Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 10
1.1. Клинические аспекты ВПГ 10
1.2. Состояние иммунной системы при герпетической инфекции 16
1.3. Система интерферона (ИФН) 27
1.4. Система ИФН во время беременности 31
Глава 2. Материал и методы исследования 35
2.1. Характеристика обследованных больных 35
2.2. Методы исследования 38
2.2.1. Клинические методы 38
2.2.2. Методы исследования неспецифической резистентности слизистой оболочки рта 38
2.2.3. Иммунологические методы исследования периферической крови 39
2.2.4. Вирусологические методы исследования 42
2.2.5. Статистическая обработка материала 45
Глава 3. Клинико-иммунологические показатели при рецидивирующем герпетическом стоматите слизистой оболочки рта у беременных 46
3.1. Результаты клинического исследования 46
3.2. Состояние иммунной системы у беременных с рецидивирующим герпетическим стоматитом 56
3.2.1. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови 56
3.2.2. Показатели гуморального иммунитета в сыворотке крови и слюне 72
3.2.3. Показатели интерферонового статуса 75
3.2.3.1. Результаты исследования интерферонового статуса при физиологической беременности 75
3.2.3.2. Результаты исследования интерферонового статуса у беременных с рецидивирующим герпетическим стоматитом (РГС) 78
Глава IV. Обсуждение полученных результатов 84
Выводы 95
Практические рекомендации 97
Список литературы 98
- Состояние иммунной системы при герпетической инфекции
- Иммунологические методы исследования периферической крови
- Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови
- Результаты исследования интерферонового статуса у беременных с рецидивирующим герпетическим стоматитом (РГС)
Введение к работе
Актуальность темы. Вирус простого герпеса (ВПГ) занимает одно из ведущих мест среди вирусной инфекции, что определяется повсеместным его распространением, 90-процентным инфицированием человеческой популяции, пожизненной персистенцией ВПГ в организме инфицированных, значительным полиморфизмом клинических проявлений герпетической инфекции, торпидностью к существующим методам лечения.
По данным ВОЗ, заболевания, передаваемые вирусом герпеса, занимают 2-е место (15,8%) после гриппа (35,8%) как причина смертности от вирусных заболеваний.
Герпетические поражения слизистой оболочки рта имеют частые и болезненные обострения в виде хронического рецидивирующего герпетического стоматита (Чичуа Т.Р., 1990; Хайрулина М.А., 1995; Барер Г.М. и др., 1999; Елизарова В.М. и соавт., 2000, 2001; Разживина Н.В., 2004, Ayangol., Sheridan Ph.J., Rogers R. S., 2001).
Герпетическая инфекция обычно протекает доброкачественно, но может приобретать и крайне тяжелые формы, особенно на фоне иммунодефицитного состояния, приобретенного или физиологического, как это происходит во время беременности. Именно последнее обстоятельство и определяет особый интерес к этой проблеме.
В последние годы, с одной стороны, отмечается рост числа больных с вирусной инфекцией, имеющих ту или иную степень иммунодефицита. С другой стороны, ведущую роль в патогенезе различных осложнений во время беременности исследователи отводят иммунологическим нарушениям (Лебедева Н.Н., 1996; Тармаева СВ., 1989 и др.). Во время беременности наступает адаптационная физиологическая иммуно-супрессия с целью избежания иммунного конфликта двух организмов -матери и плода, но она должна быть оптимальной: недостаточная
БИЬ„ІИОГІ_КА ]
С. Петербург ,
200 ^Р К \
иммуносупрессия приводит к иммунологическому конфликту между организмами матери и плода, значительный иммунодефицит - к нарушению гомеостаза и защитных механизмов сначала плода, а затем и новорожденного (Кулаков В.И. и др., 1995; Александровский А.В., 1996; Нецеевская М.А., 2000).
Вирусемия ВПГ у женщин во время беременности может явиться причиной гибели плода, мертворождения, преждевременных родов. Герпес-вирусы вызывают до 30% спонтанных абортов на ранних сроках беременности и свыше 50% поздних выкидышей, занимая второе место после вируса краснухи (Марченко Л.А., 1997; Семенова Т.Б., 2000).
Многочисленными исследователями установлено возникновение вторичной иммунной недостаточности у больных с герпетическими поражениями (Коргов В.К., Лебедев М.Ф., Егорова В.Н., 2001). Несмотря на определенные успехи в изучении этиологии и патогенеза герпетической инфекции в полости рта, исследования состояния местного и общего иммунологического статуса у беременных с герпетическим стоматитом является актуальным, т.к. сведения по этой проблеме отсутствуют.
Целью исследования явилось изучение особенностей иммунологического статуса при хроническом герпетическом стоматите слизистой оболочки рта у беременных.
Задачи исследования:
-
Изучить особенности клинического течения герпетического стоматита слизистой оболочки рта у беременных.
-
Изучить показатели местного иммунитета в слизистой оболочке рта при герпетическом стоматите у беременных.
3. Оценить состояние общего иммунологического статуса у данной
категории больных.
4. Разработать практические рекомендации по профилактике и лечению
герпетического стоматита у беременных.
Научная новизна. Впервые у беременных с РГС слизистой оболочки рта проведено комплексное изучение местных и общих иммунологических процессов. Установлены особенности клинического течения и характер иммунологических нарушений в слюне и периферической крови.
Впервые выявлены изменения иммунного ответа на уровне слизистой оболочки рта у беременных с РГС, характеризующиеся повышением уровня иммуноглобулинов класса G и М, снижением содержания IgA и секреторного IgA (slgA).
Впервые выявлены изменения субпопуляционного состава лимфоцитов в периферической крови у беременных с РГС, свидетельствующие о нарушении баланса иммунной системы.
Впервые установлены нарушения гуморального иммунитета при РГС у беременных, проявляющиеся в повышении уровня иммуноглобулинов класса IgG и IgM и снижением титра IgA.
Впервые выявлено у беременных с РГС снижение продукции а-ИФН и у-ИФН, характеризующие интерферонодефицитное состояние у данной категории женщин.
Впервые проведена корреляция между клиническими проявлениями заболевания и иммунологическими нарушениями при РГС.
Практическая значимость. На основе выявленных механизмов патогенеза РГС у беременных возможна разработка нового подхода к коррекции иммунологических нарушений у беременных в зависимости от степени клинических проявлений в полости рта.
Результаты проведенного исследования позволили разработать практические рекомендации по проведению комплексного обследования беременных с РГС.
Научные положения, выносимые на защиту:
-
В иммуногенезе РГС слизистой оболочки рта у беременных доминируют изменения Т- и В- клеточного и гуморального иммунитета.
-
Для беременных женщин с рецидивирующим герпетическим стоматитом слизистой оболочки рта характерно интерферондефицитное состояние, которое проявляется:
повышением сывороточного интерферона:
выраженным снижением продукции альфа- и гамма-интерферона.
3. При РГС у беременных нарушена регуляцій иммунного ответа на
уровне слизистой оболочки рта, что свидетельствует об
ослаблении противовирусной защиты.
Внедрение результатов исследования
Результаты исследования внедрены в клиническую практику отделения патологии беременных ГУ НЦ АГиП РАМН, в элективный цикл студентов V курса , учебный план клинических ординаторов кафедры госпитальной терапевтической стоматологии 2004 г.
Апробация результатов исследований.
Основные положения работы доложены на конференции отделения патологии беременных и на заседании апробационной комиссии ГОУ ВПО МГМСУ МЗ РФ 24 сентября 2004 года.
Структура и объем диссертации.
Состояние иммунной системы при герпетической инфекции
Противовирусный иммунитет определяется следующими механизмами: 1) естественной резистентностью, основывающейся на врожденной или развивающейся с возрастом устойчивостью клеточных систем организма к репродукции вирусов, в том числе и с участием интерферона; 2) специфическим иммунитетом, возникающим после заболевания или искусственной иммунизации. Развитие приобретенного иммунитета связано с продукцией В-лимфоцитами различных антител, а также с взаимодействием Т-лимфоцитов с клетками, инфицированными вирусами [71, 74].
Иммунный ответ организма на вирусную инфекцию состоит из двух фаз.
В первой фазе иммунный ответ является в основном антигеннеспе-цифическим, опосредованным фагоцитирующими клетками и натуральными киллерными (НК) клетками. Инфицированные вирусом клетки более чувствительны, чем нормальные, к лизирующему действию НК-клеток. Активированные клетки выделяют различные медиаторы, в том числе а- и Р-интерфероны (ИФ).
Во второй фазе, наступающей после начала размножения вируса в организме, запускается целый ряд иммунных реакций. Регуляторные Т-клетки играют ключевую роль в регуляции как антителообразующих В-клеток, так и эффекторных Т-клеток. Т-лимфоциты после стимуляции антигеном выделяют факторы роста и созревания В- и Т-клеток (интерлей-кин-2, а также другие лимфокины, такие как у-интерферон (ИФН-у) и ряд неидентифицированных хемотоксических веществ. Являясь высокоактивным противовирусным агентом, ИФН-у вместе с тем выполняет много иных функций, в частности, активирует макрофаги, включая индукцию интерлейкина-1 (ИЛ-1), усиление экспрессии антигенов класса I — главного комплекса гистосовместимости (МНС) и экспрессию антигенов МНС класса II на клеточной поверхности. Таким образом, в формировании резистентности к вирусной инфекции участвует целый комплекс взаимодействующих клеток и их факторов [42, 45, 46, 49, 51, 55].
Заражение герпес-вирусами ведет к развитию специфического и неспецифического как гуморального, так и клеточного иммунитета [49], который сохраняется на протяжении многих лет вследствие того, что ВПГ-1 и ВПГ-2 обладают рядом общим антигенных детерминант. Заражение одним из этих вирусов приводит к появлению антител и Т-лимфоцитов, реагирующих с вирусами гетерологического типа. Иммунные реакции влияют на патогенез инфекции и определяют тяжесть развивающихся поражений [96]. Большинство авторов решающую роль в противовирусной резистентности организма при герпетической инфекции отводят клеточному иммунитету, опосредованному Т-лимфоцитами [72, 112, 59, 60, 62].
Клеточный иммунитет в совокупности с гуморальным блокирует распространение ВПГ по межклеточным мостикам и при делении клеток, разрушая инфицированные и прилежащие к ним неинфицированные клетки.
Реакции клеточного иммунитета осуществляются клеточными элементами: Т-киллерами, макрофагами, полиморфноядерными лейкоцитами без участия или с участием специфических антител и направлены против инфицированных клеток и вирусов. Факторы клеточного иммунитета (лимфокины) выделяются иммунными Т-лимфоцитами [78].
Функция факторов клеточного иммунитета связана с подавлением репродукции вируса, с миграцией и удержанием макрофагов и лимфоцитов в очаге воспаления. Кроме того, факторы клеточного иммунитета, с одной стороны, вызывают лизис инфицированных клеток и способствуют высвобождению внутриклеточного вируса для последующей нейтрализации антителами, с другой - влияют на соседние нормальные клетки, предупреждая их инфицирование. К сожалению, до настоящего времени окончательно не установлена совокупность факторов, определяющих стойкий дефект в системе клеточного иммунитета, ответственного за рецидивирование герпеса [78, 82, 84, 90, 97].
При инфицировании организма ВПГ на начальных этапах взаимодействия в инфекционный процесс вовлекаются фагоциты, осуществляющие, как известно, барьерную функцию и препятствующие дессиминации вируса. В неспецифической противоинфекционной защите наряду с моноцитами (мононуклеарными фагоцитами) ведущую роль играют нейтрофилы.
Согласно данным В.А. Исакова и соавт. [54], впервые изучивших динамику катионных белков в лизосомальном катионовом тесте, острая фаза герпетической инфекции сопровождалась падением суммарного содержания катионных белков, что может говорить об интенсивной секреции нейтрофилов крови и активном вовлечении этих клеток в систему защитных реакцией организма. По мере выздоровления повышался сывороточный уровень катионных белков. Во время рецидива отмечено повышение антиоксидантного потенциала сыворотки крови. Причем напряжение в функционировании антиоксидантной системы защиты организма сохранялось и в периоде ремиссии, что, по-видимому, обусловлено необходимостью инактивации повышенных концентраций активных форм кислорода.
Важным механизмом, предотвращающим распространение вирусов в ранние сроки инфицирования, является функция макрофагов. Обнаружено, что моноциты взрослых людей резистентны к ВПГ репликации [160, 161], в то время как моноциты, созревшие до макрофагов in vitro, становились доступными для репликации в них ВПГ [163].
Роль моноцитов как регуляторов иммунного ответа определяется балансом хелперных (продукция ИЛ-1) и супрессорных (продукция ПГ) факторов при их влиянии на иммунокомпетентные клетки. У 100% больных с обострением герпетической инфекции наблюдается ингибирующий эффект супернатантов 72-часовых культур моноцитов больных на ФГА-индуцированную пролиферацию лимфоцитов доноров, в то время как в стадии ремиссии этот эффект обнаруживается у 44%.
Роль фагоцитоза ПЯЛ в инфекции ВПГ была оценена рядом авторов [115, 146]. Показано, что вирусы герпеса эффективно фагоцитируются ПЯЛ и моноцитами. J.A.G. Vanstrip и соавт. [115] нашли, что полиморфно-ядерные лейкоциты и моноциты могут быстро разрушать мембранные белки фагоцитированных вирионов ВПГ. Демонстрируя их роль в антивирусной защите, исследователи доказали, что моноциты были способны также переваривать вирусную ДНК. В результате этого исследования авторы пришли к заключению о том, что ПЯЛ и моноциты могут нейтрализовать большие количества фагоцитированного ВПГ.
Т-киллеры являются еще более активными в реакции лизиса клеток, чем макрофаги или полиморфно-ядерные лейкоциты.
При хронической рецидивирующей герпетической инфекции наблюдается значительное снижение активности естественных киллеров (ЕК) при их повышенном количестве [71]. Согласно данным A.M. Борисовой и соавт. [71], цитотоксичность, опосредованная этими клетками, как и комплемент-зависимый лизис инфицированных клеток, являются высокочувствительными тестами. Одночасовая инкубация мононуклеаров больных с иммуномодуляторами in vitro, как правило, повышает (иногда не влияет или супрессирует) активность ЕК, что является основой для выбора имму-номодуляторов, используемых в комплексной индивидуализированной терапии [71].
Местный иммунитет, наряду с вышепредставленными факторами, также участвует в обеспечении резистентности кожи и слизистых оболочек, являясь неразрывной частью иммунитета в целом.
При электронно-микроскопическом исследовании у больных с рецидивирующим герпесом в первые 24-36 часов наблюдается межклеточный отек эпителиоцитов, разрыв десмосом, истончение и разрыв базальной мембраны [37]. Наблюдается экзоцитоз клеточных элементов, формирование микроабсцессов, состоящих из нейтрофилов, лимфоцитов и макрофагов. ВПГ проходит все 3 стадии развития: от внутриклеточной репродукции в ядре эпителиоцитов (капсид, нуклеокапсид) до вирионов, находящихся как в цитоплазме эпителиоцита зернистого слоя, так и внеклеточно.
На основании сопоставления результатов клинического наблюдения и ультраструктурного анализа установлено, что у больных рецидивирующим герпесом со спокойным течение обнаруживаются, как правило, незрелые формы ВПГ (капсиды и нуклеокапсиды), не обладающие выраженной инфекционностью. В то время как при тяжелом течении и частых рецидивах — зрелые формы (вирионы), которые обладают выраженной инфекционностью.
Иммунологические методы исследования периферической крови
Исследование клеточного звена иммунитета.
I. Выделение лейкоцитов из периферической крови методом градиентного центрифугирования.
5 мл гепаринизированной крови (25 ЕД/мл крови), разведенной в 2 раза фосфатным буфером (ФБД; рН = 7,4), наслаивали на 2 мл среды для выделения клеток «Ficoll-Paque» плотностью 1,077. Затем производили центрифугирование в течение 30 мин при 400. Клетки, отобранные из интерфазного кольца, собирали и двукратно отмывали ФБД. Осадок ресус-пендировали в 1 мл ФБД и в концентрации 0,5x10-6 использовали для ме-чения моноклональными антителами.
II. Характеристика субпопуляционного состава лейкоцитов периферической крови методом проточной цитофлуометрии.
Для изучения различных субпопуляций лимфоцитов в крови моно-нуклеарные клетки выделяли, центрифугируя клеточную взвесь на Фикол-лпаке (d = 1,077 г/см ) при 400 G в течение 30 мин (+20С). Клетки из интерфазы после отмывки средой 199 разводили забуферным физиологическим раствором (рН = 7,4). Субпопуляционный анализ лимфоцитов проводили с помощью проточной цитометрии на цитофлуориметре FacScan (Becton Dickinson, США), используя флюоресцентно меченные монокло-нальные антитела фирм Ortho Diagnostics System и Becton Dickinson (США), идентифицирующие типы клеток.
Панель моноклональных антител, использованная в наших исследованиях представлена в таблице 2.
Использование метода проточной цитофлуометрии позволяет раздельно проанализировать субпопуляции клеток, различающихся по свето-рассеиванию, пропорциональному объему клеток (прямое светорассеива-ние) и количеству внутриклеточных гранул (угловое светорассеивание).
III. Определение иммуноглобулинов классов G, М, А Содержание иммуноглобулинов определяли с помощью классического метода радиальной иммунодиф фузии по Manchini. Принцип метода заключается в том, что при встрече антигенов и антител в зоне эквивалентности образуются нерастворимые преципитаты в виде колец, диаметр которых зависит от концентрации иммуноглобулина в исследуемом материале. При постановке реакции использовали бараньи моноспецифические антисыворотки против иммуноглобулинов человека (ЦНИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова). Реакцию проводили в 1,25% агаре (фирмы "Difko"), используя вероналово-мединаловый буфер. Результаты учитывали через 48 часов. Концентрацию иммуноглобулинов рассчитывали с помощью компьютерных программ на основе построения калибровочных кривых по формуле, основанной на регрессионном анализе для IgG и IgA, и данных кусочно-линейного графика для IgM.
IV. Исследование системы интерферона
Для определения интерферонового (ИФН) статуса использовали препараты цельной крови. Кровь в количестве 10 мл брали из вены пациентов в стерильную пробирку с 10 ЕД гепарина. Сывороточный, а- и у-ИФН определяли титрованием в культуре фибробластов человека (ДФЧ М-19) с использованием микрометода в полистироловых 96-луночньгх круглодонных планшетах в трех поворотах (9 лунок на каждую пробу). В каждую лунку, содержащую 160 мкл среды RPMI-1640 (с глютамином 0,3 мг/мл и гентамицином 0,08 мг/мл), вносили в первые три 20 мкл ВБН, во вторые — по 20 мкл ФГА, в третьи — по 20 мкл среды RPMI-1640, а во все 9 лунок - по 20 мкл цельной крови. Содержимое каждой лунки хорошо перемешивали. Планшеты закрывали крышкой и инкубировали при 37С 24 часа в атмосфере 5% ССЬ. Оставшуюся кровь центрифугировали для получения сывороточного интерферона. Культуру фибробластов человека в среде Игла с 10 мл бычьей сыворотки (105 кл/мл) в объеме 200 мкл на 1 лунку выращивали 28-48 часов (до образования сплошного монослоя) при 37С в атмосфере 3% СОг- В качестве тест-вируса использовали вирус эн-цефаломиокардита мышей. За единицу активности принимали величину, обратную разведению ИФН, обеспечивающую 50-процентную защиту клеток монослоя от цитопатического действия тест-вируса. Титр противовирусной активности выражали в международных единицах. Для определения индукции лейкоцитами а-ИФН и лимфоцитами у-ИФН их выделяли по методике Воушп А. Индукцию а-ИФН проводили фитогемагглютинином (ФГА) в дозе 5 мкг/мл (фирмы «Difco» (США)). Индукцию у-ИФН проводили вирусом Болезни Ньюкасла в дозе 2,5 мкг/мл в течение суток при 37С.
По данным литературы, при исследовании крови доноров в норме титры сывороточного ИФН находятся в пределах фоновых значений 3,54±0,9 Е/мл, титры а-ИФН - до 125,9+1,9 (64 - 256) Е/мл, титры у-ИФН -67,0±14,6(16-64)Е/мл.
Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови
О состоянии иммунных процессов на системном уровне (в периферической крови) судили с помощью метода проточной цитофлуометрии с применением моноклональных антител фирмы «Becton Dickinson» (США) по показателям следующих клеточных популяций: общие Т-лимфоциты (CD3+), Т-хелперы/индукторы (CD4+) и супрессоры - цитотоксические клетки (CD8+) в популяции Т-лимфоцитов, их соотношение (CD4+/CD8+), В-лимфоциты (CDi9+), естественные киллеры (CD]6+).
Результаты изучения субпопуляционного состава мононуклеарных клеток периферической крови обследуемых женщин представлены в таблицах 5, 6.
Относительное содержание Т-лимфоцитов (CD3 ) в периферической крови в целом по группе больных с РГС было статистически ниже показателей контрольной группы. При анализе содержания лимфорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов - хелперной (CD4+) выявлено достоверное снижение, а супрессорной/цитотоксической (CDg4) - достоверное увеличение.
Иммунорегуляторный индекс (CD4 /CD8 ) был снижен. Уровень относительного содержания естественных киллеров (CD 16 ) в целом по группе был выше, чем в контрольной группе. Относительное содержание В-лимфоцитов (CDi в целом по группе не отличалось от контроля.
Помимо изучения состояния клеточного звена иммунитета при герпетическом стоматите по группе в целом нами был проведен анализ суб-популяционного состава лейкоцитов периферической крови обследуемой группы женщин в зависимости от степени тяжести герпетической инфекции.
Относительное содержание Т-лимфоцитов (CD3+) и Т-хелперов (CD4) в периферической крови у больных с легкой степенью РГС было достоверно снижено в сравнении с контрольной группой. У больных со средней и тяжелой степенью РГС выявлено также достоверное снижение CD3+-лимфоцитов (рис.5).
При анализе содержания лимфорегуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов и супрессорной/цитотоксической (CD8+) - у больных с легкой и средней степенью РГС по сравнению с контролем имелось достоверное увеличение показателей.
У больных с тяжелой степенью РГС отмечено достоверное снижение относительного содержания Т-хелперов (CD4+) и увеличение (CDg+) по сравнению с контрольной группой.
Относительное содержание естественных киллеров (CDi6+) было повышено по сравнению с контролем (р 0,05) как у беременных с легкой, так и средней и тяжелой степенью инфекции. Однако различий по этим показателям в группах в зависимости от степени тяжести выявлено не было. Относительное содержание В-лимфоцитов (CDi9+) статистически не отличалось от контрольной группы при всех степенях тяжести РГС.
Таким образом, сравнительный анализ относительных показателей субпопуляционного состава лимфоцитов больных с легкой, средней и тяжелой степенями РГС показал, что при тяжелой степени относительное содержание Т-лимфоцитов СБз+ достоверно ниже, чем при легкой и средней степени, в то время как в абсолютных значениях этой разницы не найдено (табл.6). Относительные показатели содержания клеток с фенотипом Т-лимфоцитов-хелперов (CD4+) при тяжелой степени РГС также были достоверно ниже, чем при легкой и средней степени заболевания. Содержание клеток, относящихся к цитотоксической/супрессорной субпопуляции (CD8+), имело достоверное увеличение (рис.5).
Также нами была определена величина иммунорегуляторного индекса, отражающая соотношение регуляторных субпопуляций клеток двух типов лимфоцитов (CD4+/CD8+). Этот важный показатель гармоничной функции иммунной системы у больных с различной степенью тяжести РГС был снижен, что свидетельствовало о нарушении иммунного гомеостаза.
Как следует из представленных в табл.6 данных, абсолютное содержание лимфоцитов и лейкоцитов в 1 мл крови в целом по группе при РГС статистически не отличалось по сравнению с контролем.
Абсолютные величины Т-лимфоцитов (СОз ), показателей CD4+, CDi9+ имели тенденцию к снижению, a CDg+, CDi6+ в целом по группе у больных с герпетическим стоматитом имели тенденцию к повышению (табл. 6).
Абсолютное содержание лейкоцитов у больных легкой степени герпетического стоматита не отличалось от группы контроля. Подобные закономерности выявлены и для больных со средней и тяжелой степенью (табл. 6).
Абсолютное значение содержания CD3+ лимфоцитов у больных с легкой, средней и тяжелой степенью РГС также имело тенденцию к снижению по сравнению с контролем, однако результаты были статистически недостоверны, в то время как у больных с тяжелой степенью РГС выявлено достоверное снижение CD3+-KJieTOK.
Также было выявлено повышение абсолютного содержания CDg+ лимфоцитов у больных с РГС при всех степенях тяжести заболеваний (рис.6).
Абсолютное содержание естественных киллеров (CDi6+) было повышено по сравнению с контролем у пациенток при всех степенях тяжести РГС. Однако различий по этим показателям в зависимости от степени тяжести не выявлено.
Абсолютное содержание В-лимфоцитов (CDi9+) статистически не отличалось от контрольной группы при всех степенях тяжести РГС.
Таким образом, при суммарном анализе показателей относительного и абсолютного содержания клеточного звена иммунитета было выявлено: достоверное снижение относительного количества Т-лимфоцитов, Т-хелперов и повышение Т-супрессеров/цитотоксических клеток и содержания естественных киллеров.
Был проведен структурный анализ относительного содержания субпопуляций лимфоцитов женщин исследуемой группы. При этом было выявлено, что при легкой степени РГС у 65,2% женщин имелось снижение относительного количества Т-лимфоцитов, у 19,6% было повышение содержания этих клеток и только у 15,2% пациенток определялись нормальные значения. В контроле: 75% женщин имели нормальные значения Т-лимфоцитов, 10% - сниженное количество и 15% - повышенное содержание (табл.7).
Результаты исследования интерферонового статуса у беременных с рецидивирующим герпетическим стоматитом (РГС)
Проявления герпетического стоматита слизистой оболочки рта у беременных женщин отмечались во II триместре беременности.
Анализ ИФН статуса состоял из определения титров сывороточного интерферона, интерфероновой реакции лейкоцитов спонтанной, вирус индуцированной на митогены (табл.13, рис. 13).
Содержание сывороточного интерферона оказалось повышено при всех степенях тяжести рецидивирующего герпетического стоматита слизистой оболочіш рта у большинства пациенток (4,3+1,2 - легкая степень РГС; 4,2+0,9 - средняя степень РГС; 4,5+0,3 - тяжелая степень РГС; N- 4,0). Так, при легкой степени РГС содержание сывороточного интерферона было выше нормы и контрольной группы (беременные женщины с физиологической беременностью во II триместре) у 75% исследуемых. При этом нормальные значения сывороточного интерферона были только у 12,5% беременных ( 4,0 Е/мл), повышенное ( 8 Е/мл) у 12,5% пациенток.
При средней степени РГС содержание сывороточного интерферона достоверно не отличалось от значений легкой степени РГС и контрольной группы, но было выше уровня нормы. При этом повышенные значения сывороточного интерферона были у 85% обследованных, нормальные и пониженные титры сывороточного интерферона были у 15% больных.
При тяжелой степени РГС титр сывороточного интерферона был выше, чем при средней степени и соответственно выше, чем в норме и контрольной группе. Средние значения его составляли 4,5+0,3 Е/мл. При этом нормальные его значения были у 5% беременных, у 95% - повышенные.
Анализ спонтанной интерфероновой реакции лейкоцитов показал, что при РГС титр интерферона в большинстве случаев был ниже 4 Е/мл. При легкой степени РГС в 72% случаев титр интерферона был сниженным, у 13% беременных повышенным. Нормальные его значения определялись в 15% случаев. Средние значения титра интерферона составляли 3,2+0,03 Е/мл, что было ниже уровня нормы и контрольной группы в 1,3 и 1,2 раза соответственно.
При средней степени спонтанная интерфероновая реакция лейкоцитов была снижена в еще большей степени по сравнению с легкой степенью РГС. При этом сниженные показатели интерферона определялись в 83,3% случаев, повышенные в 3,4% случаев. Средние значения титра интерферона составляли 2,8+0,1 мл, что было в 1,5-1,4 раз ниже уровня нормы и контрольной группы - соответственно.
При тяжелой степени РГС титр интерферона был снижен в 1,9 раза по сравнению с контрольной группой. При этом титр пониженных значений определялся в 95,2% случаев. Средние значения его составляли 2,2+0,05 Е/мл.
Продукция лейкоцитов ос-ИФН в ответ на индукцию вирусом болезни Ньюкасла была резко снижена при РГС как по сравнению с нормальными значениями, так и по сравнению с показателями при физиологической беременности (контроль). Средние титры а-ИФН при легкой степени РГС были снижены в 4,4 раза и 1,5 соответственно. Средние значения а-ИФН составляли 16,6+3,09 Е/мл. При этом сниженная продукция а-ИФН определялась у 69% женщин, у 20% - отмечались нормальные значения и у 11% - повышенные.
По мере усиления степени тяжести РГС продукция а-ИФН в ответ на вирусный индуктор достоверно снижалась (р 0,05).
При средней степени РГС титр а-ИФН составил 12,5+2,4, что было ниже нормальных значений в 5,8 раза и в 2 раза, чем при физиологической беременности в те же сроки. При этом продукция а-ИФН на вирусный индуктор была снижена у 79,9% женщин, нормальные показатели были у 10% пациенток и повышенные у 10,1% обследованных.
При тяжелой степени РГС титр а-интерферона был еще ниже, но достоверно не отличался от значений при средней степени РГС. При этом сниженная продукция а-ИФН определялась у 97,7% беременных и только у 2,2% женщин отмечали нормальные значения.
Продукция ИФН-у в ответ на ФГА была резко снижена у беременных с РГС (рис.13). У беременных с легкой степенью РГС средние титры для ИФН-у в ответ на ФГА составили 10,0+1,4 Е/мл, что было в 2,4 раза ниже нормальных значений этого показателя и в 1,3 раза ниже значений физиологической беременности. Продукция ИФН-у была резко снижена у 87% пациенток. Нормальные значения ИФН-у имелись только у 6,5% женщин.
При средней степени РГС у беременных продукция ИФН-у в ответ на индуктор ФГА была снижена в еще большей степени. Средние значения титра у-ИФН составили 8,7+0,3 Е/мл, что было ниже нормы в 3,8 раза и в 1,6 раза ниже, чем при физиологической беременности. Нормальные титры у-ИФН на индукцию ФГА у-ИФН обнаруживались у 5% женщин, сниженные титры у 90% беременных, средние титры у 5% беременных.
Наиболее выраженное снижение титра у-ИФН в ответ на индукцию ФГА отмечалось при тяжелой степени РГС. Средние значения титра у-ИФН были достоверно ниже по сравнению с легкой и средней степенью РГС, а также в 4,0 раза ниже уровня нормы и в 2 раза ниже показателей физиологической беременности в те же сроки. Снижение ответа на ФГА было у 97,7% беременных, нормальные значения имелись только у 2,3% женщин.
Анализируя приведенные данные о состоянии интерферонового статуса, можно сделать вывод, что у беременных с РГС имеется дисбаланс системы интерферона. Этот дисбаланс выражается в повышении уровня сывороточного ИФН в сочетании с резко подавленной способностью лимфоцитов и лейкоцитов продуцировать а-ИФН и у-ИФН, что характерно для рецидивирующей формы герпетической инфекции.
