Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Литературный обзор 13
1.1. Психобиологические модели личности 13
1.2. Средовые и личностные факторы как предикторы психических расстройств 16
17 19
1.2.1. Влияние средовых факторов в детском возрасте на развитие поведенческих проблем 16
1.2.2. Взаимосвязь личностного профиля с риском развития психопатологии
1.3. Роль средовых факторов в формировании черт темперамента и личности у человека
1.3.1. Различия в чертах личности в процессе онтогенеза 19
1.3.2. Личностные различия, обусловленные влиянием половых гормонов 20
1.3.3. Популяционные и культурные различия в личностных чертах 22
1.4. Роль генетических факторов в формировании черт темперамента и личности у человека 23
1.4.1. Полиморфные маркеры генов серотонинергической системы 24
1.4.2. Полиморфные маркеры генов дофаминергической системы 33
1.4.3. Полиморфные маркеры генов норадренергической системы 41
1.4.4. Полиморфные маркеры генов ферментов, участвующих в метаболизме нейротрансмиттеров 44
1.4.5. Формирование личностных черт в результате межгенных взаимодействий 48
Глава 2. Материалы и методы исследования 50
2.1 Материалы исследования 50
2.2 Методы исследования 52
2.2.1. Выделение геномной ДНК 52
2.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК 53
2.2.3. Рестрикционный анализ 54
2.2.4. Метод электрофореза 54
2.2.5. Психологическая оценка черт темперамента и личности 55
2.2.6. Статистическая обработка полученных результатов 56
Глава 3. Результаты и обсуждение 63
3.1. Анализ личностных черт как количественных данных и их модификация "3
3.2. Исследование ассоциации демографических параметров с личностными чертами 65
3.3. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров гена переносчика серотонина (5-НТТ) с личностными чертами 69
3.3.1. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров 5-HTTLPR и rs25531 гена 5-НТТ с личностными чертами 69
3.3.2. Анализ ассоциаций полиморфного маркера STin2 гена 5-НТТ с личностными чертами 79
3.3.3. Анализ ассоциаций гаплотипов гена 5-НТТ, сконструированных на основе полиморфных маркеров 5-HTTLPR, rs25531 и STin2, с личностными чертами , 84
3.4. Анализ ассоциаций полиморфного маркера 86Ю>С гена рецептора 1В серотонина (HTR1B) с личностными чертами 88
3.5. Анализ ассоциаций полиморфного маркера -1438A>G гена рецептора 2А серотонина (HTR2A) с личностными чертами 92
3.6. Анализ ассоциаций полиморфного маркера Cys23Ser гена рецептора 2С серотонина (HTR2C) с личностными чертами 96
3.7. Анализ ассоциаций полиморфного маркера 218А>С гена триптофангидроксилазы 1 {ТРН1) с личностными чертами 99
3.8. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров гена рецептора D2 дофамина (DRD2) с личностными чертами 105
3.8.1. Анализ ассоциаций полиморфного маркера TaqlA гена DRD2 с личностными чертами 105
3.8.2. Анализ ассоциаций полиморфного маркера 939С>Т гена DRD2 с личностными чертами 109
3.8.3. Анализ ассоциаций гаплотипов гена DRD2, составленных на основе полиморфных маркеров TaqlA и 939С>Т, с
личностными чертами 114
3.9. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров гена переносчика дофамина (SLC6A3) с личностными чертами 117
3.9.1. Анализ ассоциаций полиморфного VNTR маркера в гене SLC6A3 с личностными чертами 117
3.9.2. Анализ ассоциаций полиморфного маркера 2319G>A в гене SLC6A3 с личностными чертами 121
3.9.3. Анализ ассоциаций гаплотипов гена SLC6A3, составленных на основе полиморфных маркеров VNTR и 2319G>A, с личностными чертами 124
3.10. Анализ ассоциаций полиморфных маркеров гена рецептора D4 дофамина (DRD4) с личностными чертами 128
3.10.1. Анализ ассоциаций полиморфного VNTR маркера в 5'-UTR гена DRD4 с личностными чертами 128
3.10.2. Анализ ассоциаций полиморфного маркера -616C>G гена DRD4 с личностными чертами 132
3.10.3. Анализ ассоциаций полиморфного VNTR маркера в 3 экзоне гена DRD4 с личностными чертами /.137
3.10.4. Анализ ассоциаций гаплотипов гена DRD4, сконструированных на основе полиморфных VNTR маркеров в 5 '-UTR и 3 экзоне и -616C>G, с личностными чертами 141
3.11. Анализ ассоциаций полиморфного маркера rs6651806 гена моноаминоксидазы В (МАОВ) с личностными чертами 146
3.12. Анализ ассоциаций полиморфного маркера Vall58Met гена катехол-0-метилтрансферазы (СОМТ) с личностными чертами 151
3.13. Анализ ассоциаций полиморфного маркера 1287G>A гена переносчика норэпинэфрина {NET) с личностными чертами 156
3.14. Анализ ассоциаций полиморфного маркера -1291C>G гена адренергического рецептора типа 2А (ADRA2A) с личностными чертами 160
3.15. Множественный регрессионный анализ и оценка межгенных и ген-средовых взаимодействий 168
Заключение 175
Выводы 182
Список литературы
- Средовые и личностные факторы как предикторы психических расстройств
- Различия в чертах личности в процессе онтогенеза
- Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК
- Анализ ассоциаций полиморфного маркера STin2 гена 5-НТТ с личностными чертами
Введение к работе
Актуальность проблемы
Начало изучения динамических характеристик поведения человека — свойств личности и темперамента — принадлежит Гиппократу (V-IV вв. до н.э.) и Галену (II в. до н.э.), которые охарактеризовали основные типы поведения человека. К настоящему времени существует большое число различных теорий и концепций темперамента и личности, которые связывают личностные свойства с биологическими характеристиками индивида, в частности, с особенностями функционирования центральной нервной системы. К темпераменту традиционно относят характеристики индивида со стороны динамических особенностей его психической деятельности, т.е. темпа, быстроты, ритма, интенсивности составляющих эту деятельность психических процессов и состояний. Психологи различают свойства темперамента и характера, при этом темперамент определяют как совокупность наследственных свойств, рано проявляющихся в жизни, в то время как свойства характера представляют ценности и цели, формируемые в процессе индивидуального развития и социокультурного обучения [Van Gestel et al, 2003].
После открытия генов многих моногенных заболеваний интерес ученых был направлен на изучение генетических основ различных комплексных признаков, включая исследование личности и темперамента. Согласно близнецовым и семейным исследованиям все вариации черт темперамента обусловлены на 40-60% различиями в факторах наследственности, причем относительно большое значение также имеет влияние индивидуальной среды [Van Gestel et al., 2003]. Механизм взаимодействия генов является комплексным, аддитивным и эпистатическим, причем экспрессия генов варьирует в процессе индивидуального развития индивида и находится под влиянием факторов окружающей среды. Показано, что, одни свойства личности находятся под большим влиянием
8 генетического компонента, в то время как другие - под влиянием среды [Plomin et al., 1994; Reif and Lesch, 2003]. Используя разнообразные молекулярно-генетические методы, исследователи показали, что свойства личности наследуемы, повторяются в разных этнических группах, стабильны в течение всей жизни и связаны со специфическими гормонами, нейротрансмиттерами и системами активации мозга [Benjamin et al., 2002].
Одним из аспектов, объясняющих повышенный интерес ученых к исследованию генетических основ темперамента, является гипотеза о роли личностных черт как промежуточных фенотипов, опосредующих развитие различных психопатологий [Van Gestel et al., 2003]. Поскольку, показана роль нейромедиаторов (дофамина, серотонина, ацетилхолина) в развитии таких психических патологий, как зависимость от психоактивных веществ, депрессии, агрессивного поведения [Ebstein et al., 2000], то проблема поиска генов, участвующих в развитии черт личности и темперамента, чрезвычайно актуальна как для лучшего понимания их роли в формировании нормального поведения, так и поведенческих расстройств [Ebstein et al., 2000; Van Gestel et al., 2003]. Кроме того, индивидуальные свойства личности определяют эффективность лечения психических расстройств и чувствительности к боли [Benjamin etal., 2002].
Известно, что черты темперамента находятся под влиянием таких факторов окружающей среды как стиль воспитания [Talbot et al., 2000, Reti et al., 2002], сезон рождения [Chotai et al., 2001], социально-экономический статус [Manuck et al., 2004]. Влияние факторов наследственности на динамические характеристики поведения обнаруживается уже на первом году жизни человека. Считается, что детский темперамент является предиктором возможных поведенческих проблем [Fagot et al., 1994; Goldsmith et al., 2000]. В частности, черты, ассоциированные с «трудным темпераментом» (излишней эмоциональностью, плохой адаптацией, агрессивностью, импульсивностью) являются предшественниками внутри- и внешненаправленных проблем поведения [Fagot et al., 1994; Goldsmith et al.,
9 2000]. Кроме того, темперамент выражается в предпочтении различных сфер профессиональной деятельности во взрослом возрасте. Выбор стиля жизни, в частности, желание заниматься спортом, принимать нездоровую пищу или курить, определяется в существенной мере индивидуальными свойствами личности. Причем, ученые рассматривают предпочтительный выбор «неправильного образа жизни» как мягкую форму личностного расстройства. Таким образом, для формирования зрелой личности важным аспектом является диагностика личностных черт человека в раннем возрасте с последующим грамотным использованием достоинств и преимуществ темперамента с одновременной нейтрализацией отрицательных проявлений.
Несмотря на проводимую в последние годы в России социальную политику, направленную на укрепление семейных ценностей, число разводов и детей, растущих в неполных семьях, возрастает. Некоторые исследования охарактеризовали профиль личности индивидов, склонных к флирту и неверности в семейной жизни (повышенная экстраверсия, низкая совестливость и сочувствие) [Schmitt et al., 2004]. Таким образом, воспитание индивидов с генетической предрасположенностью к неверности должно сопровождаться акцентированием их внимания на семейных ценностях для того, чтобы сделать проводимую государством социальную политику более эффективной и возродить население России.
Существующие психобиологические модели предполагают, что формирование свойств личности и темперамента опосредовано функционированием нейромедиаторных систем мозга. Многочисленные исследования свидетельствуют о существенном вкладе генетических факторов в формирование личностных свойств [Comings et al., 2000а; Ebstein et al, 2000, 2006; Benjamin et al., 2002; Van Gestel et al., 2003; Munafo et al., 2003; Reif et al., 2003]. В последнее время в результате молекулярно-генетических исследований (в частности, полно-геномных анализов сцепления) были выявлены «локусы количественных черт» для свойств личности, в которых находятся гены, ассоциации которых с личностными
10 чертами были показаны. В частности, обнаружена ассоциация генов серотонинергической системы с чертами тревожного ряда; генов дофаминергической системы - с экстраверсией, стремлением к новизне; генов норадренергической системы - с раздражительностью и гиперактивностью [Benjamin et а., 2002].
При проведении молекулярно-генетических исследований принципиально важным является учет этнической принадлежности исследуемых индивидов, так как любой этнос имеет длительную историю становления и характеризуется отличительным генетическим разнообразием, которое является результатом отбора по какому-либо признаку, зависящему от социально-демографических, климатических и прочих факторов. В тоже время разные народы мира имеют свои культурные и религиозные
особенности, обуславливающие нормы поведения в обществе, а,,
/1
следовательно, в каждой культуре в результате позитивной селекции могут сохраняться личностные черты, необходимые для успешной социализации именно в этой популяции, что является в какой-то мере следствием отбора индивидов с определенными генотипами.
Не менее важным является учет половой принадлежности исследуемых-индивидов, поскольку известен половой диморфизм как в отношении структуры мозга, так и уровня половых гормонов, что обуславливает вариации личностных черт между мужчинами и женщинами. Кроме того, социально-психологическая теория объясняет половые различия в чертах темперамента в связи с вариациями социальных ролей у мужчин и женщин, а биологическая теория - влиянием половых гормонов на экспрессию генов.
Однако лимитирующим фактором в поисках специфичных генов является отсутствие повторяемости результатов, их противоречивость и сложность выявления ассоциации генов-кандидатов вследствие небольшого вклада в развитие признака (до 1,5%). Понимание генетических механизмов формирования свойств личности имеет большое значение для профилактики
развития личностных расстройств и для психического здоровья населения в целом.
Ранее в России единичные молекулярно-генетические исследования темперамента проводились только в группе здоровых индивидов среднего возраста или в группе лиц с психическими расстройствами [Голимбет с соав., 2004, 2007]. Учитывая некоторую вариабельность личностных черт в процессе онтогенеза, обусловленную как изменениями экспрессии генов [Caspi and Roberts, 2005], так и процессами социо-культурного обучения [Costa, 2000; Srivastava, 2003]; а также достаточную стабильность личностных свойств в период 11—27 лет [Sigvardsson et al., 1987] и факт формирования большинства отделов мозга к 20 годам [De Luca et al., 2003], исследование лиц в возрасте до 27 лет является чрезвычайно актуальным.
Цель работы: изучение генетической предрасположенности к формированию черт темперамента и личности по полиморфным вариантам генов серотонинергической, дофаминергической и норадренергической систем мозга с учетом половых и этнических различий в группе лиц 17-26 лет.
Задачи исследования:
Провести исследование черт темперамента и личности в зависимости от демографических факторов.
У здоровых индивидов татарской и русской этнической принадлежности провести оценку частот генотипов и аллелей полиморфных маркеров генов:
переносчика серотонина (5-HTTLPR, rs25531 и STin2),
рецептора 1В серотонина (86Ш>С),
рецептора 2А серотонина (1438A>G),
рецептора 2С серотонина (Cys23Ser),
триптофангидроксилазы 1 (218А>С),
переносчика дофамина (VNTR и 2319G>A),
рецептора D2 дофамина (TaqlA и 939С>Т),
рецептора D4 дофамина (VNTR в 5'-UTR и экзоне 3, -616C>G),
переносчика норэпинэфрина (1287G>A),
адренергического рецептора типа 2А (-1291C>G),
моноаминооксидазы В (rs6651806),
катехол-О-метилтрансферазы {Vall58Met).
3. Провести анализ ассоциаций 18 полиморфных маркеров генов,
вовлеченных в функционирование серотонинергической,
дофаминергической и норадренергической систем мозга с чертами темперамента и личности с учетом половой и этнической принадлежности исследуемых лиц.
Провести регрессионный анализ гаплотипов полиморфных маркеров гена 5НТТ (5-HTTLPR, rs25531 и STin2), DRD2 {TaqlA и 9390Т), SLC6A3 (VNTR и 23190А), DRD4 (VNTR в экзоне 3 и 5'-UTR, -6160G) и оценить их роль в формировании личностных черт у здоровых индивидов с учетом половой и этнической принадлежности.
Оценить роль межгенных и ген-средовых взаимодействий в развитии черт темперамента и личности с учетом половой и этнической принадлежности обследованных лиц.
Научная новизна исследования Впервые в Республике Башкортостан создана коллекция ДНК' психически здоровых индивидов разной этнической принадлежности возрастной группы 17-26 лет, прошедших психологическое тестирование с помощью опросников Г. Айзенка (Eysenck Personality Inventory, ЕРІ) и СР. Клонинджера (Temperament and Character Inventory, TCI-125). Впервые проведен анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов 5-НТТ, HTR1B, HTR2A, HTR2C, ТРН1, SLC6A3, DRD2, DRD4, NET, ADRA2A, МАОВ, СОМТ с формированием различных черт личности и темперамента у здоровых индивидов татарской и русской этнической принадлежности и оценена роль взаимодействия рассматриваемых генов и демографических факторов в формировании личностных черт. Установлено, что полиморфные локусы ряда изученных генов-кандидатов ассоциированы с личностными чертами у здоровых лиц в зависимости от этнической и половой принадлежности.
13 Научно - практическая значимость работы
Полученные данные представляют интерес для понимания молекулярно-генетических механизмов формирования личностных черт, а также позволяют предложить новые направления в разработке подходов как для оценки групп риска индивидов с личностными расстройствами, так и для успешной социализации индивида и формирования зрелой личности. Кроме того, данные диссертационной работы могут служить основой для последующих исследований по определению генетических факторов, определяющих наиболее успешное проявление личности индивида в профессиональной деятельности. Результаты исследования могут быть использованы при чтении спецкурсов на факультетах биологии, психологии, социологии, в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских и социальных работников, психологов.
Средовые и личностные факторы как предикторы психических расстройств )
Рядом исследователей было показано, что черты личности в детском возрасте являются предикторами личностных расстройств во взрослой жизни и поведенческих проблем в подростковый период [Fagot et al., 1994; Goldsmith et al., 2000]. Существуют данные, показывающие, что предикторами интернализированных проблем поведения (тревожности, замкнутости и т.д.) в подростковый период, наиболее характерными для девочек, являются повышенное ИУ и СТ, пониженная ЗВ и СН, в то время как для проявления экстернализированных проблем поведения (антисоциального и делинквентного поведения, агрессии), выявленных в основном у мальчиков, характерно наличие высокого ПН и СТ, низкого ИУ, СН, С [Sigvardsson et al., 1987].
Значительное влияние на формирование поведенческих проблем оказывают такие средовые факторы как наличие стрессовых ситуаций [Bennett et al., 2002], воспитание в неполной семье [Furukawa et al., 1999], насилие в детстве [Talbot et al., 2000], психические расстройства у родителей [Ravaja et al., 2001]. Кроме того, существует прямая корреляция между семейными взаимоотношениями и самооценкой, уровнем социальной приспособленности ребенка во взрослой жизни, снижением нейротизма, повышением добросовестности и «самонаправленности» [Reti et al., 2002]. Кроме того, наличие повышенного «поиска новизны» и «настойчивости» у ребенка и матери может привести к возникновению проблем внимания, а высокое «избегание ущерба» у отца - к развитию интернализированных проблем поведения у ребенка [Rettew et al., 2006].
Кроме того, средовое влияние в детстве модулирует генетическую роль в формировании черт личности. В частности, ассоциация аллелей DRD4 2R и DRD4 5R полиморфного VNTR маркера в экзоне 3 гена DRD4 с высоким ПН была обнаружена лишь у индивидов, воспитанных более образованными матерями в семье с более высоким социально-экономическим статусом [Lahti et al., 2005]. В других работах было показано, что более высокая экстраверсия характерна для детей, родители которых страдали алкогольной зависимостью, лишь при наличии определенного аллеля полиморфного локуса TaqlA гена DRD2 [Ozkaragos и Noble, 2000], а плохое обращение родителей являлось фактором риска в развитии антисоциального поведения лишь при наличии определенного аллеля в гене МАОА [Van Gestel et al., 2003].
Согласно психобиологической модели личности Клонинджера, в зависимости от комбинации трех измерений (ПН, ИУ и ЗВ) существует 8 типов темперамента («куб темперамента»): авантюрный (высокий ПН, низкое ИУ, низкая ЗВ), взрывной (высокий ПН, высокое ИУ, низкая ЗВ), сенситивный (высокий ПН, высокое ИУ, высокая ЗВ), вспыльчивый (высокий ПН, низкое ИУ, высокая ЗВ), независимый (низкий ПН, Низкое ИУ, низкая ЗВ), систематический (низкий ПН, высокое ИУ, низкая ЗВ), осторожный (низкий ПН, высокое ИУ, высокая ЗВ) и надежный (низкий ПН, низкое ИУ, высокая ЗВ). Каждый тип темперамента при наличии низкого уровня зрелости характера (низкой СН и С) может приводить к возникновению определенных личностных расстройств. Наоборот, высокие значения по шкалам «самонаправленность», «сотрудничество», «самотрансцендентность» характеризуют наличие у человека позитивных эмоций, что имеет важное значение для удовлетворенности человека жизнью и его здоровья [Cloninger et al., 1997].
Многочисленные исследования черт личности у индивидов с психическими расстройствами выявили более-менее повторяющийся профиль личности для каждого заболевания. Кроме того, основными предикторами большинства личностных расстройств являются повышенный ПН и ИУ, заниженная ЗВ в сочетании с незрелым типом характера (низкой СН, С и СТ).
Согласно модели Клонинджера [Cloninger et al., 1997] существует алкогольная зависимость двух типов: 1 тип характеризуется поздним возрастом манифестации заболевания (характерно высокое ИУ, ЗВ и низкий ПН), а 2 тип - ранним возрастом манифестации (до 25 лет) (отмечается высокий ПН, низкое ИУ и ЗВ). Дальнейшие исследования подтвердили повышение ПН у индивидов со 2 типом алкогольной зависимости, повышенное ИУ, импульсивность, агрессивность, низкую добросовестность, согласие, «самонаправленность» [Zilberman et al., 2003; Ducci et al., 2007].
Различия в чертах личности в процессе онтогенеза
Индивидуальные различия темперамента, т.е. различия эмоциональной, двигательной и когнитивной активности, проявляются с первых дней жизни, что свидетельствует о значительном влиянии наследственности [Saudino, 2005]. Однако, необходимо отметить, что черты темперамента в чистом виде могут быть диагностированы только у младенцев, в то время как во взрослом возрасте психологи для характеристики динамических особенностей индивида используют понятие личностных свойств. Несмотря на это, число молекулярно-генетических исследований с участием детей невелико, что обусловлено сложностью определения психологических черт в этот период жизни. Другие авторы считают, что формирование большинства отделов мозга завершается к 20 годам [De Luca et al., 2003].
Клонинджер постулировал, что черты темперамента достаточно стабильны в течение всей жизни и по своей структуре и по индивидуальной выраженности [Cloninger et al., 1993, 2006], в частности, в возрасте 11-27 лет [Richter et al., 2000; Sigvardsson et al., 1987]. Однако существуют данные, указывающие на небольшие вариации в личностных свойствах, обусловленные генетическими факторами (различиями экспрессии генов на разных этапах развития) [Caspi and Roberts, 2005] и влиянием окружающей среды (изменениями социальных ролей, жизненных событий и социального окружения) [Srivastava et al., 2003]. Существует гипотеза, что такие черты темперамента и личности как экстраверсия, «поиск новизны», открытость иь нейротизм ослабевают с возрастом [McCrae et al, 2002; Allemand et al., 2007]. Однако, наибольшее проявление «поиска новизны» и «зависимости от" вознаграждения» отмечено в возрасте 17-27 лет, а «настойчивости» - в период 17-47 лет [Richter et al., 2000]. Особое внимание заслуживает возраст,-, характеризующийся переходом во взрослую жизнь, поскольку именно в этот период окончательно формируется психологический профиль личности, определяющий успешность будущей социализации и самостоятельности индивида. Формирование психологической зрелости к 30 годам отражается в увеличении самоконтроля, эмоциональной стабильности, чувствительности, «самонаправленности» и «самотрансцендентности», целеустремленности и «избегании ущерба», снижении агрессии [McGue et al., 1993; Cloninger et al., 1997; Caspi et al., 2005].
Многочисленные исследования отметили существование тендерных различий в чертах личности: у женщин отмечено повышение черт тревожного ряда (нейротизма, ИУ) по сравнению с мужчинами [Costa et ah, 2001; Chapman et al., 2007]. В отношении коммуникативных черт существуют противоречивые данные: показано как повышение экстраверсии у женщин [Feingold, 1994; Rouff et al., 2005], так и ее снижение [Lynn and Martin, 1997; Costa et al., 2001; Else-Quest, 2006]. Feingold (1994) выявил, что у мужчин отмечается более высокая «настойчивость», открытость идеям и самоуверенность [Feingold, 1994; Costa et al., 2001], а женщины проявляют большее согласие [Chapman et al., 2007], «зависимость от вознаграждения», «самотрансцендентность», «сотрудничество» и пониженную «самонаправленность» [Vaidya et al., 2004].
Вариации черт темперамента у мужчин и женщин можно объяснить с точки зрения биологической (основанной на гормональных различиях) и социально-психологической теорий (в частности, модели социальных ролей) [Costa et al., 2001]. Кроме того, показан половой диморфизм в анатомии мозга: у девочек отмечен больший объем гиппокампа (отдела мозга, где располагаются ферменты для синтеза эстрогенов), а у мальчиков - ядра миндалевидного комплекса (отдела мозга с наибольшим числом андрогенов) [Cosgrove et al., 2007]. Биологическая теория рассматривает влияние половых гормонов (которые опосредуют целый каскад клеточных эффектов) на экспрессию генов нейротрансмиттерных систем мозга. В частности, была выявлена корреляция концентрации тестостерона у беременных женщин с более агрессивным и активным поведением в возрасте 3,5 лет у родившихся девочек [Hines et al., 2002].
Существует большое число работ, свидетельствующих о повышении серотонинергической активности у женщин (увеличение ответа пролактина на D-фенфлурамин, повышения концентрации 5-ГИУК в спинномозговой жидкости) [Mann et al., 2001] вследствие снижения экспрессии генов 5-НТТ, HTR2A и ТРН1 [Pecinshompson et al., 1998], гена HTR2C [Gundlah et al., 1999].
Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК
Амплификацию изученных локусов проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ГЩР) синтеза ДНК на амплификаторе "Терцик" производства компании «ДЬЖ-технология» (г. Москва).
Перечень исследованных локусов, последовательности специфичных олигонуклеотидньгх праймеров, размеры амплифицируемых фрагментов представлены в табл. 1 прил. Для большинства локусов амлификация была выполнена в 15 мкл общего объема смеси, содержащей следующие обязательные компоненты: 25 мМ Tris-HCl, рН 8.4, 50 мМ КС1, 1,5 мМ МГЖРЬ, 250мкМ каждого dNTP, по 10 пмоль каждого из праймеров, 10-20 нг тотальной ДНК и 0,05 единицы Taq ДЬЖ-полимеразы Termus aquaticus (производства фирмы «Силекс», г. Москва). В случае необходимости для некоторых локусов с целью оптимизации в состав смеси для ПНР вводился вспомогательный реагент — диметилсульфоксид. Для амплификации VNTR локуса в экзоне 3 гена DRD4 использовался набор реагентов GenePak PCR Core, представляющий лиофилизованные сухие смеси, содержащие 1 единицу ингибированной для «горячего старта» Taq ДНК полимеразы, 200 мкМ dNTP, 2,5мМ хлорид магния и оптимизированную буферную систему. Условия амплификации представлены в табл. 2 прил.
Для определения нуклеотидных замен проводили гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей эндонуклеазой рестрикции. Данные о рестрикционных локусах, названия эндонуклеаз рестрикции и длины продуктов расщепления представлены в табл. 1 прил. Продукты ПЦР подвергали обработке эндонуклеазами рестрикции Mspl, Nhel (производства фирмы Fermentas, Helicon, Россия), Hindll, Hinfl, Bspl9I, Avail, BstACI, AspS9I (производства фирмы Sibenzyme, Россия) при температуре 37С, а эндонуклеазой TaqI (производства фирмы Sibenzyme, Россия) при 65С в течение 16 часов в соответствие с рекомендациями фирм-производителей.
Разделение фрагментов ДНК размером менее 500 п.о. после амплификации и рестрикции проводили при помощи электрофореза в 7% полиакриламидном геле (ПААГ) (исходное соотношение акриламида и метиленбисакриламида - 29:1). Электрофорез проводили в 1ХТБЕ буфере (0,089 М трис-НС1; 0,089 М борная кислота; 0,002 М ЭДТА, рН=8,0) при напряжении 300В. Перед нанесением на гель пробы смешивали в соотношении 5:1 с буфером, содержащим 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола и 15% фикола. Разделение фрагментов размером более 500 п.о. проводили в 2% агарозном геле. В качестве маркера молекулярного веса использовали 2-Log Ladder (0,1 - 10,0 кб) (New England Biolabs, CUIA). После окончания электрофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия и визуализировали в проходящем ультрафиолетовом свете. Документирование результатов электрофореза проводили с использованием видеосистемы «Geldokulant» (Франция)
Результаты электрофоретического разделения амплифицированных фрагментов исследованных полиморфных ДНК-локусов показаны на рис. 1-17 прил.
Для оценки черт темперамента и личности были использованы русскоязычные версии методик измерения личностных качеств, разработанные Г. Айзенком (Личностный опросник Айзенка) и С. Р. Клонинджером (Temperament and Character Inventory, TCI-125).
Личностный опросник Айзенка (Eysenck Personality Inventory, ЕРІ) состоит из 57 вопросов [Райгородский, 2003] и позволяет оценить личностные характеристики для двух базисных измерений личности: нейротизма и экстраверсии (в диапазоне от 0 до 24 баллов). В качестве коррекционной шкалы присутствует шкала «Ложь». Согласно Г. Айзенку экстраверсия характеризует направленность личности на окружающих людей и события, а интроверсия - направленность личности на ее внутренний мир; в то время как нейротизм проявляется как эмоциональная неустойчивость, напряженность, эмоциональная возбудимость, тревожность.
Опросник ТСІ-125 (Temperament and Character Inventory) включает в себя 125 вопросов и позволяет оценить выраженность четырех черт темперамента, таких как «поиск новизны» (novelty seeking) (в диапазоне от 0 до 20 баллов), «избегание ущерба» (harm avoidance) (в диапазоне от 0 до 20 баллов), «зависимость от вознаграждения» (reward dependence) (в диапазоне от 0 до 15 баллов) и «настойчивость» (persistence) (в диапазоне от 0 до 5 баллов). Кроме того, в результате тестирования происходит оценка и трех свойств характера, таких как «самонаправленность» (self-directedness) (в диапазоне от 0 до 25 баллов), «сотрудничество» (cooperativeness) (в диапазоне от 0 до 25 баллов) и «самотрансцендентность» (selfranscendence) (в диапазоне от 0 до 15 баллов). Тест TCI переведен и адаптирован сотрудниками лаборатории возрастной психогенетики Психологического института РАО (г. Москва).
Анализ ассоциаций полиморфного маркера STin2 гена 5-НТТ с личностными чертами
Полиморфный маркер STin2, находящийся в интроне 2 гена 5-НТТ, представляет собой VNTR локус с 9, 10 или 12 повторами 17 п.о. и находится в неравновесии по сцеплению с локусом 5-HTTLPR, что было отмечено ранее для различных популяций [Ebstein, 2006]. Существуют сведения, показывающие различия его аллельных вариантов в энхансерной активности, показанные в эмбрионньгх стволовых клетках [Fiskerstrand et al., 1999] и его совместный с локусом 5-HTTLPR эффект на скорость транскрипции мРНК гена 5-НТТ в лимфобластах [Hranilovic et al., 2004]. Так, ген 5-НТТ с аллелем STin2 12 обладает более высокой энхансерной активностью по сравнению с аллелем STin2 10, различия в которой обусловлены не только числом повторов, но и их нуклеотидной последовательностью [Fiskerstrand et al., 1999].
Результаты распределения частот аллелей и генотипов этого локуса в группах индивидов татарской и русской этнической принадлежности (женщин и мужчин) представлены в таблице 8. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера STin2 гена 5-НТТ в изученных группах соответствует распределению Харди-Вайнберга.
Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера STin2 гена 5-НТТ в двух этнических группах из Башкортостана региона и некоторых популяциях мира показано в табл. 9. Частота наиболее встречающегося аллеля STin2 12 составила 67,1% у мужчин татар, 66,5% - у женщин татар, 63,3% - у русских мужчин и 59,5% - у русских женщин. Различия в распределении частот аллелей между изученными группами были статистически значимы (%2 = 10,87; df = 6, р = 0,028), однако последующие множественные сравнения не выявили групп, значимо различающихся по частотам аллелей между собой.
Одним из преобладающих в исследованных нами группах был генотип STin2 12/ 12, частота которого варьировала от 34,3% у русских женщин до 47,5% у мужчин татар, в то время как частоты в группе мужчин русской (37,5%) и женщин татарской этнической принадлежности (44,4%) составляли промежуточное значение. Анализ распределения частот генотипов полиморфного маркера STin2 в изученных группах показал статистически значимые различия (%2 = 18,01; df = 12, р = 0,001), однако последующие множественные сравнения не выявили групп, значимо различающихся по частотам генотипов.
В европейских популяциях отмечается значительное повышение частоты аллеля STin2 10 (35-37%) и снижение частоты аллеля STin2 12 (61-63%) по сравнению с азиатскими популяциями (частоты аллелей STin2 10 и STin2 12 равны 7% и 93% соответственно). Сравнительный анализ полученных результатов с опубликованными литературными данными показал, что распределение частот аллелей полиморфного маркера STin2 в четырех группах статистически значимо отличается от такового в популяциях Восточной Азии (р 0,001). Кроме того, были выявлены статистически значимые различия в частотах аллелей между индивидами русской этнической принадлежности (мужчинами и женщинами), женщинами татарами и жителями Индии (р 0,024), однако у мужчин татарской этнической принадлежности, наоборот, отмечалось сходство с индийцами. Таким образом, во всех исследуемых группах были обнаружены близкие значения частот аллелей полиморфного маркера STin2 с выявленными для европейских популяций.
Результаты сравнительного анализа средних значений личностных черт для индивидов татарской и русской этнической принадлежности с различными генотипами полиморфного маркера STin2 приведены в табл. 6 прил. В результате однофакторного дисперсионного анализа была обнаружена ассоциация аллеля STin2 10R с повышенными значениями по шкале «экстраверсия» (ЕРІ) как в группе женщин (Р = 0,024, F = 5,140, df = 1), так и мужчин татарской этнической принадлежности (Р = 0,047, F = 4,001, df = 1). Кроме того, среди женщин татарской этнической принадлежности — носительниц аллеля STin2 10R была выявлена тенденция к повышенной «самонаправлености» (TCI) (Р = 0,081, F = 3,068, df = 1).
Литературные данные свидетельствуют о вовлеченности полиморфного локуса STin2 в формирование личностных черт и в развитие психических расстройств. В частности, некоторые ученые показали снижение черт тревожного ряда у носителей аллеля STin2 10R [Park et ah, 2006] и генотипа STin2 10R/ 10R [Melke et al., 2001]. Несмотря на то, что нами не было выявлено ассоциации полиморфного локуса STin2 с чертами тревожного ряда, мы отметили увеличение «экстраверсии» и тенденцию к повышению «самонаправленности» у носителей аллеля STin2 10R. Полученные данные согласуются с результатами Melke (2001) и Park с коллегами (2006), поскольку снижение черт тревожного ряда обратно коррелирует с «экстраверсией» и «поиском новизны» - чертами, в отношении которых нами были выявлены результаты. Кроме того, у индивидов с суицидальным поведением наблюдалось повышение частоты гаплотипа 5-HTT LA12 [De Luca et al., 2006].
