Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 8
1.1. Роль ингибиторов протеолиза 8
1.2. Методы выделения и очистки ингибиторов протеаз 29
1.3. Состояние поджелудочной железы у собак в норме и при патологии и методы ее изучения 39
2. Собственные исследования 50
2.1. Материалы и методы исследования 50
2.2. Результаты исследования 53
2.2.1. Способ получения люцернового ингибитора трипсина 53
2.2.2. Иммобилизация люцернового ингибитора трипсина на пектин 57
2.2.3. Общая ингибирующая активность сыворотки крови собак
после внутривенного введения люцернового ингибитора трипсина 59
2.2.4. Исследование крови собак после внутривенного введения люцернового ингибитора трипсина 62
2.2.5. Модель острого деструктивного панкреатита у собак 65
2.2.6. Ферментативный фон сыворотки крови собак с моделью острого деструктивного панкреатита и его изменения после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора 70
2.2.7. Изменение картины крови собак с моделью острого деструктивного панкреатита и ее изменения после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора 79
2.2.8. Гистоморфологическое исследование поджелудочной железы собак с моделью острого деструктивного панкреатита и ее изменения после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора 84
2.2.9. Общая ингибирующая активность сыворотки крови собак после внутримышечного введения иммобилизованного на пектин люцернового ингибитора трипсина 88
2.2.10. Исследование крови собак после внутримышечного введения иммобилизованного на пектин люцернового ингибитора трипсина 90
3. Обсуждение результатов исследования 92
4. Выводы 104
5. Практические предложения 106
Список использованной литературы 107
- Методы выделения и очистки ингибиторов протеаз
- Состояние поджелудочной железы у собак в норме и при патологии и методы ее изучения
- Исследование крови собак после внутривенного введения люцернового ингибитора трипсина
- Ферментативный фон сыворотки крови собак с моделью острого деструктивного панкреатита и его изменения после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора
Введение к работе
Актуальность темы. Развитие экспериментальной физиологии и современной биохимии не представляется возможным без системного исследования в области энзимологии. Несмотря на то, что эта сфера научной деятельности в настоящее время претерпела значительный подъем, проблема ферментолиза остается малоизученной, в связи с чем, привлекает особое внимание многих исследователей (Атауллаханов Ф. И., 2000). Такой интерес связан в первую очередь с тем, что ферменты являются высокоактивными строгоспецифичными нетоксичными биокатализаторами белковой природы, широко распространенными в природе, без которых невозможно осуществление биохимических процессов, протекающих в живом организме (Филиппович Ю. Б., 1984).
Одной из самых актуальных проблем в энзимологии является изучение протеолиза, так как данный процесс играет важную роль в обмене веществ организма животных (Черников М. П., 1975). Избыточная активность протеоли-тических ферментов способна вызвать различные патологические состояния организма, такие как ревматоидный артрит (Schnebli Н. P. et al, 1984), эмфизема легких (Bignon J. et al, 1980), пневмония (Abrams W. R. et al, 1984), перитонит (Ohlsson K. et al, 1977), панкреатиты (Зубовский Г. А. и др., 1982).
Одним из наиболее значимых ферментов, играющего значительную роль в организме, является трипсин (Циркина А. С, 1982, Остапчук Н. В., 1991, Вер-нигора А. Н. и др., 1996). При известных патологических процессах происходит его избыточный синтез в поджелудочной железе, и фермент становится существенным фактором, многократно усугубляющим течение многих заболеваний (Веремеенко К. Н., 1988). Например, при панкреатитах трипсин поступает в кровь и активирует один из факторов свертывания крови (Мосолов В. В., 1982).
В связи с этим изучение биологических механизмов регуляции избыточной активности трипсина приобрело особую актуальность (Laskowski М. Jr. et al, 1971). Заслуживает внимания процесс ингибирования трипсина (Holzer Н., 1975). Это обусловлено той регуляторной ролью, которую играют ингибиторы в обмене веществ живого организма (Локшина Л. А., 1977, Schreiber Н. D. et al, 1973, Кудряшов Б. А., 1974, Heimburger N. et al, 1971, Wallner О. ct al, 1974).
Ученым-биологам известны некоторые ингибиторы трипсина животного, растительного и микробного происхождения (Мосолов В. В., 1971, 1982). Среди них, наименее изученным остается ингибитор трипсина из вегетативных органов люцерны, который является наиболее перспективным препаратом для внедрения в фармакологическую практику (Толстогузов В. Б., 1978, Долгов И. А. и др., 1978, PrrieN. W., 1971). Физико-химические свойства люцернового ингибитора трипсина изучались в лабораторных условиях in vitro (Ramirez J.S. et al, 1960, Chien T.F. et al, 1970, Chang H.Y. et al, 1978), при этом в литературе не встречается данных об исследовании его биохимических свойств in vivo.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы была разработка технологии получения ингибитора трипсина из люцерны и изучение его влияния на физиологические функции организма собак. Исходя из цели были поставле-
ны следующие задачи:
РОС НАЦИОНАЛЬНА*. БИБЛИОТЕКА
эд/s?!
СПетер4*»г~7/) I 09
-
Разработать и экспериментально определить оптимальные технологические режимы получения ингибитора трипсина из люцерны с максимально высокой активностью к соответствующему ферменту.
-
Разработать методы иммобилизации полученного ингибитора трипсина на пектине для получения препарата пролонгированного действия.
-
Изучить воздействие люцернового ингибитора трипсина на биохимические свойства крови клинически здоровых собак.
-
Изучить динамику пролонгированного действия иммобилизованного ингибитора трипсина на ингибирующую активность сыворотки крови собак.
-
В сравнительном аспекте провести исследование влияния люцернового ингибитора трипсина и препарата «контрикал» на морфофункциональное состояние системы крови собак с острым деструктивным панкреатитом.
Научная новизна. Получен ингибитор трипсина из люцерны, новым, разработанным нами способом. Впервые произведена иммобилизация люцернового ингибитора на пектин. На основании биохимических, физиологических и гематологических исследований впервые получено комплексное представление о влиянии люцернового ингибитора трипсина на морфофункциональное состояние системы крови собак.
Теоретическая и практическая новизна работы. Новый способ получения ингибитора трипсина из люцерны дает возможность значительно увеличить выход продукта. Иммобилизованный ингибитор трипсина обладает пролонгированным действием, что значительно продлевает его влияние на организм животных. Данная работа создает перспективу для рекомендации люцернового ингибитора как лекарственного средства для лечения панкреатитов.
Основные положения, выносимые на защиту:
-
Способ получения люцернового ингибитора трипсина в оптимальных условиях, без потери его активности.
-
Способ иммобилизации полученного ингибитора трипсина на пектин.
-
Биохимические свойства крови клинически здоровых собак под влиянием ингибитора трипсина полученного из люцерны.
-
Результаты исследований о пролонгирующем действии иммобилизованного люцернового ингибитора трипсина на функциональное состояние системы крови собак.
-
Сравнительные данные о влиянии препарата «контрикал» и люцернового ингибитора трипсина на морфофункциональное состояние системы крови собак с острым деструктивным панкреатитом.
Апробация работы. Оснсдньїематериалндиссезтациидоложеньїиобсужденьїна:
международных научно - производственных конференциях Белгородской государственной сельскохозяйственной академии 2003 и 2004 гг.;
П международном симпозиуме «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии» (Санкт-Петербург, 2004 г.);
- научно-практических конференциях Курской государственной сельско
хозяйственной академии им. проф. И. И. Иванова в период с 2001 по 2004 гг.
Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 5 работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа изложена на 125 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц и 16 рисунков. Список литературы включает 215 источников, в том числе 55 иностранных авторов.
Методы выделения и очистки ингибиторов протеаз
В растительных тканях белки содержатся обычно в меньшем количестве, чем углеводы. Тем не менее, по значимости белки, бесспорно, являются главным компонентом растительных клеток, так же, как клеток бактерий и животных (Кретович В.Л., 1971). Белковые молекулы, взаимодействуя с другими биополимерами, с органическими и неорганическими веществами и водой, выполняют множество различных функций, например, могут выступать в роли биологических катализаторов (ферментов) или регуляторов ферментативной активности (ингибиторов и активаторов) (Гауровиц Ф., 1965). Изучение структуры и функции белковых комплексов ферментов, ингибиторов и активаторов является одним из основных направлений современной биохимии (Веремеенко К.Н., 1971, Мосолов, В.В., 1971, 1982).
Как уже было сказано, ферменты и их специфические ингибиторы по своей природе в подавляющем большинстве случаев являются белками (Бер-стон М, 1965, Кретович В.Л., 1974), поэтому для их изучения вполне подходят те же методы, что и для белков (Бейли Дж., 1965, Асатиани B.C., 1956, 1969). Однако всегда необходимо помнить о том, что ферменты и их ингибиторы в большей степени, чем прочие белки, подвержены воздействию окружающей среды, при этом подвергаясь необратимой денатурации или многократно теряя свою активность (Владимиров Г.А., 1962, Кретович В.Л., 1971). Исходя из этого, процессы выделения и очистки ферментов и ингибиторов надо проводить в мягких условиях: оптимальное рН, низкая температура, чистота посуды и реактивов и пр. (Асатиани B.C., 1953, Заводник И.Б., 1994, Клесов А.А., 1980).
Выделение и очистка белков из растений состоят из следующих основных этапов: гомогенизация сырья; экстракция белковых веществ; осаждение белков; диализ белковых осадков; фракционирование смеси белков; концентрирование исследуемой фракции белка и его высушивание. Основные приемы при получении белков представлены в таблице 4.
Для успешного выделения белка из биологического объекта необходимо тончайшее измельчение тканей вплоть до разрушения клеточных стенок. В производственных условиях для этого используют специальные валковые или шаровые мельницы, в которых исходный материал многократно продавливается между тесно сближенными валками или расплющивается непрерывно сталкивающимися шарами, а также прессы, где материал в замороженном состоянии продавливается через ножи. В условиях лаборатории с этой целью широко применяют различные гомогенизаторы, где материал измельчается острыми ножами, непрерывно вращающимися с огромной скоростью, или растирается между пришлифованными стенками стеклянных пробирки и пестика. Хорошие результаты дает метод разрушения клеточных оболочек путем попеременного замораживания и оттаивания тканей. Главную роль здесь выполняют кристаллики льда, разрывающие стенки клеток и освобождающие их содержимое. Применяют также метод «азотной бомбы», заключающийся в насыщении суспендированных клеток газообразным азотом под высоким давлением, которое затем резко сбрасывают, - азот, проникший внутрь клеток, выделяется в виде газа и «взрывает» их (Филиппович Ю.Б., 1984).
Если в процессе выделения белка в дальнейшем будут использоваться химические вещества, способствующие разрушению клеточной оболочки (мощные растворители или детергенты), то процесс измельчения можно проводить посредством обыкновенной бытовой мясорубки. Главное достигнуть такой степени измельчения, чтобы воздействию химических реагентов было доступно большее количество клеток (достаточный размер частиц сырья 1-3 мм) (Dawson R.M.C. et al, 1986).
Если дальнейшие исследования проводят с соком растений, то в технологию включают отжим: чем больше давление пресса на сырье, тем больше выход продукта (сока), и соответственно больше исследуемых веществ. Однако, если в дальнейшем отжимки будут использоваться для экстракции, то необходимо оптимально соотносить силу пресса, так как слишком большое давление на сырье делает отжимки очень плотными, что в значительной степени затрудняет работу с ними. На производстве для отжима используют виноградные прессы; в лаборатории можно пользоваться обыкновенной соковыжималкой. (Филиппович Ю.Б., 1984).
Следующим этапом является метод экстрагирования. Принцип метода экстракции белков из растительной ткани основан на способности некото рых реагентов растворять белки и, тем самым, переводить их в раствор. В качестве таких растворителей используют воду, солевые растворы, водно спиртовые и спиртосолевые растворы, слабые растворы щелочей и органи ческих кислот, соотношение и концентрацию которых определяют экспери ментальным путем для каждого отдельного белка (Williams B.L. et al, 1975). Однако каждый из перечисленных методов имеет свои недостатки. Вода яв ляется универсальным растворителем для многих высокомолекулярных со единений, тем не менее, ее экстрагирующая способность очень низкая. Вод \ но-спиртовые и спиртосолевые растворы являются хорошими экстрагентами, но содержащийся в них спирт способен необратимо денатурировать белки. Растворы слабых щелочей и органических кислот для экстракции белков применяют редко, так как они очень резко изменяют рН среды, а ферменты и ингибиторы очень чутко реагируют на эти изменения. Для экстрагирования белков из вегетативных органов растений часто используют специальные системы: водно-эфирная смесь (метод Чибнела), смесь фенола, уксусной ки слоты и воды (метод Сиджа) и т. д., которые позволяют максимально вывес ти белки в раствор. Однако, в полученных экстрактах неизбежно происходит денатурация белка, так как данные смеси в своем составе несут мощные де . натурирующие агенты. Такие экстракты используются в основном для коли чественного определения в них белка, а сами методы не направлены на со хранение нативных свойств белков (Devenyi, Т. et al, 1974). На наш взгляд, лучшими экстрагирующими системами для выделения белков являются солевые растворы, взятые в концентрации примерно 8-10%. Различные соли обладают разным растворяющим действием по отношению к белку. Ниже приведен ряд катионов и анионов, расположенных в порядке убывания их растворяющего действия (Филиппович Ю.Б., 1984), где максимальным растворяющим действием будет обладать пирофосфорнокислый литий, а минимальным—хлористый натрий.
Состояние поджелудочной железы у собак в норме и при патологии и методы ее изучения
В паренхиме железы (между ее альвеолами) располагаются округлые или неправильной формы скопления небольших эпителиальных клеток — островков Лангерганса. Островки частично или полностью окружены соединительнотканной капсулой, богато снабжены кровеносными сосудами и обладают внутрисекреторной функцией; выделяемые ими гормоны (инсулин и др.) регулируют углеводный, липоидный и водный обмен. У собаки поджелудочная железа длинная, узкая, состоит из 2 долей, расположенных под острым или почти под прямым углом друг к другу. Вес железы колеблется от 13 до 108 г, что составляет в среднем около 0,13—0,35 % от общего веса собаки.
Правая доля (lobus dexter pancreatis), длиной около 14 см, располагается в дорсально-медиальном направлении от нисходящей части двенадцатиперстной кишки. Будучи заключенной между брюшинными листками mesoduode-num, правая доля поджелудочной железы является как бы связующим звеном между нисходящей и восходящей частями двенадцатиперстной кишки. Левая доля (lobus sinister pancreatis), длиной около 10 см, располагается между брюшинными листками задней дубликатуры большого сальника.
Протоки поджелудочной железы (d. pancreatici) варьируют в количестве и расположении. Около 75% собак имеют 2 протока, раздельно впадающих в двенадцатиперстную кишку, хотя и сообщающиеся между собой в тканях поджелудочной железы. Меньший из них (иногда отсутствующий) обычно впадает в двенадцатиперстную кишку рядом или на вершине большого сосочка двенадцатиперстной кишки (papilla duodeni major), который располагается на расстоянии около 4 см дистальнее пилорического сфинктера, на брыжеечном крае duodeni. Другой, больший по размерам и всегда присутствующий — основной проток поджелудочной железы (длина его около 3— 4 мм, диаметр около 2 мм), открывается в duodenum на вершине малого сосочка двенадцатиперстной кишки (papilla duodeni minor), расположенного обычно на 4 см дистальнее большого сосочка.
Кровоснабжение поджелудочной железы: правая доля — ветвями краниальной и каудальной поджелудочно-двенадцатиперстных артерий (аа. pan creaticoduodenales cranialis et caudalis), левая доля — ветвями селезеночной артерии (a. lienalis), а также небольшими веточками от общей печеночной артерии (a. hepatica communis) и от желудочно-двенадцатиперстной артерии (a. gastroduodenalis). Артерии сопровождают одноименные вены.
Лимфоотток: в двенадцатиперстный лимфатический узел (п. 1. duo-denalis), печеночные (Inn. hepatici), селезеночные (Inn. Iienales) и брыжеечные (Inn. mesenterici) лимфатические узлы.
Иннервация: симпатическая — за счет чревного сплетения (plexus celi-acus) и каудального брыжеечного (plexus mesentericus caudalis) сплетения; парасимпатическая — ветвями блуждающих нервов (nn. vagi), подходящими к поджелудочной железе вместе с ветвями селезеночной артерии и с ветвями краниальной брыжеечной артерии, в частности с каудальнои поджелудочно-двенадцатиперстной артерией (Акаевский А.И. и др., 1984).
Аномалии поджелудочной железы у собак чрезвычайно редки. Описано лишь несколько случаев добавочной поджелудочной железы в стенке желчного пузыря и в брыжейке подвздошной кишки; все они имели выводные протоки, а в одном случае и островковую ткань.
Поджелудочная железа животных является органом внешней и внутренней секреции. Выполняя внутрисекреторную функцию, она выделяет в кровь ряд гормонов (инсулин, глюкагон, липокаин). Ее внешнесекреторная функция представлена выработкой амилолитических, липолитических и протеолитиче-ских ферментов в просвет двенадцатиперстной кишки (Афонский СИ., 1970).
Существует множество методов определения ферментативной активности дуоденального содержимого (Вилкинсон Д., 1981, Фомина Л.С. и др., 1970), однако, наибольший интерес представляет определение ферментов в крови, так как при возникновении различного рода патологических процессов в поджелудочной железе, данные ферменты способны поступать в кровеносное русло, запуская каскад ферментативных реакций и многократно осложняя течение основного заболевания (Братчик A.M., 1993, Кудряшов Б.А., 1974, Чазов Е.И. 1978). В настоящее время для определения активности ферментов предложено множество различных методик (Вилкинсон Д., 1981, Морозова В.Т., 1967). Единицы активности в каждой из них, даже при определении одного и того же фермента, сильно варьируют (от десятков до тысяч условных единиц), что связано с множеством факторов (использование авторами различных субстратов, разных количеств фермента и субстрата, условий проведения опыта и систем пересчета и т. д.).
Для определения амилазы существует много разных методик. Наиболее точным и простым в исполнении является метод, предложенный Каравеем (Кондрахин И.П. и др., 1985), основанный на расщеплении амилазой крахмала с последующей фотоэлектроколорометрией. Активность амилазы у собак в норме (по данному методу) составляют 39 - 50 ед и выражаются в мг/(ч-мл).
Определение активности липазы можно провести при помощи метода, предложенного Титцем (Покровский, А.А., 1969), основанного на расщеплении оливкового масла с последующим титрованием. Единицы активности липазы у собак в норме (по данному методу) составляют 1,3 - 1,9 и выражаются в условных единицах (усл. ед) - разница в количестве щелочи, пошедшей на титрование опытной и контрольной проб.
Определенной проблемой является определение трипсина в крови. До недавнего времени с относительным успехом пользовались различными методиками определения трипсина в крови (по Кунитцу в модификации Черникова, по Эрлангеру в модификации Шатерникова и т.д.). И, действительно, руководствуясь данными методиками, можно достоверно зафиксировать увеличение или снижение данного фермента в крови. Однако, было установлено, что активность трипсина определенная по этим методикам не является объективной, так как в крови присутствуют мощные ингибиторы протеолиза. В связи с этим был разработан способ определения иммунореактивного трипсина в крови методом РИА, позволяющего определить трипсин не по его активности, по количеству белка фермента. Данным способом можно установить не только свободный трипсин в крови, но и связанный с ингибиторами крови. Тем не менее, в данной работе использовался метод определения трипсина по Кунитцу в модификации Черникова (Покровский А.А., 1969), так как определение точного количества трипсина в крови не являлось принципиальным. Достаточно было узнать: на сколько изменяется его активность при патологическом процессе - панкреатите, что вполне можно выяснить посредством данной методики. При этом доступность метода и простота исполнения в опыте позволяют провести его в условиях обычной лаборатории.
Исследование крови собак после внутривенного введения люцернового ингибитора трипсина
Кровь, лимфа и межклеточная жидкость составляют внутреннюю среду организма, чутко реагирующую на изменения как внутренних факторов, так и окружающей среды. При этом происходят количественные и качественные изменения их состава в пределах физиологических норм (Афонский, СИ., 1970).
В настоящее время имеются данные о влиянии ингибитора трипсина на морфологические и биохимические показатели крови, но эти данные фрагментарны и требуют более тщательного изучения.
Ингибитор трипсина получен по разработанной нами методике и изучение его свойств, оказывающих воздействие на внутреннюю среду организма, представляет интерес не только для физиологии, но и для фармакологии. Препарат представляет собой очищенный белок с определенными биологическими свойствами. Поскольку источником его получения является растительное сырье, вероятно, его структура (аминокислотный состав, количество субъединиц и т. д.) будет определять ему другие, отличные от известных ингибиторов свойства. Следовательно, полнота информации о механизмах его воздействия на организм животных представляет интерес и для теории, и для практики. Кровь для гематологических исследований у собак отбирали параллельно исследованиям общей ингибирующей активности сыворотки. Результаты исследований представлены в таблице 7. Как видно из данных таблицы 7, основные физико-химические и морфологические показатели крови до применения, полученного нами препарата, и в последующие периоды были постоянными и практически не изменились по сравнению с контролем. Незначительное варьирование показателей, вероятно, связано с небольшим стрессом во время проведения эксперимента. Анализ результатов этих исследований свидетельствует о незначительном влиянии препарата или о его полном отсутствии на физиологические функции организма и его внутреннюю среду. Вызывает интерес изменение показателей сыворотки крови. Прежде всего, это прогнозированное изменение ингибирующей активности сыворотки крови - она повысилась с 1,48 до 6,87 мг/мл. Незначительно повысилось содержание общего белка, а точнее его а-глобулиновой фракции. Через час после введения полученного ингибитора трипсина количество общего белка в сыворотке крови, хотя и возросло с 65 ± 2,23 г/л до 68 ± 2,21 г/л, тем не менее, данные изменения так же лежат в пределах физиологических норм. Такое повышение, очевидно, связано с количественным увеличением общего белка в сыворотке за счет самого препарата, так как введенный ингибитор трипсина имеет белковую природу. В дальнейшем наблюдали тенденцию к снижению количества общего белка в сыворотке крови до исходного уровня.
О характере влияния полученного ингибитора на состав крови можно судить по изменениям, произошедшим в качественном составе белковых фракций. Заслуживает внимание значительное увеличение а-глобулиновой фракции, которое составило более 6%. Такие изменения, вероятно, вызваны тем, что люцерновый ингибитор трипсина тоже является а-гл обул ином (Chang H.Y., 1978),
Ha основании полученных в опыте данных можно сделать вывод, что однократное внутривенное введение люцерновый ингибитор трипсина в дозе 300 ЕД (по соотношению с контрикалом) на кг массы тела клинически здоровых собак не влияет существенно на основные составляющие картины крови.
Исследования, проведенные на клинически здоровых животных, послужили основой для продолжения экспериментов и на больных собаках. Известно, что ингибитор трипсина широко используется в медицинской и ветеринарной практике в качестве противовоспалительного средства (Вели-ченко В. М., 1971). Целенаправленно снижая активность протеиназ посредством ингибиторов, можно уменьшить степень деструкции пораженных органов и тканей.
Исходя из этого, проведены исследования по изучению регуляторных свойств люцернового ингибитора трипсина на развитие патологического процесса, в частности, острого панкреатита. Этот вид патологии интересен тем, что его патогенез в значительной мере зависит от величины активности трипсина в тканях.
Развитие острого деструктивного панкреатита моделировали посредством введения аутожелчи в проток поджелудочной железы с созданием внут-рипротоковой гипертензии по методу Шалимова А.А (1979).
В качестве подопытных животных использовали клинически здоровых беспородных собак. Собак отбирали по принципу пар-аналогов: хорошо развитых, массой 10 - 12 кг, в возрасте 2 - 2,5 года, который определяли по зубной формуле. За сутки до операции животных не поили и не кормили.
Животным с целью устранения нежелательных эффектов во время операции назначали премедикацию: атропин ОД % - 0,5 мг/голову; димедрол 1% - 1 мг/голову; дроперидол 25 % - 1 - 2 мг/голову. Через 30 мин задавали тиопенталовый наркоз (тиопентал натрий 5 % - 2 - 5 мг/голову). Собак на время операции фиксировали на операционном столе в спинном положении. Основные этапы операции представлены на рисунках 5-9.
Ферментативный фон сыворотки крови собак с моделью острого деструктивного панкреатита и его изменения после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора
Широко известно, что протеолитические ингибиторы крови контролируют развитие инфекций и воспалительных процессов (Кудряшов Б.А., 1974, Tietz N.W., 1983). Известно также, что при остром панкреатите трипсин принимает активное участие в деструкции поджелудочной железы (Усольцева, В.А., 1969). В связи с этим интересно узнать, как экзогенный ингибитор будет взаимодействовать с трипсином in vivo. С целью изучения способности люцернового ингибитора трипсина противостоять воспалительному процессу при остром деструктивном панкреатите проводили гистоморфологическое исследование поджелудочной железы (см. приложение 4).
Для гистоморфологического исследования у собак отбирали кусочки поджелудочной железы размером 20 х 20 мм через трое суток и через три недели после воспроизведения модели острого деструктивного панкреатита (контрольная группа), а также после внутривенного введения контрикала и люцернового ингибитора, с интервалом 6 часов на протяжении трех суток. На вскрытии собак контрольной группы, которых выводили из опыта через трое суток, в брюшной полости обнаружен геморрагический выпот. Поджелудочная железа была резко отечной и увеличенная в размерах. Прилежащие к поджелудочной железе серозные покровы других органов были отечны, гиперемированы, местами с кровоизлияниями. По большому сальнику, брыжейке и париетальной брюшине располагалось много пятен жирового некроза; сильно развит спаечный процесс. При микроскопическом исследовании обнаружен резко выраженный отек межуточной соединительной ткани с очагами кровоизлияний. Встречались обширные участки некрозов с вовлечением нескольких долек железы, по периферии которых имелось обильное скопление лейкоцитов. У собак на вскрытии, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили контрикал, в брюшной полости выпот не обнаружен. Поджелудочная железа была более плотной, чем в норме, бугристой, с немногочисленными кровоизлияниями. Между ней и большим сальником, а также двенадцатиперстной кишкой имелись спайки. При микроскопическом исследовании выявлен умеренный отек межуточной соединительной ткани с лейкоцитарной инфильтрацией и очагами кровоизлияний в ткани железы. Ацинусы железы были неодинаковыми по величине и содержали разное количество секрета. У собак, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили люцерновый ингибитор трипсина, при вскрытии брюшной полости обнаружили незначительное количество геморрагического выпота. Брыжейка тонких кишок, большой сальник, брюшина были гиперемированы. Поджелудочная железа так же гиперемирована, имела небольшие кровоизлияния, была бугристой и значительно более плотной, чем в норме. Между поджелудочной железой, двенадцатиперстной кишкой и большим сальником имелись спайки. При микроскопическом исследовании поджелудочной железы выявлены: отек межуточной соединительной ткани, умеренная лейкоцитарная инфильтрация, мелкие очажки кровоизлияний и некроза, ацинусы железы были неодинаковыми по величине и содержали разное количество секрета. На вскрытии собак контрольной группы, которых выводили из опыта через три недели, в брюшной полости обнаружено небольшое количество выпота. Поджелудочная железа бледно-розового цвета с желтоватым оттенком, была очень плотной и сильно уменьшенной в размерах. Имел место значительный спаечный процесс. При микроскопическом исследовании поджелудочной железы установлен процесс склерозирования ее тканей. У собак, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили контрикал, обнаружили уменьшенную в размерах поджелудочную железу и легкий спаечный процесс. Гистологическое исследование поджелудочной железы показало наличие пролиферации соединительной ткани различной интенсивности. В ацинусах отмечен процесс регенерации. У собак, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили люцерновый ингибитор, поджелудочная железа была слегка бугристой, уменьшенной в размерах и имела вид длинной узкой полоски, лежащей вдоль двенадцатиперстной кишки. При микроскопическом исследовании выявлена пролиферация соединительной ткани различной интенсивности. Нередко наблюдались процессы регенерации в ацинусах. Такие ацинусы почти не содержали секретов, клетки их располагались более компактно. имела небольшие кровоизлияния, была бугристой и значительно более плотной, чем в норме. Между поджелудочной железой, двенадцатиперстной кишкой и большим сальником имелись спайки. При микроскопическом исследовании поджелудочной железы выявлены: отек межуточной соединительной ткани, умеренная лейкоцитарная инфильтрация, мелкие очажки кровоизлияний и некроза, ацинусы железы были неодинаковыми по величине и содержали разное количество секрета. На вскрытии собак контрольной группы, которых выводили из опыта через три недели, в брюшной полости обнаружено небольшое количество выпота. Поджелудочная железа бледно-розового цвета с желтоватым оттенком, была очень плотной и сильно уменьшенной в размерах. Имел место значительный спаечный процесс. При микроскопическом исследовании поджелудочной железы установлен процесс склерозирования ее тканей. У собак, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили контрикал, обнаружили уменьшенную в размерах поджелудочную железу и легкий спаечный процесс. Гистологическое исследование поджелудочной железы показало наличие пролиферации соединительной ткани различной интенсивности. В ацинусах отмечен процесс регенерации. У собак, забитых через трое суток после модели острого деструктивного панкреатита, которым внутривенно вводили люцерновый ингибитор, поджелудочная железа была слегка бугристой, уменьшенной в размерах и имела вид длинной узкой полоски, лежащей вдоль двенадцатиперстной кишки.
