Введение к работе
Актуальность темы
Вопросы совершенствования ветеринарно-санитарного контроля безопасности и качества продукции животного происхождения являются весьма актуальными в свете проходящего в нашей стране процесса Технического регулирования и интеграции России в мировую экономику (Романенко Г.А., 2005; Алексеева Е.Ю., Посконная Т.Ф., 2004, Версан В.Г., 2003)
Сырое молоко и сырые сливки в соответствии с Федеральным законом, Техническим регламентом на молоко и молочную продукцию входят в число объектов технического регулирования этой продукции. Все процессы, применяемые при производстве сырого молока, условия содержания, кормления, доения сельскохозяйственных животных, условия сбора, охлаждения, хранения сырого молока, сырого обезжиренного молока, сырых сливок должны соответствовать требованиям ветеринарного законодательства Российской Федерации.
Сырое молоко должно быть получено от здоровых сельскохозяйственных животных на территории, благополучной в отношении инфекционных и других общих для человека и животных заболеваний.
Обладая высокой питательной ценностью, сырое молоко и сырые сливки являются скоропортящимися продуктами. Для эффективного хранения, перевозки и реализации необходимо принимать меры по обеспечению безопасности и сохранения качества данной сельскохозяйственной продукции. Среди этих мер немаловажное значение принадлежит контролю качества и безопасности. Это актуально для служб ветеринарного надзора, для фермерских хозяйств (Фомичев Ю.П.,2004), а также для предприятий по переработке указанного сырья.
Весьма важным при оценке качества является подтверждение подлинности продукции и выявление возможных фальсификаций. На безопасность молока и молочной продукции могут влиять различные загрязнители: микробные контаминации, токсины, остаточные количества антибиотиков и сульфаниламидов и др. Для определения этих показателей в скрининговых или арбитражных исследованиях необходимо использование ускоренных способов контроля, а также автоматизированных чувствительных методов и тест-систем гармонизированных с международными стандартами (Светличкин В.В., 2000; Cмирнов А.М. и др., 2003).
В этом направлении эффективными, специфичными и чувствительными для контроля различных показателей безопасности и качества сырья и продукции животного происхождения зарекомендовали себя методы ДНК-иммунодиагностики (Самуйленко А.Я. и др., 1999; Родин В.И., 2000; Буркин А.А., Кононенко Г.П, 2003; Светличкин В.В. и др., 2010; Бабунова В.С. и др., 2011).
Однако, актуальным остаетcя адаптация известных методик и тест-систем для оценки безопасности и качества сырого молока и сырых сливок, а также разработка и совершенствование новых методов для указанных объектов ветеринарного надзора.
Цель исследования
Целью настоящей работы являлось – совершенствование методов ветеринарно-санитарной оценки сырого молока и сырых сливок.
В задачи исследования входило:
- усовершенствовать определение подлинности сырых козьих молока и сливок на основе методики иммуноферментного анализа при адаптации тест-системы ИФА RIDASCREEN Casein к указанным объектам технического регулирования;
- экспериментально обосновать возможность применения иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) отечественного производства для ускоренного контроля сальмонелл и энтеротоксина золотистого стафилококка в сыром молоке и сырых сливках;
- усовершенствовать контроль санитарно-показательных микроорганизмов в сыром молоке и сырых сливках на основе ДНК-чипов;
- усовершенствовать определение остаточных количеств антибиотиков и сульфаниламидов в сырых молоке и сливках на основе иммуномикрочиповой технологии.
- провести исследования по определению сульфаниламидов в сыром молоке и сырых сливках, взятых из личных подворий и фермерских хозяйств, а также из оборота торговой сети.
Основные положения, выносимые на защиту
1. адаптация модифицированной методики ИФА с тест-системой «ИФА RIDASCREEN Casein» для выявления казеина в козьих сыром молоке и сливках для подтверждения их подлинности и выявления фальсификаций;
2.экспериментальное обоснование возможности применения иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) отечественного производства ГосНИИБП для определения в сыром молоке и сырых сливках сальмонелл различных серогрупп и стафилококкового энтеротоксина;
3. разработка и апробация модифицированной методики на основе ДНК-чипов для идентификации санитарно-показательных бактерий в сыром молоке и в сырых сливках;
4. экспериментальное обоснование определения остаточных количеств антибиотиков и сульфаниламидов в сыром молоке и сырых сливках на основе иммуномикрочиповой технологии.
Научная новизна
Экспериментально обоснована возможность применения модифицированной методики ИФА с тест-системой «ИФА RIDASCREEN Casein» для выявления казеина в козьих сыром молоке и сливках для подтверждения их подлинности и выявления фальсификаций.
Экспериментально обоснована возможность применения иммунохроматографических индикаторных элементов (ИИХЭ) отечественного производства ГосНИИБП для определения в сыром молоке и сырых сливках сальмонелл различных серогрупп и стафилококкового энтеротоксина, для последнего разработана модифицированная методика пробоподготовки.
Разработана модифицированная методика на основе ДНК-чипов и показана возможность ее применения для идентификации санитарно-показательных бактерий в сыром молоке и в сырых сливках.
Экспериментально обоснована возможность применения иммуномикрочиповой технологии для одновременного дифференцированного определения остаточных количеств антибиотиков (стрептомицина, цефоперазона, цефтриаксона) и сульфаниламидов (сульфадиметоксина, сульфадимезина, сульфаметоксипиридазина) в сыром молоке и сырых сливках. Установлена чувствительность определения.
При исследовании взятой из оборота молочной продукции, выявили наличие определяемых антимикробных веществ, в концентрациях не превышающих нормативные показатели.
Практическая ценность
На основании результатов исследований разработано методическое пособие по определению антибиотиков и сульфаниламидов в сыром молоке и сырых сливках с применением иммуномикрочиповой технологии, утвержденные Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:
- на международной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» МГУПП, Москва 2012 г.
- на расширенном совещании сотрудников лабораторий ГНУ ВНИИВСГЭ Россельхозакадемии (2013 г.).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 3 работы, 2 из них в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Структура и объем работы
Диссертация изложена на – 111 страницах машинописного текста, содержит 18 - таблиц, 11 - рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований и их результатов, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего – 167 источников (99 - отечественных, 68 - зарубежных) и приложения.
