Введение к работе
1. 1.1. Актуальность проблемы
Опухолевый супрессор р53 играет ключевую роль в регуляции клеточного цикла, апоптоза, репарации ДНК и некоторых других фундаментальных процессов жизнедеятельности клетки. В связи с этим неудивительно, что нарушения его функции являются наиболее универсальным изменением в различных новообразованиях человека. Согласно общепринятым представлениям, повреждения р53 ведут к инактивации охранных механизмов, предотвращающих размножение клеток, в которых уже произошли или могут произойти различные генетические изменения, в том числе и онкогенные. Так, недавно было показано, что нормальное функционирование р53 препятствует пролиферации клеток, содержащих активированные онкогены семейства ras [Serrano et al, 1997]. Вызываемая аномалиями р53 генетическая нестабильность является движущей силой неуклонной опухолевой прогрессии, детерминирующей появление и отбор все более и более агрессивных клонов. Между тем, детальные механизмы возникновения нестабильности генома при различных нарушениях р53 во многом остаются неясными. В частности, остается невыясненной роль р53 в предотвращении изменений числа хромосом. Неясны и генетические последствия кооперативного действия аномалий р53 и экспрессии активированных онкогенов семейства ras - события, которое также довольно часто наблюдается в различных новообразованиях человека.
1.2. Цель и задачи исследования.
Целью настоящей работы являлось изучение роли различных нарушений функции р53 и активации онкогенов семейства ras в возникновении генетической нестабильности. Было запланировано решение следуїощігх экспериментальных задач:
1. Определить влияние экспрессии экзогенных р53 с мнссенс-мутациями в кодонах 175, 248 и 273 - наиболее частыми повреждениями р53 в различных
иовобразованиях человека - на частоту возникновения числовых и структурных изменений хромосом в человеческих клетках с нормальным статусом эндогенного р53.
-
Изучить генетические последствия инактивации р53 по доминантно-негативному механизму и исследовать эффекты, возникающие при подавлении функции различных доменов белка р53.
-
Проанализировать влияние экспрессии активированных онкогенов семейства ras на частоту возникновения различных генетических нарушений и функциональную активность чекпойнтов клеточного цикла в клетках с нормальным и инактивированным р53.
1.3. Научная новизна и практическая значимость работы.
В настоящей работе впервые показано, что экспрессия р53 с характерными для опухолей человека мутациями (Trp248, His273, His 175) приводит к увеличению частоты хромосомных разрывов в пролиферирующих клетках и появлению клеток с дополнительными хромосомами. С помощью клонального анализа, подобного тесту Луриа-Дельбрюка, продемонстрировано, что в популяции человеческих клеток линии LIM1215 темп индуцированного мутантными р53 появления гипердиплоидных вариантов составляет примерно 10" на клетку на генерацию. Обнаружено, что подавление активности р53 дикого типа путем трансдукции в клетки генетических супрессорных элементов, также как и экспрессия мутантных р53, увеличивает вероятность появления в делящихся клетках самых разных генетических нарушений - гетероплоидии, незарепарированных разрывов хромосом и рекомбинаций ДНК, приводящих к генной амплификации. При этом впервые показано, что последствия супрессии различных частей белка или мРНК р53 неодинаковы: спектр и/или частота генетических нарушений при ингибировании функциональной активности олигомернзационного домена были выше, чем при подавлении функции трансактивационного и ДНК-связывающего доменов. Обнаружено, что экспрессия активированных онкогенов N-ra.v и W-ras также может вызывать
разнообразные генетические изменения, однако вероятность их появления определяется функциональной активностью р53-зависимых сигнальных путей в rtw-трансформированных клетках. Впервые продемонстрировано кооперативное действие нарушений функции р53 и экспрессии онкогенов ras, приводящее к инактивации G1- и 02-чекпойнтов клеточного цикла и отмене запрета на вход поврежденных клеток, соответственно в S фазу и митоз.
Результаты проведенной работы способствуют лучшему пониманию механизмов опухолевой прогрессии, что является важным для создания принципиально новых методов лечения злокачественных новообразований.
1.4. Апробация работы.
Диссертация апробирована 17 марта 1998 года на совместной научной конференции лабораторий цитогенетики, генетики опухолевых клеток, механизмов канцерогенеза, регуляции клеточных и вирусных онкогенов. Материалы диссертации докладывались на 1-ом Съезде Онкологов стран СНГ, Москва, 1996; 27th Annual Meeting of the Europian Society of Human Genetics, Мюнхен, 1995; American Association of Cancer Research Conference «Inducible Genomic Responses», Портленд, 1996; Joint ISRES-AACR symposium «Cancer and Cell Cycle», Лозанна, 1996; 9,h p53 Workshop, Крит, 1998.
1.5. Публикации.
По теме диссертации опубликовано 12 научных работ.
![Разработка оптимальных методов криоконсервирования кроветворных клеток пуповинной крови человека для трансплантаций [Электронный ресурс]](/i/i/4404/192487.png "Разработка оптимальных методов криоконсервирования кроветворных клеток пуповинной крови человека для трансплантаций [Электронный ресурс] Гришина Виктория Валерьевна")
