Содержание к диссертации
Список сокращений
Введение
Дизайн исследования
ГЛАВА I «Обзор литературы»
1. Фактор роста нервов
1.1. Введение
1. 2. Структура ФРН
1.3. Синтез эндогенного ФРН
1. 4. Рецепторы нейротрофинов
1.4. 1. Trk рецепторы
1. 4. 2. Рецепторы р75
1.5. Биологические эффекты фактора роста нервов.
1.5. 1. Влияние ФРН на периферическую нервную систему
1.5.2. Влияние ФРН на центральную нервную систему
1.5.3. Влияние ФРН на ткани, не относящиеся к нервнойсистеме
1.6. Клиническое применение ФРН
2. Наночастицы - средство направленного транспорта лекарств
2.1. Введение
2. 2. Модифицирование поверхности наночастиц
2.3. Наносистемы как средство направленного транспорта лекарств в центральную нервную систему
2. 3. 1. Транспорт полярных веществ в мозг
2. 3. 2. Транспорт пептидов через гематоэнцефалический барьер
2. 3. 3. Транспорт лекарственных веществ - субстратов Р-гликопротеина в мозг
ГЛАВА II «Материалы и методы»
1. Материалы и методы, используемые для получения и оценки качества экспериментальной лекарственной формы
1.1.Материалы и методы, используемые для синтеза полибутилцианоакрилатных наночастиц
1.1.1. Вещества и реактивы, используемые для синтеза ПБЦА-наночастиц
1.1.2. Методы, используемые для синетза ПЦА-наночастиц
1.1.3. Материалы и методы для оценки качества полученных ПБЦА-наночастиц
1.1.3.1. Изучение стабильности ПБЦА-наночастиц
1.1.3.2. Ресуспендируемость
1.1.3.3. Определение размеров наночастиц
1.1.3.4. Электронно-микроскопическое изучение формы и размеров наночастиц
1.2. Материалы и методы, используемые для получения наосомальной формы ФРН
1.2.1. Вещества и реактивы
1.2.2. Методика сорбции ФРН на поверхности ПБЦА-наночастиц
1.2.2.1. Приготовление суспензии наночастиц с сорбированным ФРН
1.2.2.2. Приготовление суспензии наночастиц с сорбированным ФРН, покрытых ПС-80
1.2.3. Определение степени сорбции ФРН на поверхности ПБЦА- наночастиц
2. Материалы и методы, используемые при изучении возможности направленного транспорта ФРН через ГЭБ с помощью ПБЦА-наночастиц, покрытых ПС-80
2. 1. Животные
2.2. Изучение проникновения ПБЦА наночастиц через ГЭБ.
2.2.1. Морфологическое исследование наночастиц в головном мозге с помощью флуоресцентной микроскопии.
2.2.2. Морфологическое исследование наночастиц вголовном мозге с помощью электронной микроскопии.
2.3. Изучение направленного транспорта ФРН через ГЭБ спомощью ПБЦА-наночастиц, покрытых ПС-80, в тесте УРПИ
2.3.1. Вещества и материалы
2.3.2. Приготовление рабочих растворов
2.4. Введение тестируемых лекарственных форм
2.4.1. Внутривенное введение исследуемых веществ
2.4.2. Интраназальное введение исследуемых веществ
2.5. Индицирование острой амнезии у мышей
2.6. Условный рефлекс пассивного избегания
2.6.1. Экспериментальная установка
2.6.2. Выработка УРПИ и его оценка
3. Количественное определение ФРН в тканях мозга экспериментальных животных
3.1. Подготовка проб
3.2. Приготовление гомогената-лизата ткани головного мозга
3.3. Иммуноферментный анализ
3.3.1. Приготовление реагентов
3.3.2. Схема проведения анализа
ГЛАВА III «Получение экспериментальной лекарственной формы и оценка ее качества»
1 .Синтез полибутилцианоакрилатных наночастицІ- .
1.1 .Выбор условий проведения синтеза ПБЦА-наночастиц
1.1.1. Выбор скорости перемешивания
1.1.2. Выбор стабилизатора и его концентрации
1.1.3. Выбор рН полимеризационной среды
1.2. Схема синтеза ПБЦА-наночастиц
2.0ценка качества полученных наночастиц
2.1. Изучение стабильности ПБЦА-наночастиц
2.2. Ресуспендируемость
2.3.Определение размеров наночастиц с помощью фотонной корреляционной спектроскопии
2.4. Электронно-микроскопическое изучение формы и размеров наночастиц
2.4.1. Определение формы и размеров наночастиц методом трансмиссионной электронной микроскопии
2.4.2. Изучение абсорбции полисорбата-80 на поверхности ПБЦА-наночастиц
2.4.3. Разработка метода контрастированеия ПБЦА-наночастиц
2.4.3.1. Контрастирование ПБЦА наночастиц.
2.4.3.2. Изучение абсорбции полисорбата на поверхности контрастированных ПБЦА-наночастиц.
3. Получение наносомальной формы ФРН
3.1. Сорбция ФРН на поверхности ПБЦА-наночастиц
3.2. Определение степени сорбции ФРН на поверхности ПБЦА-наночастиц
Заключение по главе ІП
Выводы к главе III
ГЛАВА IV «Изучении возможности направленного транспорта ФРН через ГЭБ с помощью ПБЦА-наночастиц, покрытых ПС-80»
1. Морфологическое исследование наночастиц в головном мозге экспериментальных животных
2. Изучение антиамнестического эффекта ФРН в различных тестируемых экспериментальных лекарственных формах в условии острой амнезии у мышей
2.1. Внутривенное введение тестируемых веществ
2. 2. Интраназальное введение тестируемых веществ
3.Количественное определение ФРН в тканях мозга экспериментальных животных
3.1. Внутривенное введение тестируемых веществ
3.2. Интраназальное введение тестируемых веществ
Заключение по главе IV
Выводы к главе IV
ГЛАВА V «Обсуждение результатов»
1. Получение экспериментальной лекарственной формы и оценка ее качества
2. Изучении возможности направленного транспорта ФРН через ГЭБ с помощью ПБЦА-наночастиц, покрытых ПС-80
Заключение
Выводы
Список литературы
Введение к работе
Коррекция и терапия патологий центральной нервной системе (ЦНС) представляется особенно значимой проблемой. Многие потенциально эффективные лекарственные вещества (противоопухолевые и противомикробные препараты, соединения пептидной природы и др.) не проникают через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и, следовательно, не могут использоваться в клинике с целью лечения заболеваний ЦНС [82, 98, 112, 148,163,165,189].
Для направленной доставки лекарственных веществ в мозг было предложено несколько способов, среди которых осмотическое открывание ГЭБ, подавление функций Р-гликопротеина, внутримозговое и интраназальное введения, использование генетически модифицированных вирусных векторов и магнитовоосприимчивых систем доставки и липосомальных форм лекарств [1, 2, 8, 12, 13, 15, 53, 60, 69, 77, 157, 158, 159, 162, 170, 193]. Весьма перспективным для решения поставленной задачи является применение нанотранспортных систем, а именно полимерных наночастиц [8, 10, 40, 41, 71, 100, 137]. Субмикронные размеры наночастиц предоставляют возможность преодоления физиологических барьеров и достижения различных тканей с последующим результативным клеточным захватом [ПО, 124, 143, 164]. Кроме того, включение лекарственного вещества в нанотранспортную систему позволяет модифицировать и контролировать характеристики их высвобождения. Известно, что покрытие наночастиц полисорбатом-80 способствует их проникновению через ГЭБ, что позволяет доставить частицы к мозгу при их системном введении [21, 102, 106].
Способность полимерных частиц, покрытых полисорбатом-80, доставлять лекарственные вещества в мозг, показана на примере таких препаратов, как даларгин и др. аналоги энкефалинов (пептиды) [4, 16, 97], тубокурарин и прозерин (полярные соединения) [3, 6, 11], лоперамид и доксорубицин (субстраты для Р-гликопротеина) [5, 78].
В последнее время все большее внимание уделяется нейротрофическим факторам [45, 74]. Нейротрофины - факторы роста нервной ткани, семейство белков, относящееся к классу цитокинов. Наиболее изученным нейротрофином является фактор роста нервов (ФРН) [115]. ФРН регулирует выживаемость симпатических и чувствительных нейронов периферической нервной системы, а также холинергических нейронов ЦНС [61, 127, 138]. Кроме того, ФРН влияет на выделение медиаторов (ацетилхолина, глутамата и др.) в нервно-мышечных синапсах и синаптосомах гиппокампа [181, 187].
Потеря холинергических нейронов является одной из наиболее весомых причин развития нейродегенеративных заболеваний, учитывая это, весьма перспективным является применение ФРН для терапии ряда патологий ЦНС [9, 52]. Существенным моментом, ограничивающим применение ФРН в клинике, является его низкая способность проникать через ГЭБ ввиду гидрофильности и высокой молекулярной массы [45].
Для преодоления этого препятствия использовали такие способы, как интраназальное введение и введение ФРН в желудочки мозга, использование генотерапии, липосомальных систем доставки, а также введение конъюгированных форм ФРН [53, 69, 75, 121, 186, 193]. Не все из предложенных подходов обеспечивают транспорт ФРН в ЦНС, кроме того, некоторые из них имеют ряд существенных недостатков, таких как инвазивность, риск развития кровотечений и образования гематом, риск развития опухоли (при трансплантации генетически модифицированных клеток), возможность развития хронического болевого синдрома, необходимость присутствия медицинского персонала и. т. д. [53, 75, 186, 193]. Исходя из данных современной литературы, можно заключить, что на сегодняшний день нет приемлемого способа направленного транспорта лекарств через ГЭБ, способствующего внедрению в клинику ФРН [45, 75].
![Использование противоспаечного интерсид-барьера при лапароскопических операциях у гинекологических больных [Электронный ресурс]](/i/i/4330/181321.png "Использование противоспаечного интерсид-барьера при лапароскопических операциях у гинекологических больных [Электронный ресурс] Глухов Евгений Юрьевич")
