Введение к работе
-3-
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В наши дни стало обычной практикой проведение миллионов анализов с использованием радиоиммунологического анализа /РИА/, предложенного Ялоу и Берсоном в 1959 году. Дагашй метод анализа наряду с достоинствами / универсальностью, чувствительностью, избирательностью и специфичностью / обладает рядом недостатков. К ним относятся : I/сравнительно короткий тгертод полураспада изотопов, испускающих кванта, 2/ опасность для здоровья, которую представляет введение изотопных меток, подготовка и выполнение и проведение анализов, —3/-повреждение-структуры меченых молекул, вызываемое излучением, 4/ необходимость разделения меченых и немеченых антигенов и 5/ обусловленная этим трудность автоматизации РИА.
двенадцать лет спустя в 1971 году Ван Веемая и Щуурс ввели в употребление другой тип чувствительных меток - ферменты. Явные преимущества нового метода, получившего название иммуноферментный анализ /ИФА/, такие как : простота выполнения, доступность и стабильность реагентов, экспрессность и возможность автоматизации для -проведения массовых анализов - обеспечили ему прочное положение в клинической биохимии, при диагностике заболеваний растений и животных, в научных исследованиях.
Первостепенное значение имеет внедрение методов ИФА для целей здравоохранения. В клинической и экспериментальной эндокринологии большое вшманио уделяется оценке функционального состояния ситовидной нелозы. Одним из паиболее информативных критериев диагностики дисфункции щитовидной келезы является количественное определенно уровней тироксипа / Т4 / и трииодтиронина / ТЗ / в сиворотко крови человека. Эти, гормоны представляют собой йодсодеркашле аминокислоты, производило тирозина. Широкое использование определения тиреоидных гор.тапов в медицинской практико требует разработки простых и падекшх аналитических методик. В последнее годы такую возможность предоставил ИФА. Необходимо создать методы иммунофермептного апализа как для детекции отдельпых горюнов, так и для одновременного определения нескольких гормонов в одной пробо, причем опроделйіше различных
-4-тиреоидных гормонов необходимо проводить различными методами иммуноферментного анализа в зависимости от природы тиреоидного гормона / конкурентный метод ИФА для тироксина, трииодтиронина и их сеоОодных фракций, сэндвич метод ИФА для белковых тиреоидных гормонов, непрямой метод ИФА для измерения уровней антител против тироглоОулина /.
ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. В нашей стране в настоящее время уровень ТЗ определяют лишь в крупных медицинских центрах методом РИА. Целью данной работы являлась разработка безопасного, высокочувствительного- метода на основе- твердофазного иммуноферментного анализа для трииодтиронина с использованием моноклональшх антител, способного заменить РИА.
В- задачи работы входило получение гибридом, ігродуцкр-двдпх моноклоналыше антитела к трииодтирошшу, наработка, выделение и подробная характеристика этих антител, а также создание на основе моноклоналышх антител системы твердофазного иммунсфермєктного анализа для определения ТЗ в научных исследованиях и клинической практике.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. В данной работе, впервые в нашей стране были получены гибридомы, продуцирующие моноклоналыше антитела к трииодтирошшу человека, пригодные в качестве универсальных агентов' для изучения функций щитовидной келезы. Моноклоналыше антитела прошли испытания в НПО "Биотехнология" и получен акт о внедрении их в производство. Полученные моноклоналыше антитела обладают высокой аффинностью, что дает возможность для создания икмуносорбентов для выделения ТЗ.
Впервые в нашей стране ,была сконструирована чувствительная кммуноферментная тест-система на основе моноклоналышх антител для определения уровня ,ТЗ в сыворотке крови человека в субнанограммовом диапазоне концентраций. Данная тест-система прошла испытания в МП "Иммунотех" и' готова к массовому производству. Получен акт с положительным заключением о внедрешм тест-системы в производство.
ПОЛОНКНИЯ, ВШОСИШЕ НА ЗАЩИТУ: I.Способ получения коныогатов
гормоп-белок для иммунизации кявотных и тестирования антисывороток. 2.Способ получения гибридом, продуцирующих копоклональпыэ аптитела к ТЗ, не давдие перекрестной реакции с тироксином. 3.Разработка оптимальных условий для препаративной наработки моноклональных антител к ТЗ. 4.Выделение и характеристика моноклональных антител к трийодтиронину. 5.Метод количественного определения общего уровня ТЗ в сыворотке крови человека с ш»..оцья кммуноформентной одностадийной тост-системы на основе моноклональных антител.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Диссертация была апробирована на заседании -кафедры - клеточной.. физиологии и иммунологии МГУ им. Н.В.Ломоносова и на меклабораторном семинаре Филиала Института биоорганической химии им. М.Н.Шемякина.
ПУБЛИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИИ. По материалам диссертации опубликовано 5 печатных работ и получены акты о внедрении моноклональных антител к трийодтиронину в производство, а такхз о внедрении тест-системы на основе данных моноклональных антител в производство.
СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ, диссертационная работа состоит из введения, обзора . литературы, экспериментальной части, результатов и их оЗсуздения, выводов и списка литературы, включающего 99 работ. Работа изложена на 104 страницах, содержит 20 рисунков п 4 таблицы.
![Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе авидин-биотинового взаимодействия для определения антител (дифтерийных, столбнячных, коклюшных, анти-HBs) [Электронный ресурс]](/i/i/4438/210884.png "Конструирование иммуноферментных тест-систем на основе авидин-биотинового взаимодействия для определения антител (дифтерийных, столбнячных, коклюшных, анти-HBs) [Электронный ресурс] Вязникова Татьяна Владимировна")
