Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Антибиотики группы эритромицина, их характеристика и применение в медицинской практике .
1.2 Раневой процесс и местные способы использования лекарственных средств.
1.3 Исследования в области разработок мазей с антибиотиками на гидрофильных основах.
Заключение. 30
Глава 2. Объекты и методы исследования. 31
2 1 Характеристика действующих веществ 31
2.2 Характеристика вспомогательных веществ 33
2.3 Физические и физико-химические методы исследования мазей
2.4 Микробиологические методы исследования мазей. 40
2.5 Количественное определение эритромицина эстолата в мазях.
2.5.1 Микробиологический метод определения 44
2.5.2 Спектрофотометрический метод определения. 46
Выводы 53
Глава 3. Экспериментальные исследования по обоснованию состава и технологии мази с эритромицина эстолатом.
3.1 Выбор основы для мазей эритромицина эстолата 55
3.2 Выбор концентрации антибиотика эритромицина эстолата в мазях.
3.3 Разработка технологии и оценка качества мазей эритромицина эстолата.
Выводы 71
Глава 4. Разработка многокомпонентных мазей эритромицина эстолата.
4.1 Обоснование и разработка составов многокомпонентных мазей с эритромицина эстолатом.
4.2 Технология многокомпонентных мазей. 78
4.3 Оценка качества и изучение стабильности многокомпонентных мазей в процессе хранения.
Выводы 91
Глава 5. Биологические исследования ранозаживляющих свойств мазей эритромицина эстолата.
Выводы ПО
Общие выводы 112
Список литературы 114
- Антибиотики группы эритромицина, их характеристика и применение в медицинской практике
- Микробиологический метод определения
- Выбор основы для мазей эритромицина эстолата
Введение к работе
Актуальность темы. Достижения в области активного ведения гнойных ран и воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек не исключает известную методику их лечения под повязкой, которая выгодна экономически, применима в любых условиях, привлекает своей доступностью, простотой и остается основной в практической медицине (М.И.Кузин, Б.М.Костюченок, 1985, 1990; С.И.Лемешко, 1994). Одной из распространенных и востребованных лекарственных форм аппликационного воздействия на указанную патологию продолжают оставаться мази. Их ассортимент весьма разнообразен, но ведущее место принадлежит мазям, содержащим антибактериальные вещества и, в частности, антибиотики ( Б.М.Даценко с соавт., 1989, 1995).
На протяжении многих лет в клинической практике используются ан-тибиотики-макролиды, в том числе, группы эритромицина, которые оказывают биоцидное действие в отношении большинства грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, а также неспорообразующих анаэробов. Они не только представляют собой приемлемую альтернативу пеницил-линам, тетрациклинам, но и во многих случаях рассматриваются как препараты выбора при лечении многих инфекционных заболеваний, в том числе, кожи и слизистых оболочек (И.П.Фомина, 1995, Л.С.Страчунский, 1998). Фармацевтической промышленностью России выпускается мазь эритромициновая. Однако в настоящее время на основе эритромицина получен ряд, так называемых, «пролекарств», в т.ч. эритромицина эстолат, являющийся объектом наших исследований.
Результаты многочисленных экспериментальных и клинических исследований свидетельствуют о возможности повышения эффективности местного медикаментозного лечения путем создания новых мазей на гидрофильных основах (полиэтиленоксидных и глицерогелях целлюлозы), обладающих многонаправленным действием на основные патогенетические факторы раневого процесса (Б.М.Даценко, 1995; И.М.Перцев с соавт, 1990; Т.А.Панкрушева,
5 1995, Л.А.Блатун с соавт., 1999). Несмотря на достигнутые успехи, проблема разработки новых препаратов для местного лечения гнойно-воспалительных процессов и ран далека до полного завершения.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является экспериментальное обоснование и разработка стабильных при хранении и эффективных для профилактики и лечения в первой фазе течения гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек мазей на гидрофильных основах, содержащих антибиотик макролидного ряда - эритромицина эстолат.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
экспериментально обосновать и разработать состав и технологию мази на полимерной основе, содержащей эритромицина эстолат;
экспериментально обосновать и разработать состав и технологию многокомпонентной мази, содержащей в качестве основного компонента эритромицина эстолат;
разработать, апробировать или модифицировать методы идентификации и количественного анализа мазей эритромицина эстолата;
оценить качество разработанных мазей по критериям нормативной документации и исследовать их стабильность в процессе длительного хранения;
изучить в опытах in vivo на модели заболевания специфическую раноза-живляющую эффективность разработанных мазей;
на основании результатов исследования составить нормативно-техническую документацию на разработанные лекарственные препараты.
Научная новизна. Впервые экспериментально обоснованы и разработаны составы и технология мазей антибиотика эритромицина эстолата на полимерных основах - глицерогеле натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (ЫаКМЦ) и сплаве полиэтиленоксидов (ПЭО) с молекулярной массой 400 и 1500.
Впервые экспериментально обоснованы и разработаны составы и технология многокомпонентных мазей на полимерных основах, сочетающих антибиотик эритромицина эстолат с экстрактом ромашки и метиленовым синим.
Проведены комплексные исследования по оценке качества разработанных мазей и установлена их стабильность в процессе длительного хранения. Впервые разработана и предложена спектрофотометрическая методика для количественного определения эритромицина эстолата в мазях.
В опытах in vivo изучено ранозаживляющее действие и установлена высокая специфическая активность мазей эритромицина эстолата при лечении гнойных ран в первой фазе течения раневого процесса.
Новизна результатов исследования отражена в заявке на патент «Лекарственный препарат для лечения и профилактики местных гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек».
Практическая значимость работы.
Для использования в медицинский практике с целью профилактики и лечения местных гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек разработаны и предложены составы мазей, содержащие эритромицина эстолат, оказывающие выраженное ранозаживляющие действие и сокращающие сроки лечения в сравнении с официнальной мазью эритромицина.
На основании проведенных исследований разработаны:
методические рекомендации «Изготовление, контроль качества и использование мазей на полимерных основах, содержащих эритромицина эстолат»;
методические рекомендации «Изготовление, контроль качества и использование многокомпонентных мазей с эритромицина эстолатом»;
лабораторный регламент «Производство многокомпонентной мази на по-лиэтиленоксидной основе с эритромицина эстолатом»;
способ измерения площади ран с применением сканирования (удостоверение на рационализаторское предложение №1474-01 от 19.11.01, КГМУ);
мази эритромицина эстолата на гидрофильных основах для местного лечения и профилактики гнойно-воспалительных процессов (удостоверение на рационализаторское предложение №1528-02 от 02.12.02, КГМУ);
составы многокомпонентных мазей эритромицина эстолата для лечения и профилактики местных гнойно-воспалительных процессов (удостоверение на рационализаторское предложение №1527-02 от 02.12.02, КГМУ).
Материалы диссертации используются в учебных курсах и научно-исследовательской работе кафедр фармацевтической технологии, фармацевтической химии, микробиологии, оперативной хирургии с курсом топографической анатомии Курского государственного медицинского университета, кафедры фармацевтической химии и заводской технологии Воронежского государственного университета.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ.
Положения, выдвигаемые на защиту. Результаты технологических, физико-химических, биофармацевтических, микробиологических и биологических исследований по созданию стабильных и эффективных для профилактики и лечения местных гнойно-воспалительных процессов мазей, содержащих антибиотик эритромицина эстолат.
Апробация работы. Результаты работы представлены и доложены на VIII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство "(Москва 2001), конференциях молодых ученых и студентов Курского государственного медицинского университета (2001, 2002), научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного Центра РАМН, (Курск, 2001), межкафедральной конференции КГМУ (2002).
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно- исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (№ государственной регистрации 01.200.119595).
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы,
8 4-х глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, содержит 21 таблиц и 17 рисунков, библиографический указатель включает 201 источник.
Антибиотики группы эритромицина, их характеристика и применение в медицинской практике
Антибиотики группы эритромицина входят в большой класс антибиотиков - макролидов, объединенных общей химической структурой, антимикробным спектром, механизмом действия и резистентностью к ним микроорганизмов. Основой их химической структуры является макроциклическое лактонное кольцо, к углеродным атомам которого гликозидными связями присоединены один или несколько углеводных остатков в виде боковых цепей [4, 43, 84, 138].
Химическая классификация макролидов предполагает разделение препаратов на 3 группы, в зависимости от числа атомов углерода в лактонном кольце: 14-, 15-, 16-членные. Структурные особенности различных макролидов предопределяют, прежде всего, различия в их фармакокинетических характеристиках, особенности антибактериальной активности, переносимости и возможности взаимодействия с другими лекарствами. В то же время все мак-ролидные антибиотики обладают одинаковым механизмом антимикробного действия и имеют в целом близкие спектры активности. Характер антимикробного действия макролидов обычно является бактериостатическим. Тем не менее, в определенной степени он зависит от концентрации антибиотика в очаге инфекции, вида микроорганизма, фазы его развития и степени микробной обсемененности. В высоких концентрациях (в 2-4 раза превышающих МПК) и особенно в отношении тех микроорганизмов, которые находятся в фазе роста, макролиды могут оказывать бактерицидное действие [65, 167, 169,171,200].
Макролидные антибиотики относятся к ингибиторам белкового синтеза, концентрируя свое действие на этапах трансляции матричной РНК. Механизм действия всех внедренных в клинику макролидов сходен: он заключается в их реагировании с большой рибосомной субъединицей в районе пептидильного центра, подавлении переноса пептидильного остатка, прекращении элонгации полипептидной цепи. Все это приводит к подавлению синтеза белка и бакте-риостатическому эффекту. Но антибактериальное действие антибиотиков направлено, главным образом, на пролиферирующие клетки, поэтому на микробы, находящиеся в фазе покоя, они действуют слабо. Для макролидных антибиотиков характерно также синергическое действие с иммунной системой. Они концентрируются в фагоцитах, повышают чувствительность бактерий к фагоцитозу и усиливают внутриклеточное уничтожение бактерий в фагоцитах [65, 134, 138, 192, 195].
Микробиологическая активность макролидных антибиотиков in vitro зависит от ряда факторов. Во-первых, от рН среды, при этом изменение активности может быть связано не с нарушением химической структуры макролидов, а с их ионизацией в условиях повышенной кислотности, следствием чего является снижение проницаемости через цитоплазматическую мембрану бактерий. Поскольку макролиды являются слабыми основаниями, их активность возрастает в щелочной среде (рН 5,5-8,5), так как при этом они меньше ионизируются и лучше проникают внутрь микробной клетки [138].
Возрастание интереса к макролидам и, соответственно, расширение сферы их применения произошло в 70-80-х годах после осознания клинического значения таких возбудителей, как микоплазмы, хламидии, кампилобак-терии и легионеллы. Это послужило стимулом для разработки и внедрения в клинику новых макролидных препаратов, близких по структуре к эритромицину и обладающих, по сравнению с ним, улучшенными фармакоклиниче-скими и микробиологическими параметрами. Все они имеют определенное структурное сходство с эритромицином, отличаясь от него по количеству атомов углерода в лактонном кольце и характеру Сахаров, составляющих боковые цепи. В настоящее время группа макролидов насчитывает более десяти различных антибиотиков [59, 101, 105, 154, 201].
При характеристике антимикробной активности макролидов принято оценивать чувствительность к ним следующих четырех групп микроорганизмов: стафилококков, стрептококков, анаэробных кокков; микроорганизмов, обычно чувствительных или слабо устойчивых к эритромицину: энтеробактерий, Hemophilus influenzae; внутриклеточно расположенных возбудителей: Campylobacter spp., Chlamidia spp., Legionella spp., Mycoplasma pneumoniae; возбудителей, обычно устойчивых к большинству применяемых в антибиотикотерапии препаратов: Pneumocystis carini, Toxoplasma gondii, Mycobacterium avium complex [133, 161, 177].
Первым антибиотиком-макролидом, внедренным в медицинскую практику и до сих пор широко применяемым, был эритромицин. Его открыли в 1952г. (Мс. Guir и др.). Способ выделения антибиотика из почвенного грибка Streptomyces erythreus приводится в патенте Bunch и Мс. Guire, 1952г. Структуру эритромицина уточнили Woodward с соавт., Willy с соавт., a Hofhens и Grisebach с помощью ядерного магнитного резонанса доказали, что кладино-за, как и дезозамин, связана Р- гликозидной связью с лактонным кольцом [4,43].
Эритромицин - порошок белого цвета, горького вкуса, без запаха, гигроскопичен. Он мало растворим в воде (около 2 мг/мл), легко в спирте, ацетоне, хлороформе, плохо растворяется в эфире, с кислотами образует соли, легко растворимые в воде [30, 91].
Антибиотик проявляет более высокую активность при щелочном значении рН. Основные свойства его определяются наличием третичного атома азота, входящего в состав аминосахара дезозамина, который соединен гликозидной связью с четырнадцатичленным макролидом эритронамидом [109]. Известны многие разновидности эритромицина, которые обозначаются латинскими буквами от А до F. Эритромицин, являющийся «золотым стандартом» среди антибиотиков класса макролидов, обладает довольно широким спектром антимикробной активности. Прежде всего, он обладает широкой активностью против грамм-положительных кокков, в частности, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans, Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecalis, а также в отношении большинства Staphylococcus aureus, в том числе пенициллиназообразующих штаммов стафилококка. Среди палочковидных грамположительных микроорганизмов к эритромицину чувствительны Corynebacterium diphteriae и Bacillus anthracis. Активность эритромицина in vitro в отношении клостридий (Clostridium tetani, Clostridium perfringens), анаэробных грамположительных кокков (Peptococcus, Peptostreptococcus) близка к активности бензилпеницил-лина, левомицетина и тетрациклина, поэтому его можно рекомендовать при непереносимости данных групп препаратов [80, 105, 168, 199].
Несмотря на то, что эритромицин и до сих пор применяется в клинической практике, применение его ограничено, так как к нему быстро развивается устойчивость микроорганизмов. Поэтому его относят к антибиотикам резерва и используют в тех случаях, когда пенициллин и другие антибиотики оказываются неэффективными [91, 102].
На основании многолетнего клинического применения эритромицина определено его место среди других макролидных антибиотиков. Активность эритромицина в отношении стафилококков, стрептококков и микоплазм делает его антибиотиком первоочередного выбора при лечении заболеваний органов дыхания. Препарат назначают при стрептококковом тонзиллофарингите, синуситах, ларингитах, трахеитах, острых бронхитах [136, 174, 175].
Высокая чувствительность к эритромицину хламидий обуславливает его терапевтический эффект при заболеваниях, вызванных этими микроорганизмами, таких, как тазовый перитонит, пневмония новорожденных и др. В лечении больных неспецифическими простатитами и уретритами, вызванными Chlamidia trachomatis, предпочтение при антибактериальной терапии отдается эритромицину [152, 199, 187]. Одним из основных показаний к применению является лечение кожных покровов и подкожной ткани, особенно у детей и взрослых с аллергией к Р-лактамным антибиотикам, и инфекций, вызванных внутриклеточными микроорганизмами и атипичными возбудителями, например, микоплазмами.
При лечении инфекций мягких тканей эритромицин применяется в тех случаях, когда заболевания вызваны пенициллиназообразующими, чувствительными к нему, стафилококками [102, 168].
Значительный терапевтический эффект отмечен при использовании антибиотика в виде 1% глазной мази для лечения инфекционных заболеваний глаз, таких, как блефариты, конъюнктивиты, кератиты, язва роговицы.
В настоящее время эритромицин выпускается в следующих лекарственных формах: таблетки по 0,1 и 0,25г; таблетки по 0,1 и 0,25г с кишечно-растворимым покрытием; гранулят для приготовления раствора для приема внутрь; гранулят для приготовления суспензии для приема внутрь; капсулы; 1% мазь; свечи ректальные; сироп [91].
Несмотря на высокую популярность эритромицина, клиницисты не могли не обратить внимание на его некоторые отрицательные свойства, такие как: относительно узкий спектр антимикробной активности, нестабильность всасывания, короткая продолжительность действия, влияние на эффект других лекарств, частые нежелательные реакции со стороны желудочно-кишечного тракта. В связи с чем, в последние годы были разработаны некоторые новые препараты эритромицина.
Согласно классификации по происхождению они подразделяются на природные, полусинтетические и пролекарства. Последние представляют собой эфиры и соли эфиров природных макролидов, которые характеризуются улучшенным вкусом, большей кислотоустойчивостью и более высокой и стабильной биодоступностью по сравнению с исходными продуктами, выпускаемыми в виде оснований. К ним, например, относятся эритромицина стеа-рат, эритромицина этилсукцинат, эритромицина лактобионат [138, 165, 198]. Эритромицина стеарат - стеариновая соль эритромицина. Подобно эритромицину основанию, стеарат - кислотоустойчив. Он устойчив к кислотному разрушению в желудке и гидролизуется в щелочной среде кишечника. Эритромицина стеарат - кристаллический порошок, который практически не растворяется в воде, но растворяется в спирте и эфире. Выпускается в виде таблеток.
Эритромицина этилсукцинат - кислотоустойчивый антибиотик, который всасывается как эфир и медленно гидролизуется с образованием основания эритромицина. Он не растворим в воде, растворим в спирте и эфире. Выпускается в виде таблеток, суспензии, порошка для приготовления суспензии, гранул для приготовления суспензии.
Эритромицина лактобионат - водорастворимая соль, получаемая в результате реакции эритромицина основания с лактобионо-а-лактоном. Это аморфный порошок, который легко растворяется в воде, спирте и эфире. Эритромицина лактобионат используется для внутривенного применения, достигая высокого уровня в плазме при лечении серьезных инфекций. Выпускается в виде раствора для инъекций во флаконах и порошка во флаконах для приготовления инъекционного раствора.
Микробиологический метод определения
Для количественной оценки активности эритромицина эстолата в мазях, приготовленных на гидрофильных основах, использовали методику, описанную в Британской Фармакопее [165]. Она заключается в том, что сравниваются зоны подавления роста тест-штамма изготовленных растворов испытуемого образца (лекарственного средства) со стандартным образцом. Метод позволяет определить активность антибиотика в пределах 95-105%.
Исследования проводили, используя тест-микроорганизм Вас. cereus, var. mycoides НВ, указанный в ГФ XI изд. на эритромицин и на дополнительном тест-штамме Staphylococcus aureus 209 P.
Для проведения испытания готовили три раствора рабочего стандартного образца эритромицина эстолата (Сь С2, Сз) и три раствора испытуемого образца - мази - (И)5 И2, Из). Концентрация растворов, содержащих малую, среднюю и большую дозы, находились между собой в кратном соотношении (1:2:4). Концентрация раствора С2 была близка к контрольной концентрации раствора рабочего стандартного образца - 2 мкг/мл (ГФ XI изд.). Все растворы стандартного и испытуемого образцов, в количестве 0,1 мл, вносили в цилиндры чашки Петри в следующем варианте: Сі И3 С2Иі Сз И2. Число чашек, взятых в опыт - 6. Последовательность внесения растворов рабочего стандартного и исследуемого образцов в цилиндры была следующей: первым вносили раствор с малой концентрацией стандартного образца (Сі) и соответствующий раствор испытуемого образца (Иі). Затем растворы со средней концентрацией (С2 И2), последними вносили растворы с большими концентрациями (Сз Из). Для уменьшения влияния колебаний во времени между внесением растворов чашки выдерживали при комнатной температуре в течение 1-2 ч. После инкубации чашек в термостате при 37С в течение 18ч измеряли диаметры зон подавления роста тест-штаммов. Расчет антимикробной активности испытуемого образца (мази) при использовании трехдозного варианта метода диффузии в агар осуществляли по формуле: И
X = 100%, (2.2)
С
где: И - диаметр зоны подавления роста тест-штамма исследуемым образцом, мм; С - диаметр зоны подавления роста тест-штамма рабочим стандартным образцом, мм.
Примечания.
1. Подготовка чашек со средой и тест-микроорганизмами.
В чашки Петри, установленные на столиках со строго горизонтальной поверхностью, разливали расплавленную питательную среду, предварительно засеяенную, в одном случае, Вас. cereus, var. mycoides НВ, в другом -Staphylococcus aureus 209 Р. Температура среды при внесении 1% взвеси не более (48-50)С. Шесть стерильных цилиндров единого размера и массы, высотой (10,0+0,1) мм и внутренним диаметром (6,0±0,1) мм из нержавеющей стали расставляли на поверхность засеянной среды на равном расстоянии друг от друга и от края чашки.
2. а) Приготовление основного стандартного раствора.
Около 40 мг эритромицина эстолата (точная навеска) растворяли в 40 мл метанола, добавляли 20 мл фосфатного буферного раствора с рН 7,0 и доводили в мерной колбе водой очищенной до метки 100 мл, выдерживали 3 ч при 60С и затем охлаждали (раствор А).
б) Приготовление рабочих растворов. 10 мл основного раствора помещали в мерную колбу на 100 мл и приливали тот же буферный раствор до метки 100 мл (раствор Б). Для получения соответствующих концентраций в колбы вместимостью 100 мл вносили соответственно 5 мл, 2,5 мл и 10 мл раствора Б, доводили фосфатным буферным раствором до метки. 3. а) Приготовление раствора исследуемого образца мази.
Навеску мази (4,0), содержащую 40 мг эритромицина эстолата, помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляли 40 мл метанола, 20 мл фосфатного буферного раствора с рН 7,0, взбалтывали до растворения мази и доводили водой очищенной до метки 100 мл. Раствор выдерживали при 60С в течение 3 ч и затем охлаждали (раствор А).
б) Приготовление рабочих растворов исследуемого образца мази.
10 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и фосфатным буферным раствором доводили до метки (раствор Б).
Для получения соответствующих концентраций в колбы вместимостью 100 мл вносили соответственно 5 мл, 2,5 мл и 10 мл раствора Б и фосфатным буфером доводили до метки.
2.5.2. Спектрофотометрический метод определения.
Как отмечалось ранее, для определения активного вещества антибиотиков макролидного ряда в настоящее время фармакопеями многих стран предлагается использовать метод диффузии в агар, основанный на подавлении роста тест-микробов [44, 140, 165]. Метод характеризуется длительностью (для проведения анализа затрачивается 16-18 ч), трудоемкостью и относительной специфичностью. При этом точность и воспроизводимость результатов микробиологических измерений в значительной степени зависят от внешних факторов (качество питательной среды, состояние тест-микробов и др.).
Наиболее точными и чувствительными являются биохимические и иммунологические методы. Но они не находят широкого применения, так как требуют создания специальных условий для работы с радиоактивными материалами.
В последние годы все больше внимание уделяется физико-химическим методам анализа. Для количественного определения эритромицина и его производных в литературе описаны различные методы анализа: объемные, фотоколориметрия, хемилюминесценция [176], масс-спектрометрия [158], экстракционная спектрофотоколориметрия [181], высокоэффективная жидкостная хроматография и др. [25, 36, 136, 159, 170, 172, 188]. Одним из наиболее широко применяемых методов является спектрофотометрия, к достоинствам которого следует отнести возможность использования небольших объемов исследуемых образцов, высокую чувствительность и экспрессность [31, 137, 191].
В связи с этим, нами совместно с кандидатом фармацевтических наук А.В.Кукурека (кафедра фармацевтической химии, зав. кафедрой профессор Л.Е.Сипливая) была разработана спектрофотометрическая методика определения эритромицина эстолата, в основу которой положена реакция образования окрашенного соединения антибиотика с красителем кристаллическим фиолетовым в щелочной среде.
При разработке методики проводили ряд исследований по определению оптимальных условий протекания реакции: аналитическая длина волны, выбор красителя и растворителя для него; состав буферного раствора и выбор значения рН среды, оказывающее влияние на взаимодействие эритромицина эстолата с красителем; влияние температуры на образование продукта взаимодействия и оптическую плотность, порядок добавления реактивов; изучение стабильности продукта реакции во времени. Это позволило разработать методику количественного определения эритромицина эстолата в субстанции и в лекарственной форме - мази [9, 10].
Выбор основы для мазей эритромицина эстолата
При разработке мазей для лечения гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей и слизистых оболочек особое место занимают исследования по выбору оптимального носителя - мазевой основы. При этом необходимо учитывать такие требования, как наличие физиологической и химической индифферентности, осмотического действия, определенного значения рН, смешиваемость с гнойным отделяемым раны, отсутствие раздражающего действия и т.д.
Проанализировав имеющуюся литературу, был сделан вывод, что наиболее полно современным требованиям к препаратам для местного лечения гнойно-воспалительных процессов и ран в 1-ой фазе раневого процесса отвечают мази на гидрофильной основе, в частности, производные целлюлозы и полиэтиленгликоли. Эти основы обеспечивают, кроме упомянутых требований, возможность изменения консистенции лекарственной формы в зависимости от количественного содержания полимера, легкость, нетравматичность нанесения, надежную слипаемость с поверхностью кожи и слизистыми оболочками, равномерность распределения, полноту высвобождения лекарственного вещества и пролонгированность его действия [66, 70, 79, 120, 140]. Поэтому в качестве мазевых основ использовали гели производных целлюлозы: метилцеллюлозы (МЦ), натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы (Na-КМЦ) и оксипропилметилцеллюлозы (ОПМЦ), а также сплав полиэтиленоксидов (ПЭО) М.м. 400 и 1500. Кроме того, в эксперименте использовали эмульсионную основу - 30% эмульсию воды в сплаве вазелина (60 ч) и эмульгатора Т-2 (10ч.), широко применяемую в производстве мазей. Учитывая также, что официнальной основой для изготовления мазей с антибиотиками является вазелин-ланолиновая, мазь готовили на сплаве вазелина и ланолина безводного, взятых в соотношении 6:4.
Для обоснования концентрации производных целлюлозы, как компонента мазевой основы, готовили водные растворы полимеров МЦ, Na-КМЦ и ОПМЦ в концентрации 3%, 4%, 5%, 6%. Выбор оптимальной консистенции основы проводили органолептически.
Основы готовили по следующей методике. Соответствующие количества полимера (3,0; 4,0; 5,0; 6,0г) помещали в стеклянные стаканы, заливали подогретой до температуры (50-70)С водой очищенной (1/2 от рассчитанного количества) и оставляли для набухания. Через 30-40 мин, после набухания полимера, добавляли оставшуюся часть воды и перемешивали. В качестве пластификатора, а также вещества, препятствующего высыханию гидрофильной основы и мази в процессе длительного хранения, вводили глицерин в общепринятой концентрации - 10%.
В дальнейшем эксперименте не были использованы 3, 4 и 6% гели. 3% и 4% глицерогели обладали большой текучестью и не способствовали локализации препарата на месте его нанесения. 6% глицерогели представляли собой по консистенции плотные массы, которые при нанесении мази на пораженный участок потребуют приложения усилий и могут вызвать у пациентов неприятные, болезненные ощущения.
Наиболее оптимальную консистенцию имели 5% глицерогели полимеров целлюлозы. При ее выборе учитывали концентрацию вводимого антибиотика, а также жидкого лекарственного средства, предполагаемого в дальнейшем при разработке многокомпонентной мази, которое приведет к изменению вязкости в сторону ее уменьшения.
Основу из полиэтиленоксидов готовили по известной методике: в фарфоровой чашке сплавляли ПЭО Мм. 400 и 1500 в соотношении 8:2. Перемешивали до охлаждения и получения однородной массы.
В качестве контроля использовали эмульсионную основу. При изготовлении эмульсионной основы на водяной бане сплавляли эмульгатор Т-2 и вазелин. К сплаву небольшими порциями добавляли воду очищенную, эмульгировали и гомогенизировали.
При изготовлении вазелин-ланолиновой основы компоненты сплавляли, фильтровали в расплавленном состоянии и стерилизовали при 150С в течение 1ч.
При проведении эксперимента по выбору оптимальной основы эритромицина эстолат вводили в основы в концентрации 1%, ориентируясь на концентрацию антибиотика эритромицина основания в мази заводского производства («Татхимфармпрепараты»), используемой в качестве контроля.
Таким образом, объектами наших исследований явились мази следующих составов:
1. Эритромицина эстолат 1,0
5% глицерогель МЦ до 100,0 2. Эритромицина эстолат 1,0 5% глицерогель NaKMLJ до 100,0
3. Эритромицина эстолат 1,0 5% глицерогель ОПМЦ до 100,0
4. Эритромицина эстолат 1,0 Полиэтиленоксидная основа до 100,0
5. Эритромицина эстолат 1,0 Эмульсионная основа до 100,0
6. Эритромицина эстолат 1,0 Вазелин-ланолиновая основа до 100,0
Выбор основы для эритромицина эстолата осуществляли на основании результатов изучения антимикробной активности приготовленных образцов мазей, полученных методом диффузии в агар. В качестве тест-штаммов использовали Вас. cereus АТСС10702 (тест-штамм на эритромицин, ГФ XI изд.) и St. aureus АТСС 6538-Р. Выбор последнего связан с тем, что микрофлора раневых поверхностей, несмотря на ее разнообразие, представлена на 60-70% стафилококком.
Полученные результаты 6-ти определений обработаны статистически и представлены в табл. 3.2.
Из данных, представленных в табл. 3.2 следует, что на высвобождение антибиотика из мазей и проявление его антибактериального действия оказывает влияние природы мазевой основы. Антибактериальная активность мазей эритромицина эстолата, изготовленных на жировой и эмульсионной основах, а также официнальной мази эритромицина не отличаются друг от друга. Из мазей, приготовленных на основах полимеров целлюлозы, наибольшую зону задержки роста в отношении обоих тест-штаммов обеспечивает 5% глицерогель NaKMU,. Мазь на этой основе по своей активности превосходит мази, приготовленные на всех остальных основах. Ее биоцидное действие намного Таблица 3.2 Влияние основ на антимикробную активность эритромицина эстолата в мазях (р 0,05).
