Содержание к диссертации
Введение
Глава I. Обзор литературы 10
1.1. Актуальность проблемы гинекологических и проктологических заболеваний.
1.2. Преимущества ректального пути введения. 12
1.3. Характеристика источника получения Эраконда - люцерны посевной.
Обсуждение обзора литературы Экспериментальная часть
Глава П. Объекты и методы исследования
2.1. Объекты исследования 31
2.2. Методы исследования 34
Глава III. Фитохимическое исследование и стандартизация экстракта люцерны густого Эраконд.
3.1. Фитохимические исследование экстракта люцерны густого Эраконд 40
3.1.1. Изучение качественного состава экстракта люцерны густого Эра конд.
3.1.2. Разработка методики количественного определения экстракта люцерны густого Эраконд 48
3.2. Стандартизация экстракта люцерны густого Эраконд 51
3.3. Фармакологическое изучение экстракта люцерны густого Эраконд 53
Выводы по главе 3 60
Глава IV. Исследования по созданию суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эракондом
4.1. Выбор оптимального состава и технологии суппозиториев с Эра кондом
4.2. Биофармацевтические и фармакокинетические исследования суп позиториев с Эракондом
4.2.1. Изучение кинетики растворения суппозиториев с Эракондом на гидрофильных основах
4.3. Стандартизация суппозиториев с Эракондом 74
4.4. Фармакологическое изучение суппозиториев с Эракондом 80
Выводы по главе 4 85
Обсуждение результатов 86
Общие выводы 87
Список литературы 89
Приложения 106
- Актуальность проблемы гинекологических и проктологических заболеваний.
- Фитохимические исследование экстракта люцерны густого Эраконд
- Выбор оптимального состава и технологии суппозиториев с Эра кондом
Введение к работе
Актуальность темы. В последнее десятилетие во всем мире, особенно в экономически развитых странах, четко прослеживается тенденция неуклонного роста гинекологических и проктологических воспалительных заболеваний, что обусловлено целым рядом факторов, как социально-экономического, так и медицинского характера.
Удельный вес проктологических патологий в структуре болезней органов пищеварения составляет 13,6%. Воспалительные заболевания женских половых органов занимают первое место в структуре гинекологической заболеваемости.
Лечение гинекологических и проктологических заболеваний, их профилактика предусматривает применение значительного ассортимента лекарственных средств внутрь, подкожно, внутривенно или местно в виде, примочек, мазей, линиментов, присыпок, суппозиториев.
Ректальный путь введения Л В является одним из оптимальных в медицинской практике, так как суппозитории обладают высокой биологической доступностью, удобством применения и безболезненностью. Однако их номенклатура весьма ограничена, многие из них не отвечают требованиям по эффективности и широте терапевтического действия.
В этой связи значительный интерес представляет расширение ассортимента лекарственных средств, применяющихся для местного лечения гинекологических и проктологических заболеваний в виде суппозиториев.
Перспективным в этом отношении является экстракт люцерны густой - Эраконд, разработанный сотрудниками НВП «АПТ-Экология», г. Екатеринбурга, обладающий ценными фармакологическими свойствами.
Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности создания суппозиториев с Эракондом и их внедрения в фармацевтическую и медицинскую практику. Цели и задачи исследования. Целью работы явилась разработка научно- обоснованного состава и технологии суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эракондом, обеспечивающих высокую биологическую доступность и стабильность при хранении.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
- теоретически обосновать и экспериментально разработать методики стандартизации оригинального отечественного экстракта люцерны густого;
- разработать состав и осуществить технологические, биофармацевтические, фармакологические исследования суппозиториев с Эракондом,
- разработать методики идентификации и количественного определения действующих веществ в суппозиториях;
-определить влияние суппозиторных основ на процессы высвобождения изофлавоноидов in vitro;
- изучить токсическое и местнораздражающее действие полученных суппозиториев с Эракондом;
- установить оптимальные условия и сроки хранения суппозиториев;
- разработать проекты Фармакопейных статей предприятия (ФСП) на экстракт люцерны густой и суппозитории «Эраконд», Методические рекомендации по изготовлению и контролю качества суппозиториев с Эракондом в аптеке.
Научная новизна исследования.
На основании фитохимического анализа в качестве тестируемого компонента для определения подлинности и количественного определения экстракта люцерны густого предложены изофлавоноиды (ононин).
Разработаны методики качественного анализа изофлавоноидов экстракта люцерны густого с помощью бумажной хроматографии и количественного определения хроматоспектрофотометрическим методом, обеспечивающие единый методический подход к стандартизации на основе сквозного использования методов анализа в экстракте и суппозиториях на его основе.
На основании технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований созданы эффективные суппозитории с Эракондом., рекомендуемые в качестве противовоспалительного и ранозаживляющего средства при лечении гинекологических и проктологических заболеваний воспалительного генеза.
Впервые предложено использовать для проведения биофармацевтических исследований по изучению кинетики высвобождения ЛВ из суппозиториев метод кондуктометрии.
Практическая значимость и внедрение результатов исследования.
На основании проведенных исследований разработаны стабильные суппозитории с экстрактом люцерны густым Эраконд, приготовленные на основах полиэтиленгликолей и твердых кондитерских жиров, удовлетворяющих требованиям НД.
В результате осуществления комплекса научных исследований разработаны:
- проекты ФСП на экстракт люцерны густой Эраконд, суппозитории с экстрактом люцерны густым;
Методические указания по изготовлению и контролю качества суппозиториев с экстрактом люцерны густым Эраконд в аптеке;
- подана заявка на патент (приоритетная справка № 2001129777 от 06.11.2001 г.).
Результаты исследования используются в учебном процессе:
- на кафедре фармацевтической технологии ПГФА на 4 и 5 курсе очного факультета, в интернатуре, на факультете дополнительного профессионального образования провизоров (акт внедрения от 29.10.01 г.).
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на III Международной конференции по восстановительной медицине в Москве в декабре 2000 г.; VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», 2001 г.; Научно-практической конференции ПГФА в октябре 2001 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнялась в соответствии с тематикой научных исследований Проблемной Комиссии АМН РФ «Фармация», секции «Фармацевтическая технология и биофармация», и планом научно-исследовательской работы ПГФА по проблеме 10.06 «Фармация» (номер государственной регистрации 01.91001873).
Положения, выносимые на защиту:
- результаты фитохимического изучения, стандартизации и фармакологического исследования оригинального отечественного экстракта люцерны густого Эраконд;
- результаты комплекса технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований суппозиториев с Эракондом.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, содержит 18 таблиц и 14 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 178 источников, из них 56 на иностранных языках. В приложении даны материалы по внедрению.
Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, показаны научная новизна и практическая значимость результатов исследований, объем и структура диссертации, положения, выносимые на защиту.
В литературы (Глава 1) представлены сведения о проблеме лечения гинекологических и проктологических заболеваний, о перспективах использования ректального пути введения, о состоянии исследований травы люцерны посевной.
Глава 2 посвящена характеристике объектов (лекарственных и вспомогательных веществ) и методов исследования.
В главе 3 изложены данные по фитохимическому анализу, стандартизации и изучению биологической безвредности экстракта люцерны густого Эраконд.
В главе 4 представлены результаты поиска состава, технологии, стандартизация и исследования безвредности суппозиториев с Эракондом.
Актуальность проблемы гинекологических и проктологических заболеваний
Современную структуру заболеваемости населения составляют широко распространенные болезни сердечно-сосудистой и центральной нервной систем, сахарный диабет, онкологические заболевания, а также прок-тологические и гинекологические заболевания.
К числу факторов, способствующих увеличению проктологических заболеваний (таких как геморрой, анальный зуд) относят малоподвижный образ жизни, нерациональное питание, нарушение экологического равновесия, старение населения и др. Кроме того, увеличение процента прокто-логической заболеваемости связано с более ранней диагностикой, которая стала возможной в результате серьезных научных исследований последнего десятилетия [44, 83].
Болезни этой группы стали приобретать все большее социальное значение, стали частой причиной длительной нетрудоспособности и инва-лидизации людей. В структуре общей заболеваемости (по обращаемости) проктологические заболевания составляют около 1 %, а в структуре органов пищеварения 12-15%. Общепроктологические хирургические больные составляют 65,9%, онкопроктологические хирургические 7,1%, колопрок-тологические терапевтические 19,2%, колопроктологические хирургические 7,7% [61, 117].
Наиболее важной составной частью лечебных мероприятий является медикаментозная терапия, при этом используется большое число разнообразных лекарственных средств (анестезин, мазь бутадиеновая, мазь гепариновая, ихтиол, викасол, детралекс, трибенозид, эскузан и др.) [44, 67, 82].
Больные воспалительными заболеваниями женских половых органов составляют 60-65% гинекологических больных, обратившихся в женскую консультацию и 30% - среди направляемых на лечение в стационар. Отмеченный во многих странах мира рост воспалительных заболеваний женских половых органов является следствием возрастающей миграции населения, урбанизации, изменения полового поведения молодежи, проституции.
Лечение в основном проводят химиотерапевтическими препаратами (левомицетин, нистатин, грамицидин, фурацилин, ваготил, этакридина лактати др.) [82, 96].
Все же номенклатура ЛС для лечения проктологических и гинекологических заболеваний весьма ограничена, а применение сильнодействующих лекарственных препаратов нередко вызывает побочные реакции, которые могут иметь серьезные последствия Наряду с многочисленными явлениями аллергии участились случаи индивидуальной непереносимости препаратов в связи с особенностями ферментативной активности у различных лиц.
При сложившихся обстоятельствах, особенно при лечении хрониче ских заболеваний, применение лекарственных растений часто является более целесообразным по сравнению с химиотерапией. Лечение с помощью лекарственных растений проводится длительными и систематическими курсами. Оно способствует повышению естественных защитных реакций организма, коррекции метаболических процессов, восполняет дефицит витаминов, минеральных солей, гормонов, ферментов и др. БАВ в организме [68, 101].
Преимуществом лекарственных растений и препаратов из них является также их малая токсичность и возможность длительного применения без риска возникновения побочных явлений. Своими целебными свойствами фитопрепараты обязаны, прежде всего, гармоничному сочетанию и взаимодействию БАВ, содержащихся в растительном сырье [104].
Фитохимические исследование экстракта люцерны густого Эраконд
Решение проблемы повышения эффективности фитотерапии возможно путем создания фитопродукции на основе оригинальных отечественных субстанций, получаемых по новым наукоемким, безотходным технологиям с использованием экологичного, экономически доступного сырья. Теоретически по материалам литературного обзора показана обоснованность проведения исследований, направленных на вовлечение изучаемого природного сырья в сферу фармацевтического производства, а препаратов на его основе в медицинскую практику. С этой целью нами осуществлен комплекс исследований промышленных серий экстракта люцерны густого Эраконд, учитывающий современные требования к фармацевтической продукции, включающий фитохимическое изучение, стандартизацию согласно требованиям ГФ XI, разработку показателей качества и методик их определения, установление обоснованных сроков годности, изучение фармакологической активности и биологической безвредности.
Согласно литературным данным в люцерне посевной содержатся фе-нольные соединения, аминокислоты и др. биологически активные соединения.
В связи с этим нами проведен ряд исследований, направленных на доказательство наличия указанных соединений в густом экстракте из травы люцерны.
Для идентификации фенольных соединений экстракта люцерны густого Эраконд использовали метод восходящей хроматографии на бумаге Ленинградской фабрики им. Володарского марки «С» в сравнении со стандартными образцами и с помощью качественных реакций.
Хромат ографическое исследование экстракта густого Эракоид
На первом этапе исследований выбирали вид необходимого экстра-гента для извлечения БАВ из экстракта густого Эраконд и системы растворителей для их разделения. Проводили обработку навески густого экстракта водой очищенной и этанолом различной концентрации (40, 50, 60, 70, 80, 90 %) при нагревании на водной бане в течение 10 минут с последующей фильтрацией растворов. Для разделения веществ использовали следующие системы растворителей: I - БУВ (4:1:2) и II - уксусная кислота - вода (15:85). Хроматограммы сопоставляли по количеству пятен, их величине и интенсивности флюоресценции в УФ-свете при длине волны 360 нм.
Результаты исследований представлены на рис 1. Исследования показали, что оптимальным экстрагентом, обеспечивающим максимальное количество идентифицируемых на хроматограммах веществ, является 70 % этанол.
На хроматограммах обнаружили 4 пятна, имеющих в УФ-свете при длине волны 360 нм сине-фиолетовую, коричневую и голубую флюоресценцию. По характеру флюоресценции отнесли вещества к соединениям фенольной природы.
На следующем этапе исследований для более полного представления о качественном составе фенольных соединений экстракт люцерны густого Эраконд подвергали двумерному хроматографированию. С этой целью 0,1 мл экстракта наносили на хроматографическую бумагу размером 45x45 на расстоянии 3 см от краев в точку старта и хроматографировали в течение 12 часов в системе растворителей БУВ (4:1:2) - первое направление, хро-матограмму высушивали на воздухе и затем хроматографировали в перпендикулярном направлении в течение 6 часов в системе растворителей уксусная кислота - вода (15:85). Готовые хроматограммы просматривали в УФ-свете. В результате проведенных хроматографических исследований нами идентифицировано 6 веществ предположительно фенольной природы
Выбор оптимального состава и технологии суппозиториев с Эра кондом
В качестве суппозиторных основ изучено 23 композиционных состава, представляющих собой сочетание гидрофобных основ (твердый кондитерский жир - ТКЖ, Витепсол W-35, Н-15, Суппорин М, Массупол-15, с поверхностно - активными веществами (эмульгатор № 1, Т-2, моноглицериды дистиллированные - МГД, твин-80, димексид), а также гидрофильных основ (полиэтиленгликоли - 4000, 1500, 400 - ПЭГ, желатино-В настоящее время с целью оценки эффективности и качества суппозиториев уделяется большое внимание изучению процессов высвобождения, всасывания и биодоступности. Методы определения биофармацевтических показателей качества суппозиториев постоянно совершенствуются.
Нами проведено изучение биологической доступности in vitro методом диффузии в агаровый гель и методом диализа через полупроницаемую мембрану со спектрофотометрическим контролем высвобождения с целью выбора оптимальной композиции суппозиториев с Эракондом.
Для определения величины диффузии в агаровый гель, измельченный суппозиторий массой 1,0 г помещали в лунку в агаре, чашки Петри закрывали и помещали в термостат при температуре 37+2 С. Через определенные промежутки времени измеряли диаметр окрашивания агарового геля. Полученные результаты представлены в таблице 9 и на рисунке 7.
Из данных таблицы 10 и рисунка 8 следует, что наибольшей степенью высвобождения обладают суппозитории на основе ПЭГ, витепсола и массу-пола.
Для определения относительной БД in vitro использовали также метод диализа через полупроницаемую мембрану по Крувчинскому со спектрофо-тометрическим контролем высвобождением. Один суппозиторий помещали в специальное устройство для диализа, имитирующее проникновение лекарственного вещества в слизистые оболочки тканевого субстрата. Моделью полупроницаемой мембраны служил целлофан (марки «Купрофан») с площадью поверхности 9 см2, толщиной 0,09 мм. В качестве акцепторной фазы использовали воду очищенную. Диализное устройство, помещали в среду высвобождения (100 мл) на глубину 2 мм. В ходе эксперимента система термо-статировалась при температуре 37+2С. Пробы отбирали в количестве 2 мл через заданные промежутки времени (15, 30, 60, 90, 120, 150 минут), к полученному диализату добавляли 4 мл водного раствора алюминия хлорида 2% и оставляли на 30-40 минут. По истечению этого времени определяли количество флавоноидов спектрофотометрическим методом на СФ-46, раствор сравнения - диализат плацебо соответствующей основы. Расчет проводили по сумме флавоноидов. После взятия пробы проводили соответствующее восполнение акцепторной фазы
