Содержание к диссертации
Введение
Обзор литературы 10
1.1. Хроническая сердечная недостаточность как неблагоприятный фактор внутренней среды организма 10
1.1.1. Причины изменения деятельности сердца 10
1.1.2. Адаптивные механизмы при нарушении насосной функции сердца (на примере ХСН) 11
1.1.3. Симпато-адреналовая система 12
1.1.4. Эффекты РААС, их влияние на работу почек и электролитный состав крови 16
1.1.5. Нарушение работы печени вследствие гемодинамических изменений при ХСН 22
1.1.6. Нарушение метаболизма миокарда и функции его рецепторного аппарата 25
1.2. Клинико-диагностическое значение определения метаболитов сыворотки крови 27
1.3. Ферменты сыворотки крови и значение их определения 33
2. Собственные исследования 39
2.1.Материалы и методы 39
2.1.1 .Материалы исследований 39
2.1.2. Методы исследований 40
2.1.2.1. Метод определения типа высшей нервной деятельности 40
2.1.2.2. Метод определения норадреналина в плазме крови 41
2.1.2.3. Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови 42
2.1.2.4. Определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови 42
2.1.2.5.Определение активности гаммаглутамилтрансферазы методом в сыво ротке крови 43
2.1.2.6. Определение общей активности лактатдегидрогеназы методом в сыворотке крови 44
2.1.2.7. Определение общей активности креатинкиназы в сыворотке крови '. 45
2.1.2.8. Определение изоферментного спектра лактатдегидрогеназы и креатинкиназы 46
2.1.2.9. Определение креатинина кинетическим методом по реакции Яффе 48
2.1.2. ЮОпределение мочевины уреазным методом 49
2.1.2.11. Определение натрия в сыворотке крови (магний-уранилацетатный колориметрический тест) 50
2.1.2.12.0пределение калия фотометрическим турбидиметрическим методом 51
2.1.2.13. Определение магния фотометрическим колориметрическим тестом 52
2.1.2.14. Определение общего кальция о-крезоловым методом в сыворотке крови 53
2.1.2.15Статистическая обработка результатов 54
2.2.Результаты исследований 56
2.2.1. Концентрация норадреналина в крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 56
2.2.2. Активность трансфераз сыворотки крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 57
2.2.3. Активность и изоферментный спектр лактатдегидрогеназы сыворотки крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 61
2.2.4. Активность и изоферментный спектр креатинкиназы сыворотки крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 65
2.2.5. Содержание показателей азотистого обмена в сыворотке крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 69
2.2.6. Содержание макроэлементов в сыворотке крови здоровых собак и собак, страдающих ХСН 72
2.3. Обсуждение результатов 77
3. Выводы 87
4. Практические предложения 89
5. Сведения о практическом использовании результатов исследования 89
6. Список использованной литературы 90
Приложения 100
- Хроническая сердечная недостаточность как неблагоприятный фактор внутренней среды организма
- Нарушение работы печени вследствие гемодинамических изменений при ХСН
- Метод определения типа высшей нервной деятельности
- Определение изоферментного спектра лактатдегидрогеназы и креатинкиназы
Введение к работе
Актуальность темы. Оптимальный в физиологическом отношении режим деятельности сердца животного является обязательным условием нормального кровоснабжения всех тканей и органов его организма. Оно достигается благодаря насосной функции сердца и деятельности сосудов. Режим деятельности сердца животного зависит от различных факторов внешней (температурного режима, условий содержания и кормления, физической нагрузки и др.) и внутренней среды (состояние сосудов, давление и кровоток в них, активность того или иного органа или многих органов), а также от состояния самого органа. Неблагоприятный фактор внутренней среды - длительное нарушение нормального режима работы сердца, который запускает целый каскад нейрогуморальных, гемодинамических и иммунологических реакций, способствует возникновению и развитию нарушения насосной функции сердца. Этот фактор ведет к развитию хронической сердечной недостаточности, которая проявляется комплексом характерных симптомов (одышка, быстрая утомляемость, снижение физической активности, отеки и др.), связанных с неадекватной перфузией органов и тканей в покое или при нагрузке и часто с задержкой жидкости в организме. Особое значение в развитии хронической сердечной недостаточности принадлежит симпато-адреналовой, ренин-ангиотензин-альдостероновой системам, антидиуретическому гормону и предсердному натрийуретическому пептиду [Бобров В.А., Жарин О.Й, Сайд С, 1999; Чазов Е.И., 1999; Tillei L.P., 2001; Лопатин Ю.М., 2002; Мартин М.В.С., Коркорэн Б.М., 2004, Нигматуллина P.P., 2004 и др.].
В последнее время наблюдается все больше случаев возникновения и развития хронической сердечной недостаточности у чистопородных собак в условиях повышенного антропогенного влияния. Однако, сведения об особенностях влияния хронической сердечной недостаточности и степени ее развития на изменения физиолого-биохимического статуса крови, активность симпато-адреналовой системы, деятельности печени, метаболические про-
цессы в миокарде и других органах и тканях у собак с возрастом имеют разрозненный и противоречивый характер.
В связи с этим исследования влияния возникновения и развития сердечной недостаточности на проявления жизнедеятельности организма животного с возрастом являются важными и актуальными.
Цель работы - выявление физиолого-биохимических особенностей механизмов адаптации организма собак в онтогенезе при изменении деятельности сердца.
Для достижения цели решались следующие задачи:
Исследовать активность симпато-адреналовой системы (САС) в разных возрастных группах клинически здоровых и страдающих хронической сердечной недостаточностью (ХСН) собак.
Изучить влияния хронической сердечной недостаточности на деятельность печени у собак с возрастом по активности аланинаминотрансфера-зы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (ACT) и гаммаглутамилтрансферазы (ГГТ) в крови.
Изучить влияние хронической сердечной недостаточности на экскреторную функцию почек у собак с возрастом по уровню мочевины и креати-нина в крови.
Исследовать водно-электролитный обмен у собак с возрастом, имеющих хроническую сердечную недостаточность, по содержанию калия, кальция, натрия, магния в крови.
Изучить изменения метаболических процессов в миокарде собак с возрастом, страдающих хронической сердечной недостаточностью, по активности и изоферментному спектру лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и креатинкина-зы (КК) в крови.
Научная новизна работы состоит в том, что впервые: определена активность симпато-адреналовой системы (по уровню норадреналина (НА) в крови) у здоровых собак разных возрастных групп; выявлено повышение ак-
7 тивности симпато-адреналовой системы (по уровню НА в крови) у собак, страдающих хронической сердечной недостаточностью; установлено, что ХСН сопровождается как гемодинамическими нарушениями, так и изменением биохимического статуса и ферментного профиля крови, обусловленного снижением перфузии печени и почек; определен изоферментный спектр крови лактатдегидрогеназы и креатинкиназы у здоровых собак разных возрастных групп; установлено, что ХСН сопровождается деструктивными процессами в миокарде, на что указывает изменение изоферментного спектра лактатдегидрогеназы и креатинкиназы в крови у собак с ХСН; установлено, что возраст животного влияет на развитие ХСН у собак.
Научно-практическая значимость работы. Выполненное исследование содержит решение актуальной проблемы - выяснения специфики осуществления физиолого-биохимических процессов и функций в органах, тканях и системах организма собак с возрастом при воздействии неблагоприятного фактора внутренней среды - хронической сердечной недостаточности. Установленные особенности метаболических изменений, сопровождающих хроническую сердечную недостаточность, у собак различных возрастов, отражает состояние различных органов и систем, изменения нейрогуморальной регуляции, деструктивные процессы в самой сердечной мышце, что необходимо для решения практических задач по созданию нормальных условий для работы сердечно-сосудистой системы. Полученные результаты могут быть использованы для комплексной диагностики сердечной недостаточности и разработки эффективных методов коррекции (лечения) возникших изменений в самом сердце, а также органах и системах вовлеченных в данный процесс.
Основные положения диссертации используются в учебном процессе, в преподавании физиологии и биохимии студентам по специальностям «Ветеринария» и «Биохимия» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.
Научные результаты используются при комплексной диагностике ХСН у собак в ряде ветеринарных клиник - «Центр» (г. Москва), «Белый клык-М» г. Москва (соответствующие документы приложены к диссертации).
Основные положения, выносимые на защиту.
Для оценки физиолого-биохимической адаптации организма собак при изменении деятельности сердца необходимо исследовать в крови уровень норадреналина, общую активность и изоферментный спектр лактатде-гидрогеназы и креатинкиназы, активность аминотрансфераз, уровень мочевины и креатинина, электролитный профиль.
Физиолого-биохимическая адаптация организма к изменениям деятельности сердца зависит от возраста животного.
Апробация работы. Основные материалы диссертации были доложены на II Региональной ветеринарной конференции 2004 г. в г. Воронеже; на 3-ей научно-практической конференции по вопросам диагностики и лечения заболеваний сердца мелких домашних животных (г. Москва, 2004 г.); на XI-м, ХП-м, ХШ-м Международных Московских конгрессах по болезням мелких домашних животных (2003, 2004, 2005 гг.); на научно-практической конференции молодых ученых и аспирантов ветеринарно-биологического факультета, посвященной 40-летию факультета и 110-летию со дня рождения СИ. Афонского (г. Москва, 2005 г.); на I научно-практической совместной конференции Кардиологического ветеринарного общества и Ветеринарного общества визуальной диагностики по вопросам диагностики и лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы мелких домашних животных (г. Москва, 2003 г.); на образовательных семинарах для ветеринарных врачей (г. Екатеринбург, 2006, г. Пермь, 2006).
По теме диссертации опубликованы: 1) Бардюкова Т.В. Исследование некоторых биохимических показателей при хронической сердечной недостаточности у собак /Бардюкова Т.В., Рыбченкова М.А., Зайцев СЮ. //Материалы международной учебно-методической и научно-практической конференции, посвященной 85-летию академии. - М.: МГАВМиБ им.К.И.
V,
9 Скрябина, 2004. - 4.2. - С. 75-77; 2) Бардюкова Т.В. Роль симпатоадренало-вой системы в патогенезе хронической сердечной недостаточности /Бардюкова Т.В., Бажибина Е.Б., Комолов А.Г. //Материалы 13 Международного московского конгресса по болезням мелких домашних животных, 23-25 апреля 2005 г. - М., 2005. - С. 49-51; 3) Бардюкова Т.В. Изоферменты сыворотки крови и клинико-биохимическое значение их определения /Бардюкова Т.В., Сорокина Е.М., Белоновская О.С., Зайцев С.Ю//Материалы 13 Международного московского конгресса по болезням мелких домашних животных, 23-25 апреля 2005 г. - М., 2005. - С. 49-51; 4) Бардюкова Т.В. Изофермент-ный спектр лактатдегидрогеназы и креатинкиназы собак при хронической сердечной недостаточности /Бардюкова Т.В., Сорокина Е.М., Белоновская О.С., Зайцев СЮ. //Материалы 13 Международного московского конгресса по болезням мелких домашних животных, 23-25 апреля 2005 г. - М., 2005. -С. 51-53; 5) Бардюкова Т.В. Содержание натрия, калия и кальция в крови собак при хронической сердечной недостаточности /Бардюкова Т.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И. //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб. научн. тр. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2005. -С. 41-45; 6) Бардюкова Т.В. Изучение активности симпато-адреналовой системы у собак с хронической сердечной недостаточностью /Бардюкова Т.В., Зайцев С.Ю., Максимов В.И.// Ветеринарная медицина. - 2006. - № 2-3. - С. 28-29; 7) Бардюкова Т.В. Ферментный профиль крови собак в норме и при хронической сердечной недостаточности/Бардюкова Т.В., Максимов В.И., Тульская Е.В., Зайцев С.Ю.//Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, 2006. - Т. 185. - С. 3-9.
Хроническая сердечная недостаточность как неблагоприятный фактор внутренней среды организма
Оптимальный в физиологическом отношении режим деятельности сердца является обязательным условием нормального кровоснабжения всех тканей организма. Оно достигается благодаря насосной функции сердца -перекачивания крови из венозной части сосудистой системы в артериальную - и деятельности сосудов (СВ. Барабанов и др., 1998.).
Режим деятельности сердца нарушается в результате его болезни. Нарушение насосной функции сердца ведет к развитию хронической сердечной недостаточности (ХСН).
Современная нейрогуморальная модель патогенеза доказала, что развитие ХСН происходит по единым патофизиологическим законам вне зависимости от этиологии повреждения. С клинической точки зрения это дает формальные основания обозначать ХСН не только как симптомокомплекс, осложняющий течение того или иного заболевания ССС, но как самостоятельную нозологическую форму.
Таким образом, с современных клинических позиций ХСН представляет собой заболевание с комплексом характерных симптомов (одышка, утомляемость и снижение физической активности, отеки и др.), которые связаны с неадекватной перфузией органов и тканей в покое или при нагрузке и часто с задержкой жидкости в организме.
Первопричиной является ухудшение способности сердца к наполнению и опорожнению, обусловленное повреждением миокарда, а также дисбалансом вазоконстрикторных и вазодилатирующих нейрогуморальных систем.
Однако наличие нарушений в работе сердца далеко не сразу приводит к развитию ХСН, а могут даже и не проявляться до конца жизни животного, успешно нивелируясь сбалансированными адаптивными реакциями организма (М. Мартин и др., 2004).
Именно истощение механизмов адаптации и их дисбаланс приводят к развитию и прогрессированию ХСН (М.А. Гуревич и др., 2001).
Сложный каскад нейрогуморальных и биохимических реакций выстраивается в порочный круг, приводя к еще большему нарушению насосной функции сердца (Е.И. Чазов, 1999).
Уменьшение сердечного выброса приводит к снижению центрального давления и оксигенации тканей. В центральную нервную систему поступают сигналы от барорецепторов, в кровь выделяются нейромедиаторы, сигнализирующие о кислородном голодании тканей (Л.Т. Малая и др., 1994).
Организм отвечает на эту информацию целым комплексом адаптивных реакций, стремясь восстановить центральное давление и улучшить оксигена-цию тканей (Е.И. Чазов. 1997; Т. Akag et al., 1991).
Основными эффекторами в этом случае являются симпатоадреналовая система (САС), ренин-ангиотензин-альдостероновая система (РААС), вазо-прессин, предсердный натрийуретический пептид.
Взаимодействие этих систем направлено, главным образом, на задержку жидкости в организме, перераспределение кровотока в сторону жизненно важных органов, поддержанию давления за счет вазоконстрикции и увеличения сердечного выброса посредством стимуляции сердечной мышцы.
Все эти адаптивные реакции имеют и свою негативную сторону. Так вазоконстрикция и стимуляция сердечной деятельности ( увеличение частоты и силы сердечных сокращений) истощает резервы сердечной мышцы.
Увеличение давления в камерах сердца нарушает отток крови от внутренних органов, особенно печени. Задержка жидкости в организме приводит к увеличению объема циркулирующей крови и, с одной стороны, ухудшает условия работы сердца, а с другой вызывает электролитные нарушения. Перераспределение кровотока снижает перфузию почек, вызывая преренальную азотемию (Г.П. Арутюнов, 2001). Побочные негативные явления адаптации ухудшают состояние гемодинамики и обмена веществ в тканях организма (АЛ. Cowley et al., 1994).
Именно поэтому необходимо детальное изучение систем адаптации. Коррекция негативных явлений адаптивных реакций является важной частью патогенетического и симптоматического лечения.
Ухудшение изгоняющей функции сердца ведет к понижению кровяного давления, что, в свою очередь вызывает немедленную реакцию компенсаторных механизмов организма (В.А. Бобров и др., 1999). Эффекты САС осуществляются за счет а - и /3-адренэргических реакций (L.P.Tilley, J.K. Goodwin 2001).
В сердце млекопитающих содержатся преимущественно /Зі— адренорецепторы и в меньшей степени /Зг- и «i-адренорецепторы. /3-адренергические рецепторы расположены на поверхности миокардиальных клеток, что делает их легко доступными как для норадреналина, высвобождающегося из синаптических нервных окончаний, так и для циркулирующего в крови адреналина.
Количество /3-адренорецепторов на поверхности миокардиальной клетки может изменяться в зависимости от многих факторов; в частности, при повышении уровня активности САС количество /3-рецепторов уменьшается, тогда, как в случае снижения уровня катехоламинов их количество возрастает. Иодсодержащие гормоны и кортизол увеличивают количество /3-рецепторов в миокарде, что приводит к усилению эффектов катехоламинов на сердце (так называемый пермиссивный эффект). Считается, что клеточные механизмы, связанные с активацией как /Зр, так и &-адренорецепторов миокарда, практически одинаковые.
Нарушение работы печени вследствие гемодинамических изменений при ХСН
При недостаточности сердца функция печени в ряде случаев остается нормальной, отдельные ее нарушения наблюдаются, главным образом, при выраженных расстройствах кровообращения. Застойная печень будучи сама результатом сердечных расстройств, усиливает нарушения некоторых обменных процессов, например, ресинтез гликогена из молочной кислоты (Л. Т. Малая, Ю.Г.Горб, 2004). При развитии недостаточности печени нарушаются такие процессы, как инактивация гормонов, в том числе альдостерона, глю кокортикоидов и АДГ , принимающих активное участие в регуляции водно-электролитного обмена. Нарушение функции печени вследствие венозного застоя способствуют возникновению и развитию различных экстракардиаль-ных нарушений метаболизма, которые объединяют в два клинических синдрома - отечный и синдром сердечной кахексии (Л.Г. Воронков, 2001).
Увеличение печени является центральным звеном в развитии недостаточности правого сердца. Особенно это относится к таким заболеваниям, как митральный стеноз с недостаточностью трёхстворчатого клапана, слипчивый перекардит, легочное сердце, а также другие заболевания сердца, легких, плевры и диафрагмы, приводящие к слабости систолы правого желудочка (К.П. Майер, 2004),
Наиболее часто наблюдается картина застойной печени. В результате различных поражений сердца наступает застой в правом предсердии, повышается давление в печеночных венах и происходит расширение центральных вен. Замедление кровообращения усиливает переполнение кровью центральных вен, центральной части долек и развивается центральная портальная ги-пертензия, имеющая преимущественно механическое происхождение, а за тем присоединяется гипоксия. У больных с недостаточностью кровообращения в венах печени содержится меньше кислорода, чем в нормальных условиях (Г.П. Арутюнов, 2001).
Постоянно повышенное давление в печеночных венах вызывает цен-тролобулярный некроз клеток печени, который встречается при всех формах поражения сердца, но особенно часто при недостаточности трехстворчатого клапана, митральном стенозе и слипчивом перекардите.
Наряду с расширением капилляров и центролобулярным некрозом начинается разрастание соединительной ткани между печеночных клеток (А.Т. Kristensen et al., 1990). Если устраняется венозный застой, происходит регенерация центролобулярных клеток и печень восстанавливает свою первоначальную структуру. Вместе с тем при снижении венозного давления не всегда устраняется венозный застой, тоже относится и к гистологической карти не печени (Л. Т. Малая, Ю.Г.Горб, 2004). При правожелудочковой недостаточности функциональные и морфологические изменения в печени проявляются очень рано. Застой в бассейне нижней полой вены ведет к гипертензии в системе воротной вены. Развитию портальной гипертензии способствует также рефлекторный спазм ветвей воротной вены, который, как предполагается, возникает в ответ на повышение давления в легочных венах. В результате застоя и гипертензии развиваются структурные изменения в портальной сосудистой системе, которые, в свою очередь, вызывают расстройства воротного кровообращения и усугубляют нарушения печеночной гемодинамики (M.E.Stark, J.H. Szurszewski, 1992).
Несмотря на повышенное кровенаполнение печени, портальный кровоток оказывается сниженным по сравнению с нормой, а снабжение портальной кровью печеночных клеток - недостаточным. Клеточная гипоксия вследствие неадекватного и замедленного кровотока, а также некрозов и атрофии печеночных клеток, возникающих в результате венозного застоя и портальной гипертензии, ведет к развитию цирротических изменений в печени (К.П. Майер, 2004; L. Roth, D.J. Meyer, 1995).
Застой в печени и в дальнейшем цирроз клинически проявляются увеличением размеров печени и нарушением её многочисленных функций. Повышается активность трансаминаз крови, увеличивается концентрация билирубина, возможно развитие желтухи. Концентрация альбуминов в крови снижается, а у-глобулинов повышается .
Усиливающаяся гипоксия угнетает процессы ресинтеза макроэргиче-ских фосфорных соединений, что приводит к развитию энергетической недостаточности миокарда. Развитие гипопротеинемии при снижении белково-образовательной функции печени ведет к снижению онкотического давления плазмы. Нарушение инактивации гормонов в печени может поддерживать высокую концентрацию в крови альдостерона и антидиуретического гормона, которые имеют важное значение в развитии отечного синдрома. (К.П. Майер, 2004; S.A. Center et al., 1999).
Метод определения типа высшей нервной деятельности
Работу проводили в ФГОУВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» и на базе ветеринарной клиники «Центр» (г. Москва).
Для решения поставленных задач в работе использовано 37 собак-пуделей, которых разделили на 3 группы: 1-я группа - клинически здоровые собаки, 2-я и 3-я группы - собаки, страдающие ХСН (III функциональный класс). У собак 2-ой группы ХСН проявилась внезапно, у собак 3-ей - постепенно. Диагноз ХСН устанавливали комплексно, на основании анамнеза, клинического осмотра, эхокардиографии с допплерографическим исследованием кровотока, электрокардиографии, рентгенографии. Животных 1-ой группы также подвергали клиническому осмотру и специальным методам исследования (эхокардиографии с допплерографическим исследованием кровотока, электрокардиографии, рентгенографии) для исключения субклинического течения заболеваний сердечно-сосудистой системы. При формировании групп мы использовали животных сильного уравновешенного подвижного типа
Собаки всех групп были разделены на 3-й подгруппы в зависимости от возраста: от 6 до 7 лет, от 8 до 9 лет и от 10 до 11 лет. Все животные подбирались по принципу аналогов: кобели, пудели, в возрасте от 6 до 11 лет, живой массой 15-20 кг.
Для стандартизации результатов нами в опыте были оставлены только те животные, которые при кормлении получали промышленно приготовленные рационы для животных старших возрастных групп.
Поскольку кровь является наиболее важной биологической жидкостью организма, объединяющей все органы и ткани и наиболее полно отражающей протекающие в них процессы, материалом для исследования служила сыворотка и плазма крови. Кровь у всех групп собак брали в утренние часы нато щак.
Для биохимических исследований забор крови производили с использованием вакуумных пробирок. (Пластиковые пробирки Vacutainer объемом 3 мл, содержащие 3,8 % тринатрия цитрат в качестве антикоагулянта). При определении норадреналина при взятии крови из вены соблюдали все необходимые меры предосторожности. Плазму хранили при 4-8 С в течение 6 часов. Для хранения в течение более длительного срока плазму замораживали и хранили при -20 С. Не использовали сильно гемолизованные образцы, образцы от больных желтухой или образцы с повышенным содержанием ли-пидов.
Сыворотку крови получали методом отстаивания цельной крови и ретракции кровяного сгустка с последующим центрифугированием (при необходимости). Сыворотку отделяли центрифугированием при скорости 2000 об/мин в течение 10-15 минут.
Для определения типа высшей нервной деятельности использовали известную методику с применением трещетки (Крушинский Л.В. и др., 1994).
Собакам давали в мисках их обычную порцию пищи в обычное время кормления. Когда они начинали есть, в 20-30 сантиметрах от миски включали ручную трещетку-пулемет. Собаки по-разному реагировали на этот раздражитель. Одни собаки совершенно не реагировали, продолжая спокойно есть, другие - сразу прекращали есть и долго не подходили к своей миске; третья группа собак в первые секунды действия отходили от бачка, однако, несмотря на продолжающееся ее действие, они возвращались к миске и продолжали есть корм.
Собаки, не реагирующие на действие трещетки или быстро к нему привыкающие к нему, были отнесены нами к сильному типу и оставлены в эксперименте (37 собак), собаки, проявившие выраженную реакцию к трещетке (больше не подходившие к миске), были отнесены нами к слабому типу и выведены из эксперимента (9 собак).
Норадреналин определяли с помощью стандартного набора Noradrenalin ELISA. Набор предназначен для количественного определения химически модифицированного норадреналина в моче и плазме крови.
Принцип метода и ход определения. На стадии приготовления образца (обозначаемого в дальнейшем общим названием этого класса - катехола-мин) норадреналин специфически экстрагировали с помощью борированного аффинного геля, связывающего цис-диолы, и последовательно ацилировали.
После элюции использовали стадию энзиматического превращения ацилированного норадреналина в N-ацил-норметанефрин.
При проведении иммуноферментного анализа модифицированный ка-техоламин связывается со специфическими антителами, иммобилизованными на поверхности лунок микротитровальных планшетов. После стадии промывания к дополнительному эпитопу модифицированного катехоламина присоединяли антитела, конъюгированные с щелочной фосфатазой (АР), образуя тем самым комплекс-сэндвич.
После отмывания несвязавшихся антител, меченных АР, для определения использовали систему амплификации.
В предлагаемом сэндвич-анализе интенсивность развивающейся окраски, измеряемая при 490 нм, пропорциональна концентрации катехоламина в образце. Для построения калибровочной кривой использовали величины оптической плотности, измеряемые для стандартов в наборе, из полученной калибровочной кривой рассчитывали концентрации катехоламина в исследуемых образцах.
Определение изоферментного спектра лактатдегидрогеназы и креатинкиназы
В опытной группе собак с постепенно проявившейся ХСН уровень креатинина был также достоверно выше в сравнении с группой контроля и составил 128,8+2,1 мкмоль/л у собак 6-7 лет; 136,9+3,9 мкмоль/л у собак 8-9 лет и 145,7+3,4 мкмоль/л у собак 10-11 лет соответственно. Также было отмечено достоверное (на 13 %) повышения уровня креатинина с возрастом в этой группе животных.
С 6-ти летнего до 11-ти летнего возраста концентрация креатинина снизилась в 1,52 раз (Р 0,001), а мочевины - в 1,33. раз (Р 0,001). Обнаруженное нами снижение концентрации мочевины и креатинина согласуется с работами Кудрявцева А.А, Кудрявцевой Л.А. (1974), Haneko J.J. (1980), Fontaine М., Cadore J.-L. (1995), Карпенко Л.ІО. (2001) и др.
В сравнении со здоровыми собаками ухудшение насосной функции сердца, вызванное ХСЫ приводит к снижению почечного кровотока, как в результате снижения сердечного выброса, так и вследствие компенсаторного перераспределения кровотока за счет повышения активности САС.
Нами установлено увеличение с возрастом собак при ХСН концентрации креатинина в крови. При внезапно проявляющейся ХСН достоверных изменений в концентрации креатинина в крови в 6-7 летнем возрасте нет (1,03), в 8-9 летнем - увеличение в 1,5 раза (Р 0,001) и в 10-11 летнем - увеличение в 1,6 раза (Р 0,001). Значительные отличия у собак с концентрацией креатинина в крови при постепенно проявляющейся ХСН - в 6-7 летнем возрасте увеличение в 1,3 раза (Р 0,001), в 8-9 летнем - увеличение в 1,9 раза (Р 0,001) и в 10-11 летнем - увеличение в 2,3 раза (Р 0,001), т.е. более выраженные изменения.
У собак с внезапно и постепенно проявляющейся ХСН в отличие от здоровых собак концентрация мочевины в крови значительно выше: с внезапно проявляющейся ХСН - в 6-7 летнем возрасте увеличение в 1,8 раза (Р 0,001), в 8-9 летнем - увеличение в 2,3 раза(Р 0,001) и в 10-11 летнем - увеличение в 2,3 раза (Р 0,001); с и постепенно проявляющейся ХСН - в 6-7 летнем возрасте увеличение в 1,6 раза (Р 0,001), в 8-9 летнем - увеличение в 2,4 раза (Р 0,001) и в 10-11 летнем - увеличение в 2,4 раза (Р 0,001). Эти данные согласуются с исследованиями, проведенными в медицине человека (Boegehold М.А. 1989; Чазов Е.И., 1997, 1999; Tillci L.P., 2001).
Таким образом, изменения концентраций креатинина и мочевины в крови собак имеют как возрастной, так и зависимый от проявления ХСН характер. Исследования показали, что в крови у собак с возрастом и с ХСН определяются натрий, калий, магний, кальций (табл. 18-21 и рис. 11-14). У здоровых собак выявили определенные закономерные возрастные изменения содержания названных минералов в крови.
В группе здоровых животных было отмечено недостоверное повышение натрия в крови с возрастом, что можно объяснить возрастными изменениями в почках, приводящие к субклиническому течению гломерулонефрита и ограничения выведения натрия с мочой (Anderson R.R., 1982). Задержка натрия может отмечаться при гиперкортицизме и пшеральдестеронизме, которые часто возникают у животных старших возрастных групп на фоне дисбаланса эндокринной системы (Шестаков В.Н., 1999).
У здоровых животных значения натрия колебались от 140,6+15,8 до 150,2+13,8 ммоль/л, калия - от 4,3+0,1 до 3,9+0,4 ммоль/л, кальция - от 2,0+0,2 до 2,6+0,1 ммоль/л, магния - от 0,85+0,07 до 0,93+0,07 ммоль/л. Были обнаружены определенные изменения в содержании исследуемых показателей у здоровых и больных животных в целом и в зависимости от возраста. Правда, значения кальция у собак во всех группах находились в пределах нормальных значений или на верхней границе нормы.
В опытной группе у собак с внезапно проявившейся ХСН уровень натрия составил 170,0+16,1 ммоль/л у собак 6-7 лет, 156,4+28,8 ммоль/л у собак 8-9 лет, что достоверно выше, чем у собак в возрасте 10-11 лет. У таких животных достоверных отличий от контрольных значений выявлено не было, хотя было отмечено увеличение этого показателя по сравнению с референтными величинами (145-150 ммоль/л).
В опытной группе собак с постепенно проявившейся ХСН уровень натрия составил 150,6+12,1 ммоль/л у собак 6-7 лет; 160,2+18,4 ммоль/л у собак 8-9 лет и 160,3+16,9 ммоль/л у собак 10-11 лет соответственно.
