Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Современные представления о морфологических изменениях в регионарных лимфатических узлах сердца при инфаркте миокарда - 10
1.2 Подходы к фармакологической коррекции ишемических повреждений ткани Биофлавоноидами - 22
1 3 Диагностическая ценность биохимических маркеров при инфаркте миокарда - 32
Глава 2. Материал и методы исследования - 39
Глава 3. Патоморфологические изменения в регионарных лимфатических узлах сердца и биохимические изменения сьгаоротки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда
3.1 Структурная организация и цитоархитектоника регионарных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода - 47
3.2 Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода
Глава 4. Патоморфологические изменения в регионарных лимфатических узлах сердца и биохимические изменения сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда в условиях его коррекции детралексом
4.1 Структурная организация и цитоархитектоника регионарных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции детралексом - 61
4.2 Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции детралексом - 72
РЕЗЮМЕ - 73
Глава 5. Патоморфологические изменения в регионарных лимфатических узлах сердца и биохимические изменения сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда в условиях его коррекции полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной
5.1 Структурная организация и цитоархитектоника регионарных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной - 74
5.2 Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной - 84
Резюме - 86
Заключение -122
Выводы - 134
Список использованной литературы
- Подходы к фармакологической коррекции ишемических повреждений ткани Биофлавоноидами
- Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода
- Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции детралексом
- Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной
Введение к работе
Актуальность исследования. Среди актуальных проблем современной медицины важнейшее место занимает ишемическая болезнь сердца (ИБС). Это заболевание является одной из ведущих причин преждевременной смерти. По данным МЗ РФ (2000 г.) смертность от ИБС составляет 4S,1% в структуре всей смертности от сердечно-сосудистой патологии, что определяет высокую социальную значимость проблемы. В связп*с этим поиски путей ранней диагностики и лечения этого заболевания, а также исследование механизмов патогенеза и характера морфологических изменений в организме при нем продолжают оставаться важной задачей современной медицины (Лукомский П.Е., 1971,1974; Виноградов А.В. с соавт.,1971, 1979; Шхвацабая Н.К. с соавт., 1974; Чазов Е.И., 1977; Малая Л.Т. с соавт., 1981; Руда М.Я., Зыско А.П., 19S1; Сыркин А.Л., 1991; Костгок Ф.Ф., 1993; Никитин Ю.П. с соавт., 1996; Савельева И.В. с соавт., 1997; Оганов Р.Г., 1999; Sobel S.E., 19S4; Floten S., 1985; Zipes D. et al., 1999). Но, при очевидных успехах диагностики, лечения, профилактики и реабилитации инфаркта миокарда (ИМ) достигнутых в последние десятилетия все еще остается много трудностей в оценке тяжести и прогнозе его клинического течения, что снижает возможности и эффективность соответствующей терапии (Малая Л.Т. с соавт., 1981; Сыркин А.Л., 1991; Чучалин А.Г. с соавт., 1999; Шевченко Ю.Л , 2000; Murray C.J.L. et al., 1996; Brand L. et al., 1999).
Особое внимание хотелось бы уделить проблеме прежде всего повторных инфарктов миокарда и в первую очередь потому, что повторные коронарные инциденты занимают важное место в современной клинической практике. Вместе с тем, уделяемое в ліггературе внимание проблеме повторных ИМ по сравнению с первичными ИМ ничтожно мало, хотя цифры смертности при этой паталогни неуклонно возрастают (Попов В.Г., 1971; Попов В.Г. с соавт., 1991). Следует отметить, что по наблюдениям за пятилетний период у пациентов, перенесшими первичный ИМ, повторный ИМ имеет место в 23% случаев (Бурцев В.И., Кочнова В.А., 1998). В то же время среди пациентов с повторным ИМ по данным разных авторов смертность варьирует от 4% (Alan И.В., 19S9) до 70% (Schuster Е.Н., Bulkley В.Н., 1981; Debusk R.F., 1986, Roberts R., 19S7; Alan H.B., 1989) также за время пятилетнего периода.
В литературе последних лет появился ряд работ посвященных изучению структуры, клеточного состава и транспортных возможностей регионарных лимфатических узлов сердца (1'ЛУ) как одной из наиболее возможных и значимых причин, оказывающих влияние на динамику пості інфарктного течения острого ИМ (Бнкбулатов З.Т., 19S7; Асташов В.В., 1992,1997, Головнев В.А., 1993). Эш вопросы при повторных инфарктах миокарда нигде не освещались, за исключением отрывочных, несистематизированных данных по описанию РЛУ сердец при повторных ИМ на аутопсийном материале (Фельдмоне Л.З.; 1969). Нет также данных .о влиянии полифенольных растительных соединений на изменение в РЛУ сердца при повторных ИМ хотя доказано их положительное влияние на динамику течения первичного ИМ (Бикбулаюв З.Т., I9S7; Асташов В.В., 1992; Головнев В. А., 1993).
Интересным, на наш взгляд, представлялось изучение динамики кардиоспецифичеекп.х маркеров (в частности креатинфосфокиназы (КФК)) в постинфарктном периоде повторного ИМ, с возможным использованием этого показателя для прижизненного определения массы некротпзпрованного участка в миокарде крыс. Этот метод успешно применялся рядом авторов в клинике (Виноградов А.В. с соавт., 1984; Балаховдкн.П И,С с соавт., 1996; Виноградов А.В. с соавт., 1999). Данных о применении этого метода у экспериментальных животных нами найдено не было. Все вышеизложенное определяет актуальность работы.
Цель исследования: Выявить закономерности структурно - клеточных преобразований в регионарных лимфатических узлах сердца, динамики КФК в сыворотке крови при повторном метаболическом инфаркте миокарда без лечения и при его коррекции бпофлавонопдамп (полифенольного комплекса из манжетки обыкновенной п фармакологического препарата детралекс).
Задачи исследования:
-
Изучить структурно-клеточную организацию передних средостенных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1, 3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода без лечения.
-
Изучить структурно-клеточную организацию передних средостенных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда в условиях его коррекции лекарственным препаратом детралекс на 1, 3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода.
-
Изучить структурно-клеточную организацию регионарных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда в условиях его коррекции полнфенольным комплексом из манжетки обыкновенной на 1, 3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода.
-
Изучить динамику уровня КФК сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда без лечения и в условиях его коррекции биофлаваноидами на 1,3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода.
-
Провести корреляционный анализ содержания КФК в сыворотке крови в исследуемых группах . на 1, 3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода.
Научная новизна исследования:
-
Впервые изучена динамика структурно - клеточных преобразований в регионарных лимфатических узлах сердца в постинфарктном периоде повторного экспериментального метаболического инфаркта миокарда.
-
Впервые изучено влияние детралекса и полифенольного комплекса из манжетки обыкновенной на морфофункцнональные изменения в регионарных лимфатических узлах сердца в динамике в постннфарктном периоде повторного экспериментального метаболического инфаркта миокарда в сравнении.
-
Впервые проведено сравнительное динамическое исследование, корреляционный анализ изменений уровней КФК сыворотки крови в постинфарктном периоде повторного экспериментального метаболического инфаркта миокарда без коррекции и при его коррекции биофлавоноидами.
-
Впервые получены данные характеризующие массу некроза в миокарде крысы прижизненно по уровню КФК сыворотки крови в постинфарктном периоде с использованием модифицированной формулы.
Практическая н теоретическая значимость работы:
Полученные результаты могут быть использованы для оценки общих закономерностей динамики структурно - клеточных преобразований в регионарных лимфатических узлах сердца в разные сроки постинфарктного периода при повторном экспериментальном метаоолііческом инфаркте миокарда, как без его коррекции, так и при использовании биофлавоноидов. Использование динамического контроля КФК сыворотки крови в постинфарктном периоде позволяет прижизненно математически отслеживать динамику массы некроза в сердечной мышце крыс и, соответственно, прогнозировать состояние тяжести изменений в их' миокарде. Полученные позитивные изменения с практически полным восстановлением всех функций лимфатических узлов при повторной ишемии миокарда в условиях использования полифенольного комплекса из манжетки обыкновенной дают теоретическое обоснование о возможном использовании его в клинике как при различных формах первичного инфаркта миокарда и его рецидивах, так и при повторных инфарктах миокарда.
Основные положення выносимые на зашиту:
-
Для постинфарктного периода повторного метаболического экспериментального инфаркта миокарда увеличивается срок "острого" периода (по структурно-клеточным преобразованиям) с максимальной выраженностью процесса на 15 сутки.
-
В группах получавших лечение ' отмечается восстановление структурно-клеточных соотношений, по сравнению с группой без коррекции.
-
В группе с манжеткой обыкновенной структурно-клеточные и биохимический показатели приближались к уровню контроля в большей степени, чем в группе с детралексом.
-
Исследование уровня КФК в динамике в постинфарктном периоде позволяет рассчитать объем некротизированного участка в миокарде прижизненно и оценить тяжесть течения повторного инфаркта миокарда.
Апробация материалов диссертации:
Основные положения диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях студентов и молодых ученых, Новосибирск, 2000, 2001; научной сессии посвященной 65 - летаю Новосибирской государственной медицинской академии, Новосибирск, 2000; V международном научном симпозиуме Чуйской научно - практической конференции, Чолпон - Ата, 2001;
Публикации: Автор имеет 7 печатных работ из них по теме диссертации 7, оформляется заявка на получение рационализаторского предложения.
Объем и структура диссертации:
Подходы к фармакологической коррекции ишемических повреждений ткани Биофлавоноидами
Прежде чем приступить к рассмотрению морфологических изменений в регионарных лимфатических узлах сердца, хотелось бы кратко остановиться на основных современных представлениях о патоморфологических изменениях при инфаркте миокарда, и проследить взаимное воздействие некротизированного миокарда на регионарные лимфатические узлы сердца и наоборот.
Инфаркт миокарда - это участок некроза мышцы сердца, вследствии полного прекращения притока крови или поступления ее в недостаточно адекватном количестве для обеспечения в определенный момент функциональных потребностей миокарда (Вихерт A.M., 1985; Моисеев B.C., 1996; Gabbasov Z.A., Platelet P., 1998). В большинстве случаев можно выделить периоды клинического течения инфаркта миокарда: прединфарктное состояние, острый период - с 1 по 7-10 дни, подострый период с 7-Ю по 30 день заболевания и период выздоровления (Малая Л.Т. с соавт., 1981). Патоморфологические изменения в ишемизированной зоне миокарда подробно изучены на разных структурных уровнях исследования (Архангельский А.В, 1967; Шмерлинг М.Д., 1968; Вихерт A.M., 1971,1982,1985; Жданов B.C., Розенблат Ю.А., 1971; Митин КС, 1974; Нагорнев В.А., 1977; Ав-тандилов ГГ. с соавт., 1978, 1984; Непомнящих Л.М., 1981; Беленков ЮН., Саидова М.А., 1999; Вах J.J. et al., 1997). Основываясь на комплексе гистологических и электроннно-микроскопических методов в развитии острого инфаркта миокарда выделяют отдельные фазы (Аль Арики Мохамед, 1985). В ишемической стадии острого инфаркта - фазу ранней ишемии (до 15 часов), которая характеризуется лейкостазами, плазморагиями, периваскулярным отеком, кровоизлияниями и контрактурными изменениями кардиомиоцитов; фазу формирования некроза (15-24 часа), характеризующуюся глыбчатым распадом, лизисом кардиомиоцитов, некрозом эндотелиоцитов и лейкодиапедезом. В следующей, некротической стадии острого инфаркта выделяют экссудативно-некротическую фазу (1-3 суток), в которой наблюдаются распространенные некрозы в различных отделах микроциркуляторного русла и значительная лейкоцитарно-моноцитарная инфильтрация; продуктивно-некротическую фазу (4 суток и более), для которой характерны лимфоцитарная инфильтрация, стромальная фибропластическая реакция и пролиферация эндотелия капилляров.
Появление патологического очага и прогрессирующая общая и местная токсемия и токсилимфия ухудшают условия гемоциркуляции в поврежденном миокарде (Куприянов ВВ. с соавт., 1975, 1983; Чернух A.M. с соавт., 1975; Левин Ю.М., 1982; Банин В.В, 2000). Это проявляется в нарушении проницаемости сосудистого русла. Проницаемость кровеносных капилляров определяется присутствием микрососудистых пор размером 50 - 70 мкм, через которые происходит транспорт воды и макромолекул (Куприянов ВВ., с соавт., 1983; Mayerson Н. et al. 1962). Большое значение при рассмотрении механизмов интерстициального транспорта придается тканевой гипергидратации. При гипергидратации, увеличению в интерстиции продуктов распада тканей способствует не только повышенное гидростатическое давление, но и увеличение концентрации различных гуморальных биологически активных факторов (гистамин, простогландины. кинины, серотонин и др.) (Зербино Д.Д. с соавт., 1974; Jonsson J. et al., 1970; Zheng VV. et al.. 1999). При инфаркте миокарда нарушается венозный и артериальный кровоток, замедляется капиллярная циркуляция вплоть до эритростаза. наблюдается расширение венозных отделов микроциркуляторного русла, неравномерность калибра, образование клубочков микроаневризм, сетевидньгх структур (Куприянов ВВ. с соавт., 1975; Чернух A.M. с соавт., 1975; Чазов Е.И. с соавт.. 1977; Головнев В А. 1981,1993; Меерсон Ф.З. 1984; Затейшикова А.А., Затейщиков ДА.. 1998; Lefer А., 1985; Nicholls M.G.. 1985; liyama К. et al., 1996). Капиллярный кровоток при острой ишемии миокарда становится прерывным, Эти явления описываются как "сладж-феномен" (Потоцкая ИИ., 1994; Асташов ВВ.. 1992). При этом наблюдается внутрисосудистая агрегация эритроцитов, повышение гематокрита и вязкости крови (Наддачина ТА. с соавт., 1972; Лукомский П.Е.. 1974; Микляев Ю.И. с соавт.. 1974; Чирейкин Л.В.. То-жиев М.С., 1994; Estanove S., 1985; Tada М. et al., 1985). Высокий уровень токсемии, наблюдаемый при обширных повреждениях тканей приводит, к нарушению лимфатических сосудов (Русньяк И. с соавт., 1957). При этом может наблюдаться спазм или паралич лимфатических сосудов, нарушающий нормальный транспорт лимфы. Создавая механическую недостаточность лимфообращения в эксперименте при помощи перевязки основных лимфатических коллекторов сердца. Русньяк И. с соавт. (1957) наблюдали признаки нарушения сердечной деятельности, которую они объясняли гипоксией миокарда, вследствие формирования его интерстициаль-ного отека. На электрокардиограмме при этом присутствовали изменения, характерные для инфаркта миокарда. Интерстициальный отек авторы подтверждали морфологическими исследованиями.
Исследования лимфатического дренажа сердца при различных его заболеваниях выполнялись многими авторами (Зербино Д.Д., 1974, 1986; Ильинский СП., 1981; Maroko Р., 1972; Ullal S.R., KJuge T.N., 1972; Feola М. et al., 1973,1975,1977; Szlauy L., Adams P.F. et al., 1980; Johustone M.T. et al, 1996). В своих работах Ильинский СП. (1978,1981) описывает при атеросклерозе коронарных артерий сердца нарушение лимфоциркуляции с развитием лимфоангиосклероза, тромбоз лимфатических сосудов, лимфостаз, отек интерстиция и развитие лимфостатической формы кардиосклероза. Данные других исследователей подтверждают, что затруднение лимфооттока из миокарда приводит к кардиомиопатии и затем к прогрессирующему кардиосклерозу (Зербино Д.Д., 1974). В развитии расстройства лимфатического дренажа сердца при инфаркте миокарда играет роль образование "пробок", блокирующих лимфатические сосуды (Фельдмоне Л.З., 1969). Их образование происходит за счет гиперкоагуляции лимфы, скопления и полимеризации фибрина. В их состав могут также входить белки, липиды. агрегаты эритроцитов, лейкоцитов, обломки погибших клеток миокарда. Савельев Г.В. (1966) выделил в процессе развития недостаточности лимфообращения при остром инфаркте миокарда три стадии. Первая стадия - динамическая, развивается в результате повышения проницаемости кровеносных сосудов и поступления плазменных белков в интерстициальную ткань. Накопление белков приводит к развитию второй стадии - резорбционной. Третья стадия называется механической и обусловлена воспалительными изменениями и тромбозом лимфатических сосудов. Результатом этого является переполнение сердечной мышцы лимфой. Расширенные периваскулярные лимфатические
Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода
Коррекцию моделируемого ПВЭМИМ осуществляли, используя лекарственный препарат детралекс, который вводился из расчета - 500 мг/кг веса животного. Эта дозировка рассчитывалась из разовой терапевтической дозы для взрослого человека в пересчете на массу тела к мсы, так как в доступной литературе данных по применению этого препарата у экспериментальных животных нами найдено не было. Полифенольный комплекс из манжетки обыкновенной вводился в общепринятой дозировке - 10мг/кг веса животного (Зыков А.А., 1982). Детралекс и полифенольный комплекс из манжетки обыкновенной в виде порошков растворяли в дистиллированной воде. Полученные растворы в объеме 2 мл. при помощи шприца и металлического зонда вводили крысам эндогастрально Введение производилось ежедневно в одно и то же время суток, начиная с 1 дня индукции ПВЭМИМ. Первое введение лекарственных препаратов в обеих группах было сделано через 60 минут после индукции ПВЭМИМ (Бикбулатов 3 Т., 1987).
Декапитация животных производилась под эфирным наркозом с последующим забором переднего средостенного лимфатического узла и миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки. Эти сроки были выбраны нами, исходя из того, что они соответствуют определенным периодам течения ИМ (Бедрин П.Л. с соавт, 1975)
Существует метод Roberts AG. et al. (1978) для определения размеров, массы зоны некроза, в левом желудочке сердца в процентах, по отношению к массе всего левого желудочка, основанный на секционном материале Немаловажный интерес представляет (как для клинической, так и хзя экспериментальной медицины) возможность прижизненного расчета массы некроза в миокарде, что более точно дает возможность оценки тяжести и динамики течения постинфарктного периода. Так. например, для определения площади очага некроза в миокарде в современной медицинской практике используют ряд инструментальных методик, такие, как: ЭКГ -мониторирование, одно- и двухмерная эхокардиография, эхокимография, допплерэхокардиофафия, радиоизотопные методы и. т. д. (Крамер А.А., 1983; Сыркин АЛ., 1991, Беленков ЮН. с соавт., 1999; Вах J.J. et al., 1999).
Особое внимание в последнее время стали уделять возможности выявления массы зоны ишемизированного миокарда с помощью определения активности различных биохимических кардиоспецифических маркеров в сыворотке крови в постинфарктном периоде. Одним из таких наиболее информативных маркеров является креатинфосфокиназа и ее изофермент MB - КФК, которые успешно применяются в современной клинической практике для прижизненной оценки массы некроза миокарда и ее динамики у больных в постинфарктном периоде (Виноградов А.В. с соавт., 1988).
Также, по нашему мнению, представляет интерес в изучении возможности применения расчета массы некроза миокарда у экспериментальных животных (крысы, кролики, собаки и т д.) прижизненным методом при помощи ферментного анализа КФК сыворотки их крови в постинфарктном периоде, чего в литературных данных нами найдено не было
Преобразуя известную формулу (Виноградов А.В. с соавт., 1988) М = 6,2 (U-10,2) \ где 6,3 и 10,2 - константы (в расчете на среднюю массу сердца человека), U - уровень КФК сыворотки крови в мМЕ/мл., М - масса некроза миокарда в (в гр.), мы получили следующее выражение для расчета массы некроза в миокарде крыс по показаниям КФК сыворотки крови в постинфарктном периоде: М = 0,055 (U-0,0035) \ где 0,055 и 0,0035 - константы (в пересчете на среднюю массу сердца крысы), U - уровень КФК в сыворотке крови в мккат /мл., М - масса некроза миокарда (в гр). Практический расчет массы некроза в миокарде осуществляли путем замера масс удаленных очагов некроза из миокарда путем взвешивания их на высокоточных весах. Полученные нами данные теоретического и практического расчета масс некроза в миокарде отражены и сопоставлены между собой (Таблицы 2, 3,4).
Каждый лимфатический узел маркировали и помешали в отдельный марлевый мешочек с биркой затем фиксировали их в свежеприготовленном растворе Телесницкого (100мл - этилового спирта, 5мл - концентрированной уксусной кислоты, 5мл - 40% раствора формальдегида) в течении I суток и перекладывали в 1й 70% раствор этилового спирта. 70% раствор спирта меняли три раза, через сутки. Затем лимфатические узлы помещали на 12 часов в 80% раствор этилового спирта. Далее гистологический материал проводили по общепринятой методике (Ромейс Б., 1954, Пирс Э., 1962, Елисеев В.Г. с соавт., 1967). После этого, узлы заливали в парафиновые блоки. Срезы с блоков делали на ротационном микротоме через середину лимфатических узлов, вдоль их продольной оси. При этом для морфометрии толщина срезов составляла 7 мкм, а для цитологического исследования - 5 мкм. Срезы окрашивали по общепринятой методике гемотоксилином и эозином по Майеру, а также по Ван-Гизону. Окрашенные препараты заключали в пихтовый бальзам и накрывали покровным стеклом.
Далее проводили морфометрический анализ структуры лимфатического узла (Автандилов ГГ., 1980, 1990; Непомнящих Л.М. и соавт, 1984). С помощью окулярной сетки при увеличении в 38,5 раз под микроскопом МБИ-15. при использовании окулярной морфометрической вставки, представляющей собой закрытую квадратную тестовую систему, площадью 7,44 Ю6 мкм. , определяли площади основных компонентов узла (общая площадь лимфатического узла, площади краевого синуса, капсулы, коркового и мозгового вещества, трабекул, лимфоидньгх узелков с герминативным центром и без него, коркового плато, паракортикальной зоны. мякотных тяжей и мозговых синусов) в 10 полях зрения. Морфометрию струк-гур лимфатического узла проводили по методу Автандилова Г Г (1980, 1990) При этом выполняли основное требование: на структуры, занимающие наименьшую площадь приходилось не менее 1 точки (Христолюбова Н.Б. с соавт., 1974: Непомнящих Л.М. с соавт., 1984). Рассчитывали отношение абсолютной площади коркового вещества к абсолюной площади мозгового вещества (К7М индекс) (Бородин Ю.И.. 1968, 1978) для определения морфофункционального типа лимфатических узлов. При этом за 100% принимали площадь лимфатического узла, срезанного в продольном направлении
При исследовании клеточного состава лимфатических узлов определяли: малые и средние лимфоциты, иммунобласты. плазмобласты. зрелые и незрелые плазмоци-ты, клетки Мотта, макрофаги, моноциты, ретикулярные клетки, нейтрофилы. мито-тически делящиеся клетки, погибающие клетки. Указанные выше клеточные формы изучали в структурах лимфатического узла: в корковом плато, паракортикаль-ной зоне, лимфоидных узелках с герминативным центром и без него, в мякотных тяжах и в мозговых синусах.
Подсчет количества клеточных форм проводили на гистологических срезах с помощью окулярной морфометрической вставки, представляющей собой закрытую квадратную тестовую систему, площадью 1,83 103 мкм.2 при увеличении в 990 раз. Выделение структурных компонентов и клеточных элементов лимфоидной паренхимы в лимфатических узлах проводили согласно Международной гистологической номенклатуре (под ред. Афанасьева Ю.И., 1987). На основании полученных данных рассчитывали коэффициент отношения митозов во всех структурно-функциональных зонах лимфатических узлов к количеству погибших клеток (состояние некроза: кареопикноза, кареолизиса, кареорексиса), рассматривали это как интегра-тивный показатель процессов физиологической регенерации и репаративной регенерации при воздействии токсических продуктов образующихся при некрозе миокарда (Овсянко Я.У., 1999).
Полученный массив данных обрабатывали методами вариационной статистики и корреляционного анализа с помощью пакета статистических программ "STATISTICA 5,(Г и "Excel 7,0" Вычисляли средние арифметические величины (М) в абсолютных и относительных единицах и ошибки их репрезентативности (т). Для выявления статистической значимости отличий использовался параметрический критерий Стьюдента
Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции детралексом
Во все исследуемые сроки постинфарктного периода значения уровней КФК сыворотки крови в этой группе оставались достоверно выше значения контрольного уровня (Таблица 7).
В группе животных, получавших в течение исследуемого срока постинфарктного периода ПВЭМИМ с коррекцией препаратом детралекс, была отмечена динамика изменений уровней КФК в сыворотке крови в сторону ее снижения по сравнению с ПВЭМИМ без лечения. Следует отметить, что в течение всего исследуемого срока постинфарктного периода, уровни КФК в этой группе, были достоверно ниже таковых в группе с ПВЭМИМ без лечения. Так, в 1 сутки уровень КФК в группе с коррекцией бы ниже такового, чем в группе без лечения в 1,85 раза. На 3 и 7 сутки снижение уровней КФК в группе получавшей детралекс по сравнению с группой без лечения имело одинаковые значения в 1,55 раза ниже уровня КФК при ПВЭМИМ В дальнейшем отмечалось значительное снижение уровней КФК. Так, к 15 суткам была отмечена разница в уровне КФК между рассмотренными выше группами в 2,53 раза, а на 21 сутки было зарегистрировано максимальное снижение уровня КФК в течении всего исследуемого постинфарктного периода ИМ в этой группе, по сравнению с группой не получавшей лечения в 3,44 раза.
При помощи корреляционного анализа было установлено, что корреляционная связь между показателями КФК при повторном инфаркте без лечения и при его коррекции детралексом обнаруживалась с 1 по 21 сутки. На 1 сутки (г = - 0,42 связь умеренная), 3 сутки связи не обнаруживалось, 7 сутки (г = - 0.49 - связь умеренная), 15 сутки (г = 0,79 - связь сильная), 21 сутки (г = 0,87 - связь сильная). Сравнительная динамика поведения КФК в этой группе в указанные сроки отображена (рис. 18). РЕЗЮМЕ
При повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда в передних средостенных регионарных лимфатических узлах сердца крыс этой группы имеет место продолжающийся прессинг токсическими продуктами аутолиза из некротического участка в миокарде на лимфоидную ткань лимфоузла (происходит увеличение объема капсулы, трабекул со значительно выраженными процессами склерозирования в лимфоузле. Но, на этом фоне, к концу эксперимента (в отличие от предыдущей группы) отмечается некоторое увеличение площадей коркового вещества, мозгового вещества и их структурных компонентов. Происходит увеличение К/М индекса.
В течение всего эксперимента количество макрофагов, ретикулярных клеток было выше исходного уровня и практически не имело различия с повторным инфарктом миокарда без лечения. Нейтрофилы и иммунобласты во всех изученных зонах к концу эксперимента достигали нормы. Показатель индекса репаративной регенерации к 21 суткам значительно увеличивался по сравнению с группой без лечения. Структурно-клеточные преобразования в исследуемых зонах лимфоузла свидетельствуют об определенном улучшении барьерно-детоксикационной и иммунной функции. В этой группе происходило улучшение в динамике показателей уровня КФК сыворотки крови в постинфарктном периоде. Такое улучшение мы объясняем влиянием использованного нами лекарственного препарата детралекс, который обладает мощным лимфо- и ангиотропным эффектами. Именно эти факторы привели к улучшению структурно-клеточных показателей в измененных лимфоузлах и, соответственно, к восстановлению (хотя и неполному) их основных функций, что в свою очередь способствовало (по принципу обратной связи) более быстрому оттоку токсических продуктов от поврежденного миокарда и его более быстрому восстановлению. Структурная организация и цитоархитектоиика регионарных лимфатических узлов сердца при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1,3, 7, 15 и 21 сутки постинфарктного периода в условиях его коррекции полифеиольиым комплексом из манжетки обыкновенной
В результате проведенного лечения животных с ПВЭМИМ полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной, было выявлено (Таблица № 8), что уже на 3 сутки эксперимента общая площадь изученных лимфатических узлов достигала контрольного уровня, а в последующие сроки даже превышала его, при чем в большей степени на 15 сутки в 1,16 раза (рис. 1). Увеличение площади лимфоузлов при применении манжетки обыкновенной происходило за счет увеличения площади коркового, и мозгового вещества.
К/М индекс в течение 1 и 3 суток эксперимента снижался, в 1,17 раз и 1,21 раза соответственно, относительно контроля (рис. 2), однако тип узла оставался компактным, по классификации Ю.И. Бородина (1972). После 7 суток эксперимента он незначительно возрастал и к 15 и 21 суткам достигал уровня здоровых животных. Можно предположить, что при лечении повторного экспериментального метаболического инфаркта миокарда полифенолами манжетки обыкновенной происходит скорейшее восстановление изначального типа лимфатических узлов (компактного типа), позволяющее более полно проводить обработку поступающей лимфы, биологическую, биохимическую, биофизическую и иммунную (Бородин Ю.И., 1972).
Площадь коркового вещества начинала восстанавливаться уже на 3 сутки эксперимента, но оставалась еще достоверно ниже контрольного уровня в 1,08 раза. С 7 суток площадь коркового вещества уже превышала исходный уровень, особенно на 15 сутки - в 1,15 раза (рис. 4). Интересно отметить, что площадь лимфатических узелков без герминативного центра была только на 1 сутки достоверно ниже контроля, в последующие сроки эксперимента данный показатель не имел достоверных различий с контролем. Интересно, что площадь лимфатических узелков без герминативного центра к концу эксперимента в 5 раз превышала соответствующий показатель у животных без лечения ив 1,35 раза показатель у животных, получавших лечение детралексом (рис. 24). Площадь же лимфатических узелков с герминативным центром значительно возрастала по сравнению с уровнем здоровых животных уже на 7 сутки, а максимального своего значения данный показатель достигал на 15 сутки в 1,25 раза. Показатель площади лимфатических узелков с герминативным центром к концу эксперимента определялся в пределах нормы и был значительно выше соответствующих показателей у животных без лечения и у животных получавших лечение детралексом в 1,51 раза ив 1,25 раза, соответственно.
Площадь коркового плато при лечении полифенолами манжетки обыкновенной максимально снижалось на 3 сутки эксперимента в 1,42 раза относительно контрольного уровня. Однако, уже начиная с 7 суток и до конца эксперимента (21 сутки) площадь коркового плато возрастала и не имела достоверных различий с уровнем контроля Площадь паракортикаїьной зоны также снижалась в 1 сутки эксперимента, но уже на 7 сутки показатель ее площади достоверно возрастал по сравнению с контролем, достигая максимума на 15 сутки и значительно превышая контроль в 1.29 раза.
К 21 суткам эксперимента площадь паракортикальной зоны не отличалась от контрольного уровня. Возможно, такие положительные изменения в структурных компонентах коркового вещества при лечении полифенолами манжетки обыкновенной животных с повторным экспериментальным метаболическим инфарктом миокарда можно связать с их протективными и иммуномодулируюшими свойствами.
Изменения креатинфосфокиназы сыворотки крови при повторном экспериментальном метаболическом инфаркте миокарда на 1-е, 3-й, 7-е, 15-е и 21-е сутки постинфарктного периода в условиях коррекции полифенольным комплексом из манжетки обыкновенной
Численность средних лимфоцитов максимально возрастала на 1 сутки эксперимента в 1,12 раза, на 3 и 7 и 15 сутки данный показатель был ниже, а в последующем вновь превышал контрольный уровень в 1,02 раза. Количество иммунобластов возрастает, в большей степени на 3 сутки в 1,88 раза, однако данный показатель не имел достоверных различий с таковым показателем в группе животных без лечения во все сроки эксперимента за исключением 21 суток. К 21 суткам количество иммунобластов определялось в пределах нормы. Численность моноцитов и макрофагов возрастала и достигала своего максимального значения на 3 сутки - в 1,43 раза ив 1,41 раза, однако к концу эксперимента если количество макрофагов оставалось выше контрольного уровня в 1,07 раза, то численность моноцитов снижалась в 1,08 раза по сравнению с контролем. Количество ретикулярных клеток увеличивалось, достигая своего максимума к 21 суткам - в 1,61 раза по сравнению с уровнем здоровых крыс (рис. 12). Между показателями ретикулярных клеток в паракортикальной зоне у животных без лечения и у животных получавших лечение детралексом достоверные различия отсутствуют.
В лимфатических узелках без герминативного центра клеточная плотность была достоверно снижена во все сроки эксперимента по сравнению с контрольным уровнем, и своего максимального снижения данный показатель достигает на 7 сутки - в 1,07 раза меньше по сравнению с контрольным уровнем. Количество малых лимфоцитов снижено в течение всего срока эксперимента, в большей степени на 7 сутки - в 1,16 раза. Численность средних лимфоцитов возрастала, достигая своего максимума на 3 сутки в 1,17 раза, но на 15 и 21 сроки опыта этот показатель был в пределах нормы. Количество иммунобластов также возрастало к 3 суткам в 1,13 раза, однако, к 21 суткам показатель их численности был ниже контрольного уровня в 1,07 раза. Количество митотически делящихся клеток снижалось на (1, 3. 7 и 15 сутки), но в большей степени на 7 сутки в 1,45 раза. В дальнейшем к 21 суткам данный показатель уже не имел достоверных различий с контрольным уровнем. Показатель численности моноцитов и макрофагов возрастал на протяжении эксперимента, в большей мере на 3 сутки - в 2,21 раза ив 1,86 раза, соответственно. Однако, если количество моноцитов к 21 суткам оставалось выше в 1,19 раза, то количество макрофагов не имело достоверных различий по сравнению с уровнем контроля. Количество ретикулярных клеток в лимфатических узелках без герминативного центра в группе животных получавших лечение детралексом увеличивалось, и к концу эксперимента было в 1,8 раза выше контроля, но не имело достоверных различий с показателем животных не получавших лечения (рис. 13).
Плотность клеточных элементов в лимфатических узелках с герминативным центром была достоверно ниже контрольного уровня на всех сроках эксперимента, в большей мере на 3 сутки в 1,1 раза. Количество малых лимфоцитов и митотиче-ски делящихся клеток также снижалось, на протяжение всего опыта, в большей степени на 3 сутки - в 1,56 раза ив 1,43 раза. Численность иммунобластов возрастала на 1, 3, 7 и 15 сутки, при чем максимального значения данный показатель достигал на 3 сутки в 1.27 раза. К 21 суткам количество иммунобластов было достоверно ниже исходного уровня в 1,05 раза. Численность средних лимфоцитов, моноцитов, макрофагов возрастало на 1, 3, 7 и 15 сутки, в большей степени на 3 сутки - в 1,22 раза, в 1,44 раза, в 1.21 раза по сравнению с контрольным уровнем. К 21 же суткам перечисленные показатели не имели уже достоверных различий с контролем. Количество ретикулярных клеток неуклонно возрастало в течение всего эксперимента, достигая своего максимального значения к 21 суткам в 1,95 раза, но данный показатель не имел достоверных различий с соответствующим показателем животных без лечения.
В мякотных тяжах плотность клеточных элементов в течение всего срока эксперимента оставалась ниже уровня контроля, в большей степени на 3 сутки в 1.39 раз. Количество малых лимфоцитов, зрелых плазматических клеток, митотически делящихся клеток было достоверно меньше контрольного уровня, на всех сроках эксперимента, и в большей мере на 3 сутки - в 2.47 раза, в 2.36 раза ив 1.74 раза соответственно. Численность средних лимфоцитов была выше на 1,3 и 7 сутки, в большей степени на 3 сутки в 1.3 раза по сравнению с уровнем контроля. На 15 и 21 сутки численность средних лимфоцитов была в пределах нормы. Количество моноцитов, макрофагов, клеток Мотта, погибших клеток достигало своего максимума на 3 сутки эксперимента - в 1,68 раза, в 1,51 раза, в 1,76 раза. 1,46 раза, однако к 21 суткам показатели этих клеток определялись в пределах нормы по сравнению с уровнем здоровых крыс. Количество плазмобластов в течение всего срока эксперимента было значительно выше исходного уровня, в большей мере на 7 сутки в 1,49 раза. Количество незрелых плазматических клеток на сутки возрастает в 1,14 раза, а к концу эксперимента снижается в 1,08 раза относительно контрольного уровня. Количеств э ретикулярных клеток неуклонно возрастало в течение всего эксперимента, достигая своего максимального значения к 21 суткам в 1,44 раза, но данный показатель не имел достоверных различий с соответствующим показателем животных без лечения (рис. 14).
Плотность клеточных элементов в мозговых синусах в 1 сутки снижалась, а затем возрастала, и к 21 суткам эксперимента была выше контроля в 1,18 раз (рис. 22). Количество малых лимфоцитов в 1 сутки максимально снижалось в 1,82 раза, и только к 21 суткам их количество превышало контрольный уровень в 1,11 раза. Численность средних лимфоцитов, макрофагов, нейтрофилов, тучных клеток в большей степени увеличивалась на 3 сутки - в 1,76 раза, в 1,76 раза, в 2,35 раза, в 2,44 раза, к 21 суткам показатели перечисленных клеточных элементов возвращались к норме. Количество зрелых плазматических клеток снижалось на 1, 3 и 7 сутки, в большей степени на 3 сутки (в 1,66 раза), но затем их показатель определялся в пределах нормы. Количество ретикулярных клеток неуклонно достоверно возрастало в течение всего эксперимента, достигая своего максимального значения к 21 суткам в 2,49 раза, но данный показатель не имел достоверных различий с соответствующим показателем животных не получавших лечения (рис. 16, рис. 23).
Индекс репаративной регенерации на I сутки эксперимента не имел достоверных различий с группой контроля. Однако в дальнейшем он значительно возрастал и к 21 суткам приближался к уровню интактных крыс, но Pi J еще не достигал его (Таблица 5).
