Введение к работе
Актуальность темы. Неходжкинские злокачественные лимфомы (НХЗЛ) - это гетерогенная группа злокачественных лимфопролиферативных опухолей, различающихся по биологическим свойствам, морфологическому строению, клиническим проявлениям, ответу на терапию и прогнозу В России они составляют 2,6 % всех злокачественных новообразований В последние годы заболеваемость НХЗЛ имеет неизменную тенденцию к росту [Поддубная И В , 2001, 2005, Jemal А , 2006] Несмотря на улучшение результатов терапии, связанных с применением высокодознои программной полихимиотерапии, смертность от НХЗЛ увеличивается на 2 % в год Это определяет необходимость дальнейшего изучения механизмов злокачественной трансформации лимфоидных клеток и опухолевой прогрессии [Савченко В Г , 2006, Воробьев А И, 2002]
В настоящее время не вызывает сомнений, что процесс онкогенеза заключается в патологических изменениях вначале на молекулярном, а затем на клеточном уровне [Бочков Н П , 2002], а предрасположенность к злокачественным новообразованиям и опухолевая прогрессия могут модифицироваться аллельными полиморфизмами генов [Thiagalmgam S А, 2006, Имя-нитовЕ Н,2007]
В последние годы идентифицированы десятки полиморфных генов-кандидатов, которые могут принимать участие в формировании онкологического риска Достаточно широко изучена роль полиморфных локусов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4экзона и G—>А 6 интрона гена р53 [Zhang Z W, 2003, WuX, 2002], Arg399Gln гена XRCC1 [CasseC, 2003, Gao W M, 2003, Hong Y С , 2005] и del32bp гена CCR5 [Чердынцева H В , 2007, Manes S , 1999, Murphy P M , 2001] при солидных новообразованиях Данные гены играют ключевую роль в таких процессах, как контроль клеточного цикла и запуск программированной клеточной смерти, репарация ДНК и хемотаксис, а их полиморфизмы могут изменять свойства кодируемых белков, вызывать нестабильность генома, что в ряде случаев способствует предрасположенности носителей этих генов к развитию опухолей различной локализации Вместе с тем, роль данных полиморфизмов в патогенезе гемобластозов остается неизученной
Ряд авторов указывают на то, что одни и те же аллели полиморфных локусов генов р53, XRCC1 и CCR5 могут иметь как проонкогенный, так и защитный эффект, в зависимости от этнической принадлежности популяции [KoushikA, 2004], типа ткани, из которой развивается опухоль [TadaM, 2001] и воздействия вредных факторов внешней среды [Murata М, 1998] По этой причине данные литературы по вопросу о роли полиморфных вариантов ДНК в онкологическом риске и опухолевой прогрессии часто являются противоречивыми, а результаты отдельных работ обладают плохой воспроизводимостью [Имянитов Е Н , 2007]
Все это создает невозможность механического переноса результатов, полученных зарубежными авторами на солидных опухолях, на опухоли крови
Вместе с тем, изучение роли полиморфных вариантов генов репарации ДНК XRCC1 и запуска программированной смерти р53 в патогенезе гемо-
бластозов может быть важным, так как грубые изменения в них при НХЗЛ встречаются крайне редко [Duell Е J , 2001, Marmtchev А, 2000], и снижение их функциональной активности может быть связано с генетическими полиморфизмами Полиморфизм гена хемокинового рецептора CCR5, оказывающий влияние на плотность рецептора на поверхности клеточной мембраны, может изменять чувствительность лимфомных клеток к провоспалительным хемокинам и, таким образом, модифицировать метастатический потенциал опухоли
Учитывая вышеизложенное, представляется важным и перспективным исследование врожденных генетических полиморфизмов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G—»А 6 интрона гена р53, Arg399Gln гена XRCC1 и del32bp гена CCR5 у больных неходжкинскими злокачественными лимфо-мами с целью установления их роли в предрасположенности к развитию заболевания и особенностях его клинического течения
Цель работы: изучить полиморфизмы антионкогена р53, гена репарации ДНК XRCC1 и хемокинового рецептора CCR5 у больных неходжкинскими злокачественными лимфомами, и установить их связь с риском развития заболевания и особенностями клинического течения
Задачи исследования:
-
Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфизмов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G—>А 6 интрона гена р53, Arg399Gln гена XRCC1 и del32bp гена CCR5 у больных неходжкинскими злокачественными лимфомами
-
Сравнить распределение частот аллелей и генотипов данных полиморфных локусов при индолентных и агрессивных лимфомах
-
Определить связь генотипов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G—>А 6 интрона гена р53, Arg399Gln гена XRCC1 и del32bp гена CCR5 с особенностями клинического течения заболевания
-
Выявить ассоциацию изменений в исследуемых полиморфных локусах генов р53, XRCC1 и CCR5 с риском развития заболевания
Научная новизна. Впервые исследована распространенность полиморфизмов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G—>А 6 интрона гена р53, Arg399Gln гена XRCC1 и del32bp гена CCR5 у больных неходжкинскими злокачественными лимфомами
Впервые показана генетическая неоднородность пациентов с НХЗЛ по данным полиморфизмам, свидетельствующая о повышении частот минорных аллелей 4 экзона и сочетанных нарушений в трех исследованных локусах антионкогена р53 при агрессивных вариантах заболевания, а также об увеличении доли пациентов с минорными аллелями интронных и экзонного полиморфизмов р53 и в гене XRCC1 при диффузной В-крупноклеточной лимфоме (ДВККЛ)
Получены данные о повышении частот минорных аллелей генов р53 и XRCC1, а также генотипов, их содержащих, у больных НХЗЛ высокой степени злокачественности по сравнению с популяционным контролем г Новосибирска и НСО Результаты свидетельствуют о различной степени предрасположенности индивидуумов популяции к развитию данных заболеваний
Выявлено значительное повышение риска развития агрессивных вариантов лимфом у носителей Gln-аллеля гена XRCC1, а также ДВККЛ у носителей Gln-аллеля гена XRCC1, Рго-аллеля 4 экзона и m-аллеля 3 интрона/>55 в сравнении с популяционным контролем
На примере НХЗЛ подтверждена суммация эффекта Gln-аллеля XRCC1, заключающаяся в увеличении риска развития заболевания у Gln/Gln гомозигот относительно Arg/Arg лиц в большей степени, чем Arg/Gln гетерозигот
Доказано, что в реализацию опухолевой прогрессии НХЗЛ CCR5 может быть вовлечен как рецептор провоспалительных хемокинов Уменьшение уровня экспрессии рецептора на мембране клеток у носителей del-аллеля CCR5 может выступать благоприятным фактором, ограничивающим распространение опухоли по организму
У пациентов с НХЗЛ показано неблагоприятное влияние на прогноз, согласно международному прогностическому индексу ІРІ, сочетанных нарушений в 72 кодо не 4 экзона гена р53 и 399 кодоне гена XRCC1, а также по трем полиморфным локусам р53
Практическая значимость. Результаты, полученные при исследовании полиморфизмов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G—>А 6 интрона гена р53, Arg399Gln гена XRCC1 и del32bp гена CCR5 у больных неходжкин-скими злокачественными лимфомами вносят вклад в современные представления о роли генетических изменений в патогенезе злокачественных заболеваний крови
Данные о наличии минорных аллелей генов р53 и XRCC1, особенно при их сочетанием обнаружении, могут быть использованы в качестве дополнительных критериев при формировании групп повышенного риска по НХЗЛ, в частности, у лиц, имеющих длительный контакт с экзогенными канцерогенами, а также при оценке риска раннего прогрессирования заболевания
Учитывая, что del32bp гена CCR5 может вносить существенный вклад в индивидуальную вариабельность метастазирования лимфомных клеток, исследование его генотипа у больных НХЗЛ может дать ценную информацию о течении опухолевого процесса
Обнаружена связь сочетания минорных аллелей трех исследуемых локу-сов р53, а также Pro-варианта 4 экзона р53 с Gin-вариантом гена XRCC1 с неблагоприятным прогнозом НХЗЛ, что может служить дополнительным критерием при планировании курсов программной полихимиотерапии
Положения, выносимые на защиту:
1 Частота встречаемости генетических полиморфизмов р53 и
XRCC1 различна при индолентных и агрессивных лимфомах при агрессив
ных вариантах заболевания отмечается снижение частоты диких аллелей и
нормальных гомозиготных генотипов 3 интрона и 4 экзона антионкогена
р53, увеличение минорного Gln-аллеля и гомозиготного Gln/Gln генотипа
XRCC1, а также большая частота сочетанных нарушений по данным локусам
в сравнении с больными индолентными лимфомами и здоровой популяцией
2 Дикий тип гена хемокинового рецептора CCR5 коррелирует с большей
распространенностью опухолевого процесса при НХЗЛ, сочетание минор-
ных аллельных вариантов полиморфных локусов р53 и XRCC1 достоверно чаще регистрируется у больных лимфомами с неблагоприятным прогнозом
3 Риск развития агрессивных лимфом у лиц, имеющих изменения в 399 кодоне гена XRCC1 возрастает от Arg/Gln гетерозиготных к Gln/Gln гомозиготным лицам
Апробация материалов диссертации. Материалы исследования были представлены на конференциях студентов и молодых ученых «Авиценна» (Новосибирск, 2004, 2005, 2006, 2007), на городских научно-практических конференциях врачей «Актуальные вопросы современной медицины» (Новосибирск, 2004, 2005, 2006), на юбилейной конференции, посвященной 40-летию гематологической службы г Новосибирска (2004), на I съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 2005), на X Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2006), на международной конференции «Фундаментальные науки - биотехнологии и медицине» (Новосибирск, 2006), на городской научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы профилактической медицины» (Новосибирск, 2007), на 3-ей Российской конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения 2007» (С-Петербург, 2007), на межрегиональной научно-практической конференции «Молекулярная генетика онкологических заболеваний» (Новосибирск, 2007)
Внедрение результатов исследования.
Полученные в работе результаты внедрены в практику работы гематологического отделения МУЗ ГКБ № 2 г Новосибирска Материалы диссертации получили отражение в учебном процессе на кафедре гематологии и трансфузиологии лечебного факультета и кафедре госпитальной терапии с курсом профессиональных болезней педиатрического факультета
Работа выполнена на кафедре гематологии и трансфузиологии лечебного факультета Новосибирского государственного медицинского университета (зав кафедрой - проф Т И Поспелова), на базе Городского гематологического центра МУЗ ГКБ № 2 (главный врач - проф Л А Шпагина, зав отделением - к м н И Н Нечунаева), отдельные фрагменты работы выполнялись на базе лаборатории рекомбинантных клеточных технологий ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» (заведующая лабораторией - проф В А Белявская)
Публикации: по теме диссертации опубликовано 30 работ, в том числе 10 в центральной печати и 2 статьи
Объем и структура диссертации.
Материал диссертации изложен на 178 страницах машинописного текста и содержит разделы введение, обзор литературы, главу «Материал и методы», 3 главы результатов собственных исследований, обсуждение результатов, 4 клинических примера, заключение, выводы и практические рекомендации Работа иллюстрирована 32 таблицами, 32 рисунками Указатель литературы состоит из 320 источников, из них 45 отечественных и 275 зарубежных авторов
Весь материал диссертации собран, обработан и проанализирован лично автором
