Значение феномена транслокации бактерий из желудочно-кишечного тракта в патогенезе хирургической инфекции при повреждениях (экспериментально-клиническое исследование) [Электронный ресурс] Копылов Вадим Анатольевич

Диссертация - 480 руб., доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Копылов Вадим Анатольевич. Значение феномена транслокации бактерий из желудочно-кишечного тракта в патогенезе хирургической инфекции при повреждениях (экспериментально-клиническое исследование) [Электронный ресурс] : Диссертация ... кандидата медицинских наук : 14.00.27

Содержание к диссертации

Введение

Глава 1. Клинико-морфологические и микробиологические аспекты хирургической инфекции при механических повреждениях (обзор литературы) 11

ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 32

2.1. Общая характеристика объектов исследования 32

2.2. Материал экспериментальных исследований 32

2.3.Светооптические гистологические, электронно микроскопические и гисторадиографические исследования 35

2.4. Бактериологические исследования 36

2.5. Характеристика хирургических больных 37

2.6. Методы статистического анализа результатов 39

Глава 3. Изучение механизмов транслокации у животных при введении бактерий штамма Staphylococcus aureus 209Р 40

3.1. Исследование транслокации бактерий у здоровых животных... 40

3.2. Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных 52

3.3. Транслокация бактерий при закрытых переломах длинных трубчатых костей у животных 61

ГЛАВА 4. Изучение механизмов транслокации у животных при введении бактерий штамма Bacillus subtilis 534 71

4.1. Определение дозозавивимых эффектов транслокации бактерий у здоровых животных 71

4.2. Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных

4.3. Транслокация бактерий у животных с закрытыми переломами конечностей 87

Глава 5. Профилактика хирургической инфекции у больных с ранениями мягких тканей 96

Глава 6. Обсуждение полученных результатов 105

Выводы 116

Практические рекомендации 118

Указатель литературы

Материал экспериментальных исследований
Характеристика хирургических больных
Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных
Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных

Введение к работе

Проблема хирургической инфекции при травмах является актуальной. Количество гнойно-воспалительных осложнений после травм варьирует от 5% до 50% (R.L. Nichols, S.Florman, 2001). Нагноения случайных ран мягких тканей встречаются в 12-25% (Х.А.Мусалатов с соавт., 1998). Частота гнойно-воспалительных осложнений области хирургического вмешательства колеблется от 2-3 до 22% (В.В. Агаджанян, 1987; Н.В. Корнилов с соавт., 1997; А.В. Кулаков с соавт., 2001; В.И. Ульянов с соавт.,2002; Т.Я.Пхакадзе, З.И.Уразгильдеев, 2002).

Можно выделить следующие направления в поиске действенных путей профилактики хирургической инфекции: совершенствование мероприятий по асептике, антисептике и технике хирургического вмешательства, воздействие на иммунную систему, устранение нарушений микроциркуляции, стимуляция репаративных процессов (В.М.Шаповалов с соавт., 1998; И.Ю.Клюквин с соавт., 1998; СВ. Лохвицкий с соавт., 2002; L. Ameziane et al., 2003). Основные усилия исследователей в настоящее время сосредоточены вокруг разработки и использования новых антибактериальных препаратов, прежде всего антибиотиков (G.V.Russell et al., 2001; F. de Lalla, 2002; СВ. Сергеев и соавт., 2003). Несмотря на огромные затраты, результаты антибиотикопрофилактики не всегда соответствуют ожиданиям (G.A.Franklin et al., 2002; М.А. Wilson, 2003). Появляются новые антибиотикорезистентные штаммы бактерий, развиваются аллергия на химиопрепараты, дисбактериоз и др. (Т. Франклин, Дж. Сноу, 1984; И.А.Ерюхин с соавт., 1997; Т. Nakagawaet al., 1998). Наличие недавно обнаруженных механизмов «укрытия» и длительной персистенции стафилококков в тканях различного генеза (А.А. Стадников с соавт., 2003) также ставит под сомнение эффективность дальнейшего развития антибиотикопрофилактики.

Всё более очевидной становится необходимость раскрытия малоизученных аспектов патогенеза хирургической инфекции. До настоящего времени большинство хирургов и микробиологов уверены, что, в основном, бактерии попадают в рану непосредственно из внешней среды. Роль эндогенного

РОГ. ^ :< LV5feHA»

С '\ігрб>рг З

инфицирования явно недооценивается. В то же время доказан феномен транслокации бактерий из желудочно-кишечного тракта, описанный R.D. Berg (1985), В.И. Никитенко (1990). Экспериментальными исследованиями последних лет было установлено, что бактерии могут проникать через неповрежденную стенку желудочно-кишечного тракта во внутренние среды организма. Транслокация обнаружена при различных патологических состояниях (L.C.Lemaire, 1997; D. Adawi et al., 1998; D. Demetnades et al., 1999), а также в условиях здорового организма (В.К. Есипов, 1999; B.C. Тарасенко, 2000).

Однако остаются неизученными многие механизмы этого явления. Неизвестно, регулируется ли транслокация макроорганизмом, зависит ли этот феномен от дозы и вида бактерий, попавших в желудочно-кишечный тракт, влияет ли характер повреждения на феномен бактериальной транслокации, возникает ли она только вследствие стресса или является защитным механизмом теплокровных, каковы методы блокирования данного пути распространения возбудителей хирургической инфекции. Всё вышеуказанное послужило основанием для выполнения данной работы.

Цель исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение значения феномена транслокации в патогенезе хирургической инфекции при повреждениях и определение эффективности нового способа профилактики хирургической инфекции.

Задачи исследования

Определены минимальные дозы бактерий штаммов Staphylococcus aureus 209Р и Bacillus subtilis 534, при интрагастральном введении которых регистрируется феномен бактериальной транслокации у здоровых белых крыс.
Изучена динамика обсеменения тканей различных органов бактериями при различных дозах инфицирования желудка.
Исследовано влияние ранений мягких тканей и закрытых переломов трубчатых костей на транслокацию бактерий у животных.
Изучена реакция тканей и органов на транслокацию у здоровых и травмированных животных.

5. Определена эффективность живого бактериального препарата «споробакте-рин жидкий» в качестве средства профилактики хирургической инфекции у больных с ранениями мягких тканей.

Научная новизна исследования

Впервые установлено, что минимальная доза бактерий, при интрагаст-ральном введении которой регистрируется феномен транслокации у здоровых крыс, равна 10⁶ микробных тел на 1 кг веса животного.

Впервые обнаружено, что при ранениях мягких тканей и закрытых переломах конечностей пороговая доза микроорганизмов штаммов Staphylococcus aureus 209Р и Bacillus subtilis 534 снижается и составляет 10⁴ микробных тел на 1 кг веса животного.

Выявлено, что у здоровых и травмированных животных через 6 часов после интрагастрального введения жизнеспособные бактерии обнаруживаются в печени, селезенке, стенке желудка и тонкого отдела кишечника, с преимущественным накоплением в селезенке и печени. В тканях легких, почек, кожи, в крови микроорганизмы не наблюдаются.

Транслокация бактерий контролируется макроорганизмом. У здоровых белых крыс при увеличении числа интрагастрально введенных микроорганизмов в 10000 раз, количество меченых бактерий, обнаруживаемых во внутренних органах, возрастает всего в 1,3 - 5,8 раз.

Впервые установлено, что феномен транслокации микроорганизмов у здоровых животных при микробной нагрузке 10 -10¹ колониеобразующих единиц штаммов Staphylococcus aureus 209Р и Bacillus subtilis 534 не сопровождается стрессорными изменениями гистологических и цитологических структур гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы и надпочечников.

Обнаружено, что тяжесть травмы влияет на феномен транслокации. У крыс с закрытыми переломами бедра количество проникающих в печень и селезенку бактерий выше, чем у животных с ранениями мягких тканей.

Установлено, что транслокация Bacillus subtilis 534 у здоровых и травмированных животных происходит интенсивнее, чем Staphylococcus aureus 209Р.

Количество бактерий сенной палочки превышает число стафилококков в тканях области раны в 1,6-2,8 раза, а в области закрытого перелома - в 4,6-5,1 раз.

Выявлено, что микроорганизмы, попадающие в желудочно-кишечный тракт, активно участвуют в течении раневого процесса. Бактерии сенной палочки, локализуясь в очагах травматизации мягких и костных тканей, создают условия для стимуляции репаративных гистогенезов (патент РФ №2202356, 20.04.2003г.). Микроорганизмы Staphylococcus aureus 209Р вызывают усугубление изменений альтеративного характера в области закрытого перелома. Научно-практическая значимость работы

Транслокация бактерий из желудочно-кишечного тракта может быть механизмом эндогенного инфицирования очагов повреждения, что следует учитывать в клинической практике, в том числе при осуществлении мероприятий по предупреждению госпитальной инфекции. Транслокации подвергаются как условно-патогенные бактерии, так и сапрофиты. Обоснована возможность селективного использования микрофлоры, попадающей в желудочно-кишечный тракт, для регуляции раневого процесса и профилактики хирургической инфекции.

Доказана более высокая эффективность живого бактериального препарата, по сравнению с антибиотиком цефазолином. Использование живого бактериального препарата «споробактерин жидкий» у больных с ранениями мягких тканей способствует снижению частоты хирургической инфекции и более быстрой нормализации клинико-лабораторных показателей.

Положения, выносимые на защиту

Транслокация бактерий из желудочно-кишечного тракта - механизм систематического инфицирования очагов повреждения и естественной защиты человека и животных от инфекции. Она регулируется макроорганизмом и зависит от дозы, вида бактерий, характера повреждения.
Использование живого бактериального препарата «споробактерин жидкий» у больных с ранениями мягких тканей способствует снижению частоты хирургической инфекции и улучшает течение посттравматического периода.

Апробация результатов исследования

Материалы диссертации доложены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы урологии» (Тюмень, 2001), научной конференции «Актуальные проблемы травматологии и ортопедии» (Нижний Новгород, 2001), на международной научно-практической конференции памяти Г.И. Гончаровой «Пробиотические микроорганизмы - современное состояние вопроса и перспективы использования» (Москва, 2002), 3-й Всеармейской научно-практической конференции с международным участием «Инфекция в хирургии - проблема современной медицины» (Москва, 2002), Ш научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа (Оренбург, 2002), на 5-ом Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2003» (Санкт-Петербург, 2003), Санкт-Петербургской Медицинской Ассамблее «Врач-Провизор-Пациент» (Санкт-Петербург, 2003), на IV научно-практической конференции врачей Приволжско-Уральского военного округа (Оренбург, 2003), на областной научно-практической конференции врачей «Актуальные проблемы хирургии повреждений» (Оренбург, 2003), на 6-ом Славяно-Балтийском научном форуме «Санкт-Петербург - Гастро-2004» (Санкт-Петербург, 2004), международной научно-практической конференции «Морфофункциональные аспекты регенерации и адаптационной дифференци-ровки структурных компонентов опорно-двигательного аппарата в условиях механических воздействий» (Курган, 2004), международном конгрессе «Современные технологии в травматологии, ортопедии: ошибки и осложнения - профилактика, лечение» (Москва, 2004), на Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией» (Санкт-Петербург, 2004), научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы гистологии. Гистогенез и регенерация тканей» (Санкт-Петербург, 2004), на областной конференции хирургов «Актуальные вопросы хирургии: проблемы и пути решения» (Оренбург, 2004).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе патент РФ на изобретение №2202356,20.04.2003г.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста. Она состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, 3 глав, в которых изложены результаты собственных исследований, главы обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 216 источников, в том числе 117 работ отечественных и 99 работ зарубежных авторов.

В диссертации имеется 17 рисунков и 25 таблиц.

Материал экспериментальных исследований

Основной "ареной" взаимодействия бактерий и макроорганизма всегда является ткани и клетки области повреждения. К методам местного воздействия на очаг повреждения обычно относят удаление возможного субстрата для микроорганизмов и самих бактерий. Важным для профилактики хирургической инфекции является полноценная хирургическая обработка ран; удаление всех нежизнеспособных тканей; предотвращение образования в ране зон ишемии, некроза и некробиоза; раннее закрытие дефектов эпителиальными покровами; ранняя стабилизация переломов. (С.С. Оганесян с соавт., 1990; И.Ю. Клюквин с соавт., 1997; И. А. Ерюхин, 1998; Л.П. Соков, С. Л. Соков, 1999; Э.Л.Степаненко, 1999; М.Н. Gonzalez et al., 1999; L.G. Ovington, 2001; MJovanovic et al., 2002; A.D. Weitz-Marshall, M.J. Bosse, 2002; L. Ameziane et al., 2003).

Многие авторы указывают на первостепенную значимость строгого соблюдения асептики и антисептики при выполнении всех манипуляций (И.М. Матяшин, 1979; В.М. Рябочкин, Г.И. Назаренко, 1996; П.Г. Брюсов, В.И. Хрупкий, 1996; А.А. Беляков с соавт., 1999; Т.Я. Пхакадзе с соавт., 2001). М. Rojczyk, Н. Tscherne (1982) установили, что без наложения асептической повязки больным с открытыми переломами на месте происшествия, частота нагноений увеличивается в пять раз.

Совершенствование методов стерилизации инструментов и медицинской техники способствует снижению частоты гнойно-воспалительных осложнений (Л.А. Генчиков, 1993; И.И. Корнев, 2000; В.И.Ульянов с соавт., 2002). Среди местных антисептиков эффективными считаются сульфадиазин серебра, йодопирон, хлоргексидин, пливасепт (Т.Я.Пхакадзе с соавт., 1996; S.M. Tambe et al., 2001). Вместе с тем не утрачивают своего значения такие средства, как гипохлорит натрия (ДД.Палкин, В.В. Чекашев, 2000), первомур (П.А. Мелехов, 2000; Н.В.Рухляда, В.А. Логинов, 2001).

По данным A. Giacometti et al. (2002), чувствительность условно-патогенных возбудителей хирургической инфекции к антисептикам остается на высоком уровне. А.П. Чадаев, А.Д. Климиашвили (2003) при лечении ран использовали повязки-сетки из пчелиного воска в качестве носителя антисептика. Л.А. Мамедов с соавт. (1999) применяли для профилактики гнойно-воспалительных осложнений послеоперационных ран электрофорез 5% водным раствором пераманганата калия. Однако следует отметить, что инфицирование ран даже надкритическими дозами монокультур и высокая микробная обсемененность зоны хирургического вмешательства не может считаться обязательным фактором, приводящим к нагноению (А.В. Воленко, 1998).

По данным экспериментальных исследований В.Н. Кошелева и Р.В.Чалык (1998), М.Ж. Азизова с соавт. (2001) низкоинтенсивное лазерное излучение при открытых переломах оказывает противомикробное действие. В.И. Хрупкий с соавт. (1998), И.П. Губченко с соавт. (2000) в эксперименте показали некоторое снижение вероятности развития раневой инфекции при использовании плазменного скальпеля для первичной хирургической обработки. Среди других физических факторов используются местное ультразвуковое воздействие, видимый свет, электростимуляция, оксигенобаротерапия, прерывистая гипоксия, гипотермия, магнитолазерное воздействие. (О.С. Горбачев с соавт., 1981; Б.Д. Комаров с соавт., 1981; А.А. Носов, 1989; Н.И. Атясов с соавт., 1997; А.А. Адамян с соавт., 1998; P.M. Тихалов с соавт., 1999; К.Г. Ибишов, 1999; Ю.В. Павлов с соавт., 2001; СВ. Лохвицкий с соавт., 2002; А.С.Аврукин с соавт., 2002).

Однако, как показывает клиническая практика, использование только методов физического местного воздействия оказывается недостаточно эффективным для профилактики хирургической инфекции. Частота последней остается достаточно высокой (Ю.В. Бирюков с соавт., 1997; А.С.Аврукин с соавт., 2002). Вместе с тем применение вышеперечисленных методов требует специальной аппаратуры и персонала с соответствующими навыками работы.

Основным направлением в профилактике гнойно-септических осложнений травм является системное использование антимикробных препаратов. По определению Комитета по антимикробным препаратам Американского общества хирургической инфекции (1985) под антибактериальной профилактикой раневой инфекции понимают назначение антимикробных препаратов больному до микробной контаминации операционной раны или появления клинических признаков раневой инфекции, а также при наличии признаков последней, если первичным методом лечения является хирургическое вмешательство (J.M.Davis, G.T. Shires, 1991; N.J. Ehrenkrantz,1993).

Известно, что при назначении антибиотиков с профилактической целью необходимо строго следовать показаниям относительно выбора препарата, а также длительности и частоты его применения (I. Heineck et al., 1999; L.C.McDonald et al., 2001; A.N. Yalcin et al., 2002). Предлагаются разные схемы антимикробной профилактики хирургической инфекции: назначение одной дозы антибиотика непосредственно перед операцией (режим "single dose"); профилактика двумя дозами - вторую дозу вводят при длительности операции более двух-трех часов (режим "double dose"); кратковременную профилактику ("shorterm") - назначение антибиотика во время премедикации и затем два-три раза в течение 24 часов после операции; долговременную профилактику ("longerm") - применение препаратов пролонгируют до 48 часов; продолжительную профилактику - в течение нескольких суток после операции (И.И. Колкер, Ж.Ш.Жумадилов, 1988; Н.Р. Simmen, F.Largiader, 1989; W.R. Jarvis, W.J. Martone, 1992; М.Н.Зубков, 1999).

Характеристика хирургических больных

При этом мембранные органеллы клеток гипертрофируются. Отмечается выраженная активизация лизосом (как первичных, так и вторичных). В клетках повышается содержание постлизосом (ламмелярных телец). В эндотелиоцитах слизистой и подслизистой оболочек отмечено расширение канальцев эндоплазматического ретикулума, набухание митохондрий, сочетающиеся с локальным разрушением крист и уплотнением матрикса. Одновременно появляются крупные липосомы, свидетельствующие о повышенном "изнашивании" клеточных мембран и демаскировке липидов

Незначительные изменения в печени и селезенке начинали регистрироваться лишь у животных, получавших 1х109 и 1x1010 бактерий на 1 кг массы. При этом гистоструктура этих органов в целом соответствовала той морфологической картине, которая укладывается в общеизвестный стереотип компенсаторно-приспособительных реакций иммунокомпетентных органов, возникающих при антигенной стимуляции. Лимфоидные фолликулы селезенки были хорошо выражены с небольшим увеличением реактивных центров. В последних встречались малодифференцированные клетки, большие и средние лимфоциты, макрофаги, реже - плазматические клетки. Периферия лимфоидных образований была представлена малыми лимфоцитами. В красной пульпе селезенки хорошо прослеживалась ретикулярная строма, кровеносные синусы были узкие. Клеточные элементы красной пульпы представлены эритроцитами, зернистыми лейкоцитами, макрофагами, единичными многоядерными гигантскими клетками типа мегакариоцитов.

Печень имела обычное строение с хорошо прослеживающимися дольками, междольковыми пространствами, трабекулами и центральными венами. Гепатоциты имели четкие ядра и ядрышки, слабобазофильную цитоплазму. Встречались клетки с эозинофильной зернистостью, в соотношении 1/40 к слабобазофильным гепатоцитам. Последние располагались преимущественно под капсулой печени.

В тканях других органов мы не наблюдали отклонений от обычного строения после введения различных количеств меченных стафилококков.

Кость имела обычное гистологическое строение, хорошо прослеживались Гаверсовы каналы с проходящими в них сосудами. Костный мозг был нормального строения. Воспалительной инфильтрации, дистрофии, некротических изменений не наблюдалось. Прилежащие мышцы также имели обычное строение с сохранением поперечнополосатой исчерченности. Эндомизий на отдельных участках несколько разной толщины. Сосуды обычного кровенаполнения. Лимфоциты и макрофаги в виде единичных клеток были равномерно распределены в прослойках соединительной ткани. Кожа обычного строения, покрытая эпидермисом на всем протяжении. Дерма представлена плотной волокнистой неоформленной соединительной тканью с большим количеством придатков кожи, волосяных фолликулов и желез. Кровенаполнение сосудов имело обычный характер. Наблюдались единичные скопления клеток макрофагального и лимфоцитарного ряда, преимущественно вблизи волосяных фолликулов.

Для верификации проникновения в органы и ткани животных микроорганизмов были проведены бактериологические посевы крови, гомогенатов печени, желудка, селезенки, тонкой кишки. Всего было выполнено 56 посевов из тканей крыс, получавших меченые стафилококки. При этом живые бактерии Staphylococcus aureus 209Р обнаружены в 30 наблюдениях (53,6%). Результаты бактериологических исследований представлены в таблице 5.

Число выделенной живой культуры(%) 50,0% 66,7% 75,0% 58,3% - 53,6% После высевов образцов печени и селезенки живые культуры Staphylococcus aureus 209Р были найдены в 50,0% и в 66,6% случаев соответственно. Посевы тканей желудка дали 75,0% получения живых бактерий, посевы гомогенатов тонкой кишки - 58,3%. Гемокультуры мы не обнаружили.

Таким образом, было установлено, что бактерии проникали в кровь и лимфу на участках в основном неповрежденной слизистой оболочки желудка и тонкого отдела кишечника. Это происходило через межклеточные щели и зоны локальной, наблюдаемой и в физиологических условиях десквамации ямочного эпителия желудка и энтероцитов кишки. Это подтверждает обнаружение стафилококков в межклеточных пространствах эпителиоцитов желудка и энтероцитов тонкого кишечника, а также электронно-микроскопическое обнаружение микробных клеток внутри эпителиоцитов. Было также установлено, что у данных животных не происходит транслокации микробов через эпителиальные барьеры толстого отдела кишечника. Культивирование и видовая идентификация стафилококков позволила нам установить жизнеспособность и сохранность биологических свойств выделенных из тканей экспериментальных животных стафилококков (штамм Staphylococcus aureus 209Р).

Морфологический анализ гипофизарно-гипоталамо адренокортикальной системы показал, что феномен транслокации микроорганизмов через эпителиальные барьеры слизистых оболочек пищеварительного тракта не сопровождается стрессорной реакцией.

Так, на электронно-микроскопическом уровне было показано, что ультраструктура терминалей аксонов нейросекреторных клеток супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса у здоровых животных при интрагастральном введении Staphylococcus aureus в дозах 10 - 10 микробных тел на 1 кг массы тела соответствует таковой, наблюдаемой в физиологических условиях (рис 4). Перикарионы цитоплазмы данных клеток имели неизмененные канальцы шероховатого эндоплазматического ретикулума, митохондрии, секреторные гранулы, локализованные на периферии.

Морфометрические показатели функционально активных нейросекреторных клеток, как супраоптических, так и паравентрикулярных ядер у данных животных существенно не различались. Размеры ядра и ядрышка, наблюдаемые у животных при введении 10 - 10 бактерий на 1 кг массы не отличались от контрольных параметров и возрастали лишь при увеличении дозировок до 109 - 10ю микробных тел на 1 кг массы (табл. 6).

Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных

В тканях стенки желудка после получения 1x105 бактерий на 1 кг массы присутствовало 0,22±0,06 радиометок, после введения микроорганизмов в дозе 1x106 микробных тел на 1 кг массы - 0,34±0,05 единиц радиометок в условных полях зрения.

В стенке тонкой кишки у животных, получивших 1x105 бактерий на 1 кг массы, обнаруживалось 0,42±0,04 радиометок, после введения микроорганизмов в дозе 1x106 микробных тел на 1 кг массы - 0,56±0,07 радиометок в условных полях зрения.

В тканях легких, почек, кожи, в стенке толстой кишки, в мазках крови через б часов после введения бактерий радиометок мы не наблюдали.

Таким образом, у животных с резаными ранами мягких тканей меченые стафилококки обнаруживались во внутренних органах после введения бактерий в меньших дозировках, чем пороговая для здоровых животных. Последняя составила 1x106 бактерий на 1 кг массы тела крысы. После травмы пороговая доза снизилась до 1x104 микроорганизмов на 1 кг массы тела животного. Причем количество меченых бактерий, проникших во внутренние органы у крыс с повреждениями, было достоверно большим (р 0,001), чем у здоровых животных (табл. 9).

В селезенке меченые стафилококки наблюдались в красной пульпе и в проекции синусоидных капилляров (после введении 1x104 бактерий на 1 кг массы тела животного). В этом случае микроорганизмы были единичными. При введении больших дозировок Staphylococcus aureus 209Р в органе обнаруживались крупные скопления скоплений бактерий.

В печени радиометки бактерий присутствовали в междольковых кровеносных сосудах, в синусоидных и желчных капиллярах, а также в центральных венах долек органа (рис. 6).

В желудке меченые бактерии располагались в покровном эпителии и собственной пластинке слизистой оболочки (рис. 7). В тонкой кишке радиометки регистрировались в криптах слизистой оболочки, в цитоплазме бокаловидных гландулоцитов, соединительной ткани и сосудах микроциркуляции. S - меченые стафилококки. Количество введенных бактерий - 1x104 на 1 кг массы тела крысы в условиях травматизации мягких тканей. Гистоавтограф, ув. об. 90, ок. 10.

Гистологическое изучение препаратов показало, что в области раневого дефекта развивались структурные изменения эпителиальных и соединительной ткани воспалительного характера. Сосуды микроциркуляторного русла были резко расширены, наблюдались агрегаты из тромбоцитов и эритроцитов. Были заметны обширные участки кровоизлияний. Ткани области раны были инфильтрированы нейтрофильными лейкоцитами, макрофагами, базофилами, лейкоцитами, единичными эозинофилами. На отдалении от раневого дефекта был заметен формирующийся лейкоцитарный вал. В целом гистологическая картина области раны через 6 часов после травмы соответствовала обычной картине альтерации и экссудации. Особых различий в структуре тканей области повреждения у животных контрольной группы и у крыс, получавших различные количества стафилококка мы не обнаружили. бактерий - 1x104 на 1 кг массы тела крысы в условиях травматизации мягких тканей. Гистоавтограф, ув. об. 40, ок. У животных с поверхностными резаными ранами через 6 часов после введения бактерий в цитоплазме поверхностного эпителия желудка отмечалась значительная эозинофильная зернистость, увеличилось число дефектов эпителия по сравнению со здоровыми животными (рис. 8). В просвете желез было большое количество слизи. Слизистая тонкой (рис. 9) и толстой кишок имела нормальный вид.

В селезенке наблюдалось умеренное расширение просвета кровеносных сосудов и синусов. Выявлялись реактивные центры митотической активности бластных форм клеток (в герминативной зоне и периартериальной муфте лимфоидных фолликулов).

В печени несколько возрастало количество гепатоцитов с эозинофильной зернистостью. Соотношение их числа к гепатоцитам с гомогенной слабобазофильной цитоплазмой составляло 20/1. Наблюдался отек соединительнотканной стромы.

Влияние ранений мягких тканей на феномен транслокации у животных

В настоящей главе мы приводим сведения о транслокации бактерий-сапрофитов, а именно сенной палочки, и характере ее взаимодействия с гистоструктурами макроорганизма. При этом в методическом плане мы использовали тот же подход, что и в предыдущих сериях экспериментов. Главный акцент был сделан на изучении дозозависимых эффектов транслокации у здоровых животных и при механических повреждениях, описании структурных феноменов, возникающих в барьерных эпителиальных тканях слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, паренхиме, строме печени и селезенки, тканях области повреждения.

Анализ полученного материала показал сходный характер транслокации и путей миграции сенной палочки с таковыми, наблюдаемыми при введении стафилококка. Однако при этом установлены некоторые специфические особенности. Результаты наших исследований транслокации штамма Bacilus subtilis 534 у здоровых животных при интрагастральном введении различных доз микроорганизмов представлены в табл. 14.

Установлено, что через 6 часов после интрагастрального введения бактерий в количестве 1x104 и 1x105 на 1 кг массы животного микроорганизмы во внутренних органах не обнаруживались. При увеличении дозы вводимых бактерий до 1x106 радиометки последних присутствовали в селезенке в количестве 0,8±0,09, в печени - 0,92±0,03.

При дальнейшем увеличении количества вводимых бактерий с 106 до 109 микробных тел на 1 кг массы тела животного включительно содержание радиометок в селезенке и печени повышалось не более, чем в 3 раза. Лишь при получении 1010 бактерий на 1 кг массы наблюдался некоторый скачок в количестве микроорганизмов, проникших в эти органы. 1,89±0,12, 1х109на 1 кг-2,79±0,1 в условных полях зрения, 1х1010на 1 кг-4,78±0,54.

В печени наблюдалась сходная динамика в увеличении содержания радиометок при последовательном десятикратном повышении дозы вводимых бактерий. После введения 1x107 микроорганизмов на 1 кг массы количество радиометок в печени было равным 1,24±0,08 в условных полях зрения, при введении 1х108 бактерий на 1 кг массы животного - 1,88±0,04, 1х109на 1 кг- 1,95±0,08, 1х1010на 1 кг 7,86±0,6.

В тканях желудка, тонкой кишки бактерии обнаруживались только при введении бактерий в дозах 1х 10 на 1 кг массы тела животного и выше. В стенке желудка после получения 1x107 микробных тел на 1 кг массы количество радиометок составило 0,68±0,05 в условных полях зрения. У животных, получивших 1x10 меченых бактерий на 1 кг, мы наблюдали 0,89±0,06 радиометок в тканях желудка; после введения 1x109 микробных тел на 1 кг массы число радиометок было равным 0,85±0,09; после получения 1x1010 сенной палочки на 1 кг массы количество последних составило 1,52±0,12 в условных полях зрения.

В стенке тонкой кишки после введения 1x10 микробных тел на 1 кг массы количество радиометок составило 0,95±0,07 в условных полях зрения. У животных, получивших 1x10 меченых бактерий на 1 кг, мы наблюдали 1,1±0,03 радиометки в тканях тонкой кишки; после введения 1x109 микробных тел на 1 кг массы число радиометок было равным 0,95±0,07; после получения 1x1010 сенной палочки на 1 кг массы количество последних составило 1,64±0,11 в условных полях зрения.

В тканях толстой кишки радиометки наблюдались только после введения 1x1010 микробных тел на 1 кг массы. Их количество составило 0,74±0,1. В тканях легких, почек, кожи, в мазках крови через 6 часов после введения бактерий радиометок мы не наблюдали. Данные результаты позволили сделать заключение о том, что транслокация бактерий Bacillus subtilis 534 у здоровых лабораторных крыс начинается при введении бактерий в количестве 106 микробных тел на 1 кг массы тела животного и выше. При этом транслокация сенной палочки, так же как и золотистого стафилококка жестко контролируется макроорганизмом. На это указывает незначительное и непропорциональное увеличение (в 1,7-8,5 раз) числа проникших во внутренние органы бактерий при увеличении их дозировок, вводимых перорально, в 10000 раз.

Представляла большой интерес сравнительная оценка распределения стафилококков и сенной палочки у здоровых животных. Результаты исследования представлены в таблице 15.

Как видно из данных таблицы, через 6 часов после интрагастрального введения меченых бактерий здоровым животным в слизистой оболочке желудка, тонкого кишечника преобладала сенная палочка, количество которой было в 1,5-2,6 раза больше, чем стафилококка (р 0,001). В органах с элементами моноцитарно-макрофагальной системы (печень, селезенка) характер преимущественно выделяемой микрофлоры из тканей несколько отличался. Также преобладала сенная палочка, но количество радиометок последней превышало число радиометок стафилококков уже в 1,8-4,7 раз (р 0,001). В стенке толстой кишки бактерии обоих видов обнаруживались лишь при введении 10 микробных тел на 1 кг массы тела животного, а их количество достоверно не различалось (р 0,5).