Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Строение и основные функции лимфатических узлов 13
1.2. Состояние лимфатической системы при воспалительных процессах 16
1.3. Реакция лимфатической системы на артериальную гипертензию 23
1.4. Влияние артериальной гипертензии на патологические процессы в полости рта 29
Глава 2. Материал и методы исследования 32
2.1. Группы животных и сроки забора материала 32
2.2. Моделирование дефекта нижней челюсти 35
2.3. Объект исследования, подготовка материала к изучению методами световой микроскопии, морфологические методы исследования, морфометрия и статистическая обработка полученных данных 36
Глава 3. Изменения субмандибулярных лимфатических узлов крыс линии Vistar после повреждения кости нижней челюсти 40
3.1. Изменения структуры лимфатических узлов 40
3.2. Изменения цитограммы коркового плато 42
3.3. Изменения цитограммы паракортикальной зоны 44
3.4. Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров 45
3.5. Изменения цитограммы центров размножения 48
3.6. Изменения цитограммы мякотных тяжей 51
3.7. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов 53
Глава 4. Особенности реакции субмандибулярных лимфатических узлов крыс линии Wag на повреждение кости нижней челюсти 84
4.1. Изменения структуры лимфатических узлов 84
4.2. Изменения цитограммы коркового плато 87
4.3. Изменения цитограммы паракортикальной зоны 89
4.4. Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров 92
4.5. Изменения цитограммы центров размножения 95
4.6. Изменения цитограммы мякотных тяжей 98
4.7. Изменения численности клеток в просвете мозговых синусов 100
Глава 5. Обсуждение полученных результатов 136
Выводы 151
Практические рекомендации 153
Список литературы 154
- Состояние лимфатической системы при воспалительных процессах
- Объект исследования, подготовка материала к изучению методами световой микроскопии, морфологические методы исследования, морфометрия и статистическая обработка полученных данных
- Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров
- Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров
Введение к работе
Актуальность темы:
Возрастание интереса к структурно-клеточным изменениям лимфатических узлов при травматических повреждениях объясняется, прежде всего, участием этих органов в инициации, течении и завершении воспалительной реакции, сопровождающей нарушение целостности тканей в септических и асептических условиях. Пациенты с воспалительными заболеваниями челюстно-лицевой области составляют 10-20% хирургических больных, обращающихся в стоматологические поликлиники (Бажанов Н.Н. и др., 1985).
Наиболее часто у амбулаторных больных с острыми стоматологическими воспалительными заболеваниями наблюдается острый или хронический периодонтит. Он встречается у 83% пациентов (Гельфанд Б.Я., Мухамедьярова Н.А., 1975). По данным А.П.Канканян (1996) распространенность различных форм заболеваний пародонта составляет почти 70%, при наличии диабета, артрита и их комбинации с артериальной гипертензией этот показатель возрастает до 90%.
Несмотря на значительный арсенал средств и методов, применяемых в лечении хронических деструктивных периодонтитов, процент излечения остается невысоким. Практическая значимость этого вопроса определяется высокой распространенностью данного заболевания среди лиц молодого возраста. В то же время, учитывая многочисленные предложения по совершенствованию терапии периодонтитов, анализ результатов лечения свидетельствует о недостаточной эффективности традиционно применяемых методов лечения, высокой частоте неблагоприятных исходов заболевания, длительных сроках ликвидации патологического очага.
Лимфатическая система участвует в различных патологических процессах: шоке различной этиологии, воспалении, аллергической, а так же адаптационной перестройке организма. При этом уже в ранние сроки в лимфатической системе проявляются функциональные и морфологические признаки процессов
повреждения, защиты и приспособления (Foldi М., 1969; Casley-Smith J.R., 1973; Бородин Ю.И., 1989, 1992; Спиженко ЮЛ., 1990; Бородин Ю.И. и др., 1995, 1996, 1997; Любарский М.С. и др., 1995, 1997).
Увеличение артериального давления приводит к возрастанию тока богатой белками лимфы, что свидетельствует об увеличении сосудистой проницаемости и усилению транспорта белков через стенку лимфатических сосудов (Tchekneva Е. et al., 1998; Wagner Е.М. et al, 1998; Hinder F. et al., 1999; Campbell A.R. et al., 1999; Hanaoka M. et al., 1999; Sone Y. et al., 1999; Bland R.D. et al., 2000; Koizumi T. et al., 2001, 2004; Evgenov O.V. et al., 2002). Снижение артериального давления приводит к уменьшению лимфообразования и капиллярной фильтрации (Koizumi Т. et al., 1992, 1993, 2001).
Хроническая легочная гипертензия, вызванная тромбоэмболией, обусловливает увеличение размеров медиастинальных лимфатических узлов, где были отмечены фолликулярная гиперплазия, геморрагии в синусную систему, эрит-рофагия и трансформация синусной системы в сосудистое русло (McDonnell P.J. et al., 1981; Meysman M. et al., 1997; Montpreville de T.V. et al, 2008). Эти же изменения были описаны ранее при злокачественной гипертензии ренального происхождения (Muirhead Е.Е., Shields W.F., 1954) и в эксперименте на собаках (Bryla P. et al., 1989). О расширении лимфатических узлов при артериальной гипертензии также сообщают C.J.Bergin и K.J.Park (2008).
Изучали состояние надпочечников, тимуса и лимфатических узлов у крыс с наследственной стресс-индуцированой артериальной гипертензией. По сравнению с состоянием крыс Wistar, у гипертензивных животных был выше уровень кортикостерона, меньше размеры и масса тимуса, размеры подколенных лимфатических узлов — больше за счет структур мозгового вещества (Шорин Ю.Пидр., 1990).
Введение препаратов, усиливающих синтез катехоламинов (L-dopa и Nakom), приводило к расширению краевого синуса, изменению соотношения коркового и мозгового вещества в сторону последнего, увеличению паракорти-кальной зоны, сокращению коркового плато и увеличению числа вновь сфор-
мированных вторичных лимфоидных фолликулов. Также было отмечено возрастание числа клеток лимфоидного и плазмоцитарного ряда во всех зонах, кроме паракортекса, где было найдено уменьшение числа бластов, средних лимфоцитов, макрофагов, ретикулярных и делящихся клеток (Голубева И.А. и ДР., 1992).
Согласно исследованиям, проведенным в Саудовской Аравии, 21% и 13%, соответственно, пациентов с генерализованным периодонтитом имели в анамнезе указания на наличие в качестве сопутствующего заболевания сахарного диабета или артериальной гипертензии. Только 2% больных с локальным периодонтитом сообщали о наличии указанных болезней (Al-Zahrani M.S., Kayal R.A., 2006).
Методом световой микроскопии изучали микролимфогемоциркуляторное русло и цитограмму лейкоцитов в ткани десны у пациентов с хроническим периодонтитом, протекающим на фоне нормального или повышенного артериального давления. При артериальной гипертензии в слизистой оболочке десны большинства больных было обнаружено расширение лимфатических сосудов и интерстициальных пространств. При сочетании артериальной гипертензии с воспалительной реакцией сохранялась тенденция к расширению лимфатических капилляров и межклеточных щелей, относительно состояния слизистой оболочки десны при воспалении на фоне нормального давления, что свидетельствует о высокой вероятности лимфогенной генерализации воспаления. Кроме этого, при развитии воспалительной патологии в десне на фоне гипертензии была достоверно выше абсолютная численность нейтрофилов, что указывает на более острое течение воспалительного процесса и большой объем вовлеченной ткани (Майбородин И.В. и др., 2004а, 20046, 2005а, 20056, 2006, 2008; Майбо-родин И.В., Колмакова И.А., 2004; Колмакова И.А., 2004; Колмакова И.А. и др., 2004; Притчина И.А. и др., 2004).
Число потерянных зубов зависит от возраста, пола (женский), курения, наличия диабета и артериальной гипертензии. Причем субъекты с гипертонией имели более значительную величину данного показателя (Leung W.K. et al.,
2008).
По данным A.Holmlund с соавт. (2006) тяжесть заболеваний периодонта связана с артериальной гипертонией вне зависимости от возраста. Количество пораженных периодонтальных карманов зависит от гипертензии, но не связано с наличием или отсутствием инфаркта миокарда, тогда как число потерянных зубов более связано с инфарктами. О связи выраженности периодонтита с артериальной гипертензией сообщают и Y.Shimazaki с соавт. (2007).
При артериальной гипертонии возрастает частота пародонтита и периодонтита за счет нарушений лейкоцитарно-эндотелиального баланса (эндотели-альной дисфункции) (Канканян А.П., 1996; Ojehanon P.I., Akhionbare О., 2007; Higashi Y. et aL, 2008; D'Aiuto F. et al, 2008).
При исследовании течения экспериментального, вызванного лигатурой, периодонтита у крыс со спонтанной артериальной гипертензией, гистопатоло-гическими методами были найдены явления деградации коллагена в альвеолярных отростках, значительно более выраженные, чем у крыс с нормальным давлением (Leite C.L. et al., 2005).
При исследовании повреждений периодонта (лигатурный периодонтит) у крыс с ожирением (гиперинсулинемия, дислипидемия и тяжелая артериальная гипертензия, Zucker fatty rat) была обнаружена более выраженная потеря плотности костной ткани пораженного альвеолярного отростка, по сравнению с таким же периодонтитом у крыс без ожирения (Pontes Andersen С.С. et al., 2007, 2008).
В доступной литературе имеется достаточно много сообщений о реакции лимфатической системы на острое и хроническое воспаление, местную и общую артериальную и венозную гипертензию, есть единичные данные о влиянии гипертензии на течение воспалительной патологии и о реакции лимфатического русла на воспаление в полости рта. Результаты исследований реакции лимфатических узлов на сочетание острого воспаления с повышенным артериальным давлением в научной литературе полностью отсутствуют.
Дель исследования: Провести сравнительный анализ структурно-клеточных изменений субмандибулярных лимфатических узлов крыс в различные сроки после повреждения кости нижней челюсти на фоне артериальной ги-пертензии и нормального давления.
Задачи исследования:
Методами световой микроскопии исследовать структурную организацию субмандибулярных лимфатических узлов крыс с нормальным артериальным давлением (линия Vistar) после повреждения кости нижней челюсти.
Изучить строение субмандибулярных лимфатичесішх узлов крыс линии Wag со спонтанной артериальной гипертензиеи при искусственно созданном дефекте кости нижней челюсти.
Установить общие и частные закономерности реакции лимфатических узлов нормотензивных и гипертензивных крыс после повреждения кости нижней челюсти.
Научная новизна:
Впервые проведено сравнительное изучение морфологических изменений субмандибулярных лимфатических узлов крыс с нормальным артериальным давлением и с артериальной гипертензиеи после повреждений кости нижней челюсти.
Впервые показано, что при повреждении кости нижней челюсти и у гипертензивных крыс и у животных с нормальным давлением в субмандибулярных лимфатических узлах расширяется корковое плато, увеличивается объемная плотность лимфоидных фолликулов без центров размножения, в фолликулах с центрами расширяется мантийная зона и уменьшаются герминативные центры, на срезе органов увеличивается площадь структур мозгового вещества: мякотных тяжей и мозговых синусов при одновременном сужении паракорти-кальной зоны.
Впервые найдено, что в лимфоидной паренхиме всех зон лимфатических
узлов обеих сравниваемых групп животных после травмы нижней челюсти вследствие антигенной стимуляции сначала возрастает число иммуно- и плаз-мобластов и делящихся клеток. К 4-5 неделе увеличивается содержание ретикулярных клеток и макрофагов, обусловленное постепенной склеротической трансформацией. Из-за нарушений сосудистой проницаемости как в месте операции, так и в самих лимфатических узлах, происходит возрастание содержания эритроцитов.
Впервые продемонстрировано, что в системе мозговых синусов лимфатических узлов нормотензивных крыс и животных с артериальной гипертензиеи на 1-2 неделях после операции увеличивается численная плотность всех клеток, количество иммуно- и плазмобластов, моноцитов, макрофагов, нейтрофилов и эритроцитов, что связано с миграцией клеток В-линии из коркового вещества, лейкоцитов и эритроцитов из региона лимфосбора. К окончанию времени наблюдения численность указанных клеток нормализуется, но увеличивается содержание плазматических и ретикулярных клеток.
Впервые показано, что в строении субмандибулярных лимфатических узлов крыс с нормальным артериальным давлением и с артериальной гипертензиеи статистически значимо отличаются объем синусной системы, ширина коркового плато и мякотных тяжей. Размер просвета краевого синуса и мозговых синусов у животных с гипертензиеи на все точки наблюдения был больше, что связано с поступлением больших объемов лимфы. За счет расширения синусной системы при повышении артериального давления статистически достоверно уменьшаются относительные показатели объемной плотности коркового плато и мякотных тяжей.
Впервые получены данные, что при повреждении кости нижней челюсти в условиях повышенного артериального давления, по сравнению с нормотен-зивными животными, различия в цитоархитектонике различных зон лимфоид-ной паренхимы и клеточном составе содержимого синусов лимфатических узлов связаны с появлением или более высоким числом эритроцитов. В данном случае повышение проницаемости кровеносных сосудов, вызванное гипертен-
зией, сочетается с нарушениями микроциркуляции, обусловленным воспалительной реакцией.
Теоретическое и практическое значение работы:
Обнаруженные изменения субмандибулярных лимфатических узлов при повреждении кости нижней челюсти на фоне АГ позволяют предполагать нарушение их иммунных функций (присутствие эритроцитов во всех зонах, в том числе и в лимфоидных фолликулах без герминативных центров и с центрами размножения). Необходим поиск методов сохранения и быстрого восстановления нарушенных функций данных органов при повышенном артериальном давлении. В связи с тем, что при развитии воспалительного процесса на фоне повышенного артериального давления в заинтересованных тканях более выражены явления сосудистой проницаемости, необходимо проведение интенсивных способов стабилизации сосудистой стенки. Так как при воспалении на фоне АГ имеются косвенные признаки более выраженного отека (расширение синусной системы лимфатических узлов), а отечная жидкость и лимфа являются хорошей питательной средой для бактерий, во время и после стоматологических процедур у данной категории больных целесообразно проведение мероприятий направленных не только на снижение артериального давления, но и на профилактику явлений лимфостаза и инфекционных осложнений.
Внедрение результатов исследования в практику:
Результаты исследований внедрены в практику научно-исследовательской работы Центра новых медицинских технологий Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН и лечебную работу хирургических отделений ООО «Дента» и «Дентал-Сервис».
На защиту выносятся следующие основные положения:
1. У гипертензивных крыс и у животных с нормальным давлением после повреждения кости нижней челюсти в субмандибулярных лимфатических узлах
расширяется корковое плато, увеличивается объемная плотность лимфоид-ных фолликулов без центров размножения, в фолликулах с центрами расширяется мантийная зона и уменьшаются герминативные центры, на срезе органов увеличивается площадь структур мозгового вещества: мякотных тяжей и мозговых синусов при одновременном сужении паракортикальной зоны.
В нормальных условиях в субмандибулярных лимфатических узлах крыс с артериальной гипертензией шире синусная система, но меньше размеры коркового плато и мякотных тяжей.
После повреждения кости нижней челюсти в условиях повышенного артериального давления, по сравнению с нормотензивными животными, различия в цитоархитеїсгонике различных зон лимфоидной паренхимы и клеточном составе содержимого синусов лимфатических узлов связаны с появлением или более высоким числом эритроцитов.
Апробация материалов диссертации:
Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы стоматологии и челюстно-лицевой хирургии» (Новокузнецк, 2007), VIII Международном симпозиуме и IX Чуйской научно-практической конференции «Проблемы саногешюго и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма» (Бишкек, 2007), Международной гистологической конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте» (Тюмень, 2008), 20 (XXIV) Всероссийской научной конференции Российского общества ангиологов и сосудистых хирургов «Диагностика и коррекция нарушений регионарного кровообращения и микроциркуляции в клинической практике» (Саратов, 2008), международной конференции «Фундаментальные проблемы лимфологии и клеточной биологии» (Новосибирск, 2008) и на объединенном заседании сотрудников кафедр ГОУ ВПО Новосибирского государственного медицинского университета Росздрава, практических врачей и научного персонала лабораторий ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН и Института
химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск, 2009).
Публикации:
По теме диссертации опубликовано 17 печатных работ, 7 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК для публикации результатов диссертационных исследований.
Структура и объем диссертации:
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 2 глав собственных результатов, обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 185 страницах компьютерного текста, содержит 15 таблиц, иллюстрирована 33 многокомпонентными комбинированными рисунками. Список литературы включает 318 источников (103 отечественных и 215 иностранных).
Автор искренне благодарен научному руководителю д.м.н., профессору И.В.Майбородину за научно-методическую помощь, ценные замечания и консультации в ходе выполнения работы.
Состояние лимфатической системы при воспалительных процессах
Важнейшей функцией лимфатической системы является извлечение микрочастиц, макромолекул, клеточных остатков, перенос жидкости и белка из межклеточного пространства в кровоток (Foldi М., 1969; Guyton А.С. et а!., 1975). Помимо фильтрационно-детоксикационнойроли, лимфатическая система выполняет важные регуляторно-приспособительные функции (Бородин Ю.И., 1989, 1992).
Ток лимфы осуществляется в результате изменения емкости лимфатического сосуда, обусловленного сокращением скелетных мышц, дыхательными экскурсиями диафрагмы, пульсацией артерий, перистальтикой кишечника (Guyton А.С. et al.,1975; Крылов B.C. и др., 1991). Активное сокращение лимфатического сосуда было продемонстрировано в эксперименте (Ohhashi Т., 1987). Также в эксперименте было установлено, что кровопотеря 25% объема циркулирующей крови сопровождалась увеличением скорости лимфотока через брыжеечные лимфатические узлы на 200-700% (Hayashi A. et al., 1987). Потеря почти 50% объема циркулирующей крови вызывала снижение скорости лимфотока. На этом фоне поступление в сосудистое русло эндотоксина приводило к прекращению лимфотока, что было обусловлено действием гуморальных факторов (Johnston М. et al., 1986; Johnston М., Elias R., 1987; Elias R.M. et al., 1987).
Лимфатическая система участвует в различных патологических процессах: шоке различной этиологии, воспалении, аллергической, а так же адаптационной перестройке организма. При этом уже в ранние сроки в лимфатической системе проявляются функциональные и морфологические признаки процессов повреждения, защиты и приспособления (Foldi М., 1969; Casley-Smith J.R., 1973; Бородин Ю.И., 1989, 1992; Спиженко Ю.П., 1990; Бородин Ю.И. и др., 1995, 1996, 1997; Любарский М.С. и др., 1995, 1997).
Любой патологический процесс в тканях организма вовлекает многие раз делы лимфатической системы (Casley-Smith J.R., 1973). Ее дренажная функция наиболее значительно изменена при воспалении, сопровождающем повреждение тканей. В опытах на овцах показано, что инфузия эндотоксина Escherichia coli (1 мкг/кг в течении 20 мин.) приводит к увеличению тока лимфы и возрастанию концентрации протеинов в ней в течении 2-6 часов в каудальных медиастиналь-ных лимфатических узлах (Matsumoto N. et al., 1990). Системный сепсис (экспериментальный бактериальный перитонит) приводит к увеличению периферического тока лимфы вследствие повышения проницаемости мембран микрососудов на периферии (Avila A. et al., 1985).
При разрушении тканей при воспалительной реакции лимфатические капилляры, сосуды и лимфатические узлы оказываются наполненными некротическими массами, клетками красной и белой крови, сгустками фибрина, часто с высоким содержанием микрофлоры (Панченков Р.Т. и др., 1986; Буянов В.М., Алексеев А.А., 1990). Диссеминировано блокируется микролимфатический дренаж тканей и пассаж лимфы через лимфатические узлы. Все это парализует барьерную и иммунную функции лимфатической системы. Она сама может стать источником септицемии и токсемии (Жданов Д.А., 1952; Ottaviani G., 1970; Выренков Ю.Е., 1986; Буянов В.М., Алексеев А.А., 1990).
Видимо, с прорывом токсинов в кровь связаны случаи венозных тромбозов после удаления или блокады лимфатических узлов. Увеличение частоты тромбоза нижней полой вены и тромбоэмболии легочной артерии наблюдали после удаления лимфатических узлов из полости таза (пельвинаденэктомия) при злокачественном (метастатическом) их поражении (Heir H.W., 1979). Спленэк-томия вместе с блокадой и удалением лимфатических узлов желудка при раке желудка часто приводит к тромбозу vena porta, имеются данные о портальном тромбозе при туберкулезном поражении лимфатических узлов в воротах печени (Kogire М. et al., 1996; Caroli-Bosc F.X. et al., 1997).
Характерной особенностью лимфатического капилляра является то, что их эндотелиальные клетки связаны с интерстициальной соединительной тканью при помощи пучков фибронитей, располагающихся под прямым или острым уг лом к поверхности капилляра (Куприянов В.В. и др., 1983; Бородин Ю.И. и др., 1990). Такая особенность приводит к расширению лимфатических капилляров при отеке межуточной ткани, вследствие чего уменьшается гидростатическое давление в просвете капилляра. При этом межуточная жидкость через щели проникает в лимфатический капилляр, происходит усиленное лимфообразование (Буянов В.М., 1987; Алексеев А.А. и др., 1988). Основная функция капилляров - в том, чтобы освободить интерстициальное пространство не только от продуктов распада и от избытка жидкости, которая реабсорбировалась в венозных капиллярах и венулах, но также от избытка макромолекул, микрочастиц и клеточных элементов (Панченков Р.Т. и др., 1984).
Низкое гидростатическое давление в лимфатическом капилляре, отмечаемое вначале при отеке интерстиция, вскоре выравнивается благодаря поступлению большого количества воды, белков, клеток и других веществ в просвет капилляра. Последний переполняется лимфой (Бородин Ю.И. и др., 1985; Буянов В. М., Алексеев А.А., 1990). Транспорт лимфы из капилляров затрудняется еще и тем, что лимфатические сосуды сдавливаются нарастающим отеком в очаге воспаления (Панченков Р.Т. и др., 1986), который является показателем того, что лимфатическая система уже не в состоянии с ним справиться в связи с ее повреждением (Чернух A.M., 1979; Чернух A.M., Фролов Е.П., 1982).
В то же время распространение микроорганизмов и их токсинов из очага воспаления вызывает воспаление выносящих лимфатических сосудов, характеризующееся нарушением оттока лимфы, набуханием и активизацией клеток эндотелия (Чернух A.M., 1979; Чернух A.M., Фролов Е.П., 1982; Elias R.M. et al., 1987).
Объект исследования, подготовка материала к изучению методами световой микроскопии, морфологические методы исследования, морфометрия и статистическая обработка полученных данных
Объектом исследования служили расположенные под краем нижней челюсти субмандибулярные лимфатические узлы, которые фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (рН 7,4) не менее 24 часов, обезвоживали в серии этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин. Срезы толщиной 7-10 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому (Пирс Э., 1964; Елисеев В.Г. и др., 1967; Лилли Р., 1969; Саркисов Д.С., Перов Ю.Л., 1996), изучали на световом микроскопе Axioimager Zl (Zeiss, Германия) при увеличении до 1200 раз.
Морфометрическое исследование структуры различных отделов субман-дибулярных лимфатических узлов проводили в соответствии с рекомендациями, изложенными в многочисленных работах, посвященных теоретическому обоснованию и конкретным примерам применения этих методов (Глаголев А.А., 1941; Шахламов В.А., 1967; Катинас Г.С., Полонский Ю.З., 1970; Плохинский Н.А., 1970; Вейбель Э.Р., 1970; Автандилов Г.Г., 1973, 1980, 1990, 2002; Христолюбова Н.Б., Шилов А.Г., 1974; Weibel E.R., 1979; Автандилов Г.Г. и др., 1981, 1984; Непомнящих Л.М. и др., 1986; Горчаков В.Н., 1997). Обозначение и размерность стереологических параметров, использованных в работе, приведены согласно рекомендациям Международного стереологического общества (Weibel E.R., 1979).
Для исследования структурной организации субмандибулярных лимфатических узлов и цитограммы клеточных элементов в различных структурах данных органов применяли квадратную тестовую систему, совмещаемую на экране компьютера с изображением, полученным при помощи цифровой видеокамеры микроскопа. Для изучения показателей структуры лимфатических узлов (использование объектива с увеличением X 4) конечная площадь тестового квадрата была равна 14400 мкм2 (сторона квадрата 120 мкм), при подсчете ци тограммы клеток (применение объектива с увеличением X 40) -144 мкм2 (сторона квадрата 12 мкм) (Майбородин И.В. и др., 2005а). С каждого среза проводили 3-5 измерений, в связи с рекомендациями, что для рандомизированного исследования достаточно 3 срезов (Head J.R., Seeling L.L., 1984).
В процессе морфометрических исследований на срезе лимфатических узлов определяли относительную площадь капсулы, соединительнотканных прослоек отдельно в корковом и мозговом веществе, краевого синуса, коркового плато, паракортекса, лимфоидных фолликулов без центров и с центрами размножения, мякотных тяжей и мозговых синусов.
Для изучения цитограммы клеток (лимфоцитов, иммуно- и плазмобластов, нейтрофилов, эозинофилов, эритроцитов, моноцитов, макрофагов, тканевых ба-зофилов (тучных клеток), плазматических, делящихся клеток, клеток Мотта и клеток с деструктивными изменениями) определяли от 500 до 1000 клеточных элементов в различных местах препарата, в зависимости от однородности клеточного состава. Приняв общее количество клеток за 100%, определяли относительное содержание каждого типа, типы клеток верифицировали в соответствии с рекомендациями М.Г.Абрамова (1985), Ю.И.Бородина и В.Н.Григорьева (1986).
Статистическую обработку результатов проводили на прикладной статистической программе MS Excel 7.0 (Microsoft, USA), определяли среднее арифметическое и ошибку среднего арифметического (стандартное отклонение). Достоверность различия сравниваемых средних величин определяли на основании критерия Стьюдента для заданного порога (р) вероятности безошибочных прогнозов (Плохинский Н.А., 1970). Достоверным считали различие между сравниваемыми рядами с уровнем доверительной вероятности 95% и выше. Если р 0,05, то это означало, что ряды совпадают на 95% на уровне доверительной вероятности. При расчетах учитывали, что распределение исследуемых признаков было близким к нормальному.
Корковое плато субмандибулярных лимфатических узлов уже к первой неделе было шире, чем в контроле, этот показатель постепенно снижался до окончания времени наблюдения, но всегда был выше исходного. Через 1 и 2 недели после создания дефекта кости нижней челюсти объемная плотность коркового плато превосходила исходный уровень на 82,4%. На 3, 4 и 5 неделе корковое плато было статистически достоверно шире на 35,3%, 25% и 29,4%, соответственно, относительно исходного значения, но меньше на 34,8%, 45,9% и 40,9%, также соответственно, по сравнению с состоянием через 1 и 2 недели после начала эксперимента (рис. 4-15) (табл. 2).
Относительная площадь паракортикальной зоны резко уменьшилась уже к 1 неделе, потом этот показатель постепенно увеличивался, но все равно в течение всего времени наблюдения был меньше исходного. Через 1 и 2 недели размер паракортекса был меньше контрольного уровня на 66,7% и 71%, соответственно. На 3, 4 и 5 неделе этот показатель был меньше на 32,6%, 28,9% и 29,2%, соответственно, относительно исходного состояния. При этом спустя 3 и 4 недели площадь паракортекса была достоверно больше на 29% и 32,7%, также соответственно, по сравнению с состоянием через 2 недели (рис. 4-15) (табл. 2).
Объемная плотность лимфоидных фолликулов без центров размножения была больше контрольной на 1 и 2 неделе, на следующие точки наблюдения величина значения этого показателя не отличалась от исходной. Спустя 1 и 2 недели площадь таких узелков на срезе органа превосходила исходный уровень на 51,8% и 43,3%, соответственно. К 4 и 5 неделе объем фолликулов без центров размножения был статистически достоверно меньше на 43,4% и 50,2%, также соответственно, относительно состояния через 1 неделю после начала эксперимента (табл. 2).
В фолликулах с центрами размножения площадь самих центров через 1 неделю была ниже в 2,2 раза, по сравнению с данными на 5 неделе (рис. 4-15) (табл. 2).
Относительная площадь мантийной зоны в таких фолликулах была больше контроля на 1 и 2 неделе, потом этот показатель постепенно снижался и уже не отличался от исходного. Через 1 и 2 недели объемная плотность мантия превосходила контрольный уровень на 70,3% и 63,5%, соответственно. На 4 неделе объем мантия был меньше в 2,4, 2,3 раза и на 78,9%, соответственно, а к 5 неделе - в 2,6, 2,5 раза и на 92,4%, также соответственно, относительно состояния на 1, 2 и 3 неделе (рис. 4-15) (табл. 2).
Объемная плотность мякотных тяжей постепенно возрастала и на 4 и 5 неделе была больше контрольной на 25,2%, и выше на 19,6%, по сравнению с состоянием спустя 1 неделю после начала эксперимента (табл. 2).
Процент мозговых синусов на срезе лимфатических узлов резко возрос на 1 неделе, но далее достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю величина значения этого показателя была больше на 25,3%, 26,3%, 25,5% и 31,4%, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 недели (табл. 2).
Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров
Процент лимфоцитов в лимфоидных узелках без центров размножения на первой и второй неделях был меньше, чем в контроле, а на остальные точки на блюдения достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю величина значения этого показателя была статистически достоверно ниже на 12,4%, 9,8%, 10,2% и 10,2%, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 недель. На 2 неделе лимфоцитов было меньше на 10,4%, 7,8%, 8,2% и 8,2%, также соответственно, и также относительно контроля и состояния на 3, 4 и 5 неделе (табл. 5).
Относительное содержание иммуно- и плазмобластов резко возросло к 1 неделе, затем постепенно снижалось и на 3, 4 и 5 неделях достоверно не отличалось от исходного. Величина значения этого показателя через 1 неделю была больше в 2,7, 2,3, 2,5 и 2,4 раза, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 недель (табл. 5).
Численная плотность бластов на 1 и 2 неделе была выше в 2,7 и 2,4 раза, также соответственно, по сравнению с состоянием в контроле (табл. 5).
Относительное количество макрофагов увеличилось к 1 неделе, но в остальные сроки не отличалось от исходного. Через 1 неделю величина значения данного показателя было выше контрольного в 2,4 раза (табл. 5).
Точно такая же динамика происходила и в абсолютном числе этих клеток. Этот показатель на 1 и 3 неделе был в 2,5 и 2,3 раза, соответственно, выше, по сравнению с контрольным уровнем (табл. 5).
Через 1 неделю после начала эксперимента в цитограмме фолликулов без герминативных центров лимфатических узлов всех животных появились эритроциты. На второй неделе эти клетки были найдены только у отдельных крыс. В контроле и на остальные сроки наблюдения эритроциты не были обнаружены в лимфоидных узелках без центров размножения (табл. 5).
Процент митозов был выше контроля на 1 и 2 неделе в 2,3 раза, потом этот показатель постепенно снижался и достоверно не отличался от исходного. При этом через 4 и 5 недель величина значения данного показателя была меньше в 2,4 раза, по сравнению с состоянием на срок в 1 неделю, а спустя 3, 4 и 5 недель - ниже в 2,1, 2,3 и 2,4 раза, соответственно, чем на 2 неделе (табл. 5).
Число фигур митозов на 10 мкм площади среза фолликула через 2 недели было выше в 2,3, 2,3 и 2,5 раза, соответственно, по сравнению с состоянием в контроле и на 4 и 5 неделе (табл. 5).
Относительное содержание клеток с признаками деструктивных изменений резко возросло к 1 неделе, далее это показатель постепенно уменьшался и на 3 неделе и позже достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю число таких клеточных элементов превосходило в 3,2, 3,6 и 3 раза, соответственно, контрольный уровень и состояние спустя 3 и 4 недели (табл. 5).
Аналогично менялось абсолютное содержание клеток с деструктивными изменениями. Спустя 1 неделю величина значения данного показателя была больше в 3,3 и 3,5 раза, соответственно, чем в контроле и через 3 недели после начала эксперимента (табл. 5).
Изменения цитограммы лимфоидных фолликулов без герминативных центров
Процент лимфоцитов в лимфоидных узелках без центров размножения на первой и второй неделях был меньше, чем в контроле, а на остальные точки наблюдения достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю величина значения этого показателя была статистически достоверно ниже на 13,3%, 8%, 9,7% и 10,2%, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 недель. На 2 неделе лимфоцитов было меньше на 12,1%, 8,5% и 9,1%, также соответственно, относительно контроля и состояния на 4 и 5 неделях (табл. 12).
Относительное содержание иммуно- и плазмобластов резко возросло к 1 неделе, затем постепенно снижалось и на 3, 4 и 5 неделях достоверно не отличалось от исходного. Величина значения этого показателя через 1 неделю была больше в 2,3, 2, 2,5 и 2,6 раза, соответственно, чем в контроле и спустя 3, 4 и 5 недель. На 2 неделе незрелых клеточных элементов было больше в 2,3, 2,5 и 2,6 раза, также соответственно, относительно контроля и состояния на 4 и 5 неделях (табл. 12).
Точно так же менялось и абсолютное число иммуно- и плазмобластов. Величина значения этого показателя спустя 1 неделю была выше в 2,4 раза, на 98,1%, в 2,6 и 2,9 раза, соответственно, по сравнению с контролем и спустя 3, 4 и 5 недель. На 2 неделе бластов было больше в 2,3, 2,5 и 2,7 раза, также соответственно, относительно контроля и состояния на 4 и 5 неделях (табл. 12).
Процент макрофагов постепенно увеличивался и на 2, 3 и 4 неделях был выше в 2,1, 2,3 и 2,4 раза, соответственно, от исходного значения (табл. 12).
Численная плотность этих клеток только на 2 неделе была в 2,1 раза больше контрольного уровня (табл. 12). На все сроки наблюдения, в том числе и в контроле, в цитограмме фолликулов без герминативных центров лимфатических узлов всех животных присутствовали эритроциты (рис. 18-31) (табл. 12).
Процент митозов был выше контроля на 1 и 2 неделе, потом этот показатель постепенно снижался и достоверно не отличался от исходного. Величина значения этого показателя через 1 неделю была больше в 2,8, 3 и 2,5 раза, соответственно, чем в контроле и спустя 3 и 4 недели. На 2 неделе фигур митозов было больше в 2,8, 2,9 и 2,5 раза, также соответственно, относительно контроля и состояния на 3 и 4 неделях (табл. 12).
Аналогично менялось и абсолютное число делящихся клеток. Величина значения этого показателя спустя 1 неделю была выше в 2,9, 3 и 2,6 раза, соответственно, по сравнению с контролем и спустя 3 и 4 недели. На 2 неделе митозов было больше в 2,8, 2,9 и 2,6 раза, также соответственно, и также относительно контроля и состояния на 3 и 4 неделях (табл. 12).
Относительное содержание клеток с признаками деструктивных изменений резко возросло к 1 неделе, далее это показатель достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю число таких клеточных элементов превосходило в 3,9 раза, контрольный уровень (табл. 12).
Численная плотность клеток с деструктивными изменениями спустя 1 неделю была больше в 3,7 раза, чем в контроле (табл. 12).
Различия в цитограмме лимфоидных узелков без центра размножения между животными с нормальным и повышенным давлением были найдены в численности эритроцитов. Эритроциты присутствовали в таких фолликулах крыс при нормальном давлении только на 1 и 2 неделе после начала эксперимента. Практически у всех гипертензивных животных форменные элементы красной крови были найдены в узелках на все сроки наблюдения, в том числе и в контроле (табл. 5, 12).
Процент лимфоцитов в лимфоидных узелках без центров размножения только на первой и второй неделях был меньше, чем в контроле. Относительное и абсолютное содержание иммуно- и плазмобластов резко возросло к 1 неделе и на 3, 4 и 5 неделях достоверно не отличалось от исходного. Процент и численная плотность макрофагов на 2 неделе были выше контрольных значений. Процент и абсолютное число митозов были выше контроля на 1 и 2 неделе, по-том эти показатели достоверно не отличались от исходных. Относительное количество и численная плотность клеток с признаками деструктивных изменений резко возросли к 1 неделе, далее эти показатели достоверно не отличались от исходного.
В цитограмме лимфоидных узелков без центра размножения статистически достоверные отличия между животными с нормальным и повышенным давлением были найдены в численности эритроцитов. Эритроциты присутствовали в таких фолликулах крыс при нормальном давлении только на 1 и 2 неделе после начала эксперимента. У гипертензивных животных данные клетки были найдены в узелках на все сроки наблюдения, в том числе и в контроле.
Численная плотность всех клеток в герминативных центрах лимфоидных фолликулов была больше контроля на 1-3 неделях, но далее не отличалась от исходного состояния. Величина значения этого показателя на 1 неделе была достоверно выше на 12%, 5% и 8,1%, соответственно, по сравнению с состоянием в контроле, на 4 и 5 неделях. Через 2 недели всех клеток было больше на 16,8%, 9,5% и 12,7%, соответственно, также чем в контроле и на 4 и 5 неделях. Спустя 3 недели клеточных элементов было больше на 9,5% и 5,7%, также соответственно, относительно контроля и состояния только на 5 неделе (табл. 13).
Процент лимфоцитов на 1, 2 и 3 неделях был меньше, чем в контроле, но далее достоверно не отличался от исходного. Через 1 неделю величина значения этого показателя была статистически достоверно ниже на 42,8%, 27,9% и 41,5%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 недель. На 2 неделе лимфоцитов было меньше на 56,3%, 40% и 54,9%, соответственно, и также относительно контроля и состояния на 4 и 5 неделе. К 3 неделе этих лейкоцитов было меньше на 30,9%, 17,2% и 29,7%, также соответственно, и также по сравнению с контролем и с состоянием на 4 и 5 неделях (табл. 13).
Абсолютное количество лимфоцитов менялось практически также. Величина значения этого показателя через 1 неделю была ниже на 26,9%, 21,9% и 31%, соответственно, чем в контроле и спустя 4 и 5 недель. На 2 неделе этих клеток было меньше на 32,7%, 27,5% и 37%, соответственно, относительно контроля и состояния на 4 и 5 неделе. К 3 неделе данных клеточных элементов было меньше на 22,3%, но только по сравнению с состоянием на 5 неделе (табл. 13).
