Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Состояние костномозгового кроветворения, периферической крови и иммунной системы птиц 8
1.2.Инфекционный ларинготрахеит и вакцинация против него как способ стимуляции иммунитета и как стрессор 18
1.3.Стрессы в птицеводстве, их влияние на кроветворение, иммунную систему и коррекция стресс-реакций 22
Глава 2. Материал и методы исследования 33
Глава 3. Костномозговое кроветворение, некоторые показатели периферической крови и иммунной системы у цыплят 37
3.1. Особенности костномозгового кроветворения цыплят 30-дневного возраста 37
3.2.Гемограмма и дифференциальная характеристика лейкоцитов цыплят 30-дневного возраста 40
3.3.Иммунограмма 30-дневных цыплят 45
Глава 4. Гемопоэз, изменение показателей периферической крови и иммунореактивности у цыплят при действии вакцинного стресса 47
4.1. Костномозговое кроветворение у цыплят при действии стресса- вакцинации против инфекционного ларинготрахеита 47
4.2.Динамика показателей периферической крови под действием стресса-вакцинации у цыплят 30-дневного возраста 58
4.3.Изменения в лейкограмме цыплят под действием стресса-вакцинации их против инфекционного ларинготрахеита 61
4.4.Иммуннореактивность цыплят при вакцинации против инфекционного ларинготрахеита 73
Глава 5. Коррекция стресса, вызванного вакцинацией цыплят против инфекционного ларинготрахеита, аскорбиновой кислотой 79
5.1. Костномозговое кроветворение при вакцинации цыплят против инфекционного ларинготрахеита при применении аскорбиновой кислоты 79
5.2.Мониторинг некоторых показателей периферической крови при иммунизации цыплят против инфекционного ларинготрахеита на фоне применения аскорбиновой кислоты 90
5.3.Изменение некоторых факторов иммунитета цыплят в ходе вакцинации их против инфекционного ларинготрахеита на фоне коррекции стресса аскорбиновой кислотой 116
Заключение 128
Выводы 144
Практические предложения 147
Библиографический список 148
Приложения
- Состояние костномозгового кроветворения, периферической крови и иммунной системы птиц
- Особенности костномозгового кроветворения цыплят 30-дневного возраста
- Костномозговое кроветворение у цыплят при действии стресса- вакцинации против инфекционного ларинготрахеита
- Костномозговое кроветворение при вакцинации цыплят против инфекционного ларинготрахеита при применении аскорбиновой кислоты
Введение к работе
Актуальность темы. Гематологические данные являются существенными элементами характеристики клинико-физиологического статуса организма (Г.И. Козинец, В.А. Макарова, 1998). Вопросы физиологии и функционального реагирования системы крови на различные воздействия факторов внешней среды, в том числе стрессоров, на изменения внутренних свойств в организме птицы очень актуальны. Особый интерес представляют исследования системы крови в период развития иммунных реакций (П.Д. Горизонтов, 1990).
Слабая изученность иммунореактивности кур является причиной, тормозящей выработку эффективных методов профилактики, лечения многих инфекционных болезней (А.П. Стрельников, 1993). По данным Л.А. Венге-ренко (2003) в птицеводческих хозяйствах России регистрируется в ряде территорий среди других болезней инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ). Он наносит значительный ущерб промышленному птицеводству (В.Ф. Макогон, А.И. Диденко, 1991) тем, что на фоне иммунодепрессирующего действия вируса снижается резистентность птицы к другим патогенным факторам. Профилактика болезни складывается из ряда ветеринарно-санитарных мероприятий, в том числе проведения вакцинации птицепоголовья. Сама процедура иммунизации нередко приводит к развитию стрессовых состояний у птиц, отрицательно влияет на формирование поствакцинального иммунитета и способствует развитию осложнений и гибели птиц (И.А. Болотников, 1983). Ряд исследователей (А.Б. Байдевлятов, В.П. Николаенко, Л.А. Ольховик с со-авт., 1979; СИ. Плященко, В.Т. Сидоров, 1987; С.Амброзене, Р. Еараказия, К. Шимкус, 1990 и др.) изучали гистоморфологические характеристики надпочечников, селезенки, тимуса птиц при действии стресс-факторов. Актуальным является комплексное изучение кроветворения и иммунного ответа птиц при сочетанном действии стрессоров.
Для развития полноценного иммунного ответа большое значение имеет возраст вакцинируемой птицы. А. Бочарников с соавт. (2003) оценивали дей-
5 ствие на организм 25-30-дневных цыплят действие различных вакцинных
штаммов вируса ИЛТ, хотя И.М. Карпуть и М.П. Бабина (2000) утверждают, что этот возраст является критическим иммунологическим периодом, в котором чаще регистрируются болезни и гиповитаминозы. По данным Дитера (1971) с третьей по седьмую недели жизни снижается содержание витамина С в лимфоидных органах цыплят. И.А. Болотников с соавт. (1983) результатами своих исследований подтверждали, что наиболее сильное действие тепловой стресс оказал на цыплят в возрасте 30-дней. Поэтому изучение состояния костномозгового кроветворения и иммунных свойств цыплят в возрасте 30 дней является актуальным.
В качестве средств, снижающих патогенное действие вакцинации, используются различные антистрессовые препараты, такие как: яблочный уксус, лимонная кислота, транквилизаторы, антибиотики, растительные биологически-активные вещества, поливитаминные премиксы, группа витаминов А, Е и С (А.Б. Байдевлятов, Л. Куценко, 1979; Н.Н. Coca, Г.А. Красильников, 1990; Ю.В. Зуев, Ю.С. Дутко, А.Т. Кушнир, 1995; Н.А. Саромов, 2003; В.Н. Хаустов, 2003). В доступной литературе крайне мало сведений о применении одной аскорбиновой кислоты для коррекции стресса, вызванного иммунизацией против ИЛТ цыплят 30-дневного возраста.
Цель исследования. Изучение особенностей костномозгового кроветворения и иммунной реактивности цыплят 30-дневного возраста для обоснования профилактики и коррекции с помощью аскорбиновой кислоты стресса, вызванного вакцинацией птицы против инфекционного ларинготра-хеита.
Задачи исследования:
1) изучить особенности костномозгового кроветворения интактных цыплят 30-дневного возраста и при действии вакцинного стресса;
исследовать иммунный статус интактных 30-дневных цыплят и при иммунизации против ИЛТ;
изучить влияние витамина С на кроветворение интактных 30-дневных цыплят и в ходе иммунного ответа их против ИЛТ;
исследовать воздействие аскорбиновой кислоты на показатели иммунной защиты интактных цыплят и при вакцинном стрессе.
Научная новизна. Для оценки активности и особенностей функционирования костномозговой кроветворной ткани и иммунного статуса у 30-дневных цыплят впервые использованы рассчитанные костномозговые, эрит-роцитарные, лейкоцитарные и иммунорегуляторный индексы. Усовершенствован метод определения антигенспецифических лимфоцитов к вирусу ИЛТ кур. В работе впервые прослежена динамика иммунокомпетентных клеток в ходе вакцинации цыплят против ИЛТ. Представлены новые данные о костномозговом кроветворении птиц при действии вакцинного стресса. Показана возможность коррекции аскорбиновой кислотой этого состояния.
Теоретическое значение и практическая значимость работы. Полученные результаты раскрывают ряд закономерностей проявления гемо- и иммунодепрессивных состояний цыплят 30-дневного возраста в зависимости от стадий развития стрессовой реакции при вакцинации их против инфекционного ларинготрахеита. Особенностью костномозгового кроветворения цыплят в возрасте 30 дней является гипоплазия миелоидного и изменение лим-фоидного и эритроидного ростков гемопоэза. Такие сдвиги меняют количественный и качественный состав циркулирующей крови, что во многом обеспечивает снижение как специфической, так и неспецифической резистентности. На фоне гемодепрессии изменяется иммунный статус цыплят изучаемого возраста и чувствительность их к действию стрессоров. Установленные особенности костномозгового кроветворения, некоторых показателей периферической крови и иммунной реакции организма 30-дневных цыплят
7 могут служить методологической основой для оптимизации сроков проведения профилактических мероприятий в птицеводстве. Разработаны диагностические критерии активности кроветворения и степени иммунной защиты цыплят при физиологических и различных патологических состояниях. Они позволяют оценить тяжесть состояния организма, эффективность лечебно-профилактических мероприятий и прогнозировать исход.
Внедрение результатов исследования. Полученные данные используются в научной, учебной и лабораторной практике при проведении занятий со студентами и слушателями ФПК на кафедре нормальной и патологической физиологии ФГОУ ВПО «ОмГАУ», в учебном процессе и при научных исследованиях на кафедре физиологии и биохимии ФГОУ ВПО «Уральская государственная сельскохозяйственная академия».
Основные положения, выносимые на защиту.
У интактных 30-дневных цыплят отмечаются признаки незрелости костномозгового кроветворения и иммуносупрессия.
Вакцинация против ИЛТ влияет как стрессовое воздействие на костномозговое кроветворение и иммунореактивность цыплят.
Витамин С нивелирует последствия стресса, вызванного иммунизацией цыплят против ИЛТ.
Апробация работы и публикация научных исследований. Материалы диссертации доложены и обсуждены на II Российском Конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000); на XVII и XVIII съездах физиологов России (Ростов-на-Дону, 1998; Казань, 2001); на научно-производственных конференциях (Чебоксары, 1994; Барнаул, 2003); на юбилейных научных конференциях (ОГМА, 2000; ОмГАУ, 2000); на ежегодных научно-практических конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов института ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «ОмГАУ» (1996, 1998, 2000); Основные положения диссертации изложены в 9 опубликованных статьях.
Состояние костномозгового кроветворения, периферической крови и иммунной системы птиц
Система крови играет интегрирующую роль (Фред Дж. Шиффман, 2000). Её рассматривают как функциональную систему, в которую входят образование компонентов крови, их разрушение, нормальное функционирование в кровеносных сосудах и регуляция этих процессов (Л.И. Иржак, 2001). Однако на сегодняшний день мало руководств по гематологии птиц, как в нашей стране, так и за рубежом (И.А.Болотников, Ю.В. Соловьев. 1980).
Кроветворная ткань представляет собой постоянно обновляющуюся систему, механизмы регуляции которой действуют в основном по принципу обратной связи. Динамическое равновесие системы крови может быть оценено по количественному и качественному составу периферической крови.
Период жизни зрелых клеток крови в сосудистом русле ограничен, и для их постоянного обновления гемопоэз находится под строгим контролем. Считается, что пролиферацию плюрипотентной стволовой гемопоэтической клетки индуцируют цитокины и стимулирующие рост гормоны, секрети-рующиеся как кроветворными, так и некроветворными клетками. Стабильность обновляющихся тканей, т.е. сохранение устойчивого клеточного равновесия, обеспечивается высокой степенью потери клеток. Обновление базируется на саморегуляции, когда зрелые клетки запрограммированы на быструю гибель (Е.Б. Владимирская, 1993).
Костный мозг - основное место нормального топического кроветворения в постнатальном периоде (Б.В. Афанасьев, СИ. Алмазов, 1985). Именно в костном мозге постоянно существуют и поддерживают свою популяцию стволовые клетки гемопоэза, формируются и начинают свою пролифератив-ную деятельность клетки - предшественники различных ростков гемопоэза. Здесь проходят все стадии дифференцировки и гемоглобинизации эритроциты, а также развиваются клетки миелоидного, лимфоидного и тромбоцитар-ного ряда. В костном мозге обитают стволовые клетки, дающие начало макрофагам, Т-лимфоцитам, В-лимфоцитам - основным факторам специфического иммунитета. Поэтому изучение морфологического состава костного мозга, динамика миелограмм при изменении реактивного состояния организма приобретают значимость.
Прогрессу изучения костномозгового кроветворения во многом способствовал разработанный А.С. Кассирским (1970) способ прижизненного получения пунктата костного мозга. Изучение парциальных миелограмм для оценки состояния здоровья цыплят с помощью усовершенствованного метода прижизненного получения пунктата костного мозга проводил в своих работах В.П. Косых (1980).
Классификация клеток кроветворения опирается на глубокую разработку теории кроветворения, созданную капитальными работами А.А. Максимова (1925), А.Н. Крюкова (1920), А.А. Заварзина (1953) и более поздних работ И.Л. Черткова и А.И. Воробьева (1973), Э.И. Терентьевой, Ф.Э. Файнштейна и Г.И. Козинец (1974). Изучением кроветворения у птиц занимались В. Дан-чакова (1909), И.М. Беляев (1954), С. Шермер (Schermer, 1954), И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев (1980), В.П. Косых (1980).
Постэмбриональное кроветворение у птиц существенно отличается от кроветворения у млекопитающих. А.А. Заварзин (1953) считает, что кроветворение во взрослом организме птиц имеет много общего с эмбриональным кроветворением. Так, очаги гетеротропного кроветворения у птиц при нормальном физиологическом состоянии могут возникнуть практически в любом органе или ткани, которым не свойственны гемопоэтические функции.
Учитывая, что в процессе своего развития гемопоэтические функции костный мозг берет на себя в последнюю очередь, можно предположить о миграции в него зрелых гранулоцитов и нормобластов, а вместе с ними и стволовых клеток из ранее функционирующих экстрамедуллярных участков печени, селезенки и желточного мешка. Оказалось, что не только у эмбриона, но и во взрослом организме стволовые кроветворные клетки находятся в состоянии постоянной репопуляции, т. е. мигрируют из одного кроветворного органа, чтобы прижиться в другом, создавая тем самым единство кроветворной системы (И.Л. Чертков, А.Я. Фриденштейн, 1972).
Отношение числа клеток-предшественников в костном мозге к зрелым клеткам периферической крови остается постоянным всю жизнь. В этом плане костный мозг более быстро отвечает на запрос организма, чем объем циркулирующей крови (Г.И. Козинец, В.А. Макарова, 1998).
Эритропоэз в костном мозге птиц в отличие от млекопитающих протекает интраваскулярно (Лелигер, 1960), и завершающей стадией, на которой клетки красного ряда заканчивают свое развитие, является эритроцит с сохранившемся в нем ядром. Б.А. Гладков (1993) поясняет, что находящийся в костном мозге птиц интраваскулярный резерв эритроцитов и экстраваску-лярный резерв гранулоцитов позволяет компенсировать при необходимости возросшую потребность в этих клетках. И.А. Болотников и Ю.В. Соловьев (1980) утверждают, что у млекопитающих и птиц как у эволюционно молодых групп животных нет единой для всего класса картины крови, она сильно варьирует даже у близкородственных представителей, поэтому нет достаточно обширного гематологического материала особенно при определенных физиологических и патологических состояниях и в онтогенезе. В.А. Верхолето-вым (1965), А.А. Кудрявцевым с соавт. (1969) представлены миелограммы кур и цыплят русской белой породы.
Наличие у птиц рыхлой, неоформленной соединительной ткани, богатой клеточными элементами, обусловливает лимфоцитарный профиль их крови.
Согласно сведениям Е.Б. Владимирской (1993), в костном мозге большое значение имеет выстилка костномозговых балок, на которой располагаются островки кроветворных клеток. Индуктивная функция стромального микроокружения обеспечивается клеточной кооперацией составляющих его элементов, создаются условия, в которых кроветворные клетки проходят все этапы от рождения до выхода в кровяное русло или гибели апоптозом (И.Л. Чертков, 1993). Известно, что в индукции эритропоэза большое значение имеют макрофаги, а для гранулоцитопоэза важен непосредственный контакт гранулоцитопоэтических клеток с фибробластами и их производными -жировыми клетками. Репопуляция (регенерация) клеток - одна из главных функций костного мозга, необходимая для поддержания его клеточной массы и участия в гомеостазе (В.Т. Морозова, 2003). Межклеточное взаимодействие стромальной и гемопоэтической ткани осуществляется в результате их регуляторного влияния друг на друга, участия в ответе на различные раздражители (В.М. Пономаренко, В.И. Ругаль, 1994).
Систему крови в целом характеризует большая лабильность при сохранении постоянства количественного и качественного состава её отдельных звеньев. Это осуществляется путем четкой регуляции, основанной на принципах обратной связи: увеличение клеток в одном из звеньев гемопоэза приводит к адекватному сокращению их числа на предыдущем этапе. Для оценки кроветворения важно не столько процентное содержание каждого элемента гемопоэза, сколько их взаимное соотношение. Судить о составе миело-граммы следует, как указывает Е.Б. Владимирская (1993), по специально рассчитанным костномозговым индексам, характеризующим эти соотношения. Эти индексы рассчитаны для костного мозга людей, некоторых видов сельскохозяйственных животных. В доступной нам литературе сведений об использовании их у птиц нет.
Особенности костномозгового кроветворения цыплят 30-дневного возраста
Кроветворение в костном мозге происходит островками, состоящими из клеток определенного вида. Белый росток кроветворения у цыплят, согласно данным таблицы 2, преобладает и составляет 66,47±1,68%. Усиление белого
ростка кроветворения происходит в основном за счет клеток лимфоидного ряда, преобадающими были зрелые представители. Наличие значительного количества зрелых лимфоцитов в составе костного мозга можно объяснить и рециркуляцией этих клеток с периферии с целью переноса антигенной информации и стимуляции кроветворения. Меньший процент (11,92±0,56%) приходится на клетки псевдоэозинофильного ряда, среди которых только 5,61±0,15% приходится на зрелые палочкоядерные и сегментоядерные формы. Среди предшественников преобладали промиелоциты. Клеток эозино-фильного ряда насчитывалось 2,82±0,24% , большую часть которых (1,3±0,06%) составляли коммитированные клетки - промиелоциты эозино-фильные.
Красный росток кроветворения представлен 31,43±1,63% клеток. Снижение интенсивности функционирования эритрона приводит к развитию анемии у цыплят. Преобладающими были базофильные нормобласты. Изучение парциальных эритробластограмм цыплят 30-дневного возраста показало, что на долю эритробластов приходится 12,8% от всех клеток эритроидно-го ряда, базофильные нормобласты составляют 46,6%, полихроматофильные — 24,9%, а на долю оксифильных приходится 15,7%).
Для оценки эффективности костномозгового кроветворения важно не столько процентное содержание каждого элемента гемопоэза, сколько их взаимное соотношение. О состоянии гемопоэтической функции костного мозга судили по специально рассчитанным костномозговым индексам, характеризующим эти соотношения (табл. 3).
Общий или суммарный эритропоэз оценивается по количеству эритробластов в костном мозге, соотношению их по степени зрелости, пролифера-тивной активности на разных стадиях созревания, величине лейкоэритробла-стического соотношения. Основным событием эритропоэза является синтез гемоглобина, который начинается на стадии базофильного нормобласта. Полихроматофильные нормобласты - последняя генерация в эритропоэтиче-ском ростке, способная к делению.
Индекс созревания нормобластов для цыплят 30-дневного возраста составляет 0,41±0,01. Значение индекса достаточно низкое, что можно объяснить необходимостью выхода этих клеток в периферическое русло для выполнения ими функции в быстро растущем организме цыплят.
Для оценки эритропоэза цыплят рекомендуем использовать еще два индекса: соотношение процентного содержания базофильных нормобластов к эритробластам - индекс созревания базофильных нормобластов (для 30-дневных цыплят равен 3,63±0,24), соотношение полихроматофильных нормобластов к базофильным - индекс созревания полихроматофильных нормобластов (для 30-дневных цыплят равное 0,54±0,03). Эти индексы характеризуют степень пролиферативной активности и гемоглобинизации эритроидных клеток на разных стадиях созревания.
Анализ значений индексов показывает, что у 30-дневных цыплят высокая активность пролиферации наблюдается в ряду базофильных нормобластов, затем снижается в 1,87 раза в ряду полихроматофильных и в 1,6 раза в ряду оксифильных нормобластов. Такая степень пролиферативной активности эритроидных клеток связана, по нашему мнению, с интенсивным ростом и развитием цыплят, затратами энергии и кислорода для метаболических процессов. Кроме того, в этом возрасте у цыплят в периферической крови встречаются полихроматофильные и оксифильные нормобласты, что можно объяснить усиленным вымыванием этих клеток в кровеносное русло.
Лейкоэритробластический индекс вычисляется как соотношение процентного содержания клеток белого и красного ростков кроветворения. У 30-дневных цыплят этот индекс равен 2,12±0,07. Этот индекс показывает преобладание в костном мозге у цыплят клеток белого ростка кроветворения. Индекс созревания псевдоэозинофилов вычисляется по отношению суммы процентов промиелоцитов, миелоцитов, метамиелоцитов к сумме процентов палочкоядерных и сегментоядерных клеток. У исследуемых цыплят индекс равен 1,12±0,05, что говорит о преобладании незрелых форм клеток миелоидного ряда и наличии малого резерва зрелых псевдоэозинофилов в костном мозге, который особенно необходим при функционировании организма в экстремальных условиях.
Индекс созревания эозинофилов вычисляется аналогично предыдущему, равен у испытуемых цыплят 2,85±0,24 и указывает на большую индукцию созревания клеток эозинофильного ряда по сравнению с клетками псевдоэо-зинофильного ряда.
Костномозговое кроветворение у цыплят при действии стресса- вакцинации против инфекционного ларинготрахеита
Вакцинация против инфекционного ларинготрахеита путем нанесения живой вирус-вакцины на конъюнктиву является стрессором для цыплят, особенно 30-дневного возраста. Костный мозг реагирует на изменения в орга низме, которые вызваны процедурой отлова птицы, фиксации её, нанесения вакцины, действия самого вакцинного штамма вируса инфекционного ларин-готрахеита. В таблице 8 отражена миелограмма в динамике иммунного процесса у цыплят. Большое значение для степени проявления стресса имеет исходное состояние организма цыплят. Данные таблицы показывают изменения, характерные для развития стрессовой реакции с некоторыми особенностями. Так, ранняя реакция системы крови - стадия мобилизации у цыплят 30-дневного возраста завершается уже к 24 часам после воздействия стресси-рующего фактора двойного действия (действие механическое — отлов, фиксация, введение антигена; действие биологическое — реакция на вирус инфекционного ларинготрахеита), поэтому стресс можно считать сочетанным.
Сопровождается достоверным (р 0,001) уменьшением содержания в костномозговом пунктате клеток псевдоэозинофильного ряда (10,55±0,36%) на 11,5% относительно исходных данных; снижением (р 0,001) количества клеток моноцитарной группы (2,81±0,09%) на 49,5% относительно фонового значения; плазматических клеток (1,62±0,15%) — на 34,4%; клеток тромбоб-ластического ряда (0,25±0,04%) - на 24,3%. Стало меньше клеток эритроид 51 ного ряда (26,65±1,33%). В целом митотическая активность костномозговых клеток (0,91±0,11%) достоверно ((р 0,001) снизилась на 58,1% относительно фонового значения.
Увеличилась пролиферативная активность и дифференцировка клеток эозинофильного ряда - на 33%, базофильного — на 35,3%. Количество клеток лимфоидного ряда достоверно возросло на 23% относительно фоновых значений в основном - за счет зрелых лимфоцитов. Достоверное снижение значения индекса созревания псевдоэозинофилов на 26,1% показывает интенсификацию дифференцировки предшественников в зрелые клетки под влиянием адреналина, и выход их в периферическую кровь и окружающие ткани для встречи с антигеном. Аналогично снижается значение индекса созревания эо-зинофилов на 6% относительно исходного значения. Но эти клетки накапливаются в костномозговом вместилище в результате блокирования возможности их выхода в кровяное русло по мере действия гормона кортизона. Пролиферация предшественников эозинофильного ряда зависит от активированных Т-лимфоцитов. Увеличение количества клеток лимфоидного ряда в составе костного мозга объясняется возможностью этих клеток рециркулиро-вать для осуществления антигенной стимуляции соответствующих клонов кроветворных клеток в зависимости от вида возбудителя.
Индекс созревания эритронормобластов (0,5±0,02%) увеличивается на 22% от исходного значения, что показывает активизацию пролиферативной функции эритрона и накопления зрелых, насыщенных гемоглобином поли-хроматофильных нормобластов, которые вместе с оксифильными формами эритроцитов могут перемещаться в периферическое русло. Индекс созревания базофильных нормобластов (3,38±0,18%) снижен, а полихроматофиль-ных — увеличен в 2 раза, что доказывает интенсификацию гемоглобинобразо-вания на этой стадии развития эритроцитов.
Лейкоэритробластический индекс в стадию мобилизации достоверно (р 0,001) увеличивается до 2,76±0,015%, что на 30,2% больше довакциналь ного значения. Связано такое изменение с активизацией гранулоцитопоэза и миграцией лимфоцитов из периферической крови в костный мозг.
Таким образом, к концу первых суток изменения в костном мозге носят неспецифический характер (псевдоэозинопения и лимфоцитоз). Второй период реакции системы крови зависит от специфики стрессового воздействия. В нашем эксперименте - это последствия от механического и биологического действия процедуры вакцинации.
Стадия резистентности, начавшаяся к концу первых суток после воздействия стресса - вакцинации у 30-дневных цыплят развивается в дальнейшем снижении пластических процессов в островках костномозгового кроветворения, ответственных за образование псевдоэозинофилов (рис.2.). Количество клеток псевдоэозинофильного ряда до конца изучаемого периода уменьшается с незначительными колебаниями роста на 7 день эксперимента (9,66±0,54%). Количество клеток эозинофильного ряда в стадию резистентности развития стресс-реакции в ходе иммунного ответа на вирус ИЛТ аналогично постепенно снижается, к концу изучаемого периода становится (2,33±0,18)% и составляет 82,6% от исходного значения. Индекс созревания эозинофилов в этот период продолжает снижаться. Минимальное значение отмечалось на 5 день наблюдений и составляло (1,49±0,22), что в 1,9 раза меньше исходного значения и показывает накопление числа зрелых эозинофилов в костном мозге. Эта секвестрация клеток эозинофильного ряда обусловлена продолжительным действием стероидных гормонов, которые снижают их выработку и блокируют выход зрелых эозинофилов в периферическое кровяное русло.
Динамика количества клеток базофильного ряда в костном мозге цыплят при вакцинации мало отличалось от изменения количества клеток эозино-фильной группы. В ходе реакции на вакцинный стресс с пятого дня испытаний достоверно (р 0,001) уменьшается количество этих клеток до 1,01 ±0,12% на 21 день эксперимента, что составляет только 53% от фонового значения. Образование базофильных гранулоцитов в костном мозге зависит от стимулирующего фактора, который образуется активированными антигеном лимфоцитами. Лимфокин Т-эффекторов усиливает хемотаксис базофильных гранулоцитов из костного мозга в периферическую кровь, а из неё -в ткани для создания условий, предотвращающих дальнейшую вирусную агрессию, оказывая эффект «привратника» (Н.М. Бережная, 1983).
Костномозговое кроветворение при вакцинации цыплят против инфекционного ларинготрахеита при применении аскорбиновой кислоты
При изучении влияния витамина С на костномозговое кроветворение цыплят 30-дневного возраста получили следующие результаты. По сравнению с миелограммой цыплят без дополнительной витаминной подкормки, у витаминизированных цыплят количество псевдоэозинофилов (6,69±0,46%) на фоне аскорбиновой кислоты стало меньше в 1,78 раза (р 0,001). Но индекс созревания псевдоэозинофилов составил 1,28±0,04, что на 0,16 выше по сравнению с этим показателем у цыплят без аскорбиновой кислоты. В числе клеток базофильного и эозинофильного ряда отмечалась тенденция к снижению в основном за счет незрелых форм эозинофилов. В целом гранулоцитов (12,29±0,78%) в костном мозге у 30-дневных цыплят на фоне применения аскорбиновой кислоты было достоверно (р 0,001) меньше, чем у цыплят без неё в 1,56 раза. Клеток моноцитарного ряда (1,12±0,14%) насчитывалось меньше в 4,96 раза (р 0,01). Таким образом, у 30-дневных цыплят на фоне аскорбиновой кислоты снижается костномозговой резерв клеточных факторов естественной защиты (микро- и макрофагов), усилена их миграция в кровяное русло и в очаг воспаления. Несколько выше (на 1,62%) количество клеток лимфоидного ряда, в основном за счет зрелых лимфоцитов (35,82±1,4%), которых насчитывали в этой группе цыплят в 1,42 раза больше. Властных клеток (3,94±0,14%) в 2,97 раза меньше, чем в костном мозге у цыплят без применения витамина С. Количество плазматических клеток (5,43±0,19%) оказалось достоверно (р 0,01) больше в 2,2 раза. Лимфопсевдоэозинофиль-ный коэффициент (8,21±0,75) в 2,7 раза выше, чем у цыплят без аскорбата. Митотическая активность клеток (1,09±0,13%) ниже в 1,99 раза. Возможно, аскорбиновая кислота за счет интенсификации метаболических процессов стимулирует дифференцировку и выход гранулоцитов в периферической русло для выполнения свойственных им функций, активирует рециркуляцию лимфоцитов.
Судя по результатам исследований пунктата костного мозга цыплят на фоне применения аскорбата, в белом ростке кроветворения активированы процессы дифференцировки клеток лимфоидного ряда, пролиферации плазматических клеток, что положительно сказывается на деятельности иммунной системы, как клеточного , так и гуморального её звена.
Среди клеток эритроидного ряда у цыплят на фоне применения аскорбиновой кислоты отмечается тенденция к снижению количества эритробластов, базофильных нормобластов, но достоверно (р 0,01) больше насчитывалось полихроматофильных (в 2,13 раза) и оксифильных нормобластов (в 1,68 раза). Индекс созревания нормобластов (0,62±0,01) выше, чем у цыплят первой группы в 1,5 раза. Причем индекс созревания базофильных нормобластов (3,97±0,07) на 0,34, а полихроматофильных нормобластов (1,37±0,03) в 2,53 раза выше, чем у цыплят первой группы. Аскорбиновая кислота улучшает усвоение железа и усиливает дифференцировку клеток эритрона и гемогло-бинобразовательную его функцию. Лейкоэритробластический индекс (1,49±0,03) ниже в 1,4 раза, чем у цыплят без витамина С.
Таким образом, степень гемодепрессии у цыплят 30-дневного возраста на фоне применения аскорбиновой кислоты меньше.
Иммунный статус цыплят при даче витамина С отличался меньшим количеством Т- и В-лимфоцитов (на 4% или 2хЮ9/л и на 2,3% или 1,27 109/л соответственно), Т-хелперов - выше на 5,6%, Т-супрессоров - выше на 6,1% (р 0,01). Аскорбиновая кислота влияет на активизацию хелперного звена.
В периферической крови изменения коснулись в основном уровня гемоглобина (меньше на 3,04 ммоль/л), уменьшено количество эритроцитов (на 0,14x10/л). На фоне аскорбиновой кислоты увеличивается средний объем эритроцитов, но снижены МНС и МСНС (на 20,96 пг и 21,2 г/л соответственно). Достоверность р 0,05.
В динамике вакцинального процесса хорошо заметно, что все изучаемые показатели под влиянием витамина С изменялись следующим образом: высокие значения незначительно снижались, а низкие - увеличивались.
У цыплят, вакцинированных на фоне применения витамина С, через сутки после начала воздействия фактора, вызывающего стресс, отмечали достоверное (р 0,001) увеличение количества недифференцированных бластов на 0,61 %, что связано, по-видимому, со стимулирующим действием коло-ниеобразующих факторов, секретируемых лимфоидными и псевдоэозино-фильными клетками, ответственными за иммунный ответ организма. К 5 дню исследования несколько снижается (на 0,38%) уровень проли-ферирующих стволовых клеток, которые, по-видимому, переходят в этап дифференцировки.
Затем к 7 дню эксперимента в пунктате костного мозга у цыплят второй группы происходит достоверное увеличение количества недифференцированных стволовых клеток до 2,2±0,08 %, что в 2,5 раза превышает фоновые показатели. Но уже к 14 дню и до конца исследований уменьшается количество недифференцированных бластов на 0,21 % и на 0,33 % соответственно ниже фонового значения. Считаем, что такая динамика доказывает активный регенерирующий ответ со стороны полипотентных клеток, отвечающих за создание всех видов клеток, входящих в состав периферической крови и интенсивно востребованных организмом цыплят на формирование специфической резистентности.
В костном мозге у цыплят II группы на фоне дачи аскорбата к 24 часам после начала эксперимента количество миелобластов увеличивается на 0,73 %, что несколько ниже (на 1,04 %), чем у цыплят I группы, у которых это увеличение произошло более резко. Минимальное значение наблюдали на 7 день - 1,65±0,68%, что в 1,46 раза меньше, чем у интактных цыплят. Следует отметить, что кривая динамики миелобластов цыплят, вакцинированных на фоне применения витамина, более плавная, что подтверждает меньшую нагрузку на аппарат кроветворения в результате действия стресса — введения вакцины против ИЛТ.
