Введение к работе
Актуальность темы. Перинатальные поражения головного мозга составляют от 60 до 70 % неврологических заболеваний детского возраста. Они оказывают неблагоприятное влияние на развитие детей, часто приводя их к инвалидизации и являются одной из ведущих причин перинатальной смертности (Барашнев Ю.И., 1988; Володин Н.Н.Д988; Бадалян Л.О. и соавт., 1990; Лебедев В.В. и соавт., 1990; Студеншаш МЯ. и соавт. 1993; Якунин Ю.А. и соавт, 1993; Blair Е., 1988; Bauer B.R. et all., 1991). Гипоксические и гипоксически-травматические поражения головного мозга наиболее часто встречаются у недоношенных детей. Клиническое и инструментальное обследование новорожденных и особенно недоношенных детей не всегда дает возможность выявить локализацию и степень тяжести перинатального поражения ЦНС и, следовательно, не позволяет надежно прогнозировать течение и исход перинатальных повреждений головного мозга (Вайль С.С., 1950; Студеникин М.Я. и соавт., 1984; Строганова В.А., 1985; Ю Виктор В.Х., Вуд Э. К., 1991; Papile L. et all., 1983; Howgood.S. et all., 1984; Volpe J., 1987; Larroche J. C, 1990; Nelson K.B., .Leviton A., 1991; Allan W. A., Riviello J.J., 1992; Bhushan V., 1994).
Все эти факты послужили основанием для поиска биологически активных веществ, являющихся маркерами патологических процессов в ткани головного мозга.Одним из наиболее перспективных является научное направление, базирующееся на разработке методов определения в сыворотки крови нейроспецифических белков (НСБ), которые попадают в кровоток лишь при нарушении проницаемости гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) (Березин В.А., 1985, 1990; Чехонин В.П., 1989, 1993; Moore B.W., 1973; Grasso А., 1977; Eng L.F., 1985, 1994).
.: Среди белков этого класса одним из наиболее изученных в биохимическом и иммунологическом плане НСБ является глио-фибриллярный кислый протеин (GFAP) - белок глиальных фила-ментов дифференцированных астроцитов, реакция которых в ответ на гипоксию первична и предшествует повреждению нейронов (Березин В.А., 1990; O'Callagan J., Miller D.B., 1987, 1991; Eng L. F., 1994).
В ряде исследований, выполненых в последние годы, было убедительно показано, что GFAP применяется в целях диагностики и контроля за эффективностью проводимой терапии при энцефалите
и менингите (Покровский В.И., Лисукова Г. Е., 1991), в нейро онкологической практике (Delpech В. et all., 1978; Eng L.F., 1994 Biktjrairow R., 1995), при психических заболеваниях [Морозов Г.В. і соавт., 1985), при ишемических и геморрагических повреждения: мозга (Бережной Г. А. и соавт., 1991; Aurell A. et all. 1991).
Все это доказывает, что GFAP является достаточно надежны! маркером повреждения ГЭБ и может быть использован і диагностических и прогностических целях.
В то же время, использованию GFAP в качестве маркера пато логических процессов в нервной ткани новорожденных детей перенесших геморрагические и ишемические повреждения ЦНС посвящены лишь единичные исследования (Rosengren L. et all., 1992 1995). Открытым остается вопрос о диагностических возможности: использования GFAP у глубоконедоношенных детей.
В связи с этим представляет большой научный и практическиі интерес иммунохимическое определение данного НСБ в сыворотк крови новорожденных в качестве биологического маркера дл прогнозирования ближайшего и отдаленного исхода состояние новорожденных с перинатальными повреждениями ЦНС.
Ответной реакцией на попадание GFAP в кровоток являютс: активация йммунокомпетентных клеток и выработка специфически: антител к данному антигену, которые в свою очередь могу забрасываться в мозг через поврежденный ГЭБ и, дестабилизиру метаболические процессы в клетках мозга, оказывать негативної влияние на функции ЦНС. В связи с этим, важным аспектої исследования является количественная оценка уровня антител (AT) і GFAP в качестве прогностического критерия исхода пери катального поражения ЦНС.
Цель работы. Изучить диагностические и прогностическиї возможности глиофибриллярного кислого протеина как маркері проницаемости гематоэнцефалического барьера у недоношенны: детей с перинатальными поражениями центральной нервной системы
Задачи исследования
-
Разработка тест-системы для иммуноферментного анализ< GFAP и антител к нему в сыворотке крови.
-
Оценка степени тяжести пренатального поражения ЦНС і помощью иммуноферментного пределения уровня GFAP и антител і нему в сыворотке пуповинной крови новорожденных.
3. Оценка динамики показателей уровня GFAP и антител к
нему в сьшоротке крови на протяжешш неонатального периода для
дифференциальной диагностики различных типов перинатального
поражения ЦНС
4. Экспериментальное изучение проницаемости ГЭБ у
новорожденных крысят при отеке головного мозга, вызванного
гипертермическими судорогами. Оценка патогенетического действия
дексаметазона на клеточные структуры ГЭБ.
Новизна полученных результатов
-
Впервые в педиатрической практике применен метод количественного иммуноферментного анализа GFAP в сьшоротке крови новорожденных детей различного гестационного возраста с целью оценки степеші тяжести повреждения клеток нейроглии, а также в качестве маркера перинатального поражения ЦНС.
-
Впервые установлены исходные величины и динамика уровней GFAP и AT к GFAP в сьшоротке крови новорожденных детей различного гестационного возраста.
З.Впервые показана эффективность комплексного клинико-иммунохимического подхода в диагностике и дифференциальной диагностике ишемических и геморрагических повреждений ЦНС. Данный подход включает клиническое и параклиническое обследование новорожденных, а также динамический скриннинг GFAP и AT к GFAP в сьшоротке крови.
4. Впервые продемонстрировано, что наличие антител в сыворотке пуповинной крови у детей, родившихся раньше срока, является неблагоприятным прогностическим признаком.
5.Впервые подтверждено стабилизирующее действие декса-зона на структурные компоненты ГЭБ у новорожденных крысят при экспериментальном отеке головного мозга.
Практическая значимость
-
Иммуноферментный анализ GFAP может быть использован в целях диагностики и дифференциальной диагностики перинатальных поражении ЦНС у новорожденных детей различного гестационного возраста, включая глубоконедоношенных детей.
-
Динамический мониторинг за уровнем GFAP и AT к GFAP в сьшоротке крови новорожденных детей с перинатальными поражениями ЦНС позволяет прогнозировать течение острого периода геморрагических инсультов и осуществлять контроль за
эффективностью проводимых лечебных и реабилитационных мероприятий.
3. Положительный эффект использования дексазона для стабилизации гематоэнцефалического барьера доказан в эксперименте на животных с использованием модели отека головного мозга, что подтверждает целесообразность применения дексазона для профилактики и лечения тяжелых постпшоксических поражений ЦНС у
НОВОрОЖДеННЫХ. V:
Апробация работы. Материалы диссертации доложены на 1 Международной симпозиуме по иммунореабилитации (994 г., на общих заседаниях лаборатории иммунохимии ГНЦССП им. В.П. Сербского, на заседаниях кафедры неонатологии ФУВ РГМУ, на совместной научно-практической конференции кафедры педиатрии N 2 РГМУ, кафедры неонатологии ФУВ РГМУ и лаборатории иммунохимии ГНЦ ССП им. В.П. Сербского.
Публикации. Материалы диссертации отражены в пяти опубликованных научных работах.
Структура диссертации. Работа изложена на ... страницах машинописи и состоит из введеїшя и 4 глав, в которых приводятся данные обзора литфатуры, результаты собственных исследований и обсуждение, выводы и практические рекомендации. Диссертация содфжит 14 таблиц и иллюстрирована 15 графиками. В библиографический указатель включено ... отечественных и ... зарубежных источников литературы.
