Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1 Биологическая активность веществ пептидной природы 9
1.2 Физико-химические свойства тимодепрессина 12
1.2. Применение тимодепрессина в медицине 15
1.3. Технология получения лекарственных форм тимодепрессина 18
1.4. Лекарственные формы, в которых возможно использовать пептидные препараты 22
Выводы по главе 46
Глава 2. Материалы и методы 47
2.1 Характеристика субстанций, вспомогательных веществ и составов, изученных композиций 47
2.2 Способы получения лекарственных форм 49
2.3 Показатели качества полученных образцов и методы их определения 55
2.4. Особенности определения показателей качества в лекарственных формах 61
Выводы по главе 66
Глава 3. Спрей с тимодепрессином 67
3.1. Разработка состава 68
3.2. Изучение биологической активности спрея 73
3.3. Изучение стабильности препарата 73
Выводы по главе 80
Глава 4. Таблетированные лекарственные формы тимодепрессина, показатели качества 81
4.1 Таблетки 81
Изучение стабильности препарата 87
4.2 Гранулы с колликутом 90
Выводы по главе 91
Глава 5. Суппозитории с тимодепрессином 92
5.1 Составы изучаемых суппозиториев 92
Изучение стабильности препарата 99
Выводы по главе 106
Глава 6. Сравнительный анализ полученных лекарственных форм 107
Общие выводы 111
Список литературы: 112
Список сокращений 126
Приложения 127
Введение к работе
На сегодняшний день известен целый ряд лекарственных средств, относящихся к препаратам пептидной природы. Подавляющее число этих препаратов - это органопрепараты, источниками которых являются железы убойного скота (гонадотропин, инсулин, кортикотропин, тималин и пр.).
Однако, в последнее десятилетние на мировой фармацевтический рынок в массовом порядке выходят лекарственные средства, содержащие в качестве активной субстанции продукты биотехнологии и пептидного синтеза. Широкое использование большинства подобных препаратов ограничивается не только их высокой стоимостью, но и отсутствием для многих из них удобных для длительного применения вне стационара лекарственных форм. На отечественном фармацевтическом рынке находят отражение общемировые тенденции.
Предложенные в работе подходы к решению задачи создания неинъекционных лекарственных форм оригинального иммуносупрессора тимодепрессин — ответ на потребность рынка в удобных лекарственных формах для данного препарата. Разработка спрея с тимодепрессином — частное решение задачи создания неинъекционной формы препарата, пригодной для использования как при стационарном, так и при амбулаторном лечении.
Впервые синтезированный в 1995 году тимодепрессин (гамма-Д-глутамил-Д-триптофан) обладает выраженным иммуносупрессорным действием при минимальном для препаратов подавляющих иммунный ответ наборе противопоказаний и практически полном отсутствии побочных эффектов в терапевтическом интервале доз. В настоящее время тимодепрессин выпускается в ампулах по 1 мл 0,1% раствора для внутримышечного введения и во флаконах по 5 мл 0,1% раствора для интраназального введения. Показания к применению тимодепрессина включают в себя системные, имеющие хроническое течение заболевания: псориаз и др. Длительное использование
5 инъекционных препаратов связано не только с явлениями дискомфорта, но и сопряжено с потенциальной опасностью инфицирования пациента в процессе инъекции. Для иммуносупрессоров риск инфицирования пациента критичен, т.к. применение препаратов данной группы само по себе повышает опасность развития инфекционных процессов у пациентов. Разработанный спрей может использоваться при длительной поддерживающей терапии, когда вводимая доза постоянна и не нуждается в коррекции. Неинъекционные лекарственные формы тимодепрессина разрабатывались с учетом набора показаний к его применению и наличия схем, подразумевающих значительные колебания доз препарата в процессе лечения. Кроме того, в некоторых случаях, появляется возможность замены инъекций на энтеральные формы на ранних стадиях лечения.
Всё вышеизложенное определило цель и задачи настоящего исследования.
Цель исследования.
Целью данного исследования является разработка научно-обоснованных составов и технологии получения эффективных и стабильных неинъекционных лекарственных форм тимодепрессина с последующим созданием нормативных документов, регламентирующих их качество.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Задачи исследования.
Разработка составов и технологии новых, неинъекционных лекарственных форм препарата тимодепрессин.
Проведение комплексного изучения и определения физико-химических и структурно-механических свойств новых лекарственных форм препарата тимодепрессин.
Проведение биофармацевтических исследований с целью выбора оптимальной композиции.
Изучение стабильности исследуемых лекарственных форм с тимодепрессином, с целью определения условий и сроков хранения.
Разработка и апробация методик анализа подлинности и количественного содержания тимодепрессина в различных лекарственных формах.
Разработка методик анализа подлинности и количественного содержания вспомогательных веществ, используемых при изготовлении исследуемых форм.
Внедрение полученных результатов в виде отдельных методик анализа, нормативной документации (регламентов, проектов ФСП) на исследуемые лекарственные формы.
Научная новизна.
Впервые предложены энтеральные неинъекционные лекарственные формы: таблетки, суппозитории и т.п., содержащие лабильный пептидный препарат тимодепрессин. Изучены технологические аспекты получения указанных лекарственных форм, их стабильность при хранении. Сформулированы требования к показателям качества для ;энтеральных лекарственных форм. Разработан состав спрея, содержащего тимодепрессин. Предложена технология его получения, получены данные по биодоступности и стабильности, разработан проект НД.
Практическая значимость.
Полученные результаты должны лечь в основу фармакопейных статей (ФС) на раствор для интраназального применения в форме спрея и других лекарственных форм данного препарата.
Методологический подход, использованный нами, основывался на возможности создания и комплексного подхода к изучению современных неинъекционных лекарственных форм, направленный на создание стабильной и удобной в применении лекарственной формы, а также на унификации условий анализа при исследовании и контроле качества.
Внедрение в практику.
Результаты работы учтены в нормативных документах, определяющих качество,интраназального спрея тимодепрессинаі
Разработанные для препарата тимодепрессин фармакопейные статьи на дозированный спрей .утверждены: Фармакопейным? государственньшікомитетом МЗРФ;^Препаратвводится>вмедицинскую практику/
Апробация работы:
Апробациям работы проведена на научно-практической конференции
кафедры Технологии лекарственных' форм фармацевтического факультета
ММА им. И;Міі Сеченова (1: июня 2006: года); на конкурсе совместных научно-
исследовательских работ преподавателей и; обучаемых в.ММА в. номинации
"Фармация'1 в рамках российского медицинского форума 2007 -
Публикации; по работе:
П6> результатам; проведённых; исследований; опубликовано» 8; печатных
работе ' ;' '' ''.'' " ' :''", :'''. ' ' ; ''' ''.';/'"' :' . '
'.' ,. '.' .' ; ." ".::'.; ' ' '. :;/'' .': . " '' ?' '
Структура и объем диссертации:
Диссертационная работа; состоит из: введения,, обзора і литературы, четырех глав: экспериментальных исследований; общих выводов; списка использованной литературы; : иі приложений: Содержит 126 страниц машинописного і текста, 26* таблиц; 21' рисунка, и 5 фотографических снимков. Библиографический: указатель, включает 130 источников; литературы, из которых 23- на .'иностранных; языках; Приложение* содержит проект фармакопейной;, статьи, предприятиям на; тимодепрессин спрей назальный дозированный 0;25 'їй ,0,5і мг/доза- пояснительную записку, и отчет об исследованиях стабильности препарата в процессе хранения.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с комплексной научной темой ГОУ ВПО Московская медицинская академия; имени И.М.
8 Сеченова Росздрава "Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований" (номер Государственной регистрации 01.2.00606352).
Положения, выносимые на защиту.
Результаты комплексных исследований по научному обоснованию и разработке составов и технологий для спрея назального дозированного, таблеток и суппозиториев препарата тимодепрессин.
Разработанные методики контроля и показатели качества исследованных лекарственных форм.
Результаты изучения стабильности при хранении спрея назального дозированного, таблеток и суппозиториев препарата тимодепрессин.
Биологическая активность веществ пептидной природы
Верхний предел величины пептидов остаётся неопределённым, так как некоторые продукты расщепления белков, традиционно называемые пептидами, могут быть больше самых маленьких природных белков. В практической , работе ориентируются на верхний предел, равный 100 аминокислотным остаткам [60, 63];
Пептидами, например, являются такие давно и широко известные гормоны, как окситоцин, вазопрессин, адренокортикотропный гормон, глюкагон, гастрин, кальцитонин, ангиотензин и др. К гормонам примыкают так называемые рилизинг-факторы гипоталамуса (либерины), а также соответствующие ингибиторы (статины), функция которых заключается в контроле секреции гормонов гипофиза. Выделяют целый класс нейропептидов мозга - энкефалины, эндорфины, пептиды памяти, сна и т.п. Среди белково-пептидных веществ имеется много антибиотиков -. грамицидины, бацитрацины, полимиксины и др [34, 35, 52, 53, 105].
Существует также группа пептидов - регуляторов иммунитета, основным представителем которой является антибиотик циклоспорин А, обладающий выраженными иммунодепрессивными свойствами. Полный синтез циклоспорина А осуществлён в 1981 году P.M. Венгером (фирма "Sandoz"). Антибиотик выпускается фирмой в промышленных масштабах на основе биотехнологического метода. Циклоспорин А ингибирует отторжение пересаженных органов и тканей и для этих целей широко применяется в медицине. Его мишенью является Т-хелперная популяция лимфоцитов. Механизм действия связан с избирательным и обратимым изменением функции лимфоцитов, путём подавления образования и секреции лимфокинов и их связывания, со специфическими рецепторами. Обратимое подавление продукции интерлейкина-2 и фактора роста Т-клеток приводит к подавлению дифференцировки и пролиферации Т-клеток, участвующих в отторжении трансплантатов [35; 36, 38].
Большая группа иммуноактивных пептидов, выделенная из тимуса; получила название тимических гормонов или тимических факторов. В результате многочисленных экспериментов установлено, что тимические пептиды и их аналоги способны оказывать выраженное воздействие практически на все звенья дифференцировки Т-лимфоцитов: от стволовой клетки до эффекторов клеточного иммунитета [51]. Практической медицине известны, в качестве регуляторов иммунных процессов, тимусные экстракты и препараты на их основе: тимозин, тималин, тактивин, тимоптин и др. Все эти препараты, являясь смесью большого числа полипептидов, оказывают влияние на иммунологическую реактивность организма, регулируя количество Т - и В -лимфоцитов и стимулируя реакции клеточного иммунитета. Кроме того, они способны стимулировать процессы кроветворения в случае их угнетения. Данную группу препаратов, применяют в качестве иммуностимуляторов в комплексной терапии заболеваний, сопровождающихся с понижением клеточного иммунитета. Препараты так же используют для профилактики инфекционных осложнений, угнетения иммунитета и кроветворения, активации процессов регенерации в посттравматическом и пост операционном периодах [13,38,51,57,74,87,98].
ЛС, источниками получения которых служат органы животных, являются по существу экстрактами и состоят из комплекса веществ полипептидной природы..Их получение из природных- источников ограничено сложностью производства; малым выходом активных : веществ и значительной вариабельностью физико-химических характеристик и биологических свойств. Кроме того, использование природных поликомпонентных препаратов .тимуса, отягощенных . балластными веществами;. сопровождается высокой вероятностью, побочных действий и аллергических реакций со стороны, организма. Перечисленные: обстоятельства послужили стимулом для работ, направленных на создание гомогенных синтетических пептидных: JIG. К настоящему времени существует большое количество работ посвященных синтезу, выделению и- очистке биологически? активных пептидов - аналогов гормонов тимуса [10; 19, 20; 23; 35, 36 44, 70 .110].
В результате; ; многочисленных, экспериментов установлено, что тимические пептиды и их аналоги способны оказывать .выраженное воздействие практически на все звенья дифференцировкй .Т-лимфоцитов: от стволовой клетки до эффекторовклеточного .иммунитета1.
Одним из соединений; выделенных из? экстракта1 тимуса был дипептид,, имеющий структуру - глутамил-тргттофан, синтетический аналог которого получил название тимоген.Шо своему фармакологическому эффекту он близок препаратам, получаемым на основе экстрактов тимуса, и применяется, в тех же случаях, что и вышеуказанные препараты.
Тимоген оказывает выраженное стимулирующее влияние на реакции клеточного и гуморального иммунитета: Препарат.усиливает in vitro процессы дифференцировки лимфоидных клеток, индуцируя экспрессию Thy-1-антигена и Е-рецепторовІ на лимфоцитах животных и нормализует количество, Т-хелперов (GD4+); Т-супрессоров (GD8+) и соотношение.GD447CD8+ у больных с различными; иммунодефицитными состояниями [49].
Разработка состава
Оценку стабильности проводили согласно временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре (И-42-2-82).
Стабильность исследуемых форм была изучена в. процессе хранения в течение двух лет при рекомендованных условиях хранения (сухое темное место, при температуре + 2-6С) и методом ускоренного старения при температуре 24 С ±0,5G в течение 276 суток, что соответствовало 3 годам хранения при рекомендованных условиях.
Метод ускоренного старения» в данной ситуации является приемлемым, поскольку основной причиной снижения» качества препарата, является процесс химической деструкции тимодепрессина, который приблизительно может быть описан с помощью- уравнения Вант-Гоффа, а результаты хранения в рекомендованных условиях показали высокую корреляцию с результатами ускоренного. Кроме того, температура ускоренного хранения близка к комнатной, что в случае положительных данных стабильности, может свидетельствовать о возможности хранения изучаемых лекарственных форм в более доступных температурных условиях.
Контроль показателей, качества проводили- через, каждые 46 суток, что соответствовало 6 мес. Храненияі при рекомендуемой, температуре +2-6 С. Моделируемый срок хранения составил 3 года. В процессе хранения образцы тимодепрессина- контролировались по показателям предусмотренным проектами нормативных документов. Контролировались следующие показатели качества: подлинность, количественное содержание тимодепрессина и используемых консервантов, содержание посторонних примесей, а также микробиологическая чистота.,
Количественный и качественный анализ в спрее с бензалкония хлоридом проводили, согласно методике, приведенной в приложении, в. проекте ФС. Анализ спрея с нипагином и нипазолом- проводили по методикам, приведенным в1 предыдущей главе.
Таблетки
В работе проводилось сравнительное изучение двух типов основ суппозиториев для получения стабильных при хранении и удобных в использовании лекарственных форм тимодепрессина.
Выбор основ был продиктован возможностью промышленного производства а, следовательно, теми основами, которые наиболее часто применяются в Российской фармацевтической промышленности.
В качестве гидрофильной основы было предложено использовать наиболее часто применяемая в настоящее время в промышленности полиэтиленоксидная основа.
Для изучения технологических свойств суппозиториев, а также влияния агрегатных свойств (пластичности и др.) основы на стабильность и время растворения суппозиториев с тимодепрессином, были изготовлены суппозитории на основе полиэтиленоксидов с различными молекулярными массами (ПЭО1500 и сочетания ПЭО1500 и ПЭО400 в соотношении 4:1 и 9:1 соответственно).
При растворении тимодепрессина в минимальном количестве воды и последующим растворении смеси в ПЭГ за счет водоотнимающей способности ПЭГ образовывалась суспензия тимодепрессина (см. главу "материалы и методы").
В ходе дальнейшего изучения было предложено заменить воду на Диметилсульфоксид (ДМСО), который способен смешиваться со многими органическими веществами, как гидрофильного, так и гидрофобного характера (в частности, в нем хорошо растворяется как ПЭО, так и тимодепрессин). Выбор в качестве растворителя ДМСО обусловлен тем, что он активизирует транспорт многих лекарственных веществ через слизистые оболочки и способен депонировать и пролонгировать их действие в организме. ДМСО также проявляет выраженное местноанестезирующее действие при болевых синдромах различной этиологии, имеет противовоспалительное, противоотечное и бактерицидное действие. ДМСО малотоксичен, хорошо переносится больными. Использование ДМСО предотвращает контакт тимодепрессина с водой. Кроме этого ДМСО в суппозиториях может быть использован в качестве пластификатора и консерванта. Таким образом, применение ДМСО в суппозиториях дает возможность улучшить фармакологические свойства и стабильность лекарственной формы.
Проанализировав литературные данные, мы пришли к выводу, что оптимальное количество ДМСО на 1 суппозиторий должно составлять 9 сантиграм (аналог суппозитории «Простатилен»). Суппозитории были изготовлены на производственной площадке биотехнологической компании Биокад. Розлив, фасовка суппозиториев осуществлялся на машине SARONG (см главу "Материалы и методы").
![Разработка и исследование препаратов для комплексного лечения чесотки [Электронный ресурс]](/i/i/4287/188801.png "Разработка и исследование препаратов для комплексного лечения чесотки [Электронный ресурс] Чижова Евгения Тимофеевна")