицированные ЛПНП взаимодействуют со скевенджер-рецепторами (рецепторами - «мусорщиками»). Так как функциональные фагоциты являются иммунокомпетентными клетками, то чем выше иммунный статус организма, тем активнее макрофаги поглощают модифицированные ЛПНП, тем ниже уровень холестерина в крови, большее количество полиненасыщенных эфиров холестерина накапливается в стенке сосудов и активнее развивается атеросклероз. Чем ниже иммунный статус (макрофагальная активность), тем выше в крови уровень ХСЛПНП (полиненасыщенных эфиров холестерина) и медленнее происходит развитие атеросклероза. Макрофагальная теория атеросклероза свидетельствует, что в стенке сосуда липиды избирательно накапливают клетки рыхлой соединительной ткани, а моноциты захватывают модифицированные липопротеиды, проникают в стенку сосуда, в субэндотелиальных пространствах накапливаются колонии активированных макрофагов, которые служат источником ростовых факторов, локальных гормонов. Последние активируют и видоизменяют гладкомышечные стенки сосудов и дают начало липидным пятнам, а позже и атеросклеротическим бляшкам (В.С.Репин, 1990; В.Н.Титов, 2001). Более того, известно, что регистрируемое повышение активности 5 - нуклеотидазы в макрофагах и усиление продукции нитроксид-анионов у мышей, находящихся на атерогенной диете, является отражением функциональной активности макрофагов. Повышение активности 5 -нуклеотидазы на поверхности клетки может увеличивать локальную концентрацию аденози- на, который, также как и нитроксид-анион, способен вызывать апоптоз, усиливать проницаемость сосудов, оказывать ангиогенное и иммуномодули- рующее влияние. Можно предполагать, что макрофаги с таким функциональным генотипом способны усиливать воспалительную реакцию и участвовать в образовании липидных пятен в области аорты (Е.П.Киселева и со- авт., 2002).
При оценке иммуномодулирующего действия растительного средства «Камфора-25» при азатиоприновой иммуносупрессии на клеточное звено иммунитета в реакции ГЗТ и гуморальное звено иммунного ответа по изменению количества АОК установлена его иммуностимулирующая активность. В то же время, «Камфора-25» подавляет функциональную активность макрофагов в опытах in vitro. По всей видимости, указанное средство оказывает двоякое воздействие на систему иммунитета. В частности, стимулируя активность иммунитета (клеточного и гуморального) при его угнетении, испытуемое средство может служить эффективным иммуномодулятором в условиях хронического воспаления, для подавления инфекции и для повышения общей сопротивляемости организма. Указанные свойства средства «Камфора-25» обосновывают его использование при атеросклерозе и гипер- липидемических состояниях для снижения воспалительных процессов в сосудистой стенке, особенно в гериатрической пратике, так как у лиц пожилого возраста обычно снижен иммунный статус организма. С другой стороны, «Камфора-25», подавляя фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (макрофагальный иммунитет), может препятствовать отложению модифицированных липопротеидов в стенке сосудов и тем самым предотвращать или замедлять атеросклеротические процессы в сосудах.
