Введение к работе
Актуальность исследования
Острые кишечные инфекции (ОКИ) остаются одной из актуальных проблем практического здравоохранения во всех без исключения странах мира в связи с высоким уровнем заболеваемости и возможностью развития осложнений [Ющук Н.Д. и соавт., 2002; Лобзин Ю.В. и соавт., 2001].
Общеизвестно, что у больных ОКИ, несмотря на полиэтиологичность, в патогенезе инфекционного процесса тяжесть состояния обуславливается совокупностью проявлений диарейного и интоксикационного синдромов [Пак С.Г и соавт. 1986; Покровский В.И. и соавт., 1983]. В клинической картине инфекционных болезней синдрому интоксикации (СИ) отводится первоочередное значение.
СИ является универсальным клиническим синдромокомплексом, развитие которого типично для большинства инфекционных заболеваний, а степень его выраженности определяет тяжесть и, соответственно, исход заболевания [Пак С.Г., 2005].
На сегодняшний день установлена ведущая роль эндогенных медиаторов (ЭМ) и в частности цитокинов в регуляции ответной реакции организма на бактериальную инвазию, однако механизмы, определяющие жизненный цикл регуляторных и эффекторных клеток организма все еще находятся на стадии активного изучения. Поэтому регуляция процесса клеточной гибели или апоптоза в норме и при патологии в настоящее время является одной из центральных проблем медико-биологической науки и интенсивно изучается во всем мире.
Появление новых методических возможностей позволило регистрировать биохимические показатели клеток, находящихся на самых ранних стадиях программированной гибели (ПГ). Так, по опубликованным данным [Змызгова А.В., Москалева Е.Ю., 1999] апоптоз лейкоцитов периферической крови при ряде заболеваний, в том числе и инфекционной природы, связан с накоплением повреждений структуры ДНК клеток, представленных преимущественно в виде однонитевых разрывов (ОР), являющихся ранними проявлениями этого процесса.
При инфекционной патологии апоптоз может играть ключевую роль в исходе системной воспалительной реакции, поскольку посредством ПГ угнетается локальная тканевая деструкция, уменьшаются дальнейшие воспалительные реакции, рекрутирование иммунных клеток, а также облегчается конечный этап формирования врожденного иммунного ответа, обусловленный ограничением провоспалительного ответа. В частности, регуляция апоптоза полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) устанавливает тонкий баланс между их эффективным функционированием в качестве одного из звеньев врожденного иммунитета и своевременным безопасным удалением этих потенциально опасных клеток [Maianski N.A.et al., 2003; Parker L.C. et al., 2005].
Целью настоящего исследования явился комплексный клинико-патогенетический анализ значения повреждений структуры ДНК, представленных в виде однонитевых разрывов, и апоптоза лейкоцитов периферической крови в развитии синдрома интоксикации у больных ОКИ в динамике инфекционного процесса.
В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:
-
Изучить динамику показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови в зависимости от тяжести и варианта течения ОКИ.
-
Исследовать состояние показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ, лимфоцитов периферической крови у больных гастроинтестинальной формой сальмонеллеза в динамике заболевания.
-
Изучить динамику показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови у больных пищевой токсикоинфекцией неуточненной этиологии.
-
Оценить динамику состояния показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ и лимфоцитов периферической крови у больных острой дизентерией.
-
Провести корреляционный анализ значений ОР ДНК и апоптоза лейкоцитов с клинико-лабораторными параметрами синдрома интоксикации в динамике ОКИ.
Научная новизна
Впервые проведено комплексное исследование показателей апоптоза и степени повреждения ДНК лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови у больных ОКИ различной этиологии в динамике развития инфекционного процесса.
Впервые у больных ОКИ обнаружены закономерные изменения показателей повреждения ДНК, представленных в виде ОР, и апоптоза лейкоцитов периферической крови в зависимости от тяжести течения и периода заболевания.
Впервые показано, что у больных ОКИ различной этиологии во все периоды заболевания наблюдаются достоверно более высокие показатели повреждения структуры ДНК ПМЯЛ периферической крови по сравнению с контрольной группой.
Впервые выявлено, что у больных ОКИ нейтрофилы периферической крови в острый период заболевания в большей степени, чем лимфоциты подвержены апоптозу.
Установлено, что у пациентов выявляются однотипные изменения в показателях программированной гибели лейкоцитов периферической крови независимо от этиологии ОКИ.
У больных ОКИ в стадии реконвалесценции установлена достоверная корреляция между параметрами начальных и завершающих проявлений программированной гибели лейкоцитов периферической крови, что свидетельствует о наличии в циркуляторном русле как клеток в состоянии апоптоза, так и коммитированных к нему.
Впервые отмечено, что у больных ОКИ на высоте клинических проявлений интоксикации получена достоверная корреляция между начальными проявлениями программированной гибели (ОР ДНК) нейтрофилов и лейкоцитарным индексом интоксикации (ЛИИ).
Практическая ценность работы
На основании проведенных исследований выявлена взаимосвязь между показателями начальных проявлений апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ОКИ различной этиологии в виде ОР ДНК и объективным критерием выраженности интоксикационного синдрома, представленным в виде интегрального показателя - ЛИИ.
Результаты исследования ОР ДНК и апоптоза лейкоцитов периферической крови больных ОКИ определили возможность их использования в качестве дополнительного критерия при оценке тяжести и длительности течения инфекционного процесса.
Полученные результаты позволяют расценивать регистрацию повреждений ДНК, представленных в виде ОР, в качестве доступного и адекватного теста для выявления клеток на ранних стадиях апоптоза у больных ОКИ.
Применение используемых нами методик может быть рекомендовано при изучении особенностей патогенеза СИ и при других инфекционных нозологиях, в качестве дополнительного инструмента, в том числе для определения роли и значения функциональной активности ПМЯЛ, как важнейшего показателя системы неспецифического иммунитета.
Положения, выносимые на защиту
У большинства больных независимо от этиологии ОКИ отмечалось возрастание показателей ОР ДНК нейтрофилов периферической крови в зависимости от периода заболевания.
У больных ОКИ отмечено снижение показателей апоптоза ПМЯЛ в период разгара заболевания по сравнению с показателями группы контроля. В период ранней реконвалесценции у пациентов ОКИ выявлено повышение показателей ОР ДНК и апоптоза ПМЯЛ не только по сравнению с показателями в группе контроля но, также в сопоставлении с начальными величинами.
Отмечено различие в регистрируемых показателях (ОР ДНК и апоптоза) ПМЯЛ в зависимости от тяжести инфекционного процесса у больных ОКИ.
В период ранней реконвалесценции, при купировании основных проявлений заболевания показатели апоптоза нейтрофилов периферической крови у больных ОКИ достигали своего пика, свидетельствуя о сохраняющихся патоморфологических реакциях.
Отмечено достоверно значимое увеличение значений апоптоза лимфоцитов периферической крови у пациентов ОКИ при среднетяжелом течении в период разгара заболевания, с последующим достоверным снижением в период реконвалесценции, но с сохраняющимся превышением этого показателя от группы контроля.
Определена взаимосвязь объективного интегрального показателя СИ – ЛИИ с показателями повреждения структуры ДНК нейтрофилов, в виде ОР у больных ОКИ.
Внедрение результатов работы
Результаты настоящего исследования используются в работе 11 инфекционного отделения ГКБ № 4. Материалы работы включены в учебный курс кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М. Сеченова и используются в учебном процессе при преподавании данного раздела.
Апробация работы
Основные положения и результаты исследования представлены на юбилейной научно-практической конференции «Инфекционные и паразитарные болезни в современном обществе. Клинико-лабораторное обеспечение инфектологии», посвященной 80-летию образования кафедры инфекционных болезней ММА им. И.М. Сеченова (Москва 22-23 мая 2003г.); III Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 20-24 января 2004г.); 1-ой Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 26-28 октября 2004г.); VII Российском съезде инфекционистов «Новые технологии в диагностике и лечении инфекционных болезней» (Нижний Новгород, 25-27 октября 2006г.); Российском Медицинском Форуме «Фундаментальная наука и практика» (Москва 18-20 октября 2006г.), а также неоднократно обсуждались на научно-практических конференциях кафедры инфекционных болезней. Диссертация апробирована на совместном заседании кафедры инфекционных болезней, лаборатории по изучению токсических и септических состояний и кафедры биохимии ММА им. И.М. Сеченова 29 июня 2006г.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка цитированной литературы, включающего 182 источника. Полученные результаты иллюстрированы 31 таблицей, 9 диаграммами и 12 рисунками, 6 выписками из историй болезни.
