Введение к работе
Актуальность проблемы Рак кожи составляет примерно 1/3 всех опухолей человека [Boring ее et al., 1991]. При этом 75% раковых опухолей кожи приходится на долю базальноклеточного рака (БКР) [dies GG et al., 1988], заболеваемость которым в последние годы неуклонно растет [Курдина М. И. с соавт., 1992, Coebergh jw et al., 1991]. Обычно БКР характеризуется относительно доброкачественным течением, в разной степени выраженным местнодеструирувдим ростом и редким метастазированием [Апатенко А. К, 1973, Miller SJ, 1991]. В то же время частота рецидивирования этой опухоли варьирует от I до 39% случаев [Silverman МК, 1991]. Причины рецидивов и метастазирования БКР пока не находят должного объяснения. Ряд авторов отмечают определенную ассоциацию частоты рецидивирования с некоторыми гистологическими типами БКР (тип морфеа)[оі xon AY et a 1., 1989, Miller SJ.I99I]. В большинстве же метастазирующих опухолей находят признаки характерные для метатипического рака (МТР) кожи [Domarus A et al., 1984]. Клинически дифференцировать БКР и МТР кожи практически невозможно [Богатырева НИ. ,1984], а при патоморфологическом исследовании часто возникают трудности, обусловленные сходством их гистологического строения и необходимостью изготовления серийных срезов с биоптата [Богатырева И. И., 1984, de Faria L,I99I]. Вместе с тем дифференциальная диагностика БКР и МТР кожи имеет важное значение как для их прогноза, так и адекватного лечения [Снарская ЕС. ,1991, de Faria L, 1991]. В этой связи весьма актуальным является поиск дополнительных маркеров, способствующих не только
объективизации дифференциальной диагностики БКР и МТР кожи, но и уточнению характера опухолевого роста.
Одним из ключевых признаков агрессивного роста опухоли является высокая пролиферативная активность клеток [Hall РА, Levi son DA, 1990]. Ранее было показано, что митотический индекс клеток МТР кожи значительно выше, чем БКР [Казанцева И. А. с соавт., 1983, Богатырева И. И., 1984]. Поэтому представляются целесообразными дальнейшие исследования пролиферативной активности различных вариантов БКР и МТР кожи с применением современных маркеров пролиферации. С этой целью могут быть использованы антитела к антигену ядер пролиферирующих клеток (АЯПК), которые, в отличие от других известных маркеров пролиферации, выявляют на парафиновых срезах клетки, находящиеся в Gj, s, G2 фазах и начале митоза, а не только в s-фазе клеточного цикла [Allegranza A et al., 1991].
Другими клеточными маркерами, способными различать "агрессивные" формы БКР и МТР кожи, могут быть бежи цитоскелета. Сравнительно недавно было показано, что БКР по характеру экспрессии кератинов 8 и 17 отличается от МТР [ Карелина Т. В., Казанцева И. A., 1991]. Однако данная работа была основана на единичных наблюдениях с использованием криостатных срезов, Которые искажают морфологическую картину [Miettinen н, 1989]. Существует так же мнение, что экспрессия кератина 8 и наличие миофиламентов в клетках БКР, обнаруживаемых при электронно-микроскопическом исследовании, являются признаком инвазивного роста опухоли [Gabblani G et al., 1976, HcNutt NS, I976,Markey AC et al., 1991]. В связи с этим, важно сопоставить экспрессию ряда белков цитоскелета в клетках БКР и МТР кожи.
Кроме того, опухолевая трансформация клеток предполагает изменения их генетического аппарата [Novel НС, 1992], что объясняет внимание к изучению экспрессии генов, которое способно объяснить ряд моментов патогенеза рака. В этом отношении особый интерес представляет ген K5I, экспрессия которого специфична для кожи и сопряжена с дифференцировкой кератиноцитов [ Чумаков И. М, и соавт., 1986, Третьяков Л. 0. и соавт., 1989]. Цель настоящей работы Изучить иммуногистохимические особенности, разработать дополнительные дифференциально-диагностические и прогностические критерии различных клинических вариантов БКР и МТР кожи.
В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи исследования:
-
Провести сравнительное изучение пролиферативной активности клеток первичного, рецидивного БКР и МТР кожи;
-
Выяснить особенности экспрессии белков цитоскелета в клетках БКР и МТР кожи;
-
Изучить особенности экспрессии кожно-специфического гена K5I в клетках БКР и МТР кожи.
Научная новизна исследования
Впервые проведен анализ пролиферативной активности клеток МТР кожи с использованием моноклональных антител к АЯПК.
Впервые описан вариант первичного БКР с высоким уровнем пролиферативной активности клеток.
Установлено, что рецидивный БКР и МТР кожи имеют высокую, по сравнению с первичным БКР, пролиферативную активность клеток и практически не отличаются между собой по этому показателю.
Описаны два варианта распределения (равномерный и краевой) пролиферирукщих клеток в БКР и впервые доказано, что БКР с краевым распределением пролиферирукщих клеток обладает более низкой пролиферативной активностью.
В ходе исследования удалось уточнить, что клетки МТР кожи содержат кератины 8 и 17 в значительно меньшем количестве, чем БКР. При этом выяснено, что различные клинические и гистологические варианты БКР не различаютя между собой по экспрессии тестируемых белков кератина.
Впервые выявлен вариант ЮТ кожи с миоэпителиальной дифференцировкой, подтверждено также существование данного варианта БКР. С использованием нескольких клонов антител к гладкомышечному альфа-актину и миозину доказана сочетанная экспрессия этих белков в клетках БКР и МТР кожи. Впервые установлено, что индекс пролиферации БКР и МТР кожи, содержащего сократительные белки, практически не отличается от индекса пролиферации опухолей их не содержащих.
Показана экспрессия гена K5I в эпидермисе, сальных и потовых железах нормальной кожи взрослого человека. Подтверждено, что она увеличивается по мере повышения дифференцировки клеток. Впервые установлено, что в клетках МТР кожи, как и в БКР, экспрессия гена K5I значительно ниже, чем в интактном эпидермисе. Практическое значение
Разработаны объективные показатели уровня пролиферативной активности клеток БКР и МТР кожи, которые могут использоваться для уточнения характера роста опухоли и влиять на тактику лечения и прогноз.
Разработаны дополнительные критерии дифференциальной
диагностики БКР и МТР кожи по экспрессии кератинов 8 и 17. Положения, выносимые на защиту
1. БКР кожи по уровню пролиферативной активности является
гетерогенной группой новообразований. Первичный БКР
характеризуется относительно низким уровнем пролиферации, однако
встречаются случаи первичного БКР с высоким содержанием
пролиферируицих клеток. Высоким индексом пролиферации отличается
и рецидивный БКР. В отличие от БКР, все случаи МТР кожи
характеризуются высокой пролиферативной активностью клеток.
Существует два вида распределения пролиферируицих клеток в опухолевых комплексах БКР - равномерный и краевой; при краевом распределении наблюдается более низкий, индекс пролиферации, Чем при равномерном.
-
Клетки БКР и МТР кожи отличаются характером экспрессии кератинов 8 и 17, что можно использовать для дифференциальной диагностики данных опухолей.
-
В части случаев БКР и МТР кожи опухолевые клетки содержат сократительные белки, такие как альфа-актин и миозин гладких мышц, что является проявлением их миоэпителиальной дифференцировки.
-
Экспрессия кожно-специфического гена K5I повышается по мере дифференцировки клеток. В БКР и МТР кожи экспрессия гена K5I снижается, по сравнению с интактным эпидермисом, что может быть следствием нарушения дифференцировки кератиноцитов. Апробация работы
Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции дерматовенерологов Урала, Сибири и Дальнего Востока (Екатеринбург, 1994), на заседании Московского областного
общества дерматовенерологов (Москва, 1994). Структура диссертации
Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, иллюстрирована 26 рисунками, 12 таблицами. Библиографический указатель включает 26 отечественных и 140 иностранных источников.
