Введение к работе
Актуальность проблемы. Особенности жизненного цикла Chlamydia trachomatis (способность длительно персистировать в неактивной форме, низкая иммуногенность и стертость клинических проявлений), вкупе с увеличением количества врожденных и функциональных иммунодефицитов и изменениями сексуального поведения в популяциях (Taylor B.D., et. al., 2011) привели к широкому распространению заболевания во всем мире. Диагностика хламидиоза при беременности затруднена, поскольку повышает риск выкидыша, и не является достаточным критерием для прогноза состояния новорожденного - инфицированные женщины нередко рожают здорового ребенка. В то же время, наличие антител класса G к Chlamydia trachomatis во время беременности, при отсутствии клинических признаков инфекции и отрицательных результатах ПЦР, не является показанием для проведения специфической терапии, однако нередко приводит к рождению ребенка с признаками внутриутробной инфекции. Более того, антитела к антигенам хламидии (в т.ч. к гомологичному человеческому HPS-60 по данным A.J., et. al., 2011) могут оказать негативное влияние на плод и при отсутствии активного возбудителя. Поскольку при беременности адаптивный иммунитет подвержен супрессии, актуальным является изучение роли компонентов врожденного иммунитета в патогенетических механизмах (Макаров О.В. и др., 2008), приводящих к рождению антителоносительницами детей с осложненным течением раннего неонатального периода. В их числе полифункциональные белковые компоненты врожденного иммунитета - лактоферрин (ЛФ) и альфа-2-макроглобулин (а2-МГ). Эти белки принимают активное участие в оплодотворении и развитии плода, задействованы в воспалительных и аутоиммунных реакциях, участвуют в распознавании и элиминации патогенов, оказывают модулирующее воздействие на синтез цитокинов, транспортируют цитокины, металлы, гормоны и другие биологически-активные вещества к клеткам-мишеням.
Цель исследования состояла в сравнительном изучении содержания иммунорегуляторных белков (а2-МГ, ЛФ), иммунокомплексов а2-МГ-IgG, белков острой фазы (СРБ и альбумина), а также цитокинов (TNF-, IL-6, IL-8, IL-10, INF-, IL-18, IL-1RА) в сыворотке венозной и пуповинной крови, в околоплодных водах рожениц – носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis для уточнения их роли в иммунопатогенезе процессов, оказывающих негативное влияние на плод.
Поставленная цель определила основные задачи исследования:
1. Оценить содержание ЛФ и а2-МГ в сыворотке венозной и пуповинной крови, а также в околоплодных водах рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis в зависимости от состояния новорожденного в раннем неонатальном периоде.
2. Изучить уровень иммунокомплекса а2-МГ-IgG в сыворотке венозной и пуповинной крови, в околоплодных водах рожениц, а также наличие антител к HSP-60 к Chlamydia trachomatis в сыворотке крови во II триместре беременности у антителоносительниц. Исследовать взаимодействие а2-МГ и ЛФ с антигенами Chlamydia trachomatis in vitro.
3. Исследовать в вышеперечисленных биожидкостях рожениц - антителоносительниц (Ch. trachomatis) содержание цитокинов (TNF-, IL-6, IL-8, IL-10, INF- IL-18, IL-1RА) в зависимости от состояния новорожденного.
4. Определить концентрации острофазовых белков – альбумина и СРБ в сыворотке венозной и пуповинной крови у рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis, а также альбумина в околоплодных водах.
5. Провести коррелятивный анализ полученных результатов для уточнения роли ЛФ и а2-МГ в патогенезе процессов, оказывающих негативное влияние на плод. Определить их диагностическую и прогностическую значимость в оценке состояния новорожденного.
Научная новизна.
Впервые получены данные по сравнительному содержанию ЛФ, а2-МГ и иммунокомплексов а2-МГ-IgG в сопоставлении с уровнями различных цитокинов, С-реактивного белка и альбумина в сыворотке венозной крови, пуповинной крови и в околоплодных водах женщин, имеющих антитела класса G к Chlamydia trachomatis и к МОМР+pgp3 Ch. tr., позволяющие уточнить роль ЛФ и а2-МГ в иммунопатогенезе процессов, приводящих к рождению ребенка с признаками внутриутробного инфицирования и осложненным течением раннего неонатального периода. Впервые установлено, что повышенные сывороточные концентрации ЛФ и а2-МГ у рожениц-антителоносительниц без клинических проявлений заболевания, достоверно взаимосвязаны с рождением детей с признаками внутриутробного инфицирования. При этом оценка содержания ЛФ в крови во II триместре беременности не имеет диагностической либо прогностической ценности. Повышение уровней ЛФ и а2-МГ сопровождается статистически значимым увеличением сывороточных концентраций TNF-, IL-6 и IL-8 и снижением альбумина, в группе женщин, родивших детей с осложнениями в раннем неонатальном периоде. Установлено, что повышенные концентрации СРБ, в сыворотке крови при антителоносительстве, не зависят от состояния новорожденного. Впервые обнаружено повышение сывороточных концентраций иммунокомплексов а2-МГ-IgG, в дополнение к появлению аутоантител к HSP-60 Ch. trachomatis, у трети беременных антителоносительниц. Продемонстрировано в эксперименте in vitro, что ЛФ и а2-МГ дозозависимо связываются с антигенами Chlamydia trachomatis. Установлено, что повышение содержания ЛФ, IL-6, IL-8 и IL-10 в пуповинной сыворотке при антителоносительстве не зависит от состояния новорожденного. Впервые выявлено, что, помимо статистически значимого увеличения содержания TNF-, IL-8 и IL-18 в околоплодных водах рожениц - носительниц IgG антител к Chlamydia trachomatis, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования, значительно повышены концентрации а2-МГ, его иммунокомплекса с IgG и альбумина, а также снижен уровень ЛФ, что свидетельствует как о нарушении проницаемости барьерных функций фетоплацентарного комплекса, так и о том, что изменение уровней иммунорегуляторных белков способствует развитию клинических проявлений внутриутробного инфицирования. Активное участие а2-МГ и ЛФ в развитии локальных иммунопатогенетических процессов подтверждается результатами корреляционного анализа, выявившего наибольшее количество значимых взаимосвязей между содержанием а2-МГ и ЛФ с цитокинами в околоплодных водах.
Практическая значимость. Выявленные изменения свидетельствуют об участии иммунорегуляторных ЛФ и а2-МГ в процессах, приводящих к повреждению фетоплацентарного барьера и плода у женщин-носительниц антител к Chlamydia trachomatis: локальный дефицит ЛФ, заброс а2-МГ в околоплодные воды с локальным повышением количества иммунокомплексов а2-МГ-IgG, а также гиперсинтез ЛФ и накопление а2-МГ в сыворотке крови беременной, способны не только оказать прямое негативное влияние на плод, но и влиять на синтез цитокинов. Полученные данные могут быть использованы в качестве лекционного материала для студентов биологических и медицинских ВУЗов.
Определение повышенных концентраций а2-МГ, ЛФ и сниженных концентраций альбумина в венозной крови беременных носительниц антител к Chlamydia trachomatis в III триместре, а также высоких уровней а2-МГ, альбумина и сниженного содержания ЛФ в околоплодных водах (в родах) может быть использовано в прогнозе состояния новорожденного в раннем неонатальном периоде.
Положения выносимые на защиту:
1. В сыворотке венозной крови рожениц, имеющих антитела к Chlamydia trachomatis и родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования, статистически значимо повышены уровни лактоферрина и альфа-2-макроглобулина, а также С-реактивного белка, цитокинов TNF-, IL-6, IL-8 и снижено содержание альбумина, что свидетельствует о наличии воспалительных процессов с аутоиммунными проявлениями в III триместре, при отсутствии клинических проявлений заболевания, и может быть использовано для прогнозирования состояния новорожденного. При этом определение содержания ЛФ во II триместре не имеет диагностической либо прогностической значимости. Повышенные уровни иммунокомплексов а2-МГ-IgG и наличие IgG антител к HSP-60 Chlamydia trachomatis обнаруживаются в крови у трети антителоносительниц. Экспериментально (in vitro) установлено дозозависимое взаимодействие высокоочищенных препаратов а2-МГ и лактоферрина с антигенами Chlamydia trachomatis.
2. В сыворотке пуповинной крови рожениц с антителами к Ch. trachomatis, статистически значимо увеличены концентрации ЛФ, IL-6, IL-10, вне зависимости от состояния ребенка в раннем неонатальном периоде. При этом содержание а2-МГ, его иммунокомплексов с IgG и острофазового альбумина при антителоносительстве не отличается от контроля.
3. В околоплодных водах женщин, имеющих антитела к Chlamydia trachomatis и родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования, значительно увеличено содержание а2-МГ и альбумина, что свидетельствует о нарушении проницаемости фетоплацентарного барьера, а также статистически значимо увеличены концентрации TNF-, IL-8, IL-18 и иммунокомплекса а2-МГ-IgG на фоне снижения уровней IFN- и ЛФ, что способствует развитию локальных воспалительных и аутоиммунных процессов, негативно влияющих на плод. Данные изменения цитокинового профиля взаимосвязаны и зависят от изменений локальных уровней иммунорегуляторных а2-МГ и ЛФ - наибольшее количество значимых коррелятивных взаимосвязей между содержанием этих белков и других изученных показателей было выявлено в околоплодных водах, что подтверждает участие а2-МГ и ЛФ в развитии процессов, приводящих к рождению ребенка с осложнениями в раннем неонатальном периоде.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования и вытекающие из них практические рекомендации внедрены в лечебную практику МБЛПУ «ЗПЦ» г. Новокузнецка, а также в учебный процесс кафедры акушерства и гинекологии ГБОУ ДПО НГИУВ МЗ РФ.
Апробация диссертации. Основные результаты работы доложены на XVII международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, (Нью-Йорк, США, 2012); Объединенном иммунологическом форуме (Нижний Новгород, 2013).
Диссертационная работа обсуждена на межкафедральном заседании апробационной комиссии ГБОУ ДПО «Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей» МЗ РФ 21.01.2014г., протокол № 1.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 5 в рецензионных журналах списка ВАК РФ и 2 патента РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 126 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, самостоятельных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 25 таблицами и 13 авторов.
![Прогнозирование и профилактика осложнений беременности на фоне вирусных гепатитов [Электронный ресурс]](/i/i/4297/204328.png "Прогнозирование и профилактика осложнений беременности на фоне вирусных гепатитов [Электронный ресурс] Кувшинова Тамара Дементьевна")
