Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Биологическая роль микроэлементов 10
1.1.1. Значение железа в организме животных 10
1.1.2. Значение меди в организме животных 14
1.1.3. Значение кобальта в организме животных 15
1.1.4. Значение цинка в организме животных 17
1.1.5. Значение марганца в организме животных 21
1.1.6. Значение йода в организме животных 22
1.1.7. Значение селена в организме животных. 24
1.2. Комплексонаты и их значение 26
1.3. Янтарная кислота и ее производные 32
1.4. Хелатокомплексные препараты микроэлементов, применяемые в настоящее время 37
2. Материалы и методы исследования 46
3. Собственные исследования 50
3.1. Изменение клинических показателей крови 50
3.2. Влияние препарата на соотношение отдельных видов лейкоцитов в крови щенков 51
3.3. Изменение биохимических показателей сыворотки крови щенков.56
3.3.1. Изменения показателей общего белка и белковых фракций сыворотки крови 56
3.3.2. Изменение показателей азотистого обмена у щенков 63
3.3.3. Изменение уровня общего билирубина сыворотки крови у щенков 66
3.3.4. Изменение активности некоторых ферментов сыворотки крови щенков 69
3.4. Изменение состояния иммунного статуса организма у щенков 71
3.4.1. Изменения показателей активности фагоцитоза нейтрофилов щенков 75
3.4.2. Изменения показателей метаболической активности нейтро-фильных фагоцитов щенков 81
3.4.3. Изменение содержания показателей гуморальных факторов естественной резистентности организма щенков 84
3.5. Динамика роста живой массы щенков 88
Обсуждение полученных результатов 91
Выводы 130
Практические предложения 132
Список литературы 133
- Значение железа в организме животных
- Комплексонаты и их значение
- Влияние препарата на соотношение отдельных видов лейкоцитов в крови щенков
- Изменение состояния иммунного статуса организма у щенков
Введение к работе
Актуальность темы. Основной задачей, стоящей перед ветеринарной и зоотехнической наукой и практикой, является защита здоровья животных от заболеваний инфекционного и незаразного характера. Общепризнано, что наибольший удельный вес (свыше 95%) заболеваний составляют незаразные болезни животных (Анохин Б.М., 1997). Радикальным путем решения этой проблемы следует считать изыскание эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств (Андреева Н.Л., 1992; Антипов В.А., Семененко М.П., Соколовский С.Л., 1997; Аргунов М.Н., 1997; Рабинович М.И., Ермолин А.В., Гринишин А.В., 1996).
В общей номенклатуре незаразных болезней значительную долю занимают гипомикроэлементозы (паракератоз, гипокобальтоз, гипокупроз, желе-зодефицитная анемия и другие эндемические болезни), наносящие животноводству значительный экономический ущерб.
Поэтому создание комплексных микроэлементных препаратов против анемии и заболеваний, связанных с дефицитом микроэлементов, особенно актуально.
Функциональная активность этих микроэлементов, их широкое участие во всех метаболических реакциях, в клеточном химизме, связаны с их способностью образовывать хелатные структуры (Афонский СИ., 1965; Казаков Х.Ш., Хазипов Н.З., 1963, 1964, 1965; Казаков Х.Ш., Тэн Э.В., 1978, Гизатул-лина Р.А., 1969; Казаков Х.Ш, 1974; Эйхгорн, 1978; Зигель X., 1982; Хьюз М, 1983; Кальницкий Б.Д., 1985; Калимуллин Ю.Н., 1988; Хазипов Н.З., 1997).
В последнее время в научной литературе появился целый ряд статей зарубежных и отечественных исследователей о применении янтарной кислоты и ее производных, способствующих активному росту растений и животных, повышающих резистентность организма. (Мудрый И.Н., 1973; Канаян Л.Р., Акопян В. И., Баласанян Д.С., 1986; Карелин Д.С., Наумкина Е.В, 1994;
Найденский М., Лузбаев Л., Зубалий С, 1996; Найденский М., Нестеров В., Кармолиев Р. и др., 2002), В качестве антистрессовой добавки янтарная кислота и ее производные уже используются в птицеводстве. Изучение возможности применения этого биологически активного вещества у животных также представляет широкое поле для исследователей.
Известно применение соединений отдельных микроэлементов с различными лигандами, однако сведений о применении препаратов содержащих целый комплекс микроэлементов с биологически активными аминокислотами, недостаточно.
Тема исследований актуальна и обладает новизной, так как в научно-технической литературе отсутствуют данные по влиянию микроэлементного комплекса на клинические, биохимические, иммунологические показатели крови, естественную резистентность и иммунную реактивность организма у щенков собак.
Цель и задачи исследования. Целью наших исследований явилось изучение клинических и биохимических показателей крови, естественную резистентность и иммунную реактивность организма щенков, их общего развития и внешнего вида, при включении в рацион микроэлементного препарата под торговым названием «Гемовит-плюс», содержащего комплекс семи микроэлементов в виде хелатного соединения с производным янтарной кислоты (этилендиаминдиянтарной кислоты - ЭДДЯК), на фоне использования аналогичных доз микроэлементов в виде минеральных солей, традиционно используемых в кормлении животных.
В решении поставленной цели были определены следующие задачи для исследований влияния препарата Гемовит-плюс на:
1. Клинические показатели крови: а) содержание количества эритроцитов и гемоглобина; б) изменение лейкограммы и содержания лейкоцитов;
2. Биохимические показатели: а) показатели белкового обмена (общий белок и белковые фракции сыворотки крови); б) показатели азотистого обмена (мочевина и креатинин сыворотке крови); в) показатели пигментного обмена (общий билирубин сыворотки крови); г) активность ферментов сыворотки крови (АлТ, АсТ, щелочной фосфатазы);
3. Иммунологические показатели: а) активность фагоцитоза (кислородзависимые механизмы (НСТ- тест); кислороднезависимые механизмы (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, переваривающая способность полиморф- ноядерных нейтрофилов, количество фагоцитированных и пере варенных микробных тел в 1мкл крови)); б) гуморальные показатели естественной резистентности и иммун ной реактивности (лизоцимная активность сыворотки крови, бак терицидная активность сыворотки крови);
4. Рост и развитие щенков.
Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые определены клинические (содержание эритроцитов, лейкоцитов и гемоглобина) показатели крови, лейкоформула, показатели азотистого обмена, общего билирубина, трансаминаз, показатели, характеризующие активность фагоцитоза (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс, переваривающая способность полиморфноядерных нейтрофилов, НСТ-тест, количество фагоцитированных и переваренных микробных тел в 1мкл крови), содержание гуморальных показателей естественной резистентности и иммунной реактивности (уровень общего белка и белковых фракций, лизоцимная активность сыворотки крови, бактерицидная активность сыворотки крови) у щенков собак под влиянием хелатокомплексного микроэлементного препарата Гемо- вит-плюс, определена динамика действия данного препарата на организм щенков собак.
Теоретическая и практическая значимость исследований.
На основании проведенных исследований получены данные о влиянии микроэлементов Fe, Mn, Си, Zn, Со, Se, и І в виде комплекса с производным янтарной кислоты на клинические и биохимические показатели крови, естественную резистентность и иммунную реактивность организма щенков. Установлена эффективность применения данной хелатной формы микроэлементов. Определены закономерности влияния данной хелатной формы микроэлементов как антианемического, иммунно- и ростостимулирующего препарата.
Основные положения, выносимые на защиту:
Влияние препарата Гемови-плюс на основные клинические и биохимические показатели крови щенков.
Изменение показателей естественной резистентности и иммунной реактивности организма щенков под действием препарата Гемовит-плюс.
Эффективность влияния препарата Гемовит-плюс на рост и общее развитие щенков.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: X Международном ветеринарном конгрессе по ветеринарной медицине мелких домашних животных. Москва, 2002; научно-практической конференции «Проблемы и перспективы развития агропромышленного комплекса Тверского региона», посвященной 30-летию Тверской государственной сельскохозяйственной академии (2002); научной конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ 2003; - XI Международном ветеринарном конгрессе по ветеринарной медици не мелких домашних животных. Москва, 2003; - 58-ой научной конференции молодых ученых и студентов СПбГАВМ 2004; XII Международном ветеринарном конгрессе по ветеринарной медицине мелких домашних животных. Москва, 2004; научно-практической конференция «Достижения сельскохозяйственной науки - развитию агропромышленного комплекса» Тверь, 2004 Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 научных статей, в которых изложено основное содержание работы.
Внедрение результатов исследования.
Результаты исследований реализованы в практике выращивания и кормления домашних животных в ОО ОЛЖ «Тверь» и питомнике Шелти «Тверская сказка» г. Твери, а также в Национальном клубе породы Шелти Российской кинологической Федерации (Москва). На основании полученных экспериментальных данных разработаны и внесены дополнения в наставление к новому препарату Гемовит-G, ТУ 9337-001-59208309-03, утвержденному Департаментом ветеринарии Минсельхоза России 23.07.2003 № 13-4-03/0829.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений и приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 12 рисунками. Список литературы включает источников 262, в том числе 62 зарубежных автора.
Значение железа в организме животных
Нарушения биоэнергетических процессов играют важную роль в патологии животных и человека. Любое изменение обмена прямо или косвенно связано с нарушением биоэнергетических процессов. Так, например, в основе всех повреждений печени, независимо от их этиологии, лежат изменения биоэнергетики и синтеза клеточных ферментов (Комаров Ф.И. и др., 1998).
Нарушения биоэнергетических процессов играют, несомненно, важную роль и при сердечно-сосудистых заболеваниях. При заболеваниях мышцы сердца выявлены изменения, связанные с нарушениями образования энергии (АТФ), превращения химической энергии в механическую, а также свойств сократительных белков. Несмотря на то, что патобиохимический механизм отдельных заболеваний сердца недостаточно изучен, в кардиологии все более прокладывает себе дорогу мнение о том, что в основе заболеваний сердца лежат нарушения обмена ферментов и микроэлементов (Камышников B.C., 2000).
Микроэлементы, вступая во взаимодействие с белками организма, образуют с ними металлоорганические комплексы. Иногда эти комплексы настолько специфичны, что без микроэлементного компонента тот или иной химический регулятор теряет свою активность (Скальный А.В.,1999; Кузнецов С.Г., 1986).
Значение железа в организме животных Железо - необходимый организму элемент. Практически все железо в организме животных находится в форме органических соединений, и лишь очень незначительное количество элемента находится в ионной форме. Все железосодержащие комплексы делятся на две группы: порфириновые (геми-новые) формы и непорфириновые (негеминовые). Геминовые формы представлены гемоглобином, миоглобином и гемсодержащими ферментами - ци-тохромами, цитохромоксидазой, каталазой, пероксидазоЙ. Негеминовое железо составляют трансферрин, ферритин, гемосидерин и некоторые протеи-наты железа. Соотношение между этими формами следующее: на долю пор-фиринового железа приходится 70 - 75% от общего количества, для непор-фиринового 25 - 30%. Примерно 65% общего количества железа содержится в циркулирующей крови, 10% в печени, 10% в селезенке, 5% в мышцах, 5% в скелете и 2% в других органах. Основное железосодержащее соединение в организме - гемоглобин, на его долю приходится до 72% общего количества железа (Георгиевский В.И., и др., 1979).
Физиологическая роль соединений железа в организме связана с тем, что они обеспечивают дыхание, окислительно-восстановительные процессы и влияют на кроветворение (Камышников B.C., 2000).
Гемоглобин входит в состав эритроцитов, синтезируется в их молодых формах, является дыхательным пигментом крови, придает ей красный цвет. Гемоглобин является переносчиком экзогенного кислорода и эндогенного углекислого газа. Миоглобин является дыхательным белком сердечной и скелетной мускулатуры, транспортирует кислород и регулирует его содержание в мышцах. Ферритин и гемосидерин представляют собой запасные соединения железа клетки, находящиеся главным образом в ретикулоэндотели-альной системе печени, селезенки и костного мозга. Трансферрин служит транспортной формой железа. Железосодержащие ферменты и негеминовое железо клетки находится в митохондриях, выполняют дыхательные и каталитические функции, участвуют в окислительно-восстановительных процессах (Георгиевский В.И., и др., 1979).
Большинство животных очень эффективно усваивают железо, поэтому потери этого минерала в организме минимальны. Железо гемоглобина ре-циркулируется и повторно используется, когда красные кровяные тельца разрушаются и только минимальное количество теряется через почки (Linda Р. Case et al.„ 2000), эндогенные потери железа с калом на 2/3 представлены железом отслоившегося эпителия слизистой оболочки кишечника и на 1/3 железом, выделяемым с желчью.
К отдельным органам из кишечника железо транспортируется в виде двух соединений: ферритина, содержащегося в слизистой кишечника, и трансферрина, находящегося в сыворотке крови. Около 90% абсорбированного железа поступает в костный мозг, где оно включается в созревающие эритроциты, а остальная часть железа откладывается в органах депо, преимущественно в печени. Железо в организме совершает постоянный кругооборот. При физиологическом распаде эритроцитов 9/10 железа остается в организме и идет на построение новых эритроцитов, а теряемая 1/10 часть пополняется за счет железа пищи, что способствует временной независимости организма от поступления железа извне (М.Г.КоломиЙцева, 1970).
При недостатке железа в организме развивается железодефицитная анемия, заболевание, выражающемся в уменьшении количества гемоглобина и числа эритроцитов в единице объема крови, а также при кровопотерях и ряде паразитарных заболеваний. При падении уровня гемоглобина в организме нарушаются окислительные процессы, развивается кислородное голодание тканей (гипоксия) (Камышников B.C., 2000).
Потребность животных в железе зависит от условий кормления, так как корма являются единственным источником железа для организма. Продукты питания содержат железо, в основном, в форме различных комплексов с органическими кислотами, углеводами, белками в виде гемовых и негемовых соединений - гемоглобина, миоглобина, ферритина, гемосидерина, ферри-доксина. Небольшая часть железа в кормах представлена неорганическими веществами. На усвоение железа в желудочно-кишечном тракте влияет не только количество и форма элемента в кормах, но и общая переваримость и полноценность рациона, соответствие кормления животных с их потребностями по органическому, минеральному и витаминному составу (Бацанов Н.П., 1992).
Комплексонаты и их значение
Комплексообразование характерно практически для всех элементов периодической системы, однако имеются большие различия в способности отдельных металлов образовывать комплексы с соответствующими группами (лигандами).
Комплексонаты или биокоординационные соединения - это комплексные соединения, составляющие наиболее обширный и разнообразный класс веществ, к которым также относятся многие металлоорганические соединения: витамин Bi2, гемоглобин, хлорофилл и другие, играющие большую роль в физиологических и биохимических процессах (Аверина Н.Г., Яронская Е.Е., Дудкина Т.С., 1991; Бабенко Г.А., 1965; Логинов В.В., Бинеев Р.Г., 1992; Малахов А.Г., 1982; Blumenkrantz N. Blomstedt L., 1987; Muscalu G., Grunderg R., Scornea L., 1989; Vishwanath R., Munday R., Curson В., Shannon P., 1992).
Еще в 1893 г. А. Вернер удачно изложил свойства комплексных соединений в координационной теории, которая явилась руководством к использованию этих веществ. Широкое распространение этой теории объясняет, почему комплексные соединения часто называют координационными. Согласно координационной теории, в молекуле любого комплексного соединения один из ионов, обычно положительно заряженный, занимает центральное место и называется комплексообразователем или центральным ионом. Вокруг него в непосредственной близости расположено или, как говорят, координировано, некоторое число противоположно заряженных ионов или электроотрицательных молекул, называемых лигандами и образующих внутреннюю координационную сферу соединения. Остальные ионы находятся на более далеком расстоянии от центрального иона, составляя внешнюю координационную сферу. Число лигандов, образующих внутреннюю сферу, называется координационным числом. Координационное число не является неизменной величиной для данного комплексообразователя и обусловлено также природой лиганда, его электронными свойствами (Забалуев Г.И., 1986; Werner А., 1901).
Возрастание способности к образованию стойких комплексов в ряду Са , Mg , Mn , Fe , Ni ,Cu увеличивает возможность металлов участвовать в качестве специфических катализаторов важнейших жизненных процессов (Вильяме, 1961). Обнаружение микроэлементов в составе большого числа ферментов превратило учение о микроэлементах в важнейшую проблему биологии. В настоящее время более чем для 200 ферментов, т. е. примерно для одной четверти из известных, предполагается их активирование металлами (Дорошкин В.И., 1998). Минеральные элементы, находящиеся в биологических системах, физиологическую функцию выполняют в виде ионов и комплексов. В виде комплексов они находятся в составе ферментов, гормонов, гемоглобина, миогло-бина, различных трансферинов плазмы крови и т.д. По происхождению комплексонаты могут быть растительные, животные, микробные, дрожжевые и синтетические (органические и неорганические). К основным типам комплексных соединений относятся аммиакаты (комплексы, в которых лигандами служат молекулы аммиака), аквакомплек-сы (лигандом выступает вода), ацидокомплексы (лигандом являются анионы) (Забалуев Г.И., 1986; КонцевенкоВ.В., 1991). К координационным относятся также циклические или хелатные комплексные соединения. Понятие "хелат" было введено в 1920 г Морганом и Дрю и происходит от греческого слова chele (коготь, клешня краба) и первоначально должно было обозначать, что лиганд охватывает центральный атом двумя или несколькими зубцами (донорными атомами) как клешней. Внутренняя сфера комплексных соединений сохраняет стабильность при растворении. Ионы, находящиеся во внешней сфере, в растворах легко отщепляются. Хелатные соединения отличаются особой прочностью, так как центральный атом в них как бы блокирован циклическим лигандом. Наибольшей устойчивостью обладают хелаты с пяти и шестичленными циклами. В кислой среде устойчивость хелатов снижается (Забалуев Г.И., 1986; Конце-венкоВ.В., 1991; Werner А., 1901). В природе встречаются следующие лиганды органического происхождения: аминокислоты, карбоновые кислоты, углеводы, пептиды, белки, фос-фолипиды, нуклеиновые кислоты, нуклеотиды и другие соединения, содержащие электроннодонорные атомы (азот, кислород, серу), являющиеся коллекторами для образования многочисленных комплексных соединений с катионами биоэлементов. При взаимодействии некоторых ионов с органическими соединениями (этилендиаминтетраацетат, аминокислоты и др.) происходит процесс хелатирования, т.е. образования клешневидных комплексов. Координационные соединения (хелаты) - это наиболее выгодная для организма форма взаимодействия металла с лигандом. Активность элементов в этих комплексах часто возрастает в сотни и тысячи раз в сравнении с активностью металла в ионном состоянии (Чернавина И.А., 1970; Дятлова Н.М., и др., 1988; Лапшин С.А., Кальницкий Б.Д., и др., 1988).
Влияние хелатов на усвоение микроэлементов связано с их константой устойчивости (КУ). При константе устойчивости менее 13 или более 17 хелат малоактивен. Эффективен хелат в том случае, если КУ выше, чем у соединений микроэлементов с компонентами корма и ниже соединений в тканях организма. В этом случае хелатирующий агент захватывает металл из корма, транспортирует через кишечную стенку и отдаёт тканям.
Многочисленные исследования по использованию комплексонатов биометаллов в области животноводства и птицеводства свидетельствуют о целесообразности использования недостающего количества микроэлементов в рационе сельскохозяйственных животных в виде комплексонатов, так как активность биометаллов в составе комплексонатов, по сравнению с неорганическими солями, намного выше. Кроме того, частично или полностью стирается антагонизм между элементами, ингибируются многочисленные факторы корма, абсорбции биоэлементов, повышается доступность микроэлементов и т.д. (Дятлова Н.М. и др., 1984; Цюпко В.В. и др., 1990). Повышение перевариваемости питательных веществ рационов под влиянием биогенных металлов и их комплексных соединений также отмечено и в других работах по данной тематике (Калимулин Ю.Н., 1991; Кабиров Г.Ф., 1987).
Эксперименты и ветеринарная практика показывают, что комплексные соединения легко усваиваются организмом и животные могут переносить довольно большие дозы микроэлементов, являющиеся при даче неорганических солей токсичными. За последние годы состав противоанемических средств пополнился комплексными соединениями биогенных металлов железа, кобальта, меди и др. с биологическими субстратами различного рода - белками и аминокислотами (Кальннцкий Б.Д. и др.; 1990).
Влияние препарата на соотношение отдельных видов лейкоцитов в крови щенков
Фагоцитарный индекс представляет собой процент активных фагоцитов по отношению ко всем нейтрофилам. Фагоцитарное число представляет собой среднее число фагоцитированных микробных тел на один нейтрофил, поглощенных 100 фагоцитами через 30 минут инкубации, позволяет судить о способности нейтрофилов к захвату чужеродных частиц за контрольное время. Переваривающая способность нейтрофилов представляет собой процент переваренных микробных тел в 100 фагоцитах через 120 минут инкубации и может быть выражен через коэффициент фагоцитарного числа. Позволяет судить о завершенности фагоцитоза. Считается что через 120 минут инкубации микробно - лейкоцитарной взвеси, фагоцитоз должен быть большей частью завершен, а количество микроорганизмов на один фагоцит должно быть минимально. Показатели, характеризующие количество фагоцитированных микробных тел в 1 мкл. крови и количество переваренных микробных тел в 1 мкл. крови являются итоговыми показателями, т.к. учитывают все параметры основных факторов показателей фагоцитоза, в том числе и количество фагоцитов в 1 мкл. крови. НСТ-тест позволяет судить о метаболических процессах, происходящих в лейкоцитах. Все эти данные позволяют наиболее полно оценить фагоцитарную активность лейкоцитов. Берестов В.А. и Малинина Г.М. (1991) к первоочередным механизмам защиты относят неспецифическую защиту системы крови, включающую клеточные и гуморальные факторы устойчивости. К числу клеточных факторов относится фагоцитарная реакция, заключающаяся в способности клеток (фагоцитов) захватывать и переваривать проникающие в организм микробы и другие инородные объекты. Все фагоцитирующие клеточные элементы (гранулоциты) подразделяются на подвижные микрофаги, или сегментоядерные лейкоциты, и подвижные и неподвижные макрофаги, или одноядерные фагоциты (Мечников, 1953). Кроме того, все макрофаги, подвижные и фиксированные, обладающие высокой функциональной активностью, по предложению Научной группы ВОЗ (1972) отнесены к единой мононуклеарной фагоцитарной системе, Гранулоциты (нейтрофильные, эозинофильные, базофильные) - это дифференцированные, специализированные клетки. Они содержат в цитоплазме гранулы, имеют дольчатое ядро, способны к фагоцитозу, но фагоцитируют, выйдя из кровотока в окружающие сосуд ткани. Разрушаясь, они выделяют ферменты и биологически активные вещества, оказывающие влияние на окружающие ткани и проницаемость капилляров (Бажибина Е.Б. и др., 2004). Фагоцитоз относится к важнейшим факторам защиты организма. Эту функцию выполняют многочисленные клетки РЭС, макро- и микрофаги. Вынести суждение об уровне фагоцитоза возможно на основании исследования фагоцитарной активности лейкоцитов крови. С помощью фагоцитоза организм освобождается от возбудителей инфекции, многих токсических веществ, продуктов некротического распада тканей. Фагоцитоз также играет определенную роль в процессе выработки специфических антител. Поскольку только захват микробов лейкоцитами еще не отражает полностью иммунного состояния лейкоцитов, важно определение и завершенности фагоцитоза. По степени фагоцитоза можно судить о функциональном состоянии нейтрофилов, а также о реактивности организма. Основная функция нейтрофилов - защита внутренней среды макроорганизма от бактериального вторжения, а также контроль количества и качества сапрофитной микрофлоры пищеварительного тракта и других органов. В связи с этим и большая значимость, отводимая показателям функциональной активности сегментоядерным нейтрофилам в комплексной оценке иммунного статуса организма человека и животных. Результаты исследований, проводимых по изучению показателей активности фагоцитоза сегментоядерных нейтрофилов, у щенков обеих групп представлены в таблице 11 ирис 7,8,9, 10,11. Анализ результатов таблицы 11 позволяет сделать вывод о том, что активность фагоцитоза по оцениваемым параметрам имеет положительную динамику в обеих группах испытуемых животных. Наибольший процент активных фагоцитов (фагоцитарный индекс) в группах опыта и контроля наблюдается на 40-ой день и увеличивается по отношению на начало эксперимента в группе опыта на 105,4% (РОДЮ1) и группе контроля на 61,7% (Р 0,001), превышение данных группы опыта над группой контроля (40-ой контрольный день эксперимента) составляет 22,2% (Р 0,001). Динамика роста фагоцитарного индекса в обеих группах в течение всего опыта не одинакова. Фактически, между 20-ым днем постановки опыта и окончанием опытного периода, изменение данного показателя в группе контроля носит незначительный характер. У животных опытной группы существенная динамика фагоцитарного индекса наблюдается в период от начала эксперимента и до 40-го контрольного дня, с последующим небольшим снижением спустя 25 дней после прекращения дачи микроэлементных препаратов. Изменение значения фагоцитарного индекса в группе щенков, принимавших препарат Гемовит-плюс на протяжении всего эксперимента, носит более существенный характер чем у животных группы контроля. Аналогичная картина наблюдается и в остальных исследуемых показателях фагоцитарной активности экспериментальных групп щенков. Максимальные показатели фагоцитарного числа в группе опыта и контроля наблюдаются на 40-ой день эксперимента и увеличиваются по отношению к преопытному периоду в группе опыта на 75% (Р 0,001), а группе контроля на 33% (Р 0,001), превышение данных группы опыта над группой контроля составляет 33,6% (Р 0,001). Максимальная переваривающая способность сегментоядерных ней-трофилов отмечается на 20-ый контрольный день в обеих группах экспериментальных животных, увеличиваясь в группе опыта на 410,8% (Р 0,001), а группе контроля на 95,6% (Р 0,001) с последующим динамическим снижением. Максимальная разница в показателях между группами наблюдается также на 20-ый контрольный день и составляет 150,9% (Р 0,001). Аналогично с высокой степенью достоверной разницы между группами испытуемых животных остается этот разрыв до окончания эксперимента. Для полной оценки активности фагоцитоза используются два итоговых показателя, которые учитывают абсолютные величины в показателях исследуемой активности, а именно: количество фагоцитированных микробных тел в 1 мкл, крови и количество переваренных микробных тел в 1 мкл. крови. Данные показатели являются наиболее информативными, так как вытекают из целого комплекса исследуемых значений, относящихся к фагоцитарной активности, имеют абсолютную величину измерения и дают реальное представление об обсуждаемом предмете. Динамика рассматриваемых показателей в группах развивается с разной интенсивностью (наиболее активно в группе опыта) в сторону увеличения и имеет максимальные значения на 40-ой день эксперимента.
Изменение состояния иммунного статуса организма у щенков
Еще в 1915 г академик Вернадский В.И. подсчитал, что в древности в питании использовалось 18 элементов, в 17 веке - 25, в 19 веке - 62, а в 1915 г - 69 (Вернадский В.И., 1954). Являясь основоположником изучения влияния микроэлементов на растительный и животный организмы, впервые объяснил биологическую роль микроэлементов в физиологических функциях животных. Сравнивая химический состав организмов с составом земной коры, он указывал, что организм не может существовать вне связи с биогеосферой.
Обобщая результаты исследований по биологии и геохимии, Вернадский В.И. создал новую науку - биогеохимию. Эти идеи получили свое дальнейшее развитие в трудах А.П.Виноградова (1952).
Академиком Самохиным В.Т.(1981) установлено, что если уровень содержания минеральных веществ ниже на 10-20 % нормы, то нужно ставить диагноз гипомикроэлементоз. Уже на начальной стадии патологического процесса в организме наступают и биохимическими методами выявляются нарушения основных видов обмена - белков, углеводов, липидов, макроэлементов (фосфора, кальция), падает активность ферментов, в том числе в пищеварительном тракте, из-за чего снижается использование питательных веществ из кормов и снижается резистентность и иммунобиологическая реактивность организма животных (Самохин В.Т., 1997).
Установлено наиболее эффективное влияние солей микроэлементов на животный организм при их комплексном применении (Буевич Э.М., 1968; Гражевская СБ., 1970; Кабыш А.А., Петухова Г.И. и др.,1992). За последние десятилетия, начиная с сороковых годов прошлого столетия, ведется активный поиск формы микроэлементных соединений, которая бы могла разрешить все противоречия, возникающие как между самими элементами, так и окружающей их средой (в премиксах, корме, внутренней среде желудочно-кишечного тракта и т.д.). Дефицит микроэлементов в организме животных связан также и с невозможностью включения их в обменные процессы, так как для этого они нуждаются в специальных носителях (аминокислоты, белки и другие) (Кали-мулин Ю.Н., 1991; Пантелеев СВ., 1994; Тен Э.В., 1987). Поэтому с углублением знаний о роли биологически активных веществ в жизнедеятельности животного организма внимание ученых сосредоточено на комплексных препаратах, полученных путем синтеза микроэлементов с аминокислотами или другими веществами, входящих в группу биокоординационных соединений. Функциональная активность этих соединений обусловлена их способностью образовывать хелатные структуры и участвовать во всех метаболических реакциях, в т.ч. клеточном химизме (КальницкиЙ Б.Д., 1985; Тен Э.В., 1987; Kinnersley A.M., 1993). В последние годы ветеринарные врачи в нашей стране стали уделять пристальное внимание лечению мелких домашних животных. Из-за того, что основным направлением ветеринарии в прежние годы было лечение и профилактика болезней сельскохозяйственных животных, многие заболевания плотоядных недостаточно хорошо изучены. К ним относятся и гипомикро-элементозы, в частности, железодефицитная анемия, или алиментарная гипо-хромная микроцитарная анемия (Замарин Л.Г.Д985, Кабыш А.А., 1986г.). Из-за дефицита экзогенного биодоступного железа в организме нарушается процесс биосинтеза молекул гемоглобина, формирование эритроцитов, синтез белков плазмы крови. Это приводит к дисбалансу всех окислительно-восстановительных процессов, понижению сопротивляемости организма к вторичным заболеваниям и в ряде случаев к гибели животных (КальницкиЙ БД, 1985). В настоящее время актуальность в этом направлении имеют соединения микроэлементов в виде комплекса с биолигандами. В данной форме ме-таллокомпоненты находятся в виде хелатных соединений, т.е. в виде биохимических структур, которые сходны с транспортными белками организма, что обеспечивает повышенную усвояемость микроэлементов (Скальный А.В.Д999), в т.ч. за счет химической невосприимчивости атомов микроэлементов к условиям окружающей их среды (Кузнецов С.Г.; 1992). Установлено, что синтетические хелатокомплексные соединения, благодаря их активному участию в обменных процессах, оказывают положительное действие на резистентность, продуктивные и воспроизводительную функцию сельскохозяйственных животных (Самохин В.Т., 1981; Кузнецов С.Г., 1992). К группе микроэлементов гемостимулирующего действия относятся химические элементы, которые в ничтожных количествах оказывают стимулирующее, биокаталитическое действие на процессы кроветворения, в первую очередь, эритропоэз. В настоящее время в качестве гемостимуляторов рассматривают 10 микроэлементов. Наиболее изученными, получившими применение на практике при лечении анемии являются медь, кобальт, цинк, селен (Ковальский В.В., 1963; Коломийцева М.Г., 1970; Идельсон Л.И., 1978). Обобщая огромный объем исследований, необходимо констатировать высокую биологическую роль микроэлементов и их важное значение в фармакологической регуляции практически всех функций организма, нормализующее действие солей микроэлементов на обменные процессы, гормональную активность желез внутренней секреции, воспроизводительную функцию животных (Кондратьев Ю.Н., 1977; Саттаров Д.Х., 1971; Турченко А.Н. и др., 1983). Основной задачей наших исследований явилось изучить влияние комплексного минерального препарата Гемовит-плюс, содержащего в своем со 95 ставе семь основных микроэлементов, на клинические, биохимические показатели крови, естественную резистентность и иммунную реактивность организма щенков, их общего развития и внешнего вида на фоне аналогичных доз микроэлементов в виде минеральных солей. В доступных литературных источниках оказалось сложно в полном объеме найти данные по обсуждаемым показателям, тем более у щенков собак, также нами не найдено данных о применении комплексных хелатных соединений у данного вида животных. Поэтому, в нашей работе для сравнения динамики и действия данных форм микроэлементов использованы, в том числе, результаты исследований авторов, изучавших данную тематику у других видов животных. Кровь является самой подвижной средой в организме, очень чутко реагирующей на самые незначительные физиологические и тем более патологические сдвиги. Состав периферической крови характеризует функциональное состояние кроветворной системы. Изменения в нем могут быть обусловлены заболеваниями системы крови и реакцией кроветворного аппарата на самые разнообразные патологические состояния. Изучение состава периферической крови позволяет судить о состоянии функции кроветворения: его эритропоэтической, лейкопоэтической и тромбопоэтической функциях (Абрамов М.Г., Абрикосова М.А., Агранович А.И. и др., 1970).
