Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Анализ состояния и тенденции развития способов получения и применения природных комплексов биологически активных соединений из лекарственного сырья
1.1. Растительное лекарственное сырье и его применение в медицине 11
1.2. Общие сведения о биологически активных соединениях, содержащихся в плодах шиповника, рябины, калины 12
1.3. Описание различных способов сушки растительного сырья 16
1.3.1. Оборудование для вакуумной сублимационной сушки 18
1.4. Преимущества низкотемпературных технологий получения растительных порошков, содержащих комплексы биоорганических соединений 20
1.5. Экстракционные методы выделения липофильных комплексов из плодов лекарственных растений 29
1.5.1. Особенности применения сжиженных газов для экстракции бологичкчески активных комплексов из растительного сырья 29
1.5.2. Методы интенсификации процесса экстракции липофильных комплексов 32
1.6. Биологически активные добавки к пище как натуральные комплексы биоорганических соединений 35
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы 38
2.1.1. Шиповник майский (коричный) 38
2.1.2. Рябина обыкновения 39
2.1.3. Калина обыкновенная 40
2.1.4. Общая характеристика сухих концентров (порошков) и углекислотных экстрактов 41
2.1.5. Установка сублимационной сушки 43
2.1.6. Установка для микронизирования сухой биомассы в среде жидкого азота (криомельница) 43
2.1.7. Установка для экстрагирования комплекса биоорганических соединений в среде жидкой двуокиси углерода 43
2.2. Методы исследования 43
2.2.1. Методы химического исследования 43
2.2.2. Методы качественного анализа 43
2.2.3. Хроматографическое исследование 48
2.2.4. Объекты и методы в фармакологического исследования 49
2.2.5. Статистическая обработка 50
Глава 3. Разработка оптимальной технологии получения фитокрипов и углекислотных экстрактов из плодов шиповника, рябины и калины
3.1. Разработка технологических процессов получения микронизированных порошков (фитокрипов) и углекислотных экстрактов, содержащих биоорганические комплексы плодов некоторых розоцветных и жимолостных 51
3.1.1. Обоснование преимущитва сублимационной сушки для сохранения биологически активных веществ при переработке сырья 51
3.1.2. Характеристика экспериментального технологического оборудования 52
3.2. Влияние технологических факторов на химический состав плодов шиповника, рябины, калины в сравнительном аспекте 65
3.3. Исследование комплекса флавоноидов плодов семейства розоцветных и жимолостных 68
3.4. Особенности процесса экстракции жидким диоксидом углерода и его влияние на качество и биологическую активность густых экстрактов. 74
3.4.1. Теоретическое и экспериментальное обоснование выбора жидкой углекислоты в качестве экстрагента 74
3.4.2. Технологические особенности применения жидкой углекислоты для получение густого экстракта плодов шиповника, рябины и калины 77
Глава 4. Технология получения и исследование мягких желатиновых капсул С02-экстрактов плодов шиповника и калины 81
4.1. Разработка технологии капсулирования углекислотных экстрактов плодов шиповника и калины 86
4.1.1. Разработка состава и соотношения жидкого наполнителя для капсулирования «Цитокар», содержащего СОг-экстракт шиповника, «Вибурнол», содержащего С02-экстракт калины 86
4.1.2. Разработка состава желатиновой оболочки и технологии капсулирования 88
4.2. Оценка качества экстрактов шиповника и калины методом ВЭЖХ .94
Глава 5. Доклиническая сравнительная характеристика токсичности, безопасности и фармакологической активности биоорганических комплексов взвесей и С02-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины
5.1. Изучение острой токсичности 98
5.2. Хроническая токсичность 100
5.2.1. Сравнительная оценка действия биоорганических комплексов взвесей фитокрипов и С02-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы 101
5.2.2. Влияние взвесей фитокрипов и СС -экстрактов плодов изучаемых растений на морфологию периферической крови 104
5.2.3. Влияние взвесей и СОг-экстрактов рябины и калины на динамику процессов свертывания крови и гемостаз 106
5.2.4. Влияние взвесей фитокрипов и СОг-экстраков плодов на состояние трансаминаз и щелочной фосфатазы в плазме крови после 90-дневного внутрижелудочного их введения 110
5.2.5. Состояние общего белка крови и его фракций после 90-дневного введения 20% взвеси фитокрипов и 30% масляного раствора С02-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины 113
5.2.6. Состояние липопротеидов различной плотности после 90-дневного введения взвесей и СОг-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины 114
5.2.7. Влияние биоорганических комплексов взвесей фитокрипов, масляных растворов СОг-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины на прочность капиллярной стенки 116
5.2.8. Оценка местного действия взвесей фитокрипов и СОг-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины 117
5.2.9. Влияние биоорганических комплексов взвесей и С02- экстрактов плодов шиповника, рябины и калины на ориентировочно-исследовательские реакции 123
5.2.10. Влияние биоорганических комплексов взвесей и ССЬ-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины на динамику массы крыс 124
5.2.11. Гистоморфологическое состояние некоторых висцеральных органов на 90-е сутки курса применения биоорганических комплексов взвесей и ССЬ-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины 125
Заключение 133
Выводы 133
Библиография 139
Приложение 164
- Общие сведения о биологически активных соединениях, содержащихся в плодах шиповника, рябины, калины
- Характеристика экспериментального технологического оборудования
- Оценка качества экстрактов шиповника и калины методом ВЭЖХ
- Гистоморфологическое состояние некоторых висцеральных органов на 90-е сутки курса применения биоорганических комплексов взвесей и ССЬ-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины
Общие сведения о биологически активных соединениях, содержащихся в плодах шиповника, рябины, калины
В течение многих лет каротшюиды изучались в основном как предшественники витамина А, что послужило тормозом в развитии учения об их многогранной роли. Разнообразие каротшюидов в природе, объясняющееся различиями строения и конфигурации концевых групп молекул, затрудняет установление функций каротиноидов [49, 60, 109]. В организме они образуют множество различных комплексов с белками, липидами и т. д. Поэтому правильнее изучать не функции каротнноидов, а функции полимолекулярных комплексов, которые включают в свой состав каротиноиды. Установление их функций усложняется способностью различных каротнноидов выполнять одинаковые функции, а также сложностью проведения экспериментов. Вместе с тем в настоящее время можно выделить универсальные функции каротнноидов. Благодаря общности их структуры, т.е. наличию углеродной цепи конъюгированных ненасыщенных двойных связей, каротиноиды обладают электроноакцепторными и электронодонорными свойствами [22, 145]. Они способны поглощать свет и обеспечивать взаимосвязь между изменением электронных характеристик и химическими реакциями этих соединений [43, 77, 107, 240]. Можно предположить, что основным функциональным элементом углеродной цепи является система ее обобществленных электронов. Универсальное значение имеет участие каротнноидов в окислительном обмене в клетках животных при адаптации их в гипоксических условиях, а также при старении. Каротиноиды при этом выполняют роль своеобразного депо кислорода [2,15,27, 179].
В настоящее время проводятся работы, позволяющие расширить и углубить познания физиологической роли каротнноидов в живом организме. Так, экспериментально установлено, что в условиях высокогорной гипоксии в мозге животных резко повышается концентрация каротнноидов и в то же время резко снижаются запасы витамина А в печени [11, 31, 42]. Несмотря на то, что функции каротнноидов в живом организме изучены недостаточно, можно утверждать, что они многогранны и значительны. Изучение функций каротнноидов имеет огромное практическое значение [1, 52, 177].
Масляные препараты на основе каротиноидов применяются в медицине и являются радикальным средством против ожогов, обморожений, язв и некоторых заболеваний кожи. При местном применении они обезболивают, уменьшают воспалительные процессы в тканях, ускоряют эпителшацию поврежденной поверхности [18, 68, 87,169]. Применяются эти препараты также в случае гипо- и авитаминозов А, для роста молодых организмов и как антиинфекщюнный фактор. Кристаллический р-каротин может применяться при лечений заболеваний глаз, для приготовления препаратов, улучшающіїх зрение [34, 103, 178].
В последнее время заметно возросло количество научных исследований, свидетельствующих о целесообразности применения каротиноидов в медицине. Исходя їв представлений об участии каротиноидов в окислительном обмене и депонировании кислорода внутри клеток, предполагается, что при внутриклеточной гипоксии больных диабетом, атеросклерозом, болезныо Паркннсона и других болезнях следует ожидать изменений каротиноидного состава в клетках и тканях организма [143,178].
Высказывается предположение, что каротиноиды могут быть биологически активными не только как защитные агенты против рака, но и как детерминанты долговечности, т.к. старение и рак обладают общими характеристиками. Поэтому средства, пригодные против старения, пригодны и против рака [73, 182]. Таким образом, каротиноиды важны для определения жизненного потенциала и вероятности заболевания раком в зависимости от возраста. Ретинол, хотя и обладает антиканцерогенными свойствами, но не является главным в предотвращении развития опухолей. Тот факт, что все каротиноиды, не только А-витаминно активные, всасываются в организме из пищи неизбирательно, еще раз подтверждает то, что они ему необходимы. [69, 104].
Использование комплекса каротиноидов в пищевой промышленности. Каротиноиды в пищевой промышленности применяются для витаминизации и окраски маргарина, бутербродных сортов сливочного масла, других пищевых продуктов: молока, сыра, консервов, макаронных, хлебобулочных и кондитерских изделий, шоколада, мороженого, различных напитков и плодоовощных соков. Окраска натуральных продуктов, особенно пищевых, часто определяет свежесть, полезность и пригодность ее к потреблению, вызывает вкусовые ощущения [ 142, 151,153].
Под действием кислорода каротиноиды обесцвечиваются и поэтому служат своеобразным индикатором качества продуктов питания. Среди встречающихся в природе красителей каротиноиды самые распространенные [36, 150]. Они обладают не только наиболее широкой гаммой окраски от бледножелтого до ярко-оранжевого и темно-красного цветов, но и выполняют ряд физиологических функций, являясь при этом нетоксичными веществами. Для окраски пищевых продуктов используїотся каротансодержаїщіе экстракты моркови, тыквы, томатов, шафрана [18, 81,149,160].
Фитостсрины являются предшественниками витаминов группы D. При поступлении растительной пищи в организм они превращаются в холестеро-лы, из которых далее формируется тот или иной витамин группы D, в частности, эргостерол в организме превращается в витамин D2. В растениях витамины группы D не обнаружены; в них имеются провитамины - фитостери-ны. В неомыляемой фракции растительных липидов содержатся токоферолы [59, 76, 184, 222]. Преимущественно они находятся в составе липопротеино-вых мембран клеток и субклеточных органеллах, где локализованы благодаря межмолекулярному взаимодействию с ненасыщенными жирными кислотами.
Токоферолы применяются в медицине при мышечных дистрофиях, дистрофии миокарда, нарушении функции половых желез, кожных заболеваниях, для стимуляции иммунитета [244]. Они участвуют в биосинтезе белков, тканевом дыхании и других процессах клеточного метаболизма. В присутствии витамина Е усиливается биологическая активность других витаминов и улучшаются процессы усвоения каротина из пищи [77, 117, 212].
Биологическая активность а-токоферола и его аналогов основана на высокой эффективности и способности ликвидировать радикалы. Тем самым витамин Е предотвращает окисление ненасыщенных жирных кислот и предохраняет от окисления биологические мембраны. Биологическая активность синтетического D, L- а-токоферола (рацематная смесь) составляет 40% от активности природного изомера D- а-токоферола. Токоферолы могут блокировать активность важного фермента протеинкиназы, в тромбоцитах и гладко-мышечных клетках сосудов, что обусловливает антитромботический и гипотензивный эффекты витамина Е [98, 215, 236]. Имеются также данные об антиаритмическом действии токоферолов, которое особенно заметно проявляется при ишемии миокарда [117, 143, 213]. Витамины группы К - филлохинон (Kl) и менахшюн (К2) выполняют функцию антигеморрагических факторов, необходимых для свертывания крови, обладают гепатопротекторной и иммуномодулирующей активностью [71, 199]. В высших растениях обнаружен только витамин Kl- филлохинон. Важным компонентом растительных липидов являются фосфолипиды. В семенах некоторых масличных растений их содержание может достигать 1-1,5%. Фосфолипиды обладают антистрессовой и адатогенной активностью, способствуют уменьшению явлений жировой инфильтрации печени, снижению в крови общего холестерина, улучшают физико-химические свойства желчи, оказывают благоприятное влияние на психоэмоциональную сферу больных хроническими заболеваниями гепатобилиарной системы [9, 88,238].
Характеристика экспериментального технологического оборудования
Установка сублимационной сушки
Экспериментальная установка сублимационной сушки, предназначена для обезвоживания термолабильного растительного сырья в условиях вакуума и отрицательных температур, изготовлена на ОАО «Уралкриотехника» г. Екатеринбурга, (СУ-100).
Сушка производится при температуре ниже 0С и давлении ниже 10-2 мм рт. ст. При этом влага из высушиваемого материала переходит из твердого состояния непосредственно в пар, минуя жидкую фазу, то есть происходит сублимация [17].
Установка сублимационной сушки состоит из сублимационной камеры, двух конденсаторов - десублиматоров и системы трубопроводов. Необходимое разряжение в камере и конденсаторе обеспечивается двумя вакуумными насосами, соединенными параллельно. В камере размещается блок нагревателей и помещаются поддоны (противни) с сублимируемым сырьем. Камера соединена с конденсаторами. На входных патрубках конденсаторов смонтированы затворы, отсекающие камеру от конденсаторов. Конденсаторы подключаются в работу последовательно. Во время работы одного, другой должен быть отключен от вакуумной системы; в нем происходит размораживание водного конденсата от предыдущего процесса сушки [17,25, 57].
На выходных патрубках конденсаторов также размещены вакуумные затворы, отсекающие конденсаторы от вакуумных насосов. Конденсаторы имеют вакуумные клапаны для напуска воздуха при окончании процесса сушки.
Камера сублимационная
Сублимационная камера выполнена в виде цилиндра, на котором имеется отверстие под моновакууметр ПМТ- 2.
Блок нагревательный представляет собой конструкцию этажерного типа, в которой рядами расположены нагреватели, предназначенные для устранения явления само замораживания сырья в процессе испарения льда.
Каркас из алюминиевых профилей имеет колеса, обеспечивающие перемещение нагревательного блока. На полках каркаса установлены семь нагревателей, между ними могут располагаться двенадцать поддонов по два на каждой полке.
Нагреватель представляет собой сварную рамку, на которой закреплены кварцевые трубки, в которых размещены спиралевидные нагревательные элементы [115]. Камера закрывается крышкой, в которую ввернуты 8 невыпадающих болтов, обеспечивающих предварительный нажим ее через прокладку к фланцу камеры. На крышке имеется смотровое стекло.
Конденсатор десублимационный Конденсатор десублимационный состоит из цилиндры и ческой камеры. Крышка и днище камеры усилены ребрами. В горизонтально расположенные полые трубки непрерывно пропускается хладагент - жидкий азот. На трубках намораживаются пары влаги, полученной из замороженного сырья. Температура поверхности трубок должна быть не выше (-100С). Контроль температуры на сырье осуществляется при помощи термопар.
Принцип действия экспериментальной сублимационной установки
В сушильной камере 18 (рис.1), называемой сублиматором, устанавливаются противни 3 с высушиваемым сырьем. Противни не соприкасаются с поверхностью нагревательных трубок, тепло от последних передается сырью, преимущественно радиацией.
Паровоздушная смесь из сублиматора поступает в межтрубное пространство конденсатора, в трубах которого циркулирует хладагент - жидкий азот. Конденсатор включается в один циркуляционный контур с цистерной жидкого азота. На трубах конденсатора происходит конденсация и замораживание водяных паров. Для более удобного удаления льда в конце процесса обычно используют два конденсатора, которые переменно работают и размораживаются [146,161].
Процесс сублимации влаги из сырого материала происходит в две стадии:
при вакуумировании в сушильной камеры происходит быстрое самозамораживание сырья до -30С;
сублимации льда за счет тепла, поступающего от нагревателей. При этом удаляется основная часть влаги.
Особенности низкой температуры технологии переработки растительного сырья с получением фитокрипов заключаются в последовательных процессах сублимационной сушки и криопомола обезвоженной биомассы растений в среде жидкого азота, который также является и охлаждающей жидкостью для конденсаторов сублимационной установки. Технология производства фитокрипов из овощного (свекла, морковь, топинамбур) и некоторых видов лекарственного сырья [20,119].
Особенности применения данной технологии для переработки плодов растений семейства розоцветных и жимолостных с получением соответствующих фитокрипов практически не изучались.
В связи с этим нами была предпринята попытка разработки получения фитокрипов шиповника, рябины и калины и изучение их фиохимических и фармакологических свойств. Соответственно была разработана безотходная криогенная технология получения микронизированных порошков (фитокрипов) из плодов и ягод. В отличие от общепринятых, такая технология включает сублимационную сушку, полностью исключает тепловую обработку и основывается на использовании жидкого азота как источника низких температур и инертной среды. Указанная технология является новым способом консервирования продуктов растительного происхождения, приготовленных в виде порошков.
Фиохимические исследования показали, что фитокрипы обладают уникальными качествами - в них практически полностью сохраняются биологически активные и питательные вещества. Кроме того, фитокрипы могут годами храниться в герметичной упаковке без потери своих качеств. Для нашей страны актуальность получения таких порошков связана еще и с тем, что на значительных территориях наблюдается определенный дефицит местных растительных продуктов питания, содержащих витамины и другие БАВ. Очевидно, что производство плодово-ягодных порошков на основе местного сырья способствовало бы устранению такого дефицита.
В чем же особенности разрабатываемой криогенной технологии? В том, что она состоит в последовательности следующих стадий:
предварительное быстрое замораживание сырья в жидком азоте;
вакуумная сублимационная сушка;
быстрое замораживание высушенного продукта в жидком азоте;
криопомол с последующей расфасовкой порошка в герметичную упаковку в среде газообразного азота.
Процесс получения фитокрипов начинается с того, что измельченные плоды шиповника, рябины обыкновенной и черноплодной, калины обыкновенной на две-три минуты погружают в жидкий азот и замораживают, что способствует образованию мелких кристаллов льда, которые быстрее, чем крупные кристаллы, возгоняются при вакуумной сублимационной сушке. Кроме этого, быстрое замораживание приостанавливает действие окислительных ферментов в целях сохранения биологически активных веществ (БАВ), обладающих витаминной активностью [171].
Изучение веществ, обладающих Р-витаминной активностью приобретает в последнее время все большее значение, что объясняется физиологическим действием флавоноидов, которые укрепляют стенки кровеносных сосудов, регулируют их проницаемость, способствуют накоплению и лучшему усвоению аскорбиновой кислоты. Р-витаминная активность характерна для целой группы химических соединений: флавонолов, катехинов, антоцианов, лейко-антоцианов, кумаринов и их производных с галловой кислотой [44, 86].
Антоцианы наряду с Р-витаминной активностью являются основой той или иной окраски плодов и ягод: красной, фиолетовой, синей. Они встречаются в листьях, цветках, плодах высших растений. Наиболее высокой Р-витаминной активностью обладают катехины. Практическая ценность полифе-нольных соединений определяется также и тем, что они входят в состав многих пищевых продуктов и обусловливают высокое качество органолептиче-ских показателей, а также вкусовые достоинства готовой продукции [18, 67].
Биофлавоноиды дикорастущих плодовых растений изучены недостаточно. В литературе, в лучшем случае, приводится суммарное количество дубильных и красящих веществ в плодах отдельных видов растений [132,226].
Оценка качества экстрактов шиповника и калины методом ВЭЖХ
В качестве основного сырья использовали высушенные плоды шиповника и калины, соответствующие требованиям ГФХІ. Отвары плодов (1:10) готовили по принятым методикам [Приказ МЗ РФ № 308]. Спиртовые настойки и масляные экстракты (1:10) получали экстракцией из измельченных плодов шиповника этиловым спиртом 55% или маслом растителнным при температуре 70-75С или 90-95С соответственно в течение 1 часа. Углекнслотные экстракты были получены по ранее описанной технологии.
Исследование качественного состава экстрактов шиповника проводили на жидкостном хроматографе в составе: насос "L- 4000А Intelligent Pump", детектор - "L-4000A UV Detector", интегратор "D-2500A Chromate-Integrator" , колонка 250 х 4,6 мм заполненная сорбентом "Li Chooser RP-18,5 цт", ввод пробы при помощи крана Redline с объемом петли 20 цл.
Для возможности определения веществ различной природы был выбран градиентный режим элюирования, с линейным изменением состава подвижной фазы от 100% воды до 100% ацетонитрила. Расход подвижной фазы составлял 0,8 мл/мин, время полной замены растворителей 30,0мин. Анализ состава масляных и С02.экстрактов проводили методом ВЭЖХ в из сократическом режиме в системе ацетонитрила: ИПС 80:20 (об). Объем пробы 20 мкл. Скорость элюиурования 0,7 мл/мин. Детектирование при длине волны 285 нм, что соответствует максимуму поглощения большинства флавоноидов, а также витаминов: ретинол и токоферол [ФСП 42- 0056133501 Аевит капсулы].
Вязкость ССЬ-экстрактов и их растворов в растительном масле определяли по скорости истечения из пипетки, откалиброванной по воде.
Градиентный режим. Вода: ацетонитрил 0-100% за 30 минут. В виду того, что в условиях градиентного элюирования введение жирорастворимых веществ дает большое размывание пиков, 50 мг СОг-экстракта помещали в колбу, добавляли 50 мл воды интенсивно встряхивали в течение 5 минут. Фильтровали. Осадок с фильтра переносили в 50 мл изопропанола. Полученные фракции хроматографировали раздельно [14, 83, 155].
Изократический режим. Ацетонитрил: изопропанол 80:20 (об). Скорость элюции 0,7 мл/мин. Пробы предварительно растворяли в изопропаноле. Концентрация около 1мг/1мл. Объем пробы 20 мкл.
В процессе проведения настоящей работы исследовали качественный состав СОг-экстракта шиповника в сравнении с водным и водно-спиртовым экстрактами методом ВЭЖХ в условиях градиентной хроматографии; результаты которой представлены на рис. 11 и 12.
При градиентной хроматографии спиртового и водного настоев шиповника обнаруживаются интенсивные группы сигналов со временем удерживания в области 4,5-12,0 минут (рис.11), в то время как в водорастворимые вещества углекислотного экстракта обнаруживают сигналы с временами удерживания от 14,5 до 19,0 минут (рис. 12). В спиртовой фракции углекислотного экстракта имеются шесть пиков с временами удерживания от 14,5 до 23,0 мин (рис. 12). В водном и спиртовом экстрактах шиповника преобладают достаточно полярные вещества, имеющие небольшое (4,5-12 мин.) время удерживания. В С02-экстракте шиповника присутствуют более неполярные вещества, удерживаемые в обращеннофазовой колонке 14,5-23 мин. Это свидетельствует о липофильности продуктов, полученных экстракцией углекислотой по сравнению с водными и спиртовыми экстрактами шиповника [102, 118].
В изократическом режиме хроматографии СОг-экстракт шиповника имеет один основной пик в области 3,46-3,49 минут и значимый сигнал в районе 20,35 минут площадью около 10% от суммарного поглощения. Масло шиповника имеет только один пик вещества, поглощающего при длине волны 285 нм в области 3,5 минуты.
Данные (рис.13) свидетельствуют о том, что суммарная площадь веществ, поглощающих в области 285 нм СОг-экстракта составляет 443580 ед. в сравнении с маслом шиповника 42529 ед. при неизменной концентрации в пробе. Таким образом, С02 эффективнее метиленхлорида практически на порядок. Хотелось бы подчеркнуть спорность данного вывода. Дело в том, что масло шиповника по ФСП стандартизировано по количеству бета-каротина и не контролируется по содержанию других экстрактивных веществ. Однако факт присутствия значительного количества веществ, поглощающих излучение в области 285 нм, в СОг-экстракте шиповника является бесспорным. Это позволяет выдвинуть гипотезу о том, что диоксид углерода является значительно более интенсивным экстрагентом.
Таким образом, представленные данные свидетельствуют о том, что СОх-экстракт шиповника содержит в основном неполярные компоненты и определенное количество полярных веществ. Поэтому можно предположить, что углекислота является неполярным экстрагентом неселективного действия, а применение её позволит значительно увеличить спектр извлекаемых соединений, которые повысят физиологическую ценность получаемых препаратов их фармакологическую эффективность.
При проведении сравнительной градиентной хроматографии водного и спиртового экстрактов плодов калины (рис.14) обнаруживаются группы сигналов в интервале от 6,0-13,0 минут, из которых ярко выражены три сигнала 7.34; и 7,61 мин, 9,97 минут. В водной вытяжке углекислотного экстракта калины преобладают два сигнала с временем удерживания 7.96 и 15.22 минуты (рис.15). В спиртовой вытяжке углекислотного экстракта обнаруживается группа сигналов от 15.44 до 25.47 мин (рис. 15).
Наличие двух отчетливых пиков неполярных веществ СС 2-экстракта в области 15-26 минут и их отсутствие в водном и спиртовом экстракте свидетельствует о том, что качественный состав субстанций, полученных экстракцией углекислотой, значительно отличается по сравнению с водными и спиртовыми экстрактами [206].
В изократическом режиме хроматографии СОг и масляный экстракты калины имеют один основной пик в области 3,46 - 3,49 минут (рис.16).
В отличие от масляного С02-экстракт плодов калины имеет два сигнала относительно полярных веществ в области 11,1 и 21,35 минут.
Гистоморфологическое состояние некоторых висцеральных органов на 90-е сутки курса применения биоорганических комплексов взвесей и ССЬ-экстрактов плодов шиповника, рябины и калины
После вскрытия животных проводили макроскопические исследования извлекаемых органов, при которых оценивали общий вид последних, их окраску, наполненность желудочно-кишечного тракта, расположение органов их влажность и т.п.
Гистологическому изучению были подвергнуты сердце, печень, селезенка, почки, желудок, двенадцатиперстная кишка, а у кроликов были взяты лоскуты кожи правого и левого бока. Перед фиксацией извлеченные органы взвешивали, результаты которых представлены в таблице 28.
Рассматривая статистически недостоверные некоторые отклонения показателей, можно заключить, что испытуемые БАВ комплексов практически не вызывают резких изменений в показателях относительной массы висцеральных органов крыс, что говорит об отсутствии отрицательных эффектов изучаемых плодов растений при длительном их использовании.
Извлеченные органы для гистологических исследований фиксировали 10% раствором формалина. Кусочки печени резали на замораживающем микро-томе, срезы окрашивали на жир Суданом черным Б и на липиды по методу Гольдмана (Судан Ш + альфа-нафтол). Остальные органы заливали парафином, срезы окрашивали гематоксилином и эозином по Ван-Гизону. Результаты данного эксперимента представлены (для примера на фоне СОг-экстракта калины обыкновенной) на микрофотографиях (рис. 23-36).
Сердце - морфология сосудов и кардиомиоцитов соответствует нормальному строению. Коронарные сосуды и капилляры умеренного кровенаполнения (рис. 23).
Печень - во всех случаях ядра гепатоцитов сохранены, так же как и дольчатая структура печени. Межуточная ткань и пространства Дриссе не подвергались изменениям. Сосуды полнокровны. Гистологическая картина печени характеризуется либо диффузными мелкокапельными отложениями жира, за-полняющими цитоплазму гепатоцитов и прилегающих к центральным венам или по периферии долек, либо крупнокапельными отложениями жира под капсулой и по периферии долек.
Каких-либо различий в морфологии жировых отложений в гепатоцитах и в паренхиме контрольных и опытных животных, получавших внутрижелу-дочно в течение 90 сут. по 1/10мл/кг от максимальных доз изучаемых взвесей и СОг-экстр. плодов, не выявлено (рис. 25).
Во всех остальных органах у подопытных животных также не выявлено каких-либо существенных морфологических отличий от контроля, свидетельствующих о токсическом воздействии изучаемых субстанций.
Селезёнка - белая и красная пульпа нормального строения, умеренно
Почки — клубочки у опытных и контрольных животных интактны. Эпителий нефрона на всем его протяжении нормальной структуры, в просвете канальцев белковые выпоты (рис.29).
Желудок и кишечник (рис.31) - слизистая желудка и отдела двенадцатиперстной кишки не имеют каких- либо изменений, свидетельствующих о наличии раздражающего и повреждающего действия у взвесей и СОг-экстрактов плодов изучаемых видов растений
![Разработка методических подходов к применению современных информационных технологий для оптимизации снабженческо-сбытовой деятельности фармацевтических организаций субъекта РФ [Электронный ресурс]](/i/i/4502/187023.png "Разработка методических подходов к применению современных информационных технологий для оптимизации снабженческо-сбытовой деятельности фармацевтических организаций субъекта РФ [Электронный ресурс] Хусаинова Галина Ильдусовна")
