Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Ботаническая, биохимическая и фармакологическая характеристика. видов рода nepeta (котовник) сем. lamiaceae (яснотковые) 9
1.1 Систематическое положение сем. Lamiaceae среди цветковых растений 9
1.2 Современное состояние системы рода Nepeta и его положение в сем. Lamiaceae 11
1.3 Распространение видов рода Nepeta в мировой флоре 14
1.4 Культура некоторых видов рода Nepeta 16
1.5 Получение новых гибридов котовника для селекции 19
1.6 Химический состав видов рода Nepeta 21
1.6.1 Содержание и состав эфирных масел видов рода Nepeta 21
1.6.2 Содержание других биологически активных веществ в видах рода Nepeta (Котовник) 24
1.7 Использование видов рода Nepeta в народной и научной медицине 28
1.7.1 Использование в народной медицине 28
1.7.2 Использование в научной медицине 31
1.8 Использование видов Nepeta в народном хозяйстве 32
Глава 2 Фармакогностическое исследование травы (сырья) котовника крупноцветкового 35
2.1 Морфолого-анатомическое изучение надземной части котовника крупноцветкового (Nepeta grandiflora) 35
2.1.1 Морфологическое изучение котовника крупноцветкового 35
2.1.2 Анатомическое изучение вегетативных органов котовника крупноцветкового 36
2.2 Фитохимический анализ травы котовника крупноцветкового 44
2.2.1 Изучение качественного состава основных групп БАВ1 сырья котовника крупноцветкового 44
2.2.2 Изучение количественного состава основных групп БАВ сырья котовника крупноцветкового 46
2.2.2.1 Количественное определение кислоты кофейной в траве котовника крупноцветкового 48
2.2.2.2 Количественное определение флавоноидов в траве котовника крупноцветкового.. 49
2.2.2.3 Аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового 51
2.2.2.4 Макро- и микроэлементный состав травы и корней котовника крупноцветкового 52
2.2.2.5 Изучение компонентного состава эфирного масла котовника крупноцветкового 54
2.2.3 Определение числовых показателей травы котовника крупноцветкового 56
2.3 Прогноз природных ресурсов травы котовника крупноцветкового в Карачаево-Черкесской Республике 58
2.3.1.Выявление площадей зарослей и запаса котовника 58
Глава 3 Разработка технологии сухого экстракта из травы котовника крупноцветкового и его стандартизация 63
3.1 Изложение технологического процесса 63
3.2 Разработка методик стандартизации сухого экстракта котовника крупноцветкового 70
3.3 Характеристика готового продукта 74
Глава 4 Изучение антимикробного действия водного настоя и экстрактов котовника кругшоцветкового 79
Глава 5 Фармакологическое изучение сухих экстрактов котовника крупноцветкового 82
5.1 Материалы и методы исследования 82
5.2 Изучение острой токсичности сухого экстракта травы котовника крупноцветкового... 82
5.3 Изучение ранозаживляющего действия экстракта котовника крупноцветкового 83
5.4 Изучение противовоспалительной активности .85
Общие выводы 87
Список литературы 89
- Современное состояние системы рода Nepeta и его положение в сем. Lamiaceae
- Фитохимический анализ травы котовника крупноцветкового
- Разработка методик стандартизации сухого экстракта котовника крупноцветкового
- Изучение антимикробного действия водного настоя и экстрактов котовника кругшоцветкового
Введение к работе
Актуальность проблемы. Одним из приоритетных направлений поиска новых растительных источников биологически активных веществ является изучение дикорастущих видов флоры России, запасы которых достаточно велики. Такой подход будет обеспечивать долгосрочную надежную сырьевую базу, позволит рационально использовать эти растительные ресурсы и даст возможность расширить ассортимент лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на их основе.
Основным источником информации для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения, особый интерес представляют растения сем. Lamiaceae (яснотковые). Виды из известных родов Mentha, Salvia, Thymus , Melissa ,Leonurus, Scutellaria, Rosmarinum, Hyssopus, Lavandula и др. уже давно прочно вошли в арсенал официального лекарственного растительного сырья не только в зарубежных странах, но и в России.
Одним из таких перспективных и недостаточно изученных растений является котовник крупноцветковый (Nepeta grandiflora Bieb.), который во флоре Карачаево-Черкесской Республики (КЧР) является самым распространенным видом в сем. яснотковых. У народов КЧР котовник крупноцветковый используется как отхаркивающее средство; траву в виде чая пьют как общеукрепляющее средство и при анемии.
Недостаточная фармакогностическая и фармакологическая изученность этого интересного растения не позволяет до сих пор использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение сырья (травы) к. крупноцветкового является перспективным и актуальным.
Цель и задачи исследования. Целью нашей работы является фармакогностическое изучение сырья (травы) котовника крупноцветкового, выявление запасов сырья на территории КЧР, выявление возможности производства экстракционных препаратов и изучение их фармакологического действия, а также стандартизация сырья и сухого экстракта на его основе.
Для достижения поставленной цели должны быть решены следующие задачи:
-
Выявить характерные места произрастания и определить запасы сырья котовника крупноцветкового на территории КЧР.
-
Изучить качественный и количественный состав основных групп биологически активных веществ (БАВ) травы котовника крупноцветкового.
-
Разработать методы нормирования подлинности (выявление характерных анатомо-диагностических признаков) и качества (содержания основных групп БАВ) сырья (травы) котовника крупноцветкового.
-
Обосновать технологию сухого экстракта и разработать нормы его качества.
-
Провести фармакологические исследования водного настоя и водно-спиртового экстракта котовника крупноцветкового.
-
Составить соответствующую нормативную документацию (НД) на траву котовника крупноцветкового и экстракт сухой.
Научная новизна. В результате экспедиционных обследований основных горных районов КЧР выявлены места произрастания и определены ориентировочные запасы сырья котовника крупноцветкового. Установлено, что объем возможных ежегодных заготовок на территории КЧР составляет около 12 т. воздушно-сухого сырья.
Методом ВЭЖХ в траве котовника крупноцветкового (экстрагент – спирт этиловый 70%) впервые идентифицированы и количественно определены 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, дикумарин, кумарин. Установлено, что доминирующими соединениями в полифенольном комплексе являются кислота кофейная (24,16%) и кислота салициловая (22,66%).
Методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный химический состав эфирного масла котовника крупноцветкового. Идентифицированы 38 соединений, среди которых доминирующими являются бициклический монотерпен 1,8-цинеол (39,91%) и сесквитерпен кариофиллен-оксид (32,83%).
Впервые спектрофотометрическим методом установлено содержание флавоноидов в различных частях растения: наибольшее содержание обнаружено в листьях (до 0,217%), наименьшее – в корнях (0,024%); в траве содержание флавоноидов может достигать 0,165%.
Впервые методом колоночной жидкостной хроматографией изучен аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового, который представлен 15 аминокислотами, из которых 9 (валин, треонин, метеонин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин, аргинин) являются незаменимыми.
Впервые полуколичественным спектральным анализом изучен макро- и микроэлементный состав травы котовника крупноцветкового. В траве определено содержание 27 элементов. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальными: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.
Разработана стандартизация сырья (травы) котовника крупноцветкового, определяющая показатели подлинности и доброкачественности сырья.
Предложена оптимальная технология сухого экстракта (экстрагент – спирт этиловый 70%) из травы к. крупноцветкового и методы его стандартизации. Разработана методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5%.
Фармакологический скрининг водного настоя травы (I) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол, II) выявили антимикробную (I), ранозаживляющую (II) и противовоспалительную (II) виды активности.
Практическая значимость. Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья – травы котовника крупноцветкового для получения БАВ, обладающих противомикробным, ранозаживляющим и противовоспалительным действием.
У водного настоя травы котовника крупноцветкового (10:200) выявлено антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. У экстрактов (70% и 40% этанол) кроме отмеченного, выявлено также антимикробное действие и на спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus.
Фармакологический скрининг в опытах на животных позволил установить, что сухие экстракты (70%, 40% этанол) в дозе 30 мг/кг проявляли ранозаживляющую и противовоспалительную активность.
Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлены проекты ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой» (подтверждены актами внедрения от 09.04.07), позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид лекарственного растительного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ, для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции на ЗАО «Вифитех» (Россия).
Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 53-й, 54-й, 56-й, 57-й и 58-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001, 2002, 2003 гг.), материалах Всероссийской научно-практической конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 2002). По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА (номер государственной регистрации 01.200.112164) в рамках темы «Разработка лекарственных средств и их рациональное использование», согласно договору 016/146/050 между Министерством здравоохранения и социального развития РФ и Пятигорской ГФА.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Результаты изучения распространения котовника крупноцветкового на территории КЧР и определение его запасов и объема возможных ежегодных заготовок.
-
Результаты фитохимического изучения содержания основных биологически активных веществ в траве к. крупноцветкового.
-
Данные по изучению подлинности (анатомо-диагностические признаки сырья) и качества (содержание флавоноидов) травы котовника крупноцветкового.
-
Методики качественного и количественного состава сырья (травы) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол).
-
Результаты доклинического изучения водного настоя (1:20) и сухого экстракта (70% этанол) из травы котовника крупноцветкового по выявлению антимикробного, ранозаживляющего и противовоспалительного действия.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах текста в компьютерном наборе, состоит из введения, обзора литературы и четырёх глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 224 источника, в том числе 36 иностранных; содержит 17 таблиц, 14 рисунков и приложение.
Современное состояние системы рода Nepeta и его положение в сем. Lamiaceae
Род Nepeta вместе с другими родами: Glechoma L., Dracocephalum L., Lalle-mantia(Fisch. et Mey, Hymenocrater Fisch. et Mey. составляет трибу Nepeteae Benth. По своему объёму (212-250 видов) он занимает главное место в трибе Nepeteae Benth. [20, 201].
Ареал видов этого рода охватывает некоторые острова Макаронезийского архипелага, страны Средиземноморья (включая Африканское побережье), большую часть Европы (за исключением северных её районов), умеренные районы Азии, а также северо-восток Африки. К территориям с наибольшей концентрацией видов рода Nepeta можно отнести Юго-Западный Китай (восточную окраину Тибета, Сы-чуаньские Альпы, часть Юньнаньского надгорья), Западные Гималаи (Кашмир, Читрал), Иранское надгорье, Гиндукуш, Горную Среднюю Азию, Анатолийское надгорье, а также Западное Средиземноморье [206, 217, 224].
Виды рода Nepeta приурочены, в основном, к горным территориям и произрастают от предгорий до высокогорий. Некоторые виды нередко выступают в качестве эдификаторов сухих степных и петрофильных группировок. Многие виды секций Capituliferae (Benth.) Pojark., Denudatae (Briq.) A. Budantz., Micrantae (Boiss.) Pojark. и Micronepeta Benth. входят в состав пустынной и полупустынной растительности.
Род Nepeta относится к трудным в систематическом отношении родам. С одной стороны, наиболее характерные и используемые в систематике сем. Lamiaceae морфологические особенности цветков у этого рода довольно однообразны. С другой - некоторые группы видов из разных секций рода Nepeta образуют чрезвычайно полиморфные комплексы, внутри которых ограничение отдельных рас осложняется процессами гибридизации и переходами к облигатной или смешанной двудомности растений.
Существует два принципа классификации видов рода Nepeta. В одном подходе, разработанном G. Bentham [20, 101, 159, 206, 217, 224], предусматривается деление рода на секции, которые различаются по набору таких признаков, как жизненная форма; форма соцветий, чашечки, относительные параметры венчика, форма его губ, и реже по морфологическим особенностям вегетативных органов. С некоторыми дополнениями и незначительными изменениями точка зрения G. Bentham была принята ещё некоторыми ботаниками.
В другом подходе, предложенном I. Hedge и J. Lamond, и использованном при обработке рода Nepeta для «Флоры Турции», был отказ от выделения секций и подсекций и классификации видов на удобные для разграничения группы без определённого таксономического ранга. Главной причиной, побудившей этих авторов перейти к иной системе классификаций, являлась размытость границ многих секций рода Nepeta [206].
Однако А.Л. Буданцев, занимающийся систематикой рода Nepeta, придерживается традиционного подхода в классификации его видов. В его конспект рода Nepeta включено 212 видов, составляющих 19 секций, различающихся-по совокупности признаков [20] (табл. 2).
Фитохимический анализ травы котовника крупноцветкового
Устьица расположены как на верхней, так и на нижней (больше) эпидерме и имеют диацитный тип.устьичного аппарата. На верхней и нижней эпидерме встречаются три типа волосков: 1) двух-трех-клеточные с бородавчатой поверхностью, 2) мелкие, сосочковидные, 3) головчатые на одноклеточной ножке. Вдоль жилок листа преимущественно располагаются многоклеточные волоски [70] (рис. 5).
Эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками. При действии реактивом Судан III капельки эфирного масла окрашивались в розовый цвет.
Таким образом, для листа к. крупноцветкового характерно наличие следую щих характерных признаков: диацитный тип расположения околоустьичных клеток, три типа волосков - бородавчатые, сосочковидные и головчатые, эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками [31].
Черешок на поперечном срезе имеет трапециевидную форму (рис. 6). Он имеет слегка вогнутую верхнюю поверхность, выпуклую нижнюю поверхность и хорошо выступающие края, Покровная ткань черешка, также как и листа, представлена однорядным слоем эпидермы, сверху покрытой небольшим слоем кутикулы.
На эпидерме расположены простые многоклеточные однорядные волоски и короткие головчатые (железистые). Под эпидермой расположен слой механической ткани, представленный уголковой колленхимой. Под верхней эпидермой колленхима представлена 1-2 слоями клеток, под нижней — слоев колленхимы больше (2-3). По выступающим краям черешка клеток колленхимы ещё больше. Иногда наблюдалось, что колленхима заполняет весь выступ.
Проводящая система черешка представлена открытыми, коллатеральными пучками. В центре черешка располагается самый большой — центральный пучок, по бокам - два маленьких пучка. Ксилема в пучках ориентирована к верхней стороне черешка. В ней сосуды располагаются радиальными рядами, между которыми имеются мелкие одревесневшие клетки склеренхимы. Флоэма в пучке прилегает с нижней стороны к ксилеме. Ее клетки мелкие, тонкостенные, 5-6-угольной формы, плотно расположенные друг к другу.
Вся остальная часть черешка заполнена клетками основной паренхимы. По своей форме они больших размеров, тонкостенные и плотно расположенные друг к другу. Размеры клеток основной паренхимы уменьшаются при приближении к про-водящим пучкам (рис. 6).
Таким образом, черешок котовника крупноцветкового на поперечном срезе имеет трапециевидную форму. На однорядной эпидерме расположены 2 типа волосков: простые многоклеточные и короткие головчатые. Проводящая система представлена 3 открытыми коллатеральными пучками: 1 большой, центральный; 2 маленьких, боковых.
Стебель на поперечном срезе имеет четырехгранную форму с выступами, внутри заполненными колленхимой. Покровная ткань представлена однорядным слоем эпидермы, снаружи покрытой небольшим слоем кутикулы, в некоторых местах образующей складки. На эпидерме редко встречаются головчатые (железистые) волоски. Под эпидермой располагается механическая ткань, представленная колленхимой, которая особенно хорошо выражена в четырёх больших выступах стебля (рис. 7).
Под колленхимой расположена кора, которая выражена очень незначительно. Её паренхимные клетки имеют натуральную желтую окраску, которая под действием раствора натрия гидроксида принимает более интенсивное окрашивание. Проводящая система стебля представлена открытыми коллатеральными пучками, расположенными прерывистым кольцом. Проводящие пучки стебля, расположенные в углах (4 пучка) по своим размерам превышают остальные пучки в 2-3 раза.
Разработка методик стандартизации сухого экстракта котовника крупноцветкового
Основными показателями качества сухих экстрактов являются подлинность, влажность, количественное содержание суммы действующих веществ. Большое значение имеют также описание и. растворимость. Раздел «Описание» в- проекте ФС или ФСЛ должен отражать основные визуальные и органолептические характеристики препарата с учетом того, что растительные экстракты очень часто имеют, помимо основных цветов, оттенки того или иного цвета, способные при анализе вызвать затруднения в оценке подлинности препарата.
Растворимость - также важная характеристика, так как сухие экстракты — это чаще всего сложная многокомпонентная смесь веществ различной природы. Растворимость сухих экстрактов зависит от природы доминирующих в его составе веществ,, экстрагента (крепости этилового спирта), параметров сушки, условий и сроков хранения препарата (субстанции).
Для оценки подлинности сухого экстракта котовника крупноцветкового мы предлагаем две химические реакции и один спектральный анализ, позволяющие оценить наличие в его составе фенольных веществ (фенолокислоты, фенолоспирты), терпеноидов (ди- и тритерпеноидов) и флавоноидов.
Изучение химического состава полифенольного комплекса травы котовника крупноцветкового методом ВЭЖХ показало, что в состав полифенольной фракции в качестве основных БАВ входят флавоноиды, фенолокислоты и кумарины [180]. Идентификация и количественная оценка проводилась по величинам индексов удерживания относительно внутреннего стандарта (табл. 13).
Из данных, представленных в табл. 13 видно, что значительная доля (более 60%) в составе полифенольного комплекса котовника крупноцветкового принадлежит фенолокислотам (кофейная, салициловая, хлорогеновая, феруловая), обладаю-щим противовоспалительной, спазмолитической и жаропонижающей активностью. Немалую часть (более 10%) занимают флавоноиды, производные кверцетина. Содержание кофейной кислоты, определенное методом внутренней нормализации в траве котовника крупноцветкового превышает 1%.
Исследования химического состава экстракта котовника крупноцветкового позволили обнаружить, кроме флавоноидов, значительное количество терпеновых производных, приобретающих характерное окрашивание при протонировании в среде безводных уксусного ангидрида и конц. серной кислоты [2].
В анализе флавоноидов в сухом экстракте котовника нами применена так называемая сквозная стандартизация, когда раствор, предназначенный для количественного определения, сначала проверяется по разделу «Подлинность» на наличие анализируемых веществ. Такой подход позволяет достоверно и полнее оценить качество стандартизуемого препарата [116,135].
Так, для объективного анализа флавоноидов, сначала необходимо обнаружить наличие максимума поглощения при длине волны 405 нм±3 нм у раствора, приготовленного для количественного определения. Определение флавоноидов в экстракте котовника мы предлагаем осуществлять по методике дифференциальной спектр офотометрии комплексов флавоноидов с алюминия (III) хлоридом в слабокислой среде, позволяющей быстро и достоверно оценить содержание флавоноидов в препарате в присутствии сопутствующих веществ [14].
В таблице 14 представлены результаты шести определений в одном образце сухого экстракта котовника крупноцветкового, обработанные статистически.
Изучение антимикробного действия водного настоя и экстрактов котовника кругшоцветкового
Для определения антимикробной активности травы котовника крупноцветкового мы готовили водный настой. Для этого 5,0 г измельченной травы котовника заливали 100 мл воды очищенной и нагревали на водяной бане в течение 15 минут. Настой охлаждали 30 минут, фильтровали, объем доводили до 100 мл (настой № 1). Для сравнения нами использовался водный настой листьев эвкалипта прутовидного (настой № 2), приготовленный аналогичным способом. Определение антимикробной активности котовника крупноцветкового проводили методом диффузии в агар (способ «колодцев»). Метод основан на оценке угнетения роста тест-микроорганизмов определенными концентрациями испытуемого средства. Для установления антимикробной активности мы использовали 24-часовые тест-культуры, выращенные на скошенном мясопептонном агаре (МПА). Микробные культуры с МПА смывали 2-3 миллилитрами физиологического раствора и готовили взвесь, содержащую 500 млн. микробных тел в 1 мл по стандарту мутности. На поверхность агара в чашках Петри одинакового диаметра делали посев сплошным газоном стандартных взвесей используемых тест-культур. Для этого 2 мл взвеси помещали в чашку Петри, взвесь газоном распределяли по поверхности, а излишки взвеси полностью удаляли. Стерильным сверлом диаметром 6 мм делали 6 лунок («колодцев») на расстоянии 2,5 см от центра и на одинаковом расстоянии друг от друга. В три-лунки через одну вносили 0,1 мл испытуемое вещество в соответствующем растворителе, а в три оставшиеся лунки -растворитель в соответствующей концентрации (контроль). Под крышку чашки Петри помещали стерильный фильтр; во избежание попадания конденсата на лунки. Все чашки Петри ставили в термостат (37 С) на 18-20 часов строго горизонтально для получения-круглых зон угнетения роста микрофлоры. После инкубации диаметр зон угнетения роста измеряли с помощью миллиметровой линейки. Оценка результатов проводилась по диаметру зон задержки роста вокруг «колодца», включая диаметр самого «колодца»: отсутствие зоны задержки роста — испытуемая культура не чувствительна к данной концентрации препарата; диаметр зоны задержки роста 10 мм - умеренная чувствительность культуры к данной концентрации препарата; диаметр зоны задержки роста более 10 мм — высокая чувствительность испытуемой культуры к данной концентрации препарата. Результаты определения антимикробного действия представлены в табл. 16. Результаты проведенных микробиологических исследований свидетельству-ют, что водные настои эвкалипта прутовидного (контроль) и котовника крупноцветкового (опыт) обладают сходным спектром антимикробного действия. Оба настоя обладают выраженным антимикробным действием в отношении грамположитель-ных кокков из рода Staphylococcus. В то же время-антибактериальное действие в отношении энтеробактерий более сильное у водного настоя эвкалипта прутовидного, поскольку он угнетает рост Shigella flexneri 266 и Shigella sonnei, двух исследуемых штаммов энтеробактерий. Водный настой котовника крупноцветкового угнетает рост только Shigella sonnei, наиболее распространенных в настоящее время возбудителей дизентерии (табл. 16). В отношении грамположительных спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus у обоих водных настоев не выявлено антимикробного действия (табл. 16). У экстрактов котовника крупноцветкового (спирт этиловый 70% и 40%) выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus. В отношении энтеробактерий: у исследуемых двух экстрактов, полученных из травы котовника крупноцветкового, не выявлено антимикробного действия в отношении Escherichia coli 675 и Escherichia 055 [114]. 1. Водные настои травы котовника крупноцветкового и листьев эвкалипта прутовидного обладают сходным спектром антимикробного действия в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и энтеробактерий Shigella. 2. У экстрактов котовника крупноцветкового (спирт этиловый 70% и 40%) выявлено также антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus. Однако у них не выявлено антибактериального действия в отношении видов Escherichia coli 675 и Escherichia coli 055.
