Введение к работе
Актуальность темы
Мясо кролика является экологичным, диетическим и легко усвояемым организмом человека пищевым продуктом. Оно имеет высокую питательную ценность, при этом содержит мало жира и калорий. В крольчатине почти не накапливается остаточных количеств пестицидов и других ксенобиотиков. Мясо кролика полезно людям с повышенной массой тела и страдающим сердечно-сосудистыми, желудочно-кишечными заболеваниями. Оно содержит полнорационный белковый состав и, по сравнению с мясом других видов животных, небольшие количества холестерина. В мясе кролика много витаминов и минеральных веществ (Мишанин Ю.Ф., Куц Р.Ф.,2003). Бульон из крольчатины включает компоненты, повышающие иммунитет и положительно влияет на пищеварительную систему человека (Плотников В.Г., 2004).
Учитывая высокую ценность крольчатины, существует вероятность подмены (фальсификации) ее другим мясом. Особенно вероятна фальсификация продуктов из мяса кролика, так как осуществить ее гораздо проще.
В этой связи актуальным является разработка эффективных методов идентификации крольчатины и определения фальсификаций. В соответствии с Федеральным законом «О техническом регулировании» идентификация является одним из основных элементов при подтверждении соответствия продукции. Это особенно важно при подтверждении соответствия в системах сертификации «Экологичный продукт». Подобные системы достаточно хорошо развиты в ряде стран ЕС и имеются у нас в стране.
При сертификации в «Эко»-системах кроме основных показателей безопасности и качества вводятся дополнительные критерии (наличие различных возбудителей инфекций, синтетических гормонов, консервантов, аллергенов, ГМО, красителей, ароматизаторов, антибиотиков и других вредных веществ).
Кроме того, некоторые из этих критериев определены нормативными документами для Государственного ветеринарного мониторинга остаточных и вредных веществ в сырье, продукции и кормах.
Для оценки показателей безопасности и качества сырья и продукции животного происхождения весьма эффективными показали себя методы ДНК- и иммунодиагностики (В.В. Светличкин 2002; А.М. Смирнов и др., 2003, 2012).
Однако, актуальным является апробация и адаптация методов для конкретных объектов, в частности, для мяса кролика и продуктов из него, а также совершенствование методов в плане эффективности анализа.
Цель и задачи исследований
Целью исследований являлось совершенствование методов идентификации и оценки безопасности и качества мяса кролика.
В задачи исследований входило:
1. Адаптировать и усовершенствовать методы подтверждения подлинности мяса кролика и продуктов из него на основе ДНК- и иммунодиагностики.
2. Адаптировать и усовершенствовать методы микробиологического и токсикологического контроля безопасности мяса кролика на основе методов ДНК-диагностики и иммунохроматографии.
3. Экспериментально обосновать возможность применения методов и тест – систем ИФА и иммуномикрочиповой технологии для определения в мясе кролика сульфаниламидов, антибиотиков и синтетических гормонов.
Научная новизна
Получены экспериментальные результаты по адаптации и усовершенствованию методов и тест-систем идентификации и оценки безопасности и качества мяса кролика и продуктов из него на основе ДНК- и иммунодиагностики, разработаны модификации методов.
Экспериментальными данными показана возможность идентификации крольчатины и определения фальсифицирующих примесей животного и растительного происхождения, включая ГМО в продукции из мяса кролика с помощью разработанной модифицированной методики иммунодиффузии, а также иммунохроматографических тест-систем.
Апробирована и адаптирована модифицированная методика на основе амплификации с последующей ДНК-гибридизацией и регистрацией конечного результата по иммуноферментному типу для идентификации мяса кролика, которая позволяла определять до 0,1% фальсифицирующих примесей животного и растительного происхождения в продукции из этого мяса.
Усовершенствована индикация сальмонелл, золотистого стафилококка и кишечной палочки в мясе кролика с помощью модифицированной методики амплификации с рассеянной затравкой и последующей гибридизацией на мембранных фильтрах, которая позволяла проводить анализ при наличии сопутствующей микрофлоры.
Экспериментально подтверждена возможность выявления сальмонелл, и стафилококкового энтеротоксина в мясе кролика с помощью отечественных иммунохроматографических индикаторных элементов с наночастицами коллоидного золота, а также синтетических гормонов и антибиотиков с помощью иммуноферментных тест-систем.
Усовершенствовано определение сульфаниламидов и антибиотиков в мясе кролика на основе иммуномикрочиповой технологии с хемилюминесцентной детекцией, что позволило с высокой точностью и чувствительностью осуществлять качественный и количественный анализ в автоматическом режиме.
Практическая ценность
На основании результатов исследований для практического использования разработаны:
- Методические рекомендации по использованию иммунохрома-тографических тест-систем для выявления ГМО (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 02.06. 2008 г. пп.1-10);
- Методическое пособие по определению нерегламентированных добавок из генномодифицированных растений в фаршах на основе иммунохроматографии (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26.10. 2010 г. пп. 1-7);
- Методическое пособие по идентификации мяса и определению нерегламентированных добавок растительного и животного происхождения в фаршах на основе иммунодиффузии» (утверждены Отделением ветеринарной медицины РАСХН 26.10. 2010 г. пп. 1-5);
Апробация работы
Материалы диссертации доложены и обсуждены на:
- V Международной научной конференции «Живые системы и биологическая безопасность населения» Москва, МГУПБ, 2006 г.;
- III Международной конференции, Махачкала, 2007 г.;
- заседаниях Ученого совета ВНИИВСГЭ (2008 -2013 г.);
- межлабораторном совещании ВНИИВСГЭ (2013 г.).
Основные положения, выносимые на защиту
1. Адаптированные и модифицированные методики иммунодиффузии иммунохроматографии и амплификации для идентификации мяса кролика и определению фальсифицирующих примесей животного и растительного происхождения, включая ГМО в продуктах из этого мяса.
2. Адаптированная и модифицированная методика индикации в мясе кролика санитарно-показательных микроорганизмов, на основе амплификации с рассеянной затравкой и последующей ДНК-гибридизацией на мембранных фильтрах.
3. Результаты экспериментального обоснования возможности применения методики и отечественной тест-системы иммунохроматографии для определения сальмонелл и энтеротоксина золотистого стафилококка в мясе кролика.
4. Результаты экспериментального обоснования методов иммуноферментного анализа и иммуномикрочиповой технологии для выявления остаточных количеств сульфаниламидов, антибиотиков и синтетических гормонов в мясе кролика.
Публикации
Результаты исследований отражены в 7 научных статьях, из них две – в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы
Диссертация состоит из введения, литературного обзора, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения.
Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц и 11 рисунков. Список литературы включает 224 источника отечественных и зарубежных авторов.
