Содержание к диссертации
Стр.
Список сокращений 5
Введение 7
Обзор литературы 12
Глава 1. Таксономия, биологические свойства и патогенность
микоплазм 12
Таксономия представителей класса Mollicutes 11
Уникальные биологические особенности микоплазм 14
Факторы патогенности микоплазм 15
Характеристика «урогенитальных микоплазм» человека.... 18
Урогенитальные микоплазменные инфекции при воспалительных заболеваниях органов малого таза у женщин 22
Микоплазменные инфекции у беременных 24
Микоплазмы и бесплодие 25
Урогенитальные микоплазменные инфекции у мужчин.... 25
1.9. Микоплазменные инфекции при заболеваниях почек 29
Глава 2. Антигены микоплазм 31
Общая характеристика антигенов 31
Антигены генитальных микоплазм 34
Генетические механизмы вариабельности мембранных антигенов: '. 37
Глава 3. Генерализованная инфекция и длительная
персистенция микоплазм 38
Особенности микоплазменных инфекций 38
Механизмы длительной персистенции микоплазм 43
Патогенетическое значение длительно сохраняющихся антигенов 46
Собственные исследования 54
Глава 4. Материалы и методы 54
Глава 5. Выявление "урогенитальных микоплазм" у пациентов 72
Основные критерии и методы обследования пациентов... 72
Выявление Uspp у обследованных пациентов 73
Выявление М. hominis у обследованных пациентов 77
Сравнение результатов выявления микоплазм у клинически здоровых мужчин и пациентов с острым и хроническим уретритом 80
Глава 6. Обнаружение «урогенитальных микоплазм»
в сыворотке крови пациентов 88
Глава 7. Сохранение живых клеток, ДНК и антигенов
микоплазм в условиях in vitro 95
Выявление живых клеток, ДНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови человека при 37 С в условиях in vitro 96
Выявление выделенных из клеток ДНК и антигенов М. hominis и U. urealyticum в сыворотке крови человека при 37 С в условиях in vitro 98
Глава 8. Длительность сохранения живых клеток, антигенов и
ДНК Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в
условиях in vivo 101
Результаты выявления живых клеток М. hominis, их антигенов и ДНК в организме кроликов и мышей при заражении живой культурой 103
Результаты выявления живых клеток U. urealyticum, их антигенов и ДНК в организме кроликов и мышей при заражении живой культурой 106
8.3. Сохранение выделенных из клеток антигенов М. hominis и
U. urealyticum в организме кроликов и мышей 109
Выявление ДНК М. hominis и U. urealyticum в организме кроликов и мышей 112
Выявление живых клеток, антигенов и ДНК М. hominis и
U. urealyticum у иммунизированных кроликов 113
8.6. Выявление антигенов М. hominis и U. urealyticum в
составе ЦИК 115
Глава 9. Выявление белков М. hominis и уреаплазм в пробах
сыворотки крови инфицированных пациентов 117
9.1. Характеристика белкового профиля клеток М. hominis и
U. urealyticum VIII в ЭПАГ 117
9.2. Выявление антигенов М. hominis и уреаплазм в сыворотке
крови пациентов с помощью иммуноблотинга 118
Обсуяедение результатов 123
Выводы 136
Список литературы 137
Список сокращений
Ig - иммуноглобулин MBA - multybanding antigen Mg - Mycoplasma genitalium Mh - Mycoplasma hominis NF-kB - ядерный фактор «каппа-би» TLR - Толл-подобный рецептор Uspp - Ureaplasma species Uu - Ureaplasma urealyticum АГ - антиген AT - антитело
ВЗОМТ - воспалительные заболевания органов малого таза ВИЧ - вирус иммунодефицита человека Г+Ц - гуанин + цитозин ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИЛ - интерлейкин ИФА - иммуноферментный метод КБ - карбонат-бикарбонатный буфер кД - килодальтон
КОЕ - колониеобразующие единицы ЛПС - липополисахариды мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
МУД88 - белок 88 первичного ответа миелоидной дифференциации НГУ - негонококковый уретрит ОД - оптическая плотность ОП - оптическая плотность ОТ - обратная транскрипция
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РАГА - реакция агрегатгемагглютинации
РИФ - реакция прямой иммунофлюоресценции
РНК - рибонуклеиновая кислота
РИГА - реакция пассивной гемагглютинации
т. н. п. - тысяч нуклеотидных пар
УГТ - урогенитальный тракт
ФНО - фактор некроза опухоли
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы
ЦОЕ - цветообразующие единицы
ЦПД - цитопатическое действие
ЦТД - цитотоксическое действие
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
Введение к работе
Изучение биологии и роли микоплазм человека в инфекционной патологии продолжается уже несколько десятков лет. Тем не менее, в настоящее время нет, по-видимому, другой такой группы микроорганизмов, споры о патогенности которых были бы столь продолжительны, а мнения столь противоречивы. Это связано с рядом причин, главной из которых является широкое распространение микоплазменных инфекций среди людей при отсутствии свойственных только этим инфекциям клинических проявлений (157).
Ранее в работах ряда авторов была показана способность микоплазм вызывать хромосомные аберрации (84). В последние годы у микоплазм обнаружены новые уникальные свойства. Показано, что они обладают проапоптотической и антиапоптотической активностями, а при хронических формах инфекции в условиях in vivo и in vitro могут быть причиной нестабильности генома и трансформации инфицированных клеток. Индукторами этих процессов, как показали исследования, являются антигены микоплазм липопротеиновой природы (127, 128).
Из ветеринарной практики известно, что микоплазменные инфекции животных: птиц, свиней, крупного и мелкого рогатого скота часто носят генерализованный характер и сопровождаются длительной персистенцией возбудителей даже после клинического выздоровления (19). Данные о генерализации микоплазменных инфекций человека известны лишь в отношении респираторного микоплазмоза (возбудитель М. pneumaniae).
В лаборатории микоплазм и L- форм бактерий ГУ НИИЭМ имени Н.Ф. Гамалеи были созданы модели микоплазменных инфекций человека: ревматоидного артрита на мышах, кроликах и крысах (М. fermentans, М. arthritidis, U. urealyticum), респираторного микоплазмоза на морских
свинках и хомяках (М. pneumoniae) и урогенитальной микоплазменной инфекции на морских свинках, кроликах и обезьянах (27). Антигены микоплазм длительно выявляли в крови и органах животных, однако оставалось неизвестным, принадлежат ли эти антигены живым персистирующим клеткам микоплазм или в инфицированном организме сохраняются антигены погибших клеток. Если последнее предположение справедливо, то необходимо знать, как долго и в каких очагах антигены сохраняются в организме и принимают ли они участие в патогенезе микоплазменных инфекций.
Новые данные об антиапоптотической, трансформирующей, иммуномодулирующей и других активностях микоплазм диктуют необходимость переоценки данных о роли антигенов микоплазм в инфекционной патологии человека и детального изучения феномена антигенемии.
Цель работы: выяснить возможность существования антигенемии при урогенитальных микоплазменных инфекциях человека, определить длительность, очаги и формы сохранения антигенов «урогенитальных микоплазм» в модельных опытах на животных.
Основные задачи исследования:
Получить данные о частоте выявления антигенов «урогенитальных микоплазм» в крови пациентов и сравнить их с результатами выявления живых клеток, ДНК и антител к ним.
Изучить возможность выявления ДНК «урогенитальных микоплазм» в крови пациентов с помощью полимеразной цепной реакции.
Определить длительность сохранения жизнеспособных клеток «урогенитальных микоплазм», их ДНК и антигенов в сыворотке крови человека в условиях in vitro.
Определить длительность, формы и очаги сохранения жизнеспособных клеток «урогенитальных микоплазм», их ДНК и антигенов в организме экспериментально инфицированных ими кроликов и мышей.
Выявить растворимые антигены «урогенитальных микоплазм» в сыворотке крови пациентов с помощью иммуноблотинга.
Обосновать тактику ведения пациентов с длительно сохраняющейся микоплазменной антигенемией.
Научная новизна
- Впервые показано, что растворимые антигены «урогенитальных
микоплазм» выявляются с помощью реакции агрегатгемагглютинации в
крови пациентов и зараженных лабораторных животных значительно
чаще, чем живые клетки микоплазм, антитела к ним и их ДНК.
Экспериментальная микоплазменная инфекция лабораторных
животных является генерализованной с длительной персистенцией
возбудителя во внутренних органах и бактериемией.
- Установлено, что при введении животным антигенов, выделенных из
клеток микоплазм, развивается антигенемия, сохраняющаяся на
протяжении всего срока наблюдения (до трех месяцев).
- Показано, что антигены микоплазм сохраняются в организме в
различных формах: в виде корпускулярных антигенов живых и
погибших клеток, растворимых макромолекулярных соединений,
циркулирующих в крови в свободном или связанном в иммунные
комплексы состоянии.
- С помощью иммуноблотинга в пробах сыворотки крови пациентов выявлен спектр антигенов микоплазм и уреаплазм с молекулярной массой от 19 до 120 кД (Uu) и от 25 до 120 кД (Mh).
Научно - практическая значимость работы
Показано, что бактериемия и антигенемия «урогенитальных микоплазм» являются не известными ранее особенностями патогенеза урогенитальных микоплазменных инфекций.
Получены данные, свидетельствующие в пользу представления о причастности U. urealyticum и М. genitalium к развитию уретрита. Роль М. hominis сомнительна.
Показано, что исследование крови в ПЦР с целью выявления ДНК «урогенитальных микоплазм» менее информативно, чем исследование соскобов из урогенитального тракта.
Показано, что ПЦР нельзя использовать в качестве единственного критерия излеченности после антибиотикотерапии, поскольку ДНК погибших клеток и фрагменты самой ДНК могут длительно (до двух месяцев) сохраняться в условиях in vivo.
Учитывая возможность антигенемии у пациентов, рекомендуем в комплекс диагностических методов включить реакцию афегатгемагглютинации или иммуноферментный анализ, выявляющие растворимые антигены в крови.
Предложена тактика ведения пациентов с длительной микоплазменной антигенемией.
Данные работы могут быть использованы в клинических лабораториях и медицинских центрах, занимающихся диагностикой
микоплазменных инфекций, а также в учебном процессе на курсах лекций по микробиологии и инфектологии.
Созданы Методические рекомендации «Диагностика
микоплазменных инфекций при негонококковых уретритах у мужчин». Утверждены на Ученом Совете по внедрению научных достижений в практику ГУ НРШЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. Протокол №9 от 17 апреля 2009 года.
12 Обзор литературы
![Использование липосомальных форм антимикробных препаратов для лечения раневой инфекции в эксперименте [Электронный ресурс]](/i/i/4326/211478.png "Использование липосомальных форм антимикробных препаратов для лечения раневой инфекции в эксперименте [Электронный ресурс] Снатенков Евгений Александрович")
![Этиологическая роль кампилобактеров в структуре острых бактериальных кишечных инфекций у детей в Таджикистане [Электронный ресурс]](/i/i/4703/193414.png "Этиологическая роль кампилобактеров в структуре острых бактериальных кишечных инфекций у детей в Таджикистане [Электронный ресурс] Ахмедова Гульнора Махмуджановна")
