Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 10
1.1 Современные аспекты клинического применения антрациклиновых антибиотиков 10
1.2 Структурно - функциональные и метаболические изменения в миокарде при введении антрациклиновых антибиотиков 18
1.3 Коррекция повреждений миокарда, обусловленных действием антрациклиновых антибиотиков 23
1.4 Влияние гипоксии на организм и возможности использования прерывистой гипоксии для снижения выраженности повреждений миокарда 30
2 Материал и методы исследования 41
2.1 Общая характеристика и объем исследований 41
2.2 Методы исследования 43
3 Результаты собственных исследований 46
3.1 Морфологические изменения сосудистого русла и тканевых структур миокарда при введении доксорубицина 46
3.2 Морфологическая характеристика сосудистого русла и тканевых структур миокарда при введении доксорубицина и глицина з
3.3 Морфологические изменения тканевых структур и сосудистого русла миокарда при введении доксорубицина после предварительной гипобарической гипоксии 70
3.4 Морфологические изменения сосудистого русла и тканевых структур миокарда при введении доксорубицина и глицина после предварительной гипобарической гипоксии 81
4. Влияние доксорубицина на состояние ферментативного и неферментативного звеньев антиоксидантной системы в гомогенате миокарда 92
4.1 Изменение активности ГП и СОД и концентрации МДА в гомогенате ткани сердца при введении доксорубицина 92
4.2 Влияние введения доксорубицина и глицина на активность ГП, СОД и концентрацию МДА в гомогенате ткани сердца 95
4.3 Влияние предварительной гипобарической гипоксии на активность ГП, СОД и концентрацию МДА в гомогенате ткани сердца крыс при введении доксорубицина 98
4.4 Влияние предварительной гипобарической гипоксии на активность ГП, СОД и концентрацию МДА в гомогенате ткани сердца крыс при введении доксорубицина и глицина 101
Заключение 105
Выводы 113
Практические рекомендации 115
Список сокращений 116
Библиографический список
- Структурно - функциональные и метаболические изменения в миокарде при введении антрациклиновых антибиотиков
- Влияние гипоксии на организм и возможности использования прерывистой гипоксии для снижения выраженности повреждений миокарда
- Морфологическая характеристика сосудистого русла и тканевых структур миокарда при введении доксорубицина и глицина
- Влияние введения доксорубицина и глицина на активность ГП, СОД и концентрацию МДА в гомогенате ткани сердца
Структурно - функциональные и метаболические изменения в миокарде при введении антрациклиновых антибиотиков
Развитие кардиомиопатии и сердечной недостаточности при применении антибиотиков антрациклинового ряда обусловлено изменением структуры сердечной мышцы (Дуднакова Т.В. и соавт., 2002; Целлариус Ю.Г. и соавт., 1982; Цыпленкова В.Г. и соавт., 1993; Розенберг В.Д., Непомнящих Л.М., 1998; Пауков B.C. и соавт., 1998; Alderton P.M. et al., 1992; Arai M. et al., 2000 и др.) и, соответственно, изменением функционального состояния (Капелько В.И. и соавт., 1998; Капелько В.И., 1999).
Все методы оценки состояния сердечно-сосудистой системы делятся на неспецифические (клинические симптомы и данные ЭКГ) (Семенова Л.А. и соавт., 1985; Lefrak Е. A. et al., 1973; Gans W.L. et al., 1996) и специфические (эндомиокардиальная биопсия) (Лушникова Е.А. и соавт., 2001; Billingham М. Е. et al., 1978; Mason J. W. et al., 1978; Papoian Т., Levis W., 1991).
Основные клинические симптомы - это одышка, нарушение ритма, тахикардия (Непомнящих Л. М. и соавт., 2003.
Как отмечали M.R. Bristow et al. (1978), С. Prada et al. (1979), на ранних сроках после применения доксорубицина на ЭКГ возможно появление аритмий, обратимой синусовой тахикардии.
А.С. Gilladoga et al. (1976) полагали, что более выраженные изменения отмечаются на более поздних сроках и проявляются на ЭКГ уполощением Т - волны, удлинением интервала QT, исчезновением вольтажа R - волны.
Более информативны, особенно при использовании с тестами физической нагрузки, эхокардиографические измерения фракции выброса левого желудочка (McKillop J. Н. et al., 1983; Ganz W. I. et al., 1996).
По мнению В.Ф. Семиглазова (1997) выявление признаков ранней кардиомиопатии возможно только при проведении тщательного, непрерывного неинвазивного мониторирования функций сердца. Причем, чем больше сроки исследования, тем больше частота выявления миокардиопатий.
Некоторые авторы (Меерсон Ф.З. и соавт., 1984; Бурлакова Е.Б. и соавт., 1988; Утешев Д.Б. и соавт., 1978; Ивасенко И.Н., Шляхто Е.В., 2001; Myers G. et al., 1982; Dames K. et al., 1986) оценивали состояние миокарда по концентрации малонового диальдегида и определению активности глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы в гомогенате ткани.
Так, Т. Li et al. (2000) отмечали, что индуцированные доксорубицином ранние изменения миокарда сопровождаются снижением активности глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы, а по данным P. Singal (2000) эти изменения сопровождаются увеличением концентрации малонового диальдегида.
Наиболее объективным методом оценки является анализ морфологических признаков изменений миокарда, выявляемых на материале эндомиокардаиальных биопсий, хотя этот метод является сложным инвазивным и далеко не у всех больных может быть использован (Непомнящих Л.М. и соавт., 2001; Gans W.I. et al., 1996).
Исследованиями Л.М. Непомнящих и соавт. (1982,1984,1985) было показано, что при однократном введении рубомицина в кардиомиоцитах с 3 го часа после введения препарата появлялись литические повреждения миофибрилл, представлявшие основной субстрат сократительной недостаточности. Миофибриллы становились менее плотными, во многих саркомерах появлялись пустоты, в некоторых случаях отмечался тотальный лизис миофиламентов в пределах саркомера с наиболее выраженными изменениями в околоядерной зоне. Внутриклеточная регенерация кардиомиоцитов характеризовалась аномалиями расположения новообразованных миофибриллярных структур относительно продольной оси клетки и предшествующих миофибриллярных пучков. В то же время авторами не проводилось исследование сосудистого русла миокарда.
Изменения в миокарде при введении рубомицина отмечали М. Bristovv et al. (1981), но авторы считали, что наиболее характерным проявлением кардиотоксичности являлось поражение только миофибрилл.
В то же время В.П. Скулачев (1989), В.А. Хазанов и соавт. (1999) полагали, что наибольшее значение в повреждении миокарда и равитии кардиомиопатии имели деструкция митохондрий, нарушение структуры их мембран, просветление матрикса с фрагментацией крист.
Такой же точки зрения придерживались М. Arai et al. (2000), считая, что антрациклины модифицируют основные сигнальные трансдукторные пути через фосфорилирование митоген-активируемых протеинкиназ, нарушают функционирование митохондриального комплекса.
По мнению G. Minotti et al. (2001), повреждения митохондрий кардиомиоцитов приводили к уменьшению выработки АТФ, что обуславливает снижение или угнетение биосинтетических реакций и запуск апоптоза клеток. Специфическим признаком антрациклиновой кардиомиопатии, по мнению М.Л. Гершанович (2001), является обнаружение так называемых «адриамициновых клеток», представляющих собой миоциты в состоянии некробиоза.
Т.В. Дуднакова и соавт. (2002), изучая состояние миокарда при введении доксорубицина отмечали, что уже через 2 часа в кардиомиоцитах наблюдались изменения мембранных органелл, приводящие к снижению плотности распределения фибронектина, снижению тубулина, КЛЦМ и KRP. При увеличении срока наблюдения до 3-х недель авторы отмечали уплотнение и расширение коллагеновои сети, что указывало на развитие диффузного фиброза, содержание тубулина не изменялось, уровень экспрессии КЛЦМ оставался низким, и лишь экспрессия KRP увеличивалась. Авторы считали, что в период репарации в миокарде происходит повышенная экспрессия белков цитоскелета и внеклеточного матрикса, не приводящая к восстановлению нормальной структуры ткани, что обусловлено нарушением процессов транскрипции и трансляции в мышечных клетках при предшествующем нарушении матрицы ДНК. Автор отмечает, что снижение уровня экспрессии КЛЦМ на фоне ее повышения для KRP может вызвать нарушение регуляции тонуса коронарных сосудов. В то же время характер морфологических изменений сосудов автором не исследовался.
Влияние гипоксии на организм и возможности использования прерывистой гипоксии для снижения выраженности повреждений миокарда
Экспериментальные исследования выполнены на белых беспородных половозрелых крысах - самцах, постоянно обитавших в виварии ИМЭ и ФК УлГУ. На всём протяжении эксперимента животные содержались на стандартном питании при свободном доступе к пище и воде. В работе использовано 250 крыс-самцов весом 180-200 граммов.
Было проведено 5 серий эксперимента:
I серия - интактные животные (контроль I) (10 крыс): животные находились в состоянии относительного физиологического покоя. Этот раздел выполнен для сопоставления данных с результатами последующих серий эксперимента.
II серия - животные, которым производилась однократная внутрибрюшинная инъекция доксорубицина («Доксорубицин-ЛЭНС», производитель ООО «ЛЭНС-ФАРМ») в дозе 10 мг/кг (50 крыс). Данная серия экспериментов посвящена оценке характера повреждений миокарда при введении доксорубицина.
III серия - животные, которым в 1 -й день эксперимента производилась внутрибрюшинная инъекция глицина («Глицин», ICN, США) в дозе 50 мг/кг, через 2 часа-однократная внутрибрюшинная инъекция доксорубицина в дозе 10 мг/кг, затем на протяжении 7-ми дней проводилась ежедневная однократная внутрибрюшинная инъекция глицина в одно и то же время (50 крыс).
Данная серия экспериментов проведена с целью оценки кардиопротекторного эффекта глицина на повреждения миокарда, вызванные доксорубицином. IV серия - животные (контроль II), которые подвергались воздействию прерывистой гипобарической гипоксии (гипоксическая тренировка). Прерывистая гипобарическая гипоксия моделировалась путём разрежения воздуха подъёмами животных в барокамере на «высоту» 6000-6500 м над уровнем моря по схеме: 5 минут подъём, 1 минута - пребывание на «высоте», 5 минут -«спуск», 5 минут - отдых. В течение 14 дней ежедневно проводилось подряд по пять подъёмов.
В этой серии эксперимента проведено изучение воздействия прерывистой гипобарической гипоксии (гипоксической тренировки) на микрогемоциркуляторное русло и тканевые структуры миокарда.
V серия - животные, которые подвергались воздействию прерывистой гипобарической гипоксии (гипоксическая тренировка) в течение 14 дней по методике, описанной в IV серии эксперимента. Затем всем животным была произведена однократная внутрибрюшинная инъекция доксорубицина в дозе 10 мг/кг(50 крыс).
В данной серии эксперимента изучены структурные изменения миокарда у животных при введении доксорубицина после предварительной гипоксической тренировки.
VI серия - животные, которые подвергались воздействию прерывистой гипобарической гипоксии в течение 14 дней по методике, описанной в IV серии эксперимента. На 15-й день эксперимента производилась внутрибрюшинная инъекция глицина (ICN, США) в дозе 50 мг/кг, через 2 часа - однократная внутрибрюшинная инъекция доксорубицина в дозе 10 мг/кг, затем на протяжении 7-ми дней производилась ежедневная однократная внутрибрюшинная инъекция глицина в одно и то же время (50 крыс).
В этой серии эксперимента проведена оценка повреждений миокарда крыс при сочетанном введении доксорубицина и глицина после применения прерывистой гипобарической гипоксии (гипоксической тренировки).
Животные II, III, V, VI, серий эксперимента были разделены на группы по срокам выведения из эксперимента с учётом «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приказ Минвуза от 13.11.1984 г. №724) под эфирным наркозом на 3, 5, 7, 15, 30 сутки, IV серии -на 15 сутки. В каждой группе использовано по 10 животных.
Объектом морфологических исследований служила ткань сердца. Масса исследуемого органа учитывалась по отношению к массе тела животных (относительная масса сердца). Общегистологические и гистохимические методики. В соответствии с задачами в работе были использованы гистологические, гистохимические, морфостереометрические методы изучения. Ткань сердца фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующей обработкой в спиртах возрастающей концентрации, заключением в парафин и приготовлением срезов толщиной 5-7 мкм согласно общепринятым методикам (Меркулов Г. А., 1969; Волкова О. В., Елецкий Ю. К., 1982). Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином (обзорные препараты), пикрофуксином по ван-Гизону на соединительную ткань, резорцин-фуксином по Вейгерту на эластические волокна, реактивом Шифф-йодная кислота с докраской гематоксилином.
При исследовании неокрашенных и окрашенных гематоксилином и эозином препаратов в поляризованном свете придерживались классификации повреждений кардиомиоцитов Ю.Г.Целлариуса и соавт. (1980) с дополнениями К.К.Даукши (1988). Согласно представленным критериям выделяли обратимый и необратимый типы повреждений. К обратимому типу повреждений относили сегментарные контрактуры I—II степени (изменение миофибрилл с укорочением дисков J, сближение дисков А). К необратимому типу повреждений относили исчезновение поперечной исчерченности, глыбчатый распад и лизис миофибрилл, контрактуры III степени (сближение дисков А). Для оценки интраорганного кровеносного русла проводили прижизненную инъекцию кровеносного русла водной взвесью чёрной туши в разведении 1:1 (Катинас Г.С., Полонский Ю.З., 1970) в модификации В. X. Габитова (1976). Инъекционная масса, предварительно нагретая до температуры 38 С, вводилась в кровеносное русло через левый желудочек сердца. Критерием удачной инъекции кровеносного русла служило быстрое окрашивание хвоста, передних и задних лапок, ушных раковин животного. Срезы толщиной 20 мкм получали на замораживающем микротоме ВН с последующим приготовлением неокрашенных просветленных срезов и срезов с докраской гематоксилином и эозином.
Характеристика структурных изменений миокарда животных во всех сериях эксперимента складывалась из суммарной оценки признаков, наблюдаемых при изучении гистологических и просветленных препаратов, (включая количественные методы) на продольных и поперечных срезах миокарда.
Морфологическая характеристика сосудистого русла и тканевых структур миокарда при введении доксорубицина и глицина
Миокард крыс на 3-й сутки эксперимента: кардиомиоциты с крупными ядрами, параллельно идущими миофибриллами в саркоплазме и поперечной исчерченностью. Инъекция водной взвесью черной туши с докраской гематоксилином и эозином, х200. зрения прослеживалась нечеткость контуров сосудов, выявлялись единичные экстравазаты. Суммарная площадь поперечных сечений капилляров была равна 1,88±0,10х10 мкм и была достоверно меньше контроля на 39,6%. Относительная поверхностная площадь сосудистого русла уменьшена против контроля на 10,9% (р 0,05), а индекс васкуляризации, наоборот, увеличен на 19,7% (р 0,05) (табл. 3).
На 5-е сутки после введения доксорубицина относительная масса миокарда оставалась на уровне предыдущего срока (рис. 15).
На гистологических препаратах в паренхиме миокарда наблюдалась картина, близкая к предыдущему сроку, то есть выявлялись группы истонченных кардиомиоцитов с гомогенной саркоплазмой, которая слабо окрашивалась Шифф-реактивом. При поляризационной микроскопии выявлялись набухание и глыбчатый распад миофибрилл, нечеткость контуров вставочных дисков. Стенки капилляров разрыхлены, отечны, с выраженной Шифф-позитивной реакцией. В окружающей паренхиме отмечались признаки межмышечного отека, расширение паравазальных пространств, мелкие очаги кровоизлияний. В отдельных капиллярах -признаки эритростаза.
Картина сосудистого русла миокарда отличалась однонаправленной динамикой в сторону уменьшения показателей микрогемоциркуляторного русла, причем диаметр, площадь поперечного сечения капилляра, суммарная площадь поперечных сечений и относительная поверхностная площадь сосудистого русла были минимальными по сравнению с остальными сроками наблюдения (табл.3). Это проявлялось достоверным уменьшением среднего диаметра капилляров против контроля (К-П) (на 20,6%; р 0,05) (рис. 18). контроль II 3 5 7 15 30 В Суммарная площадь поперечных сечений капилляров -достоверное различие показателей по отношению к контролю (р 0,05). Рис.18. Динамика показателей микрогемоциркуляторного русла миокарда при введении доксорубицина после гипоксической тренировки. Количество функционирующих капилляров было меньше контроля на 7,5% и составляло 38,11±0,38 на стандартной площади среза. Достоверно уменьшались площадь поперечного сечения капилляра (на 44,5%), суммарная площадь поперечных сечений (на 48,6%) (р 0,05). Относительная поверхностная площадь сосудистого русла достоверно отличалась от контроля на 13,1% (р 0,05), увеличен индекс васкуляризации на 24,4% (р 0,05). Контуры капилляров в местах расширения были нечеткими, здесь же отмечались «почкообразные» выпячивания и имбибиция туши в окружающую ткань. Часто выявлялись признаки «прерывистости» инъецируемой массы.
После 7-ми суток относительная масса миокарда крыс не отличалась от предыдущего срока и контроля (р 0,05) (рис. 15).
На гистологических препаратах в паренхиме миокарда на фоне деструкции и истончения отдельных групп кардиомиоцитов выявлялись мелкие очаги некроза, окруженные слабо выраженной полиморфноклеточной инфильтрацией (рис. 19). (микрофото). Мелкие очаги некроза, слабо выраженная полиморфноклеточная инфильтрация в миокарде крыс. Инъекция водной взвесью черной туши с докраской гематоксилином и эозином, х325. Сопоставление структурных изменений в миокарде с предыдущей серией экспериментальных животных выявило отсутствие обширных очагов дистрофии, некроза кардномиоцитов. В меньшей степени были выражены признаки интерстициального и паравазального отека, полнокровия сосудов, венозной гиперемии. Стенки сосудов разрыхлены, местами утолщены, отчетливо прокрашивались при Шифф-реакции.
В этот срок микроангиоархитектоника миокарда характеризовалась увеличением просвета капилляров, средний диаметр которых достоверно превышал показатель предыдущего срока (р 0,05) и был равен 7,74±0,04 мкм. Сохранялась извилистость капилляров, по ходу их выявлялись сужения, «прерывистость» инъекции, чередующиеся с расширенными участками. В то же время количество функционирующих капилляров было, наоборот, ниже по сравнению с 5 -ми сутками (36,88±0,22) (р 0,05). Площадь поперечного сечения капилляра увеличивались, соответственно увеличивалась и суммарная площадь их поперечных сечений, но эти показатели не достигали исходных показателей контроля (рис. 18). Относительная поверхностная площадь сосудов составляла 32,1±0,12%, а индекс васкуляризации -2,11+0,02.
К 15-м суткам эксперимента отмечалось недостоверное уменьшение относительной массы миокарда по отношению к предыдущему сроку и контролю (рис. 15)(р 0,05).
На гистологических препаратах наряду с неизмененными кардиомиоцитами сохранялись мелкие очаги некроза. В отдельных полях зрения отмечались признаки регенераторной активности, что характеризовалось наличием гипертрофированных кардномиоцитов с крупными ядрами. При поляризационной микроскопии в этих мышечных клетках прослеживалась поперечная исчерченность, отсутствовали необратимые изменения в виде глыбчатого распада миофибрилл и контрактур III степени.
Влияние введения доксорубицина и глицина на активность ГП, СОД и концентрацию МДА в гомогенате ткани сердца
Одним из высокоэффективных антиканцерогенных препаратов, входящих в группу антрациклиновых антибиотиков, применяемых при злокачественных новообразованиях, является доксорубицин, в основе противоопухолевого действия которого лежит его взаимодействие с геномом опухолевых клеток (Моисеенко В.М., Орлова Р.В., 1999; Семиглазов В.Ф. и соавт., 2000; Zunino F. et al., 1972; Benjamin R.S. et al., 1973; Anversa P., Kajustra J., 1998; De Beer E.Z. et al., 2001; Shinozaki T. Et al., 2002).
Одним из серьезных препятствий к применению доксорубицина является наличие токсических эффектов, из которых наиболее выраженным является кардиотоксический (Непомнящих Л.М, 2001; Лушникова Е.Л. и соавт., 2004).
Токсические свойства доксорубицина обусловлены гиперпродукцией радикальных молекул, вызывающих, наряду с подавлением генной супрессии, действием высокотоксичных метаболитов, нарушением гомеостаза железа и кальция, взаимодействия с актин-миозиновой системой и действие через другие медиаторы необратимую дефадацию клеточных структур кардиомиоцитов с формированием регенераторно-пластической недостаточности сердца (Непомнящих Л.М., 2001; Лушникова Е.Л. и соавт., 2004; Singal Р.К. and Iliskovic N., 1998; Giri S.N. et al., 2004).
Поскольку актуальным и востребованным остается поиск методов, направленных на снижение токсических эффектов противоопухолевой терапии, нами была поставлена цель поиска патогенетически обоснованного метода коррекции возникающих повреждений миокарда.
Наличие опухолевого процесса является показанием для применения «ловушек радикалов»-антиоксидантов, так как среди признаков опухолевой профессии выделяют как активизацию свободнорадикальных реакций в опухолевой ткани, так и потенциирование их в здоровых тканях. Поэтому обоснованным является применение природных антиоксидантов (глицина) за некоторое время до введения доксорубицина для обеспечения «антиоксидантного фона», а также после начала химиотерапии для нейтрализации продуктов свободнорадикальных реакций (Гацура В.В., 1993; Скворцова В.И., 1995; Белокрылов Г.А. и соавт., 1996). Именно так использовался в нашей работе антиоксидант глицин.
Применение только антиоксидантов далеко не всегда может обеспечить должный уровень коррекции, так как, влияя только на свободнорадикальные процессы, не вызывает повышения неспецифической резистентности в целом. Учитывая, что развитие кардиомиопатии является только манифестным синдромом и в более поздние сроки происходит нарушение структуры практически всех внутренних органов (печени, почек, костного мозга, легких), что на фоне имеющегося онкологического процесса крайне неблагоприятно в плане дальнейшего прогноза (Семенов Д.Е. и соавт., 1982,1987; Непомнящих Л.М. и соавт., 1983; Semenov D.E. et al., 1983,1988), необходимо использование метода, позволяющего воздействовать на основные звенья формирования неспецифической резистентности, повышающего устойчивость к целому ряду факторов агрессии: тканевой гипоксии, воздействию токсических метаболитов, нарушению функционирования митохондрий и так далее.
Таким методом может служить прерывистая гипобарическая гипоксия (гипоксические тренировки) (Зборовская И.А., Банникова М.В., 1995; Яковлева Л.В. и соавт., 1998; Моругова Т.В., Лазарева Д.Н., 2000; Стрелков Р.Б.,ЧижовА.Я.,2001).
Важную роль в процессах кислородного обеспечения тканей и удаления токсических продуктов жизнедеятельности играет состояние сосудистого русла, а именно капилляров, где происходят процессы обмена (Залмаев Б.Е., Соболева Т.М., 2001). При действии стрессовых факторов «самые ранние проявления выявляются именно в изменении сосудистых реакций» (Струков А.И., Аруин Л.И., 1967).
В нашей работе использована модель прерывистой гипобарической гипоксии. Выбор интервальных «жестких» гипоксических воздействий на организм не случаен. Еще в 30-е годы канадский ученый Le Blanc (1971) и отечественные физиологи А.Д. Слоним (1982), Н.Н. Сиротинин (1966) отмечали, что субмаксимальные и максимальные гипоксические воздействия на организм приводят к более быстрому формированию адаптивных процессов не только к фактору токсического воздействия, но и к воздействию многих других (неспецифических) раздражителей.
При воздействии прерывистой гипоксической гипоксии происходит многократная активация основных звеньев процесса перекисного окисления липидов и «тренировка» основных антиоксидантных ферментов, сопровождающаяся увеличением их концентрации и повышением активности и стабилизация на «новом» уровне на 15-20 сутки (Миррахимов М.М., 1984). Поскольку прерывистая гипобарнческая гипоксия проводилась нами в течение 2-х недель до введения доксорубицина (предварительная гипоксическая тренировка), то действие этого препарата приходится на ткань миокарда уже с более высоким уровнем антиоксидантной защиты, которая, по сравнению с другими органами, в обычном состоянии имеет крайне низкий уровень антиоксидантных ферментов. В этот период формируются и другие факторы как неспецифической, так и специфической защиты: повышение устойчивости к гипоксии, увеличение мощности системы цитохрома Р-450, гуморального и клеточного иммунитета, стресс-лимитирующих систем, уменьшается уровень биогенных аминов, происходит нормализация вегетативной, адренергической регуляции, тканевого дыхания, увеличение кислородной емкости крови и т.д. (Колчинская А.З., 1983, 2002; Агаджанян Н.А., 1972; Агаджанян Н.А., Миррахимов М.М., 1970; Агаджанян М.А. и соавт., 1997; Меерсон Ф.З., 1973, 1981, 1993; Меерсон Ф.З.исоавт., 1972-1984).
