Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 11
1.1.Клинико-эпидемиологическая эволюция коклюша в России с 1925 по 2004г.г. 11
1.2. Микробиологическая характеристика рода B.pertussis 16
1.3. Патогенез коклюша 26
1.4. Особенности коклюша у привитых детей 31
1.5. Лабораторная диагностика коклюша
1.5.1. Методы выявления возбудителя коклюша З 3
1.5.2. Серологические методы лабораторной диагностики коклюша Собственные исследования 39
Глава 2. Материалы и методы исследования 45
2.1.Объем проведенных исследований 45
2.2.Методы выделения и идентификации Bordetella pertussis 47
2.3. Методы раннего подтверждения этиологического диагноза коклюша 48
2.4.Методы ретроспективной серологической диагностики 49
2.5.Методы изучения антиинфекционной резистентности и
морфофункционального состояния слизистой ротоглотки 49
2.5.1 Методы изучения морфофункционального состояния слизистой ротоглотки 50
2.5.2 Методы оценки антиинфекционной резистентности слизистой ротоглотки 52
2.5.2.1 Оценка электрокинетического состояния слизистой ротоглотки 52
2.5.2.2 Методы изучения местного специфического и неспецифического иммунитета 53
2.6.Статистическая обработка результатов исследования 54
Глава 3. Совершенствование методов лабораторной диагностики коклюша 56
3.1. Методологические подходы к раннему подтверждению этиологического диагноза
3.1.1. Метод выявления антигенов pertussis в реакции непрямой иммунофлюоресценции 56
Глава 4. Клинико-анамнестические факторы, влияющие на течение коклюша 68
4.1. Заболеваемость коклюшем в зависимости от прививочного статуса наблюдаемых детей (по данным НИИДИ) 68
Глава 5. Разработка этиопатогенетических критериев прогноза характера течения коклюша у детей 83
5.1. Изучение морфофункционального состояния слизистой ротоглотки при коклюше у детей 83
5.2 Характеристика специфической и неспецифической резистентности при коклюше у детей 101
5.2.1. Оценка электрофизиологического состояния слизистой ротоглотки на основе ЭлА 102
5.2.2 Характеристика микроэкологических нарушений слизистой ротоглотки при коклюше 103
5.2.3. Характеристика содержания общего иммуноглобулина класса А в секрете слизистой при коклюше у детей 114
Заключение 117
Выводы 129
Практические рекомендации 131
Список литературы
- Микробиологическая характеристика рода B.pertussis
- Методы раннего подтверждения этиологического диагноза коклюша
- Методы изучения местного специфического и неспецифического иммунитета
- Оценка электрофизиологического состояния слизистой ротоглотки на основе ЭлА
Микробиологическая характеристика рода B.pertussis
Несмотря на многолетний разносторонний опыт изучения коклюша, необходимость дальнейшего совершенствования юкишко-диагиостических и эпидемиологических аспектов этого заболевания в настоящее время приобретает особую актуальность. В последнее время наметилась тенденция к росту заболеваемости коклюшем у детей, сохраняется его повсеместное распространение и очаговый характер [99, 132, 147, 150].
До введения обязательной вакцинации против коклюша в 1959 г. заболевание находилось на одном из первых мест среди причин детской заболеваемости и смертности. Вакцинопрофилактика позволила снизить заболеваемость коклюшем в десятки раз: в Санкт-Петербурге показатели заболеваемости в 1958г. составили 710 на ЮОтыс. населения, а в 1973г. — 18,8 (минимальный уровень). Летальность была фактически сведена к нулю.
Однако в начале 90-х годов необоснованно возросшее число медицинских отводов детей от прививок привело к росту заболеваемости коклюшем. Особенно пострадали крупные города. Пик заболеваемости пришелся на 1994г., когда показатели заболеваемости составили 32,6 на ЮОтыс.населения, а в Санкт-Петербурге - 143,2 [100]. В последующие годы были приняты меры по повышению уровня привитости детей до 4 лет. К 2001г. показатель привитости составил 89,4% против 35,7% в 1992г. Следствием увеличения иммунной прослойки среди детей раннего возраста явилось снижение показателей заболеваемости, которые, однако, в 3-4 раза превышают срешпій уровень по России.
Первое упоминание о коклюше встречается в литературе в 1578г., его автор - Guilleaume de Bailou наблюдал в Париже эпидемию этого заболевания, протекающего с высокой летальностью, а затем описал его. Название заболевания появилось в 1724г., когда эпидемия коклюша наблюдалась в Англии, Франции и Австрии и происходит от французского coqueluche. В течение первых тридцати лет XVIII века заболевание распространилось по всей Европе, приняв характер пандемии с тяжелым течением. Во второй половине XVI11 века коклюш получил дальнейшее распространение: не только в Европе, но и в Америке, а с первой половины XIX века был зарегистрирован в тропических странах. В Англии с 1858 по 1867 г. умерло от коклюша 120000 детей. Со второй половины XIX века отмечается, что течение коклюша в европейских государствах является более легким в местах его постоянного распространения и более тяжелым там, куда он проникал впервые. В отечественной литературе первое упоминание о коклюше встречается у Н.Максимовича-Амбодика в труде «Искусство повивання» (1784г.), однако клиника заболевания впервые описана С.Ф.Хотовицким только в 1847г. в книге «Педиятрика». Первые статистические итоги регистрации заболевших были опубликованы в конце XIX века. Согласно им, коклюш тогда занимал четвертое место по смертности у детей до 5 лет среди основных детских инфекционных заболеваний, уступая первые три места кори, скарлатине и дифтерии, а по заболеваемости - опережал их. В первой половине XX века ситуация сохранялась [101].
В 1906г. Bordet и Gengou выделили из кашлевой слизи больного ребенка возбудителя коклюша - Bordetella pertussis. Работа проводилась 6 лет и завершилась успехом, когда была разработана оптимальная питательная среда и обследован ребенок на ранней стадии развития заболевания. Одним из фундаментальных доказательств этиологической роли выделенного микроба стала положительная реакция связывания комплемента с сывороткой коклюшных больных при отрицательной реакции с сыворотками здоровых детей или больных другими заболеваниями. В 1916 г. появилось обстоятельное серологическое исследование Chievitz и Meyer, где определялась динамика нарастания специфических антител в крови больных, что убедительно доказало этиологическую роль B.pertussis - как возбудителя заболевания [41].
Последнее десятилетие 20 века ознаменовалось ростом заболеваемости коклюшем во многих странах Европы, США, Канады, а также в России и СНГ. Показатели заболеваемости возросли среди детей младших возрастных групп и особенно интенсивно среди подростков и взрослых [68, 74, 83J. Многие зарубежные авторы отмечают, что с 1999 года наблюдается рост коклюша с пиками заболеваемости каждые 3-4 года. Так, например, в США в период 1994 - 1996 г.г. заболеваемость коклюшем среди детей 5-9 лет возросла на 40%; среди подростков - на 106%; среди лиц старше 20 лет - на 93%. В то же время заболеваемость детей в возрасте до 5 лет оставалась стабильной [117, 118, 133]. Описаны большие вспышки коклюша в штатах Цинцинати, Чикаго, Идахо, Вермонте в 1996г. [124, 128]. Вспышки коклюша наблюдались также во Франции, Швеции и Канаде в 1998-1999 г.г. [133, 134, 139, 178].Отмечена также сезонность при регистрации данной инфекции у детей до 5 лет и лиц старше 20 лет пик заболеваемости приходится на июнь - сентябрь, среди лиц от 5 до 19 лет - на октябрь - декабрь. Повышение уровня заболеваемости коклюшем обусловлено недостаточной эффективностью цельноклеточной вакцины (36-48%), нарушением сроков вакцинации, а также совершенствованием методов диагностики и регистрации коклюша [125, 126, 148, 173]. По-прежнему вызывает тревогу заболеваемость детей младшей возрастной группы, особенно первого полугодия жизни, болеющих тяжело и длительно, часто требующих при госпитализации проведения интенсивной терапии [40, 71, 72, 93]. Среди детей первого года жизни встречаются летальные исходы, особенно в случаях осложненного течения коклюша. Показатели летальности колеблются, по данным различных авторов, в пределах 0,5% - 0,9 % [85, 124, 128].
Несмотря на более чем 40-летнее использование в мире АКДС-вакциньї, до настоящего времени сохраняются основные периодические сезонные подъемы заболеваемости, которая регистрируется не только среди детей до года, среди заболевших формируются очаги с большим количеством случаев; параллельно увеличивается число тяжелых и среднетяжелых форм заболеваний среди не привитых детей, растет заболеваемость подростков и взрослых, которые переносят коклюш в легкой и стертой формах (источники инфекции) [45, 82, 87J.
За последние годы в России отмечен повсеместный рост заболеваемости коклюшем среди всех групп населения, достигший в ряде городов и областей уровня довакцинального периода. Так, в 90-е годы показатели заболеваемости коклюшем оставались стабильно высокими, несмотря на проведение профилактических прививок, и колебались в пределах от 55 до 130-150 на 100 тыс. населения по разным регионам. Показатели в крупных городах, в том числе Санкт-Петербурге, на протяжении последних лет также были высокими и составляли 80-130 на 100 тыс. населения [39, 46]. В настоящее время высокий удельный вес в структуре общей заболеваемости коклюшем составляют дети первого года жизни, не получившие вовремя вакцинацию АКДС, а также школьники и подростки с угасшим поствакцинальным иммунитетом [38, 43, 44, 70,71].
Сложившаяся в РФ ситуация с коклюшем объясняется прежде всего ограниченным влиянием существующей АКДС-вакцины на эпидемический процесс заболевания; неоправданно широкими противопоказаниями к проведению прививок и, как следствие, снижением коллективного иммунитета, а также низким уровнем бактериальной и отсутствием серологической диагностики (особенно на ранних сроках заболевания), ошибками клинической диагностики, поздней обращаемостью, несвоевременной госпитализацией. Все эти факторы в совокупности приводят к отсутствию достоверных данных о распространенности коклюша среди населения [48, 52, 82].
Методы раннего подтверждения этиологического диагноза коклюша
Раннее этиологическое подтверждение диагноза коклюша устанавливали при параллельном выявлении в гортанно-глоточных смывах антигенов B:pertussis и иммуноглобулина класса А в реакции непрямой иммунофлюоресценции, разработанной сотрудниками ПИИ детских инфекций, получен патент РФ на изобретение № 2247388 от 27 февраля 2005г. В качестве диагностикума использовали гітері мм}тяную ітротітвококлюшную сыворотку из набора «Тест-система иммуноферментная для определения антител к B.pertussis производства предприятия «Антиген»», г.Электрогорск, Московская обл. Подробно описание метода и оценка его эффективности представлено в главе 3. Совершенствование методов лабораторной диагностики коклюша.
Оценку гуморального специфического иммунитета проводили на основе результатов исследования проб сывороток крови (292 пробы) в реакции агглютинации по общепринятой методике с использованием коммерческого «Диагностикума коклюшного жидкого для РА» и «Диагностикума паракоклюпшго жидкого для РА» производства АООТ «Биомед» им.И.И.Мечникова, с.Петрово-Дальнее, Московская обл.. Для постановки реакции использовались 72-луночные планшеты производства «Медполимер», г. Санкт-Петербург.
Проведена оценка состояния антиинефкционной резистентности и морфофункционального состояния слизистой эпителия ротоглотки, микробиоценоза и уровней специфического и неспецифического местного иммунитета, а также электрокинетической активности ядер эпителиотщтов на материале от 144 больных. Материалом для исследования служили гортанно-глоточные смывы и браш-биоптаты слизистой ротоглотки (рис.1). Уровень ЭлА
Оценку морфофункционального состояния слизистой ротоглотки проводили методом цитобактериоскопии браш-биоптатов слизистой ротоглотки с использованием щеточки-браш от эндоскопа, укрепленной на держателе для бактериологической петли (рис.2) [34].
Такой способ взятия материала позволял при однократном заборе получить достаточное количество эпителиальных клеток ( 1000 000 клеток (мл)). Взятый биоптат со щеточки отмывали в центрифужной пробирке, в 1 мл стерильного физиологического раствора (рН 7,2), давали отстояться в течении 30 минут, надосадочную жидкость сливали, из осадка готовили мазки-отпечатки на 3-х предметных стеклах, которые (1 и 2) фиксировали метанолом и окрашивали по Романовскому-Гимзе и Граму. Окрашенные мазки исследовали методом прямой световой микроскопии (обх10,окх7). В мазках-отпечатках при окраске по Граму определялись мелкие грамотрицательные коккопалочки, морфологически схожие с В.pertussis, что позволяло предположить об этиологическом факторе, а именно, возможном присутствии В.pertussis в секрете слизистой обследуемого ребенка. Чтобы подтвердить или опровергнуть наши предположения об этиологическом диагнозе, мы проводили постановку РНИФ со специфическими гипериммунными противококлюшными сыворотками из набора «Тест-система иммуноферментная для определения антител к B.pertussis, производства предприятия «Антиген»», г.Электрогорск, Московская обл. Подробно постановка РНИФ и оценка его эффективности описаны в главе 3.
Часть полученного клеточного материала наносили тонким слоем на предметные стекла (2 стекла). Часть биоптата со щеточки отмывали в центрифужной пробирке, в 1 мл стерильного физиологического раствора (рН 7,2-7,4), давали отстояться в течение 30 минут, надосадочную экилкость сливали, из осадка получали мазки-отпечатки на предметном стекле s виде одной капли - для изучения местного иммунитета по классу иммуноглобулина А. Постановка РНИФ и учет результатов описаны ниже.
Состояние антиинфекционной резистентности слизистой ротоглотки оценивалось на основании показателей инфицированности эпителтяогдитов: индекса инфицирования (ИИ), колонизационной активности возбулителя: и УПМ, по индексу адгезии (ИА), а также фагоцитарной активности ( I V) и фагоцитарному индексу (ФИ).
За индекс инфицирования эпителиоцита (ИИ) пригашали ізгротдетгг эпителиоцитов с адгезированными клетками микроорганизма. ИА - индекс адгезии — среднее количество микробных клеток т-га олиом участвующем в адгезивном процессе эпителиоците. ФА - фагоцитарная активность - процент активных фагоцитов из числа сосчитанных поли- и мононуклеаров (50 или 100). ФИ - фагоцитарный индекс - среднее число микробных клеток, поглощенных одним активным фагоцитом.
Для оценки физиологического состояния организма человека по электрокинетическим свойствам клеток буккального эпителия использовалось устройство (прибор) БЭ-1, разработанное в Харьковском НИИ дерматологии и венерологии [19, 20].
Принцип работы прибора основан на подсчете числа подвижных и не подвижных клеток буккального эпителия, наблюдаемых в камере исследований с помощью микроскопа.
Клетки буккального эпителия пациентов получали соскабливанием с внутренней поверхности слизистой щек с помощью щеточки от эндоскопа. Полученный материал со щеточки наносили на покровное стекло, которое помещали в камеру исследований между электродами, которую затем устанавливали на предметном столике микроскопа «Биолам - 1». Просматривали (обх40, окхЮ) 100 клеток буккального эпителия, из них подсчитывали количество подвижных клеток из 100 просмотренных, рассчитывали процент подвижных клеток.
Методы изучения местного специфического и неспецифического иммунитета
Выявление иммуноглобулина класса А в гортанно-глоточных смывах, осуществлялась на слайд-препаратах с культурой B.pertussis (штамм АТСС № 18323), используемой в РНИФ как антиген коклюшной палочки. При наличии иммуноглобулина класса А в исследуемой пробе гортанно-глоточного смыва происходит связывание его с антигенами коклюшной палочки. Образовавшийся иммунный комплекс «антиген B.pertussis - Ig» выявляется после окрашивания антивидовой сывороткой против глобулиновой фракции человека.
Описание метода. Материалом для исследования служили гортанно-глоточные смывы. Для их получения применялись задне-глоточные тампоны, смонтированные на изогнутом (под углом 60 -90) алюминиевом держателе в виде узкой петли па конце. После определения красящего титра и рабочего разведения (5 разведений) антивидовой против иммуноглобулинов человека кроличьей люминисцирующей сыворотки (ФИТЦ) осуществляли постановку реакции непрямой иммунофлюоресценции в нашей модификации.
В качестве специфического антигена в реакции использовали тест-культуру B.pertussis АТСС № 18323. Перед постановкой опыта тест-культуру предварительно подращивали на КУА агаре 18-24 ч. При температуре не менее 37С, содержащую 105 микробных клеток в 1 мл.
Подготовка слайд-препаратов. При приготовлении слайд-антигенов использовали чистые обезжиренные предметные стекла, на которые бактериологической петлей наносили взвесь, содержащую 105 микробных клеток в 1 мл ФБР (рН 7,2-7,4) суточной (18-24 часа) тест-культуры B.pertussis - по 3 капли: вторая, третья и четвертая (положительный контроль - К+) капли. Приготовленные слайд-препараты высушивали на воздухе в течении 15-20 мин. и фиксировали в охлажденном ацетоне (+4С, 10-15 мин.). Фиксированные слайд-препараты хранили при -20С не более 2-3 недель. Извлеченные из холодильника слайды предварительно перед работой подсушивали на воздухе.
Доставленные в бактериологическую лабораторию гортанно-глоточные смывы со слизистой задней стенки глотки наносили последовательно на предметное стекло в виде двух капель диаметром 0,5 мм: первая капля была предназначена для выявления антигенов коклюшной палочки, вторая — для выявления иммуноглобулина класса А. Во вторую каплю с исследуемым материалом вносили одну каплю взвеси суточной тестовой культуры коїслюшной палочки в фосфатно-буферном растворе (ФБР, рН 7,2 — 7,4) и одновременно рядом на поверхность предметного стекла наносили еще две капли (третья и четвертая капли) этой же взвеси культуры. Третья капля служила для постановки положительного, четвертая - для отрицательного контролей (1 этап). Препарат подсушивали на воздухе и фиксировали в ацетоне при температуре + 4 С в течение 10-15 мин (2 этап). После фиксации в ацетоне в первую и третью капли добавляли по капле коклюшной гипериммушюй человеческой сыворотки, во вторую - каплю антивидовой сыворотки к иммуноглобулину класса А, в четвертую - донорскую сыворотку, не содержащую антител к коклюшной палочке (3 этап). После подсушивания препарат помещали во влажную камеру и инкубировали при температуре 37 С в течеьше 20 мин (4 этап). По истечении времени ипкубации препарат промывали в дистиллированной воде дважды по 5 мин (5 этап), высушивали и наносили во все капли препарата антивидовую (к иммуноглобулинам человека) диагностическую люминесцирующую сыворотку, меченную ФИТЦ (флюоресцеинизотиоционат) (6 этап), снова инкубировали во влажной камере (37 С, 20 мин) (7 этап). В завершение (8 этап) препарат промывали в воде (дважды по 5 мин) и исследовали под люминесцентным микроскопом (9 этап). Процедура проведения исследования занимала 2-2,5 часа. Ход исследования схематично представлен на рис.3. Микроскопию окрашенных: препаратов производили в падающем свете на люминесцентном микроскопе «МИКМЕД - 2» ОАО «ЛОМО», Санкт Петербург, Россия (регистрационное удостоверение № 29/07060996/Q778-OG) с использованием набора реактивов для хемилюминесцентной и иммуноферментной диагностики вирусных и бактериальных инфекций (ГРМИ № 94\256). Оценка интенсивности свечения производили по четырехплюсовой системе: «++++» - очень яркая люминесценция по периферии микробной клетки, четко контрастируемая с телом клетки. «+++» - яркая люминесцирующая периферия клетки. «++» - или «+» - слабое свечение периферии клетки. «-» (минус) - люминесценция клеток отсутствует.
При специфическом свечении в третьей капле (положительный контроль) и отсутствии свечения в четвертой капле (отрицательный контроль) обнаружение ярко зеленого специфического свечения (на 3-4 «+») по периферии микробных клеток (морфологически схожих с коклюшной палочкой) в первой капле свидетельствовало о наличии антигенов В.pertussis. Специфическое свечение (на 3-4 «+») вокруг тела тестовой культуры B.pertussis во второй капле регистрировало наличии иммуноглобулина класса А. Отсутствие специфического свечения во второй капле, предназначенной для выявления иммуноглобулина А, расценивали как неблагоприятный прогностический критерий характера течения инфекционного процесса.
Оценка электрофизиологического состояния слизистой ротоглотки на основе ЭлА
Таким образом, на начальных этапах неспецифического взаимодействия эпителиоцита с микробной клеткой, элекрофоретическая подвижность ядер клеток буккального эпителия играет важную роль. Снижение ЭлА в 7 — 9 раз способствует более прочному прикреплению микроорганизма к эпителиоцитам и развитию тяжелых осложненных форм заболевания, что коррелирует с клиникой. Высокие же показатели ЭлА свидетельствуют о легком течении заболевания и благоприятном исходе, как у привитых, так и у непривитых детей.
Попав на слизистую ротоглотки человека, B.pertussis вступает во взаимодействие с микробами ассоциантами, высоко колонизующими данную экологическую нишу [6, 10, 11, 12, 16]. Течение коклюша во многом определяется состоянием микробиоценоза слизистой верхних дыхательных путей. Активно персистирующие на слизистой ротоглотки УПМ, нередко при коклюше оказываются причиной развития бактериальных осложнений, обуславливающих не гладкое течение заболевания [81]. При коклюше установлены выраженные, нарушения микробиоценоза слизистой ротоглотки, обусловленные ассоциацией B.pertussis с резидентной микрофлорой и условно-патогенными микроорганизмами [81, 104]. Однако, характер взаимоотношений коклюшной палочки с ними не изучен.
Для выявления определенных патогенных и УПМ, играющих роль в развитии на ранних сроках осложнений при коклюше, проведена сравнительная оценка их колонизационной активности на основе изучения количества колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемого материала, выраженное в средней геометрической концентрации (СПС).
Для анализа были выделены две группы больных коклюшем: привитые (75) и непривитые (69) дети, перенесшие заболевание в разных формах.
Результаты бактериологических исследований гортанно-глоточных смывов со слизистой ротоглотки представлены в таблице 5.2.2.1.
Исходная структура микробного пейзажа слизистой ротоглотки, независимо от характера течения коклюша, у детей была однотипна и включала 9 видов микроорганизмов - это представители «нормальной», резидентной микрофлоры и условно-патогенные аэробные микроорганизмы. Состав резидентной микрофлоры определяли S."viridans",S.epidermidis, Neisseriae spp. На слизистой ротоглотки активно персистировали условно-патогенные микроорганизмы - S.pneumoniae, S.pyogenes, H.influenzae, Moraxella cat. и грибы рода Candida. Вместе с тем, в сравниваемых группах, частота регистрации перечисленных микроорганизмов была различна. Анализ сравнительного изучения микробного пейзажа и частоты встречаемости микроорганизмов, персистирующих на слизистой ротоглотки, выявил значительные нарушения биоценоза во всех сравниваемых группах больных с коклюшем, как привитых, так и непривитых. Структура микробного пейзажа слизистой ротоглотки у детей, больных коклюшем, характеризовалась многокомпонентными ассоциациями (до 4-6 видов). Обращало на себя внимание практически полное исчезновение представителей резидентной микрофлоры, особенно в группе детей с тяжелым, осложненным течением коклюша (S.epidermidis и Neisseriae spp. - 10±9,5% - привитые, нет в группе непривитых детей с тяжелым течением коклюша, S."viridans - нет в группе детей с тяжелым течением коклюша, как привитых, так и непривитых). Напротив, чаще всего резидентная флора встречалась у детей с легким течением коклюша, как у привитых, так и непривитых (S.epidermidis 29,6±8,8% у привитых и 50±15,8% у непривитых, Neisseriae spp. - 55,6+9,6% у привитых, 80+12,6% у непривитых, S."viridans" 48,1+9,7% у привитых и 40+15,5% у непривитых). Соотношение доли представителей условно-патогенной микрофлоры (S.pneumoniae, S.pyogenes, H.influenzae, Moraxella cat., и грибы рода Candida) в сравниваемых группах было различным. Так, достоверно чаще S.pneumoniae встречался у детей с тяжелой формой коклюша, осложненной пневмонией (30+14,5% привитые дети, 34,8+9,9% непривитые больные против 18,5+7,5% привитые с легким течением заболевания и 10±9,5% у непривитых детей). Кроме того, при среднетяжелой и тяжелой формах течения коклюша достоверно чаще определялись S.aureus (31,6+7,5% и 80+12,6% у привитых, 22,2±6,9% и 17,4+7,9% у непривитых детей), S.pyogenes (21,1+6,6% и 40+15,5% у привитых, 11,1+5,2% и 8,7±5,9% у непривитых больных), грибы рода Candida (21,1+6,6% и 20+12,6% - привитые дети, 25+7,2% и 13,1+7% - непривитые).
Таким образом, в случаях развития осложнений на слизистой ротоглотки доминировали четыре возбудителя: S.pneumoniae, S.pyogenes, H.influenzae и грибы рода Candida.
Для решения вопроса этиологической значимости в развитии осложненного течения коклюша патогенных и условно-патогенных микрорганизмов, нами проделан сравнительный анализ их колонизационной активности (таблица 5.2.2.2).
Средние геометрические концентрации СГК (lg/мл) микрофлоры ларингеальных смывов при коклюше у привитых и непривитых детей - данные, достоверно отличающиеся от таковых группы сравнения (прир 0,01 ,прир 0,05 )КОЕ — колониеобразующие единицы в 1 мл исследуемого материала,выраженное в средней геометрической концентрации (СГК)
Представленные данные свидетельствуют, что при коклюше, независимо от формы заболевания высокую колонизационную активность имели S.pneumoniae, S.pyogenes, S.aureus и грибы рода Candida, однако, в группе с легким течением коклюша, как у привитых, так и у непривитых детей, показатели колонизационной активности патогенной и УПФ достоверно ниже (р 0,01), чем в группе с тяжелым и среднетяжелым течением, в то же время, колонизационная активность представителей резидентной микрофлоры (S."viridans",S.epidermidis, Neisseriae spp.) была достоверно выше (р 0,05).
Структура персистирующих микроорганизмов на слизистой определялась одно- и многокомпонентными ассоциациями. Характер ассоциаций и оценки взаимоотношений между B.pertussis и определенными видами УПМ, персистирующих на слизистой ротоглотки при различных формах коклюша, позволили выявить три степени выраженности микроэкологических нарушений:
Компенсированная (1-ая степень) - характеризовалась незначительными изменениями микробиоценоза в составе аэробной микрофлоры (уменьшение количества резидентной микрофлоры S."viridans",S.epidermidis, Neisseriae spp.), присутствием одного - двух представителей УПМ, определяемых в высокой колонизационной активности ( Ю4). Изменения в составе аэробной микрофлоры, характеризующиеся превалированием патогенных, УПМ и практически отсутствием резидентной микрофлоры, свидетельствовали о развитии субкомпенсированной (П-ая степень) формы микроэкологических нарушений. Декомпенеированная (Ш-ая степень) — полное исчезновение представителей резидентной микрофлоры и персистенция патогенно! и УПМ, с доминированием одного или нескольких возбудителей (S.pneumoniae, S.aureus) с синергидным характером их отношений с В.pertussis.
![Этиологическая роль кампилобактеров в структуре острых бактериальных кишечных инфекций у детей в Таджикистане [Электронный ресурс]](/i/i/4703/193414.png "Этиологическая роль кампилобактеров в структуре острых бактериальных кишечных инфекций у детей в Таджикистане [Электронный ресурс] Ахмедова Гульнора Махмуджановна")
