Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Современные представления о неходжкинских злокачественных лим фомах 10
1.2. Генетические основы опухолевой прогрессии 15
1.3. Рольр53 в онкогенезе 18
1.4. Гены семейства XRCC 30
1.5. Роль хемокинов и хемокиновых рецепторов при опухолях 37
Глава 2. Материал и методы исследования 48
2.1. Общая характеристика группы обследованных больных 48
2.2. Методы клинического, лабораторного и инструментального исследования - 54
2.3. Специальные методы исследования
2.3.1. Выделение ДНК из лейкоцитов цельной венозной крови больных лим-фомами 63
2.3.2. Оценка полиморфизмов с помощью аллель-специфичной ГЩР и ГШР-ПДРФ-анализа 64
2.4. Статистические методы исследования, 72
Результаты собственного исследования 74
Глава 3. Частота полиморфизмов генов р53, ccr5 и xrcc1 у больных неходжкинскими злокачественными лимфомами; 74
Глава 4. Полиморфизмы генов р53, ccr5 и xrcc1 у больных индолентными и агрессивными лимфомами 84
Глава 5. Особенности клинического течения неходжкинских злокачественных лимфом у пациентов с полиморфизмами генов Р53, CCR5 HXRCCL 101
Глава 6. Обсуждение результатов собственного
Исследования 122
Заключение 142
Выводы 145
Практические рекомендации 146
Список литературы
- Генетические основы опухолевой прогрессии
- Методы клинического, лабораторного и инструментального исследования
- Оценка полиморфизмов с помощью аллель-специфичной ГЩР и ГШР-ПДРФ-анализа
- Полиморфизмы генов р53, ccr5 и xrcc1 у больных индолентными и агрессивными лимфомами
Генетические основы опухолевой прогрессии
Мутационный процесс - универсальная характеристика всех клеток организма. Все люди в той или иной степени подвергаются неблагоприятным влияниям окружающей среды или эндогенных мутагенов, однако онкологические заболевания развиваются далеко не у всех. Значит, человеческая популяция исходно неоднородна по своей восприимчивости к этим влияниям.
По мнению Tiagalingami et. al., молекулярной основой поведения опухолевых клеток, определяющей свойства- и скорость прогрессии, могут выступать не только приобретенные, но и врожденные генетические и эпигенетические нарушения. Следует отметить, что врожденные геномные аномалии, в отличие от возникающих de novo изменений, ассоциированных с ма-лигнизацией, обнаруживаются во всех клетках пациента. Эти аномалии, создавая несбалансированность генома, предрасполагают клетки к появлению новых изменений и повышают риск возникновения опухолей [303].
Известно, что герминативные мутации или хромосомные перестройки являются достаточно грубыми изменениями в геноме и быстро из популяции элиминируются, поэтому частота их обнаружения не превышает 1% [40]. Кроме них в онкогенезе могут принимать участие врожденные структурные генетические изменения другого рода - полиморфизмы генов. Согласно принятому определению, SNPs (single nucleotide polymorphisms) - это однонуклеотидные позиции в геномной ДНК, для которых в популяции имеются различные варианты последовательностей (алле-ли) причём редкий; аллель встречается с частотой не менее: 1 %. Все полиморфизмы являются «вариантом нормы», передаются в поколениях [12].
Эти изменения5 могут быть качественными, если они обусловлены заменой или потерей нуклеотидов; либо количественными если в определенном локусе варьирует число нуклеотидных повторов; различной протяжённости. И-те, и другие варианты генетического полиморфизма встречаются как. в смысловых, так и!вшнтронных последовательностях молекулы; ДНК.
Предполагают, что; различия по одному основанию; между определёнными: отрезкамигеномов-лежат воснове наследственного предрасположения к мультифакториальным болезням втом числе к неоплазиям[12].
В; последнее время расширяются исследования, связанные с поиском и характеристикой полиморфных вариантовгенов, в той или иной степени вовлеченных в канцерогенез. При определенных условиях (экзо- и эндогенных влияниях) генетические полиморфизмы могут предрасполагать или препятствовать проявлению различных; заболеваний; в том числе онкологических сед Одной из возможных причин вариабельности механизмов опухолевой прогрессии является наличие конституционального: (врожденного) генетического? полиморфизмам [23]!: собо? важными являются; полиморфизмы генов-регуляторов . апоптоза, репарации ДНК и отвечающих за процессы метаста-зирования неоплазированных клеток. КЗ; Рольр53 в онкогенезе
Ген р53 является одним из наиболее изученных представителей группы антионкогенов, которым в настоящее время отводится важная роль в индукции и прогрессии опухолевого роста [5, 16, 106]. Белок р53 считают ключевым «диспетчером» апоптоза, на котором сходятся; многие апоптогенные сигналы, и от которого исходят многочисленные команды к «генам-исполнителям» программированной гибели клетки [16, 41, 24]. В частности, апоптозу, помимо прочих, подвергаются клетки, в которых произошла опухолевая трансформация [24, 45]. В большинстве развивающихся опухолей функции его нарушены [16, 123, 238, 266, 274].
Поскольку путем апоптоза элиминируются потенциально злокачественные клетки, результатом- модификации гена р53 является значительное повышение вероятности развития злокачественных опухолей [16, 45]. Нарушение функции р53- в результате точечных мутаций, делеций, образования комплекса с другим клеточным регулятором или изменение внутриклеточной локализации приводит к утрате супрессивных свойств и стимулирует опухолевый процесс [16, 142, 201].
Ген р53 — один из наиболее часто мутирующих при опухолях человека [16, 41, 63, 120, 121, 204, 259, 262]. Описаны врожденные мутации геяар53 (всего около 133) [162], которые создают молекулярную основу редкого семейного заболевания, характеризующегося развитием множественных опухолей различной локализации - синдромаЫ-Ргашпет[Г51, 152, 190].
При гемобластозах чаще наблюдаются делеций; а не точечные мутации, как при солидных опухолях [106]. Частые изменения как в локусе 17р13 (зона локализации гена), так и непосредственно в структуре р53 фиксируются при лимфоме Беркитта [16, 166], реже при хроническом лимфолейкозе [78, 149].
При НХЗЛ - частота мутаций р53 достигает 12,5% [39]. При Т-клеточных опухолях кожи аномалии р53 встречаются крайне редко [195,62]. Изучение фолликулярных лимфом показало, что мутации р53 встречаются у 16% больных [79, 266], а при первичной В-клеточной лимфоме средостения мутации р53 выявляются с частотой 13% [198]. По данным исследований Gaidano G et. al., мутации р53 выявлялись только в опухолевой ткани MALT-лимфомы высокой степени градации [119]. Мутации р53 значительно чаще встречаются при СПИД-ассоциированных лимфомах: при лимфоме Беркитта и беркитто-подобных лимфомах - в 50%, при диффузной В-крупноклеточной - в 40% [138].
Таким образом, если принято считать, что от 50% до 80% солидных опухолей содержат мутантный р53, гемобластозы отличаются от них тем, что частота мутирования р53 снижена. Однако трудно себе представить, что функциональная активность гена р53 у большинства больных НХЗЛ остается неизменной. Вероятно, существуют другие, менее грубые механизмы изменения его функционирования. Таковыми могут быть генетические полиморфизмы.
Методы клинического, лабораторного и инструментального исследования
Аллель 32del".гена GGR5 — молодой в эволюционном масштабе. Предполагается, что он возник всего лишь около 1000 лет назад, но уже достиг относительно высоких частот в Европе. Эти данные указывают, что мутация подвергалась интенсивному положительному отбору [287].
Ееографическое. распространение выгодного адаптивного аллеля- фундаментально для эволюционных процессов Иі часто является пространственным» отражением:динамики коэволюции: патогенов и их хозяев. CCR5 del32 мутация в настоящее времягиграет важную роль в Ш резистентности [207]. Поскольку ЄЄК5 является основным корецептором для входа: в клетку HIV-1 типа эта?делеция?связана с нечувствительностью людей;к ШУ-1: инфекции в гомозиготном-состоянии по данному полиморфизму и замедленной прогрессией заболевание до стадии СПИДа в гетерозиготном состоянии [33, 147], а также уменьшенной тяжестью течения ревматоидного артрита" [292], и. множественного склероза [31, 94], хорошей приживляемостью почечного, сердечного трансплантата [90; 130]- и низким: риском, развития, инфаркта миокарда [148].
Вирус:HIV-! не мог повлиять наэту частоту, так:как,воздействует еще; не столь долго;.Возможно; такими?отборочными факторами была бубонная чума: или оспа в период средневековья; Эта гипотеза: была, основана на нескольких фактах,. включаяїтот, что этот аллель отсутствует вне европейской популяциш[287]1
Аллель, 32deK гена; GCR5 существует в значимых частотах только в Европе, а в пределах Европы частота его,выше на севере [31, 35, 140, 193, 207]. 3 2del аллель гена CCR5 отсутствует у Азиатов и Африканцев [150,294].
Группа Российских ученых во главе с О. И. Балановским проанализировали глобальную базу по распространенности del32 аллеля в 300 поселениях земного шара. Исследователи пришли к выводам; что 1) данная мутация возникла и распространилась-впоселениях Урала; 2) частота ее увеличивается в северо-восточной Европе в результате генетического отбора и/или генетического дрейфа; 3) вторичное распространение связано с перемещением северных народов,Европы по всему земному шару [124, 177].
Делеция 32 пар оснований в кодирующей области гена CCR5 приводит к изменению структуры соответствующего белка и синтезу функционально неактивного рецептора. Гомозиготы по этому полиморфизму не имеют CCR5 на поверхности клетки, а уровень активного рецептора у гетерозигот значительно уменьшен. И те и другие индивидуумы имеют здоровый фенотип [147].
Известно; что CCR5 - трансмембранный рецептор поверхности клеток. Benkirane et. al. изучили эффект 32del гена CCR5 и выяснили, что 1) CCR5 после трансляции фосфорилируется в цитоплазматической области в ответ на стимуляцию; 2) GCR5 функционирует в виде CCR5/CGR5 или 32del/CCR5 мультимеров; 3) CCR5 и 32del CCR5 различаются по локализации (первый -на поверхности-клетки, в то время как.последний задерживается в эндоплаз-матическом ретикулуме); 4) 32del CCR5 снижает поверхностную экспрессию CCR5. Дефектные мутанты мультимеризуются с диким типомг белка CCR5 и через.этот гетерокомплекс задерживают его в клетке [173]. Разумно предположить, что, чем больше рецепторов на поверхности клетки; тем «громче» сигнал, посланный клетке, и тем сильнее ее ответ [193]-.
Эти данные были экспериментально подтверждены Suzuki et. al.. Они идентифицировали, в: лимфоцитах человека два разных варианта белка- 62 и 42 Ша, причем эти формы отличались по локализации в клетке: Так, 62 kDa CCR5, главным образом, обнаруживался на мембране, а укороченный 42 kDa вариант CCR5 - исключительно в цитоплазме клеток [103].
Хотя уровень экспрессии CCR5 на поверхности клеток вне инфекционных осложнений весьма гетерогенный и может отличаться более, чем в 20 раз между индивидуумами, было показано, что 32de\/CCR5 Т-клетки имели заметно уменьшенную его экспрессию по сравнению с CCR5/CCR5 клетками [193]. Shieh et. al. методом- проточной цитометрии показали снижение экспрессии CCR5 на поверхности лимфоцитов и моноцитов периферической крови у лиц, несущих CCR5 32с1е1-аллель [167].
В то же время Odum et. al. показали, что способность продуцировать цитокиновые факторы ТЫ, полученные от гомозиготного по CCR5 32del индивидуума, а также их способность к дифференцировке не отличаются от клеток человека с нормальной структурой CCR5 [289].
Полиморфизм 32del гена CCR5 при онкозаболеваниях изучен мало. Удалось найти лишь разрозненные указания на его участие в опухолевой прогресии. Так, в исследовании Manes et. al. авторы приводят данные, полученные на клинических примерах первичного рака молочной железы, которые свидетельствуют, что безрецидивная выживаемость короче у лиц, несущих 32del CCR5 аллель, в сравнении-с пациентами с CCR5 дикого типа, но только-для тех, где в опухоли определялся дикий тип р53. Эти результаты дают возможность предположить, что CCR5 влияет на прогрессию.рака молочной железы по р53-зависимым механизмам. Авторы,связывают это с нарушением передачи апоптоз-индуцирующего сигнала трансформированными клетками [95]. В то же время.известно, что более эффективным индуктором апоптоза в ответ на сигналы, воспринимаемые CCR5, является Arg-вариантр53 [95].
Напротив, есть сведения, что 32del CCR5 связан с более благоприятным прогнозом при раке молочной железьь И меньшей склонностью опухоли- к прогрессии. Это связано-с тем, что-данный рецептор может вовлекаться, в процессы метастазирования под действием провоспатительных цитокинов МІР11а, МІР-lp и RANTES. В этой связи уменьшение уровня экспрессии CCR5 на мембранах опухолевых клеток, у носителей делеционного аллеля может выступать благоприятным фактором, ограничивающим прогрессию [23].
В-клеточные лимфомы представляют собой одну из основных причин смертности у HIV-инфицированных лиц. Dean et. al. исследовали роль полиморфизма CCR5 в процессах лимфо-могенеза у больных СПИДом. Оказалось, что частота их меньше у лиц с полиморфизмом CCR5 гена. Крупными мультицентровыми исследованиями было показано, что изменения гена CCR5 не связаны с риском развития саркомы Капоши - другой частой злокачественной опухолью у данных пациентов. Оказывается, что RANTES - одна из лиганд CCR5 - является митогеном для В-клеток. Эти данные позволили авторам предположить, что у больных с del32 CCR5 меньшая частота возникновения В-НХЗЛ связана с уменьшенным или полным отсутствием ответа В-лимфоцитов на митогенный эффект RANTES [263]. Снижение частоты развития. НХЛ у больных СПИДом с 32del CCR5 показано и рядом других авторов [101, 153].
Резюме. Обобщая вышеизложенное, следует заключить, что исследование роли полиморфных вариантов ДНК в развитие и дальнейшей опухолевой прогре-сии злокачественных новообразований занимает важное место в современной науке и имеет большое значение для понимания патогенеза опухолевого процесса.
Корреляция» аллельных вариантов генов "регулятора апоптоза р53, репарации ДНК XRCC1 и хемокинового рецептора CCR5 с частотой развития не-оплазий, выживаемостью пациентов; эффективностью терапии, метастатическим потенциалом опухолей представляет большой интерес в плане использования данных показателейв качестве факторов для определения групп повышенного риска развития злокачественных новообразований и прогностических маркеров;
Поскольку генетическая конституция человека складывается из множества взаимодействующих полиморфных аллелей, каждый из которых в отдельности обладает лишь весьма умеренным эффектом, особый интерес представляет их совместное изучение. Данные литературы по этой теме в основном являются разрозненными, а результаты отдельных работ обладают плохой воспроизводимостью. Требуется оценка эффекта генетического полиморфизма с учетом расовой принадлежности больных.
Гемобластозы отличаются от солидных опухолей крайне редкой частотой мутационного статуса р53. Грубые изменения XRCC1 также событие редкое. Генетическими механизмами, модулирующими их функцию, могут быть олигонуклеотидные полиморфизмы. CCR5 является хемокиновым рецептором, экспрессируемым непосредственно гемопоэтическими клетками. Несмотря на это в литературе практически отсутствуют данные о роли полиморфных вариантов ДНК в патогенезе гемобластозов.
С учетом широкой распространенности НХЗЛ и увеличивающейся заболеваемости этим видом опухолей крови, большой интерес представляет исследование роли полиморфизмов р53, XRCC1 и CCR5 у больных неход-жкинскими злокачественными лимфомами.
Оценка полиморфизмов с помощью аллель-специфичной ГЩР и ГШР-ПДРФ-анализа
Генотип G/G у больных ДВМКЛ встречался в 18/22 (82%) случаев, а G/A или А/А только у 4/22 (18%) больных. Для пациентов ДВККЛ соответствующие показатели составили 7/7 (50%) каждый. Таким образом отмечено, что у пациентов с В-мелкоклеточной лимфомой гомозиготный дикий генотип встречался достоверно чаще, а G-содержащие - достоверно реже, чем в группе больных В-крупноклеточной лимфомой (р 0,05) и группе контроля (р 0,05)(табл.4.4.1.1).
Кроме того, при оценке ассоциации между определенными генотипами и риском развития заболевания нами выявлено, что у лиц, имеющих т-аллель 3 интрона гена р53, риск развития диффузной В-крупноклеточной лимфомы превышал среднепопуляционный в 2,6 раза [1,01;7,4], а у лиц, несущих Рго-аллель 4 экзона генар53 - в 3,7 раза [1,01; 12,2].
Следует отметить, что в группе больных ДВККЛ, в отличие от группы НХЗЛ в целом, в 2 раза реже одновременно регистрировались дикие гомозиготные генотипы по 3 и 6 интронам и всем исследуемым локусам/?53: 36% (р 0,05) и 21%о (р 0,01) соответственно. В 100% случаев ДВККЛ изменения dupl6bp 3 интрона (р 0,05) и G— А в 6 интроне сочетались с Pro-вариантом 4 экзона, что может свидетельствовать об отборе при данном варианте заболевания больных с сочетанными нарушениями в локусах теяар53.
Полиморфизм deI32bp гена хемокинового рецептора CCR5 у больных диффузной В-крупноклеточной и диффузной В-мелкоклеточной лимфомами Нами не выявлено достоверно значимых различий в частотах полиморфных аллелей и генотипов del32bp гена CCR5 в группах больных диффузными В-крупноклеточными и диффузными В-мелкоклеточными лимфомами между собой и популяционным контролем (табл.4.4.2.1).
Частота del-аллеля у больных ДВККЛ составила 3/28 (11%), а дикого -25/28 (89%) случаев. Гомозиготы и гетерозиготы распределялись 11/14 (78%) и 3/14 (22%), соответственно. В группе пациентов ДВМКЛ значения del- и w-аллелей составили 3/44 (7%), 41/44 (93%), a w/w и w/del генотипов 19/22 (86%) и 3/22 (14%).
Частота Gln-аллеля гена XRCC1 в группе пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой составила 68% (19/28) и была достоверно выше, чем в контрольной выборке (р 0,01) и группе больных диффузной В-мелкоклеточной лимфомой (р 0,05), где минорный аллель был выявлен лишь в 45%) (14/38) случаев. Частота Arg-аллеля у пациентов с ДВККЛ составила 32% (9/28), а у пациентов с ДВМКЛ - 55% (24/38) (р 0,05) (рис.4.4.3.1).
Кроме того, получены достоверные различия в частотах генотипов по данному полиморфизму. Среди пациентов с ДВККЛ Arg/Arg выявлен только в 7% (1/14) случаев, т.е. гомозиготный нормальный генотип в данной группе встречался в 5 раз реже, чем у больных ДВМКЛ - 32% (7/19) (р=0,056) или в контрольной выборке - 34% (60/180) (р 0,05). При этом в группе больных диффузной В-крупноклеточной лимфомой Gln/Gln гомозиготами являлись 43%) (6/14) пациентов, что в 3,5 раза превышало популяционные значения (р 0,01) и в 2 раза значения в группе ДВМКЛ - 22% (2/19) (р 0,05).
Гетерозиготами оказались 7/14 (50%) больных ДВККЛ и 10/19 (46%) больных ДВМКЛ (рис.4.7). Распределение аллелей и генотипов Arg399Gln гена XRCC1 у пациентов с ДВМКЛ в целом соответствовало популяционно-му.
Примечание: отмечены показатели, достигшие достоверного уровня значимости отличия р 0,01 между лимфомами ДВККЛ и контрольной группой; отмечены показатели, достигшие достоверного уровня значимости отличия р 0,05 между ДВККЛ и ДВМКЛ; отмечены показатели, достигшие достоверного уровня значимости отличия р 0,05 между лимфомами ДВККЛ и контрольной группой.
Таким образом, пациенты с различными морфологическими вариантами НХЗЛ, скорее всего, исходно являются генетически неоднородной группой. Нами выявлены различия как по полиморфизму 4 экзона, так и по полиморфизмам интронных последовательностей гена-регулятора апоптоза р53, а также Arg399GIn гена-регулятора репарации ДНК XRCC1, указываю 100 щие на большую частоту минорных аллелей и генотипов, их несущих, у пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой, в отличие от больных В-мелкоклеточными лимфомами и популяции г. Новосибирска.
Процессы опухолевой прогрессии направлены в сторону накопления злокачественными клетками все новых свойств, дающих им способность к несоблюдению дифференцировочных программ, автономному росту и бесконтрольному делению, а также распространению по организму [23]. Процессы миграции как нормальных лимфоидных клеток, так и зрелых лимфом-ных, определяются набором и степенью экспрессии на их поверхности хемо-киновых рецепторов, а также вырабатываемых в определенных лимфоидных органах лиганд [102]. По этой причине мелкоклеточные НХЗЛ, субстратом которых являются зрелые лимфоидные клетки, как правило протекают с выраженной спленомегалией и генерализованной лимфоаденопатией. Крупноклеточные элементы (незрелый субстрат) способность к метастазированию могут приобретать в процессе генетической изменчивости, приводящей к появлению в рамках первоначального опухолевого клона новых мутантных клонов [9].
Согласно теории опухолевой прогрессии, распространение гемопоэти-ческих опухолевых клеток за пределы кроветворных органов (лейкемизация, диссеминация), означает качественно новый этап в развитии гемобластоза и появление в субстрате более агрессивного клона [9]. Естественно, что интенсивность мутационного процесса возможна в быстропролиферирующих вариантах опухолей, а закрепление возникающих генетических изменений может произойти при дефекте в системе репарации ДНК и нарушении процессов апоптоза [36]. Таким образом, полиморфизмы генов, участвующих в процессах хемотаксиса, апоптоза и репарации генетических повреждений могут оказывать влияние на опухолевую прогрессию.
Нами проанализированы клинические особенности и распространенность опухолевого процесса у пациентов с НХЗЛ в зависимости от их гено 102 типа по полиморфным локусам 3 и 6 интрона, а также 4 экзона гена р53, гена. Особенности клинического течения и распространенность опухолевого процесса при полиморфизме гена хемокинового рецептора CCR5
Различий по степени злокачественности НХЗЛ в группе гомозиготных и гетерозиготных пациентов отмечено не было. Среди w/w больных индолент-ные лимфомы диагностированы у 57% (44/77), среди w/del - у 59% (13/22), а агрессивные варианты заболевания составили - 43% (33/77) и 41% (9/22) соответственно.
Выявлено, что наличие del-аллеля гена CCR5 достоверно снижало генерализацию опухолевого процесса по лимфоидным органам. Лица с диким гомозиготным генотипом CCR5 в момент диагностики заболевания в 13/77 (17%) случаев имели локализованные стадии (И) заболевания, в то время как доля больных с локальными стадиями заболевания при w/del генотипе была в 2 раза выше - 8/22 (37%) (р 0,05) (рис.5.1.1).
В то же время большая часть w/w пациентов имели продвинутые стадии НХЗЛ - 64/77 (83%): в 11/77 (12%) случаев - III и в 53/77 (71%) - IV стадию. Среди больных - CCR5 гетерозигот продвинутые стадии заболевания имели только 2/3 больных - 14/22 (63%) (р 0,05): 3/22 (14%) - III и 5/22 (23%)-IV (рис.5.1.1).
Полиморфизмы генов р53, ccr5 и xrcc1 у больных индолентными и агрессивными лимфомами
Согласно полученным нами результатам, в реализации опухолевой прогрессии НХЗЛ CCR5 может быть вовлечен как рецептор к провоспалитель-ным цитокинам. Существует образное высказывание, о том, что «если генетическая мутация - это спичка, которая зажигает пожар опухоли, то цитоки-ны - топливо, которое этот пожар подкармливает». В этой связи уменьшение уровня экспрессии рецептора на мембране клеток у носителей деляционного аллеля CCR5, а, следовательно, и меньший ответ на провоспалительные хе-мокины, может выступать благоприятным фактором, ограничивающим прогрессию НХЗЛ.
Исследование генотипа CCR5 у больных НХЗЛ может дать ценную информацию о течении опухолевого процесса. Обнаруженная связь между диким генотипом CCR5 и большей распространенностью неходжкинских лим-фом позволяет предположить возможность использования полиморфизма del32bp гена CCR5 в качестве прогностического фактора.
Анализ особенностей клинического течения заболевания в зависимости от генотипов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G— А 6 интрона гена при их изолированном рассмотрении оказался малоинформативным.
В то время как каждый из полиморфизмов dupl6bp 3 интрона, Arg72Pro 4 экзона и G— А 6 интрона р53 в отдельности не был связан с прогнозом пациентов, нами были выявлены различия в распределении больных с различными сочетанными нарушениями в данных локусах антионкогена р53 на группы риска, согласно международному прогностическому индексу IPI. Так, наихудший прогноз регистрировался у пациентов, одновременно имеющих минорные аллели в трех полиморфных локусах, в отличие от больных с диким типом р53. Они в 2 раза реже относились к группам низкого или промежуточного/низкого риска (38% против 65%, р=0,078), но в 4 раза чаще - к группе промежуточного/высокого риска (54% против 15%, р 0,01). Полученные данные показывают важность оценки комплекса генетических изменений р53 с целью выяснения их результирующего влияния на течение заболевания и прогноз, что может свидетельствовать о весьма умеренном эффекте каждого из полиморфизмов в отдельности и необходимости их сочетанного анализа в составе гаплотипных групп.
В группе больных с неизмененным XRCC1 подавляющая часть НХЗЛ были индолентными - 77%, тогда как у пациентов с Gin-несущими генотипами - лишь в половине случаев (р 0,05) регистрировались лимфомы НСЗ. Агрессивные лимфомы имели 23% Arg/Arg пациентов, а в группах больных гетерозиготных и гомозиготных по Gln-аллелю лимфомы ВСЗ встречались частотой 45% (р 0,05) и 50% (р 0,05) соответственно.
Обнаруженная ранее связь Arg/Gln и Gln/Gln генотипов XRCC1 с риском развития неблагоприятных вариантов заболевания позволила нам предположить возможность использования генотипа данного гена в качестве прогностического фактора. Для проверки этого предположения нами были сопоставлены показатели международного прогностического индекса IPI в группах больных с полиморфизмом Arg399Gln.
Оказалось, что пациенты, не имеющие изменений в 399 ко доне гена XRCC1, в 73% случаев входили в группу низкого или низкого/промежуточного риска, и только 27% больных с Arg/Arg генотипом относились к группе промежуточного/высокого или высокого риска раннего про-грессирования заболевания. Значительно чаще 3 и более факторов риска регистрировались у гетерозиготных (48%, р=0,068) и Gln/Gln больных (45%, р=0,068).
Возникает вопрос, почему же полиморфизм Arg399Gln гена репарации ДНК XRCC1 имел тенденцию коррелировать с неблагоприятным прогнозом, указывающим на риск раннего прогрессирования заболевания и сниженную эффективность лечения при проведении стандартной полихимиотерапии I линии? Ведь, как свидетельствуют проведенные исследования, нарушение функции этого гена приводит к повышению чувствительности клеток к радиотерапии и некоторым видам химиопрепаратов [146, 178, 284, 300]. Терапевтическое хими-олучевое воздействие направлено на генерирование в опухолевых клетках большого количества генетических повреждений, приводящих к запуску в них программированной клеточной смерти, т.е. снижение функциональной активности XRCC1 должно повышать апоптогенный эффект лечения.
Вероятно, это связано с конкурирующими генетическими изменениями, наблюдаемыми у пациентов, несущих Gln-аллель. Wong et. al. показали, что у лиц, гомозиготных по Gln-аллелю в 2 раза чаще регистрируются аномалии р53 и обнаруживаются в крови антитела к этому белку [313]. Увеличение частоты мутаций р53 более, чем в 6 раз у Gln/Gln больных раком легкого было показано в исследованиях Casse et. al. [89]. На белке р53 сходятся едва ли не все пути запуска апоптоза и дополнительный дефицит его функции позволяет клеткам выживать [283].
В задачи нашего исследования не входило изучение мутационного статуса р53. Кроме того, проведенные другими авторами исследования у больных гемобластозами показали, что мутации р53 - позднее событие в эволюции лимфом и в момент диагностики не более 2-13% больных могут иметь грубые изменения в данном гене [195, 198]. Однако, учитывая, что функция гена р53 может снижаться при полиморфизме Arg72Pro, нами был проанализирован IPI в двух группах больных: не имеющих изменений в XRCC1 и 4 экзоне р53 и имеющих минорные аллели одновременно по 2 изучаемым ло-кусам. Оказалось, что пациенты с гомозиготными дикими генотипами XRCC1 ир53 в 86% случаев относились в группу низкого (35%) или низкого/промежуточного (51%) риска, тогда как в группе пациентов, несущих минорные аллели гена репарации ДНК XRCC1 и 4 экзона антионкогена р53 низкий и промежуточный/низкий риск отмечен только в 58% (р 0,01) случаев (10%, р 0,05 и 48% соответственно). Только по 7% больных с диким типом обоих генов имели промежуточный/высокий или высокий риск раннего прогрессирования заболевания, а у носителей минорных аллелей - промежуточный/высокий регистрировался в 32% (р 0,05) и высокий - в 20% (р 0,05) случаев.
Известно, что Pro-вариант р53 имеет слабую проапоптотическую активность и в большей степени способствует протеканию репаративных процессов ДНК [236]. В этой связи у больных, несущих, помимо минорного аллеля 4 экзона р53 еще и минорный аллель гена XRCC1, может возникнуть снижение способностей клеток восстанавливать повреждения макромолекул и одновременно проводить сигнал на активацию апоптоза, что может способствовать выживанию и селекции все более агрессивных клонов.
