Введение к работе
Актуальность проблемі. В настоящее время и в нашей стране, и за рубежом употребление наркотических веществ с немедицинс-кими целями продолжает расти. Хорошо известно, что хроническая интоксикация наркотиками приводит к выраженным нарушеїшям на соматическом, нейро-гуморальнсм л психо-социальном уровне. Несмотря на противоречивые и несистематизированные данные о влиянии злоупотребления наркотиками на иммунную систему [Шюцитый К.Д. .Давыдова Г.В. І9Є9], вовлеченность последней в развитие наркомании как заболевания не вызывает сомнений. Этот факт хорошо укладывается в современные представления о роли иммунной системы в регулировании гомеостазе.
Изучение и осмысление реакций иммунной системы на хроническую интоксикацию наркотическими веществами должно помочь в решении принципиальных проблем наркологии, указать возможные пути адекватной диагностики и лечения наркоманий.
На сегодняшний день существует довольно много работ, посвященных изучении клеточного звена иммунитета при употреблении наркотических вещесчв, и имеется немалое количество обзоров существующей литературы по этому вопросу (Плецитый К.Д.Давыдова Т.В., 1989; Yahya M.D..Watson R.H., 1987]. Менее изученной является реакция гуморального звена иммунитета. В большинстве работ указывается на повышение уровней сывороточных иммуноглобулинов У опийных наркоманов[Heathoote J., Taylor К.В., 1981 J. И практически не изученным остается вопрос о существовании и роли специфических антител к наркотическим веществам, хотя в экспериментах на животных была продемонстрирована их индукция. '[Ringle D., Herndon В., 19753-
Будучи наименее изученным, этот вопрос является в то же время одним из наиболее важных и интересных. Выработка специфических антител в ответ на хроническую интоксикацию означает включение главного эф$екторного механизма иммунохимической функциональной системы гомеостазе. Появление специфических иммуноглобулинов мокэт существенно менять фармакокинэтику препарата, а также служить вакнкм диагностическим признаком,. имеющим большое практическое значение.
Сегодня основным объективным лабораторным методом исследования наркоманов является токсикологическая экспертиза, основанная на определении в биологических средах непосредственно наркотического вещества, которое в организме активно метаболи-
зїфувтся и через непродолжительное время уже не определяется. Что касается опиатов, то возможности их определения в моче ограничены 24-48 часами после последнего приема, при определении в крови это время еще меньше. К тому же токсикологическая экспертиза лишь констатирует факт употребления наркотика, но не характеризует его как патологический процесс. Все это в свете ненаказуемости употребления и добровольности лечения сникает диагностическую ценность вышеописанных методов.
Выработка специфических антител может свидетельствовать о декомпенсации классических путей метаболизма наркотика в случае его запредельного поступления в организм и вовлечении системы иммунитета в поддержание гомеостазе. Уровень этих антител может характеризовать степень нейро-химического дасстрэсса и размер участия иммунной системы в его компенсации.
Таким образом, очевидно, что роль специфических антител в патогенезе наркомании представляется безусловно важной, а факт обнаружения их повышенного уровня может стать объективной и информатішной характеристикой злоупотребления наркотическими веществами.
Использование стандартного методического подхода, основанного на применении твердофазного иммуноферыентного анализа (ИФА) для определения специфически антител к опиатам' позволит обойтись без дорогостоящего оборудования. А его широкое применение в диагностике СПИДа и гепатита дает реальную возможность быстрого, не требующего больших матеріальних затрат, внедрения на базе вспользувдегося оборудования. Кроме того, возможность визуального учета реакции делает этот метод еще. более доступным для самого широкого применения в медицинской практике.
Несомненный научный и практический литерео этой проблемы послухил основанием для проведения настоящей работы. Цель и сздачи. Цельи нзстоядзй работы было изученкэ образова-ния специфических антител к опиатам и возможности использования этого факта в диагностике хронической интоксикации опиатами, разработка рутинного метода на основа иммуно-фарментноло анализа и его практическое внедрение.
Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:
I. Изучить условия образования и специфичность антител к морфину при хронической интоксикации опиатами у кивотных и человека.
2. Разработать твердофазный иммуноферментный анализ с при
менением пероксидазы хрена для даагностиюі хронической опийной
интоксикации, исследовать его чувствительность и специфичность
с использованием групп сравнения (другие вида наркоманий, ин
фекционные и аутоиммунные заболевания), привести характеристи
ки метода в соответствие с государственными и международными
стандартами.
3. Разработать вариант диагностического теста для
визуального учета результатов на осново р-лактамазы.
-
Сравнить методические варианты теста, провести матема-тико-статистйческий анализ, разработать критерии диагностики и инструкции по практическому применению.
-
Разработать всю необходимую для практического внедрения техническую документацию, создать на ее основе опытную партию наборов реактивов для определения антител к опиатам. Провести . предварительные, межведомственные и медицинские испытания.
Научная новизна. Впервые показано, что реакция иммунной системы развивается преимущественно по т-независимому типу при возможном решающем участии макрофагов.
Впервые продемонстрирована возмояшость использования факта выявления антител к опиатам в сыворотке кро-?и для диагностики хронической опийной интоксикации и разработан метод определения антител к опиатам в сыворотке крови на базе твердофазного иммунофэрментного анализа, а также вариант теста с использованием а-лактамазы и создан набор реактивов для иммунофэрментясто анализа антител к опиатам в сыворотке їфови человека, не имеющий аналогов ни в наши стране, ни за рубежом. Проведено сравнительное изучение вариантов теста между собой и с разработанным в Италии методом определения морфина в волосах.
Создан специфический коныогнрованный антиген морфин-белок по оригинальной методике, и проведено сравнение его с известными аналогичными антигенами.
В экспериментах на кявотннх изучена зависимость индукции специфического гуїюрального иммунного ответа от интенсивности п длительности хронической наркотизации.
Практическая значимость результатов исследования. Результаты изучения реакции гуморального иммунитета при хронической опийной интоксикации могут помочь в понимакда патогенетических механизмов развития наркомании, открывают возможности новых
подходов к оценке тяжести заболевания, эффективности лечения к критериев излеченности, ь таске иммунологическим методам лечения.
Разработанный диагностический тест приспособлен к возможностям практического здравоохранения и может быть внедрен ъ Шігрокую медицинскую практику. Методические подходи, разработанные для решения данной задачи, могут быть использованы для изучения возможной индукции образования специфических антител другими низкомолекулярными веществами, в том числе наркотическими. Созданный набор реактивов может быть использован в наркологических клиниках, при диспансерном наблюдении, на станциях переливания крови, а также при ігрсфилакгическом обследовании различных контингентов населения и врачами другиг. специальностей для исключения наркомании.
Внедрение. Получено авторское свидетельство на изобретение #1807420. Разработанный метод использовался в 17 наркологической больнице г.Москвы, в Гематологическом научном центре МЗ РФ, на станции переливания кропи г.Подольска. Набор реактивов "Морфоскрин" просел предварительные, межведомственные и медицинские испытания. Результаты испытаний были долоаены на заседании комиссии по радиокммуншш и иммунофермэнтным наборам реактивов Комитота по новой медицинской технике Министерства здравоохранения РФ. Реаениом комиссии набор реактивов рекомендован к промышленному выпуску.
Апробация работы. Тема диссертации утверадена на заседании
Проблемной комиссии. ГЩ нарколо'.-ии МЗ РФ от ІЄ.02.1990г.
(протокол З-з). Основные материалы и положения диссертации
доложены л утверждены на мэклабораторной конференции института
медико-биологических проблем наркологии (протокол JSI4 от
12 Л1.1932г). Основные материалы исследований были такг;о
доложены на: Всесоюзной конференции "Биологические основы
индивидуальной чувствительности к психотропным препаратам"
(Ростов на Дону 1990г.), совещании по вопросам профилактики
иаркотизма, (Москва 1991г.); семинаре "Иммунохимическиэ подхо^-
ды в дііагностике хронической наркомании" (Верона, Италия,
1931г.); I Всероссийском съезде иммунологов, (Новосибирск
1992г.) -
Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста и состоит из вбєдєния, 4 глав,
выводов и приложения. Список литературы включает 186 источников, з том-числе 54 отечественных и 132 зарубезяшх авторов. Работа иллюстрирована 23 таблицами и 12 рисунками, актами исіштаний набора реактивов для определения антител к опиатам в сыворотке крови человека.
