Содержание к диссертации
Введение
Аналитический обзор 7
1.1 Биохимические особенности льна 7
1.2 Белковый комплекс семян льна 18
1.3 Методы модификации функциональных свойств растительных белков 29
1.4 Применение растительных белков в пищевой промышленности 32
2 Методическая часть 38
2.1 Характеристика объектов исследования 38
2.2 Методы проведения экспериментов и лабораторных исследований 41
2.3. Методы определения функциональных свойств белковых продуктов 59
3 Экспериментальная часть 63
3.1 Биохимическая характеристика белкового комплекса семян льна исследуемых сортов 63
3.2 Модификация функциональных свойств белков семян льна ограниченным гидролизом в процессе проращивания 67
3.3 Модификация функциональных свойств белков семян льна термоденатурацией 76
3.4 Сопоставление функциональных свойств белков семян льна, модифицированных ограниченным гидролизом при проращивании и термоденатурацией 87
3.5 Содержание нитрилглюкозида линамарина и продуктов его гидролиза в семенах льна до и после . модификаций 97
3.6 Определение биологической ценности и аминокислотного состава модифицированных белковых концентратов 100
3.7 Разработка рецептур пищевых продуктов, обогащенных белками льна и оценка их биологической ценности 104
Общие выводы 106
Список использованной литературы 108
Приложения 121
- Биохимические особенности льна
- Применение растительных белков в пищевой промышленности
- Методы проведения экспериментов и лабораторных исследований
- Модификация функциональных свойств белков семян льна ограниченным гидролизом в процессе проращивания
Введение к работе
Современное производство пищевого белка в мире намного ниже необходимого. В России, по данным Института питания РАМН, дефицит пищевого белка составляет около 2 млн. т в год. При решении проблемы удовлетворения потребности населения страны в пищевом белке особое значение приобретает расширение сырьевых ресурсов белка за счет рационального использования вторичных белоксодержащих продуктов -жмыхов и шротов, получаемых при извлечении растительных масел из семян масличных растений [7].
К числу практически не используемых белоксодержащих вторичных
продуктов относятся жмыхи и шроты, получаемые после извлечения из
льняных семян растительного масла, используемого для получения
высококачественных лаков и олиф [125]. і
Несмотря на высокое содержание белков в семенах льна, составляющее до 30 % массы сухих семян, льняные жмыхи и шроты применяют в качестве компонента комбикормов для сельскохозяйственных животных. Причинами, исключающими получение из продуктов переработки семян льна пищевых белков, являются присутствие в их составе глюкозида линамарина, при гидролизе которого образуется высокотоксичная синильная кислота, а также применение при возделывание льна как технической культуры химических средств борьбы с сельскохозяйственными вредителями, недопустимых при возделывании пищевых растений.
Преимущественное использование льна как прядильно-масличной культуры определило основное направление исследований в области липидного комплекса семян, главнейшими из которых было изучение жирнокислотного состава триацилглицеролов льняного масла. Химические характеристики и биологическая ценность белкового комплекса семян льна современных сортов, отличающихся высоким содержанием полноценных по аминокислотному составу белков, практически остаются неисследованными. Нуждаются в
исследовании биохимические характеристики белкового комплекса семян льна, а также их функциональные свойства, определяющие поведение белков в сложных пищевых системах. Немаловажным является также выяснение токсичности льняных жмыхов и шротов и разработка способов и условий их получения, приводящих к детоксикации белков льняных семян.
Нерешенность проблемы пищевого использования белков льняных семян ограничивает включение получаемых на их основе белковых продуктов -концентратов, изолятов и гидролизатов - в рецептуры пищевых продуктов с направленно изменяемыми биологическими свойствами, отвечающими потребностям организма человека [126].
Годовая потребность в пищевых растительных белках в России -согласно экспертному прогнозу Института потребительского рынка и маркетинга — составляет 400-450 тыс. тонн для производства около 10 млн. тонн различной пищевой продукции. В настоящее время в стране работает только два завода по выпуску пищевого растительного белка. Один из них производит белок из импортного соевого лепестка. В то же время в страну ввозят пищевые растительные белки, по разным оценкам в количестве 40-60 тыс. тонн в год в чистом виде и не учтенное никем количество пищевого растительного белка в составе композитных функциональных ингредиентов.
Причина сложившегося положения - в некоторой консервативности взглядов на белок специалистов старшего поколения, недостаток информации и знаний у нового поколения руководителей и владельцев предприятий, а также в общей недооценке роли пищевых растительных белков для производства пищевых продуктов в нашей стране.
За последние годы построено 5 маслодобывающих предприятий' по переработке около 1000 тонн сырья в сутки и выработке 600 тонн кормового шрота. При осуществлении небольших изменений в технологии и технологической схеме предприятий можно получать не кормовой, а пищевой шрот, стоимость которого значительно выше кормового. Внедрение технологии
получения пищевых и кормовых белковых продуктов - белковой муки, концентратов и изолятов - является технологическим продолжением маслодобывающего производства и способно повысить экономическую эффективность существующих предприятий. Следует учитывать, что в настоящее время смежные отрасли - комбикормовая промышленность и птицеводство -осваивают использование в составе кормов шроты масличных семян не только сои, но и льна, и других масличных растений.
В связи с этим изучение химических и биохимических характеристик белков семян льна сортов современной селекции и обоснование способов направленной модификации их функциональных свойств являются актуальными и имеют теоретическое и прикладное значение для биохимии растений и комплексной переработки семян льна.
Целью работы являляется изучение биохимических и функциональных характеристик белков семян льна сортов современной селекции и разработка способов повышения их биологической ценности и функциональных свойств.
В результате проведенных исследований должна быть предложена принципиальная схема получения модифицированных белковых' продуктов из семян льна и определены рецептуры пищевых продуктов, обогащенных белками семян льна в качестве функциональных компонентов.
Биохимические особенности льна
Современное производство пищевого белка в мире намного ниже необходимого. В России, по данным Института питания РАМН, дефицит пищевого белка составляет около 2 млн. т в год. При решении проблемы удовлетворения потребности населения страны в пищевом белке особое значение приобретает расширение сырьевых ресурсов белка за счет рационального использования вторичных белоксодержащих продуктов -жмыхов и шротов, получаемых при извлечении растительных масел из семян масличных растений [7].
К числу практически не используемых белоксодержащих вторичных продуктов относятся жмыхи и шроты, получаемые после извлечения из льняных семян растительного масла, используемого для получения высококачественных лаков и олиф [125]. І Несмотря на высокое содержание белков в семенах льна, составляющее до 30 % массы сухих семян, льняные жмыхи и шроты применяют в качестве компонента комбикормов для сельскохозяйственных животных. Причинами, исключающими получение из продуктов переработки семян льна пищевых белков, являются присутствие в их составе глюкозида линамарина, при гидролизе которого образуется высокотоксичная синильная кислота, а также применение при возделывание льна как технической культуры химических средств борьбы с сельскохозяйственными вредителями, недопустимых при возделывании пищевых растений.
Преимущественное использование льна как прядильно-масличной культуры определило основное направление исследований в области липидного комплекса семян, главнейшими из которых было изучение жирнокислотного состава триацилглицеролов льняного масла. Химические характеристики и биологическая ценность белкового комплекса семян льна современных сортов, отличающихся высоким содержанием полноценных по аминокислотному составу белков, практически остаются неисследованными. Нуждаются в исследовании биохимические характеристики белкового комплекса семян льна, а также их функциональные свойства, определяющие поведение белков в сложных пищевых системах. Немаловажным является также выяснение токсичности льняных жмыхов и шротов и разработка способов и условий их получения, приводящих к детоксикации белков льняных семян.
Нерешенность проблемы пищевого использования белков льняных семян ограничивает включение получаемых на их основе белковых продуктов -концентратов, изолятов и гидролизатов - в рецептуры пищевых продуктов с направленно изменяемыми биологическими свойствами, отвечающими потребностям организма человека [126].
Годовая потребность в пищевых растительных белках в России -согласно экспертному прогнозу Института потребительского рынка и маркетинга — составляет 400-450 тыс. тонн для производства около 10 млн. тонн различной пищевой продукции. В настоящее время в стране работает только два завода по выпуску пищевого растительного белка. Один из них производит белок из импортного соевого лепестка. В то же время в страну ввозят пищевые растительные белки, по разным оценкам в количестве 40-60 тыс. тонн в год в чистом виде и не учтенное никем количество пищевого растительного белка в составе композитных функциональных ингредиентов.
Причина сложившегося положения - в некоторой консервативности взглядов на белок специалистов старшего поколения, недостаток информации и знаний у нового поколения руководителей и владельцев предприятий, а также в общей недооценке роли пищевых растительных белков для производства пищевых продуктов в нашей стране.
За последние годы построено 5 маслодобывающих предприятий по переработке около 1000 тонн сырья в сутки и выработке 600 тонн кормового шрота. При осуществлении небольших изменений в технологии и технологической схеме предприятий можно получать не кормовой, а пищевой шрот, стоимость которого значительно выше кормового. Внедрение технологии получения пищевых и кормовых белковых продуктов - белковой муки, концентратов и изолятов - является технологическим продолжением маслодобывающего производства и способно повысить экономическую эффективность существующих предприятий. Следует учитывать, что в настоящее время смежные отрасли - комбикормовая промышленность и птицеводство -осваивают использование в составе кормов шроты масличных семян не только сои, но и льна, и других масличных растений.
В связи с этим изучение химических и биохимических характеристик белков семян льна сортов современной селекции и обоснование способов направленной модификации их функциональных свойств являются актуальными и имеют теоретическое и прикладное значение для биохимии растений и комплексной переработки семян льна.
Целью работы являляется изучение биохимических и функциональных характеристик белков семян льна сортов современной селекции и разработка способов повышения их биологической ценности и функциональных свойств.
В результате проведенных исследований должна быть предложена принципиальная схема получения модифицированных белковых продуктов из семян льна и определены рецептуры пищевых продуктов, обогащенных белками семян льна в качестве функциональных компонентов.
Применение растительных белков в пищевой промышленности
В настоящее время наиболее освоено промышленное производство молочных и мясных продуктов, обогащенных белковыми продуктами, получаемыми из соевых семян.і Комбинированные пищевые системы.- смеси мясных фаршей или сырых масс белковыми наполнителями из семян сои получают на основе технологических процессов, практически не отличающихся от процессов производства традиционных изделий. Схема классификации процессов применения растительных белков в производстве пищевых продуктов и изделий приведена на рисунке 1:
В процессах первой группы белок перерабатывают непосредственно в конечный пищевой продукт. При этом структурные функций" белка проявляются во всем объеме пищевой системы, и функциональные свойства белка определяют физико-химические свойства и потребительские качества готового продукта.
Таким путем получают относительно несложные по составу и структуре продукты, обычно не содержащие значительных количеств небелковых макромолекулярных компонентов. К 1их числу относятся белковые напитки, отбеливатели кофе, желе, взбивные изделия, ряд аналогов молочных продуктов и т.д. состав и условия получения таких систем сравнительно легко моделируются, и поэтому функциональные свойства белка, установленные при исследовании сравнительно простых модельных систем, дают достаточно полную информацию о реальной системе [23]. Среди функциональных свойств белка особое значение имеет его растворимость в средах заданного состава, способность стабилизировать пены, эмульсии и суспензии, образовывать стабильные суспензии, гели, а также обеспечивать реологические свойства модельных систем. Полупродуктами могут быть текстураты белка в виде одно-, двух- или трехмерных гелей, пен, тиксотропных эмульсий и т.д [27,45], Для получения пищевых продуктов обычно смешивают белковые структурные элементы (полупродукты) со связующими и приводят смесь в гелеобразное состояние. Таким путем получают аналоги и комбинированные мясопродукты [9]. В процессах второй группы белок перерабатывают сначала в полупродукты, служащие элементами структуры конечного (композиционного) продукта. При получении аналогов мясопродуктов в качестве белковых структурных элементов используют белковые волокна, пучки волокон или текстураты с анизотропной волокнистой, слоистой или пористой макроструктурой, т„е, структурой, различаемой невооруженным глазом. Окрашивающие, вкусовые и ароматические вещества вводят в состав как волокон, так и связующего, В качестве связующего при получении комбинированных мясопродуктов применяют такие традиционные системы, как мясные фарши. ... ........ Третья группа процессов переработки белка в пищевые продукты предполагает использование его в качестве наполнителя геля, образованного пищевой гелёобразующей системой. К числу последних относятся мясные фарши, тестовые массы и ряд других традиционных и новых гелеобразующих систем, в том числе содержащих4 специально подобранные гелеобразователи белковой или полисахаридной природы- Так, при получении аналогов зернистой икры используют гели желатина, наполненные казеином или другими белками, а при производстве аналогов картофелепродуктов, макарон и крупы - наполненные белками альгинат-крахмальные гели. Для этой группы важны сведения о функциональных свойствах пищевой гелеобразующей системы, ее способности к гелеобразованию в присутствии значительных количеств наполнителя, так, чтобы наполнение не приводило к изменению реологических и других физико-химических свойств готового продукта или же вызывало изменения этих свойств в желаемом направлении. Требования к функциональным свойствам белка для третьей группы процессов переработки сводятся к условию, чтобы белок-наполнитель в минимальной степени воздействовал на механические и другие физико-химические свойства геля. Белковый наполнитель может образовывать в геле истинные раствор, коллоидную или микрогетерогенную системы с твердыми или жидкими дисперсными частицами. Переход от однофазных гелеобразующих систем, содержащих белок-наполнитель в растворенном состоянии, к двухфазным системам сопровождается изменением характера влияния белкового наполнителя на физико-химические свойства геля [79,77,31,20]. Как следует из обзора литературных данных, сведения о белках семян льна ограничены и противоречивы- В то же время обогащение белком пищевых продуктов выдвигает необходимость расширения ассортимента белковых добавок с заданными функциональными свойствами. Разработка эффективных способов модификации функциональных свойств собственными протеиназами белков позволит получать новые пищевые продукты повышенного качества и биологической ценности на основе применения белковых добавок с заданными функциональными свойствами. В связи с этим, при выполнении диссертационной работы решались следующие задачи: - исследовать биохимические характеристики белкового комплекса семян льна сортов современной селекции, ранее не изученных, и его антипитательные компоненты; - изучить возможность ферментативной и термической модификации запасных белков семян льна, определяющих их функциональные свойства и биологическую ценность.
Методы проведения экспериментов и лабораторных исследований
По своей химической природе .растительные белки отличаются большим разнообразием, что обусловлено их аминокислотным составом, і структурой и характером связи с другими веществами. Неоднородность химической природы белков, а также изменения, которые происходят в свойствах белков под влиянием различных факторовт!(например,:: при , влаготепловой обработке масличных семян), учитывают различными методами, в том числе по растворимости белков в воде, 10 %-ном растворе NaCl и 0,2 %-ном растворе NaOH. Фракционирование белков проводили по Осборну в модификации ВНИИ жиров [85].
Метод Осборна заключается в последовательном экстрагировании групп белков из исследуемого материала тремя растворителями: водой,раствором хлорида натрия и гидроксида натрия. Следует учитывать, что при экстрагировании извлекаются из пробы не только белки, но и другие вещества, среди которых могут присутствовать азотосодержащие соединения. Полнота извлечения белковых веществ из масличных семян и продуктов их переработки зависит от многих факторов, в том числе от количества последовательных экстракций и степени измельчения материала. Нами был применен вариант метода определения фракционного состава белков, основанный на последовательном извлечении белковых веществ из исследуемого материала водой, 10 %-ным раствором NaCl и 0,2 %-ным раствором NaOH и определении содержания азота в экстрактах и нерастворимом остатке полумакрометодом Кьельдаля,
Около 50 г материала измельчали в кофемолке до прохода через сито с отверстиями размером 1 мм., взвешивали 15-16 г измельченного материала и обезжиривали настаиванием со 100 мл, гексана в течение часа при перемешивании через каждые 15 мин. Эфирный экстракт сливали с осадка декантацией па фильтр диаметром 11 см и осадок заливали свежей порцией растворителя (100 мл). Настаивание продолжали еще 2 ч, при перемешивании через каждые 15 мин. По окончании настаивания весь материал отфильтровывали через тот же фильтр и остаток на фильтре промывали 50 мл растворителя. Обезжиренный остаток выдерживали на воздухе до исчезновения запаха растворителя, затем измельчали до прохода через сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.
Навеску от 1,0 до 2,0 г измельченного материала помещали в коническую колбу емкостью 250 мл и приливали в колбу 100 мл дистиллированной воды. Колбу закрывали пробкой, укрепляли на механическом встряхивателе и встряхивали в течение 30 мин. Через 30 мин смесь центрифугировали в течение 6-Ю мин при 1200 об/мин. Отцснтрифугировапный прозрачный раствор сливали в мерную колбу емкостью 500 мл. Осадок центрифужный пробирок количественно переносили новой порцией (100 мл) дистиллированной воды в ту же коническую колбу и проводили вторую, а затем третью экстракцию при встряхивании в течение 15 мин.
После третьей экстракции осадок в центрифужных пробирках, а также колбу, в которой производилось встряхивание, промывали дистиллированной водой (-50 мл). Промывные воды после центрифугирования присоединяли к основному раствору в мерной колбе. Объединенные вытяжки и промывные воды разбавляли дистиллированной водой в мерной колбе до 500 мл. Осадок из центрифужных пробирок переносили в ту же коническую колбу емкостью 250 мл, разбавляли 100 миллилитрами 10 %-ного раствора хлорида натрия. Затем проводили извлечение солерастворимых белков также как и в случае экстракции водой.
После экстракции белков, растворимых в 10 %-ном растворе хлорида натрия, остаток обрабатывали в аналогичных условиях 0,2%-ным раствором едкого натра.
Полученные экстракты были мутными, поэтому их последовательно фильтровали на воронке Бюхнера через бумажное тесто приготовленное из мелко нарезанных беззольных фильтров, прокипяченных с дистиллированной водой. После окончания фильтрования щелочной вытяжки бумажное тесто вместе с нерастворившимся остатком исходного материала количественно переносили в колбу Кьельдаля емкостью 500 мл, добавляли 1 г сернокислой меди, 7-8 г сернокислого калия и 50 мл серной кислоты (шт. 1,84) и сжигали в соответствии с методикой определения общего азота макрометодом Кьельдаля. После сжигания колбу Кьельдаля охлаждали, приливали теста с остатком нерастворившегося исходного материала в колбу приливали небольшое количество дистиллированной воды перемешивали и переносили содержимое колбы без потерь в мерную емкость 250 мл. Колбу Кьельдаля ополаскивали несколько раз водой, сливая промывные воды в ту же мерную колбу. В колбу добавляли воду до метки и тщательно перемешивали. Для определения содержания азота в экстрактах брали пипеткой 25-50 мл соответствующего экстракта (в зависимости от содержания в нем белка) и помещали в колбу Кьельдаля емкостью 250 мл, В колбу приливали 5-10 мл концентрированной серной кислоты и прибавляли около 0,1 г смеси сернокислой меди и сернокислого калия в отношении 1:3. Затем навеску сжигали.
Модификация функциональных свойств белков семян льна ограниченным гидролизом в процессе проращивания
Исходя из данных таблицы 19, доля белкового, небелкового и суммарного азота водорастворимой фракции сорта Ручеек при термообработке 40С снизилось на 1,92; 0,74 и 2,615%. При 60С - на 1,745; 0,46 и 2,205% и при 80С-на 2,175; 0,7 и 2,875%.
Белковый, небелковый и суммарный азот солерастворимой фракции снизился на 0,475; 0,037 и 0,51% при 40С; на 0,455; 0,032 и 0,49% при 60 С, а также на 0,495; 0,034 и 0,53% при 80С В щелочерастворимой фракции отмечено повышение доли белкового, небелкового и суммарного азота на 0,018; 0,016 и 0,034 % при 40С 80 Термоденатурация при 60С вызвала снижение доли белкового азота на 0,07 %; за счет роста доли небелкового азота на 0,044 % суммарный азот возрос на 0,037 %. Также белковый азот снизился на 0,042%; суммарный азот возрос на 0,035 % за счет роста небелкового на 0,077 % при термообработке 80С, Фракционный состав белкового комплекса семян сорта ВНИИМК-630 в результате термообработки подвергся следующим изменениям. При термодинатурации, проходящей при 40С белковый небелковый и суммарный азот водорастворимой фракции снизился на 2,975; 0,78 и 3,755%; в солерастворимой фракции снижение тех же показателей произошло на 0,4; 0,108 и 0,51 %; тогда как в щелочерастворимои фракции белковый азот повысился на 0,098 %; небелковый - на 0,84 % и суммарный- на 0,155 %. Термообработка при 60С вызвала аналогичное снижение доли белкового небелкового и суммарного азота водорастворимой фракции на 2,815; 0,72 и 3,535 %; в солерастворимой фракции - на 0,42; 0,106 и 0,53%, В щелочерастворимои фракции также наблюдалось повышение доли белкового азота на 0,029 %; небелкового - на 0,76 % и суммарного - на 0,105%. При воздействии на семена температуры 80С также наблюдалось понижение долей тех же показателей водорастворимой фракции-на 2,945; 0,76 и 3,705 %. В солерастворимой фракции - на 0,26; 0,05 и 0,31 %. Белковый азот щелочерастворимои фракции снизился на 0,063 %, тогда как суммарный азот возрос на 0,055% за счет роста небелкового азота — на 0,118%. Что касается сорта-контроля, то в результате термообработки в нем происходили аналогичные изменения фракционного состава белкового комплекса. Термообработка при 40С вызвала понижение белкового небелкового и суммарного азота водорастворимой фракции на 2,59; 1,075 и 3,665%. При 60С произошло снижение тех же показателей на 2,65; 1,055 и 3,705%. И при 80 С-на 2,76; 1,065 и 3,825%. В солерастворимой фракции отмечено незначительное повышение на 0,005; 0,02 и 0,125 % при 40С ; снижение на 0,305; 0,34 и 0,336% при 60С и на 0,385; 0,024 и 0,405% при 80 С. Отмечено варьирование долей белкового, небелкового и суммарного азота в щелочерастворимой фракции при трех температурах: рост на 0,02% белкового азота, на 0,005 % небелкового азота и 0,03 % суммарного азота при40С. Снижение на 0,035% доли белкового азота при повышении на 0,016% и понижении суммарного азота 0,019% при 60С. При термомодификации 80С снижение доли белкового азота составило 0,131%, повышение доли небелкового азота составило 0,076% при снижении суммарного на 0,055%. Разница в доле белкового азота в модифицированных продуктах БПЛ-40 и БПЛ-60? а также БПЛ-60 и БПЛ-80 водорастворимой фракции при трех температурах составила от 0,13 до 0,43% и от 0,02 до 0,03% солератворимой фракции в фракционном составе сорта Ручеек; от 0,16 до 0,13%»; а также от 0,02 до 0,056% в тех же фракциях сорта ВНИИМК-630. Отличие в долях белкового азота при термообработке при тех же температурах в двух фракциях в сорте ВНИИМК-620 составило от 0,06 до 0,11% и от 0,31 до 0,08% соответственно. Потерю в семенах доли белка в процессе термообработки можно объяснить уменьшением молекулярной массы белка, что происходит с белковой молекулой под воздействием температуры- Так, солерастворимые белки - глобулины имеют молекулярную массу 300-400 кДа и коэффициент Сведберга (S) равный 11 S- По мере разукрупнения глобулина (олигомерного белка), образуются фрагменты белка, то есть белки с меньшей молекулярной массой: 7 S.- 4 S и 2 S. Растворимые агрегаты из мономеров и разрушенных белков при дальнейшем нагревании образуют нерастворимые белковые агрегаты [43,81]. Терм о денатурация семян должна осуществляться при такой температуре и за такой период времени, при котором процесс гидрофобизации белка протекает наиболее полноценно. Необходимо максимальное «раскрытие» тех участков белковой молекулы, которые определяют необходимые для повышения биологической ценности растительного белка функциональные свойства- Например, раскрытие в белковой молекуле участков способных удерживать жир, повышает жироудерживающую способность белка - одного из необходимых функциональных свойств. Как следует из данных, приведенных в таблице 19» все температурные режимы привели к снижению общего азота альбумин-глобулиновой фракции белков семян льна в результате перехода водорастворимых и солерастворимых белков в щелочерастворимые, что согласуется со схемой В-П. Ржехина о взаимных переходах белковых веществ при влаготешювой обработке, проводимой с семенами хлопчатника, из одного состояния по растворимости в другое, при отсутствии гидролитического расщепления белков [81]. Промежуточное положение в этой схеме занимают соле- и щелочерастворимые фракции, причем переход альбуминов и глобулинов в нерастворимые формы происходит через щелочеобразное состояние. Фракционный состав белкового комплекса семян льна до и после термоденатурации представлен в таблице 20, данные которой также подтверждает снижение доли суммарного белка - протеина, определяемого как произведение азота на коэффициент 6,25 (N 6,25).
