Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время различными эндокринными заболеваниями страдает около 7-8% населення страны (М.И.Бадаболкин, 1998). Ежегодно отмечается роет заболеваемости практически для всех нозологических форм эндокринной патологии, сопровождающихся раинеіі шша.шлнзацней и емері носило, а также ірс-бугощнх больших экономических затрат на лечение и заместительную терапию.
В настоящее время признано, что система иммунитета находится в субординационных отношениях с нервной и эндокринной системами, оказывая на них регулиторно-эффекторное влияние (Д.С.Саркисов, М.А.Пальиев, Н.К.Хитров, 1997, И.Г.Акмаев, 1999, E.M.Stenberg, 2001). Новые достижения в экспериментальной и клинической иммунологии позволили пересмотреть вопросы этнологии, патогенеза, диагностики и лечения многих эндокринных заболеваний. Окончательно установлена аутоиммунная природа целого ряда эндокринных заболеваний.
Научные исследования последних лет убедительно показали, что иммунная система обладает высокой чувствительное! ыо ко многим химическим соединениям, радиоактивным веществам, а также неблагоприятным факторам физической природы, что неизбежно сопровождается снижением резистентности организма к инфекционным агентам и повышением риска шшшкновенші аутоиммунных состоянии и іаболепашііі (Г.И.Сидоренко, М.ПЛахарченко, 1992). Подтверждением этому является тенденция к увеличению распространенности аутоиммунных заболевании в целом. Так, на фойе общего роста заболеваемости болезнью Адднеона отмечается прогрессирующее преобладание первичной надиочечннковой недостаточности над болешыо Лддпсона туберкулезной этнологии (В.В.Фадеев, И.И.Бузиашвнли, И.И.Дедов, 1998). Отмечается резкое увеличение заболеваемости болезнями щитовидной железы, прежде всего, на территориях, подвергшихся загрязнению радиоактивными веществами в результате аварии на Чернобыльской АЭС, а также на территориях с неудовлетворительным состоянием профилактики йод-дефицитных состояний (В.А.Мншашн, 1994). Обращает внимание значительное повышение удельного веса аутоиммунного тиронднта среди других форм тнроидной патологии, которые, в свою очередь, также сопровождаются и осложняются аутоиммунными реакциями, как правило, на территориях с высоким уровнем техногенного загрязнения (И.В.Теретенко, 1996).
На современном этапе становится очевидным, что бактериальные, вирусные н паразитарные антигены, имеющие перекрестно-реагирующие детерминанты с антигенами тканей и органов человека, в определенных условиях инициируют и поддерживают аутоиммунные реакции. Концепция о том, что молекулярная мимикрия возбуди-
телей пнфекипоиных заболеваний и даже нормальной микрофлоры под ткан» хозяина может составлять первичную основу в развитии аутоиммунных реакций, продолжает доминировать над многими гипотезами в этой области (S.Nagatacki, 1094, G.H.Ko, 1997, M.C.Honeyman, 2000).
В большом числе случаев аутоиммунная обмепно-эндокриннаи патология имеет сширомалыюе, полигландуляриое течение. В настоящее время нет единого мнения в отношении классификации аутоиммунных полнгландулярных синдромов. Достаточно отметить, что компонентами синдромов являются: первичная надночечннковаи недостаточность, аутоиммунный тироидит, диффузный токсический зоб, сахарный диабет I типа, гнгшпаротироз, первичный гипогоиадизм, пернициознан анемия и другие заболевания.
Многообразие и нсснецифичность клинических проявлений большей части аутоиммунной обменно-эндокрииной патологии служит причиной того, что верификация диагноза возможна только на основе лабораторно-инструментальных методов. Особенно важна своевременная диагностика на ранних этапах формирования заболевании, когда еще высока возможность эффективного использования средств вторичной профилактики.
Анализ данных, полученных при изучении аутоиммунных заболеваний эндокринной системы, в том числе н полнгландулярных синдромов, свидетельствует о значительной вариации показателен гуморального аутонммунитеча. Прежде всею это касается активности органоспецифнческих аутоаитнтел, которые рассматриваются как маркеры при данной патологии (И.В. Свирнденко, И.В. Крюкова, Ю.М. Кеда, 1998, 1'. Obermagerstraub, M.F. Manns, 1998, De Carmo Silvar, 2000). Широкое распространение получили днагностнкумы на основе антигенов щитовидной железы, индекс информативности которых, по оценкам отдельных авторов, составляет 90-95% (Н.С. Кузьмина, 2000, Д.С. Рафибсков, А.П. Калинин, 1996). В настоящее время большое значение приобретает определение антител в диагностике других эндокринных заболевании аутоиммунного происхождения. Так, основным критерием для начала проведения мероприятий, направленных на профилактику сахарного диабета 1 типа, в ряде с і ран является определение аутоаитнтел к антигенам поджелудочной железы (R.J.Keller, 1993, C.F. Verge, 1996).
Одним из современных высокочувствительных методов определения антител является иммуноферментный анализ (ИФА). Использование в едином иммунофер-ментном тесте панели различных препаратов органоспецифнческих антигенов могло бы позволить проводить одновременное сравнение и изучать частоту вовлечения органов эндокринной системы в аутоиммунные процессы, оценивать активность, раенро-
странеішості, и преимущественное направление аутоиммунною процесса при некоторых заболеваниях и состояниях органов эндокринной системы. Учитывая высокую чувствительность иммунной и эндокринной систем к действию факторов окружающей среды, использование такой тест -системы позволило бы проводить прескршптпшую диагностику и определять «неблагополучие» в нммуно-нейроэидокрннпон системе, формировать і руины риска по развитию заболеваний органов эндокринной iticumi.i с последующим мониторингом.
Цель работы- создание комплексной скринппговой нммуноферментнон тест-системы для определения активности антител к органоспецнфнчеекпм антигенам органов эндокринной системы.
Задачи исследования:
-
Выделить антигенные препараты из тканей гипофиза, щитовидной железы, поджелудочной железы, надпочечника, яичника и желудка.
-
11а основании результатов физико-химического и пммупохнмического анализа обосновать применение отдельных антигенных препаратов гормонпроду-цпрующих органов для создания единого теста на их основе.
-
Разработать скрниииговую пммуноферментную тест-систему на основе выделенных антигенных препаратов.
-
Определить с помощью разработанного теста активность IgG антител в сыворотках кровн здоровых и больных различными заболеваниями людей.
Научная новизна:
Впервые выделены но единой методике и охарактеризованы но химическим, физико-химическим и иммунохимическим параметрам антигенные препараты ні гор-монпродуцирующих органов: гипофиза, щитовидной железы, желудка (слизистого и мышечного слоев), поджелудочной железы, надпочечника и яичника.
С помощью методов нммупохнмического анализа (преципитация в геле, имму-поэлсктрофорез, торможение ИФА, иммуноблопшг) установлено наличие в мнкросо-мальиых фракциях перечисленных органов и в составе цитоп.тазматической фракции щитовидной железы органоспецифичеекпх антигенов.
Впервые на основе семи микросомальных и одной цитоплазматической антигенных фракций разработан комплексный унифицированный скрииннговый нммунофер-ментнын тест для определения IgG антител к антигенам гормонпродунпрующих opia-нов, обладающий высокой специфичностью и воспроизводимостью результатов.
Разработан метод отбора из состава субклеточных фракций диагностически значимых антигенов, сочетающий в себе гель-фильтрацию и ИФА.
С помощью разработанного теста впервые оценено состояние гуморального ау-тонммуннтега у доноров кропи гг. Москвы и Тулы, пожилых людей, больных различными аутоиммунными заболеваниями. Установлена высокая частота аутоиммунных расстройств в отношении антигенов щитовидной железы у доноров г. Тулы, а в отношении антигенов яичника - у доноров крови г. Москвы. Установлена более частая активность lgG антител к антигенам щитовидной железы в сыворотках лиц пожилого возраста. Выявлена высокая встречаемость полпгландуляриых проявлений у больных с заболеваниями: диффузный токсический зоб (ДТЗ), аутоиммунный тнронднт (АИТ), сахарный диабет 1 тина (СД-1) и диффузными болезнями соединительной і кани (ДБСТ). С помощью иммуноблотинга выявлены перекрестные реакции между антигенными препаратами щитовидной железы и различными антигенами Y.enterocolitica.
Практическая значимость
Разработана комплексная нммуноферментная тест система для одновременного определения lgG антител в сыворотках крови к 8 антигенным препаратам гормоииро-дуцирующих органов.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Мнкросомальные фракции гипофиза, щитовидной железы, слизистого и мышечного слоев желудка, поджелудочной железы, надпочечника и яичника и цитоплазматнчс-ской фракции щитовидной железы содержат органоспецифнческне антигены п могут быть использованы для создания на их основе иммуноферменгной ieci-снстсмы.
-
Разработана унифицированная нммуноферментная тест система, обладающая высокой специфичностью, надежностью. Основной ее особенностью является одновременное выявление антител к антигенным препаратам шести гормоннродуци-руюших органов (гипофиз, щитовидная железа, желудок, поджелудочная железа, надпочечник н яичник).
-
Активность lgG антител сывороток к антигенам отдельных гормонпродуцирующих органов может зависеть от экологических и эндемических условий проживания людей в геохимических провинциях. Высокая активность lgG антител сывороток больных аутоиммунными заболеваниями в отношении целого ряда органоспецнфн-ческих антигенов свидетельствует о частом вовлечении в аутоиммунный процесе одновременно нескольких органов эндокринной системы.
4. Субклеточные фракции щитовидной железы и антигенные препараты
i'.enterocolilica имеют в своем составе перекрестно-реагирующие антигены.
Апробация диссертации. Материалы диссертационной работы доложены: на двух
конференциях молодых ученых НИИВС им И.И.Мечникова РАМН (февраль 2000, марі
2001); Международном конгрессе «Современные методы диагностики и лечения аллср-
пит, астмы и иммунодефнцнтов», Тбилиси, Грузии, 23-26 сентября 1999г.; VI Международном конгрессе «Успехи в иммунологии и аллергологии на пороге XXI пека», )іі.г.п, Пірш.іь, 3-6 мая 2000г.; III съезде иммунологов и аллергологов СИГ, Сочи, России, 16-20 сентября 2000г.; VII Международном конгрессе «Аллергия, иммунология и глобальная сеть: ігігляд в новое тысячелетие», Нью-Йорк, США, 14-17 апреля 2001г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ, из них 4 к центральной печати.
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 130 страницах компьютерного текста, иллюстрированы 3 схемами, 10 таблицами и 14 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы по материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, который включает 196 источников из них 63 - на русском языке.
![Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе авидин-биотинового взаимодействия для определения антител (дифтерийных, столбнячных, коклюшных, анти-HBs) [Электронный ресурс]](/i/i/4438/210884.png "Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе авидин-биотинового взаимодействия для определения антител (дифтерийных, столбнячных, коклюшных, анти-HBs) [Электронный ресурс] Вязникова Татьяна Владимировна")
