Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 10
2.1. Характеристика болезни Ауески и биология возбудителя 10
2.2. Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески 20
2.3. Методы лабораторной диагностики болезни Ауески 31
3. Собственные исследования 41
3.1. Материалы и методы исследований 41
3.1.1. Материалы 41
3.1.2. Методы исследований 43
4. Результаты собственных исследований 45
4.1 Разработка технологии изготовления антигена вируса болезни Ауески, делеционного по гликопротеину gE 45
4.1.1. Сравнительное изучение чувствительности культур клеток к варианту вируса болезни Ауески делеционного по гликопротеину gE и ВГНКИ 45
4.1.2. Очистка и концентрирование вируса псевдобешенства... 52
4.2. Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE штамма "ВК" вируса болезни Ауески 53
4.2.1. Получение специфических сывороток крови кроликов и крыс, иммунизированных против болезни Ауески различными вакцинными штаммами 53
4.2.2. Получение эритроцитарного реагента 54
4.2.3. Сенсибилизация эритроцитов антигеном различных штаммов вируса болезни Ауески 56
4.2.4. Определение активности и специфичности серий эритроцитарных диагностикумов в межлабораторных комиссионных испытаниях 59
4.3. Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител у свиней 63
4.4. Сопоставительный анализ результатов РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма вируса болезни Ауески штамма «ВК» при определении антител в сыворотках крови иммунизированных животных 66
4.5. Практическое использование существующих и разработанных методов и средств для иммунологического мониторинга эффективности вакцинопрофилактики при болезни Ауески 70
5. Обсуждение результатов исследования 71
6. Выводы 82
7. Практические предложения 83
8. Список литературы 84
9. Приложения 114
- Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески
- Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE штамма "ВК" вируса болезни Ауески
- Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител у свиней
- Сопоставительный анализ результатов РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма вируса болезни Ауески штамма «ВК» при определении антител в сыворотках крови иммунизированных животных
Введение к работе
1.1 Актуальность проблемы. Болезнь Ауески (БА) - контагиозное остро
протекающее в виде эпизоотии и спорадических случаев заболевание,
наносящее значительный экономический ущерб животноводству, особенно в
странах с интенсивно развитым свиноводством и пушным звероводством
(Gustafson Р.,1970; Wittman G. et.al.,1989; Байбиков Т.З., 2008; Иванов А.В.,
2008). Летальный исход болезни наблюдается у поросят, а у взрослых свиней
сопровождается установлением длительного или пожизненного носительства
вируса. В определенных условиях латентный герпесвирус способен
реактивироваться и животное вновь становится источником инфекции
(Wittman G. et.al., 1989; Сергеев В.А., 1993; Юсупов Р.Х., 2002). У
свиноматок наблюдаются мертворождение, мумификация и эмбриональная
смертность, бесплодие (Уласов В.И. и др. 2001).
Болезнь Ауески трудно искоренить с помощью прививок традиционными вакцинными препаратами, так как не предотвращается инфицирование поголовья и распространение вируса среди свиней (Моренков О.С., 2000).
Международный опыт показывает, что искоренение заболевания возможно при применений стратегии борьбы, включающее выявление инфицированных животных (в том числе латентно инфицированных) и их выбраковку, а также реализацию комплекса санитарно-эпидемиологических и других мер. Выявление инфицированных животных проводится с использованием маркированных вакцинных штаммов вируса Б А и дискриминирующих тестов, позволяющих дифференцировать вакцинальный и инфекционный иммунитет (Моренков О.С., 2002; Komaromi М., 2005). При этом дискриминирующие тесты основаны на использовании гликопротеинов или моноклональных антител, что определяет высокую себестоимость соответствующих исследований. В связи с вышеизложенным дальнейшее усовершенствование тест-системы для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных антител остается актуальной задачей.
1.2 Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась разработка
тест-системы на основе РНГА с использованием антигена делеционного по
гликопротеину gE вируса болезни Ауески, оценка и дифференциация
постинфекционных и поствакцинальных антител в сыворотках крови
вакцинированных свиней. ;.'
Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
-
Адаптировать маркированный (делеционный по гликопротеину gE) вирус болезни Ауески к культуре клеток.
-
Отработать условия изготовления эритроцитарного реагента ,на основе использования делеционного по гликопротеину gE вируса болезни \ ч Ауески.
3. Получить различные варианты сывороток крови животнцх, \.
иммунизированных: а) маркированным антигеном * вируса '-БА; б) вирус-\
вакциной ВЕНКИ против Б А; в) радиоинактивированным (эпизоотическим) антигеном вируса Б А (ФГУ «ФЦТРБ - ВНИВИ»).
-
Провести сравнительную оценку 3-х вариантов сывороток крови иммунизированных животных и 2-х вариантов эритроцитарных реагентов на основе вакцин «ВК» и «ВГНКИ» для выявления постинфекционных и поствакцинальных антител к вирусу БА.
-
Разработать инструкцию по применению набора препаратов для дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из штамма «ВК».
1.3 Научная новизна работы. Впервые создан эритроцитарный
диагностикум на основе делеционного по гликолротеину gE вируса болезни
Ауески, обеспечивающий дифференцированное выявление
поствакцинальных и постинфекционных антител при указанной инфекции.
Впервые адаптирован вакцинный штамм «ВК» вируса болезни Ауески к культуре клеток невриномы Гассерова узла крысы (НГУК -1). Разработанный метод культивирования вакцинного штамма «ВК» вируса болезни Ауески на указанной клеточной системе сокращает время репродукции и обеспечивает увеличение его титра в 2-3 раза по сравнению с другими изученными культурами клеток.
1.4 Практическая ценность работы. На основании проведенных
исследований предложен для внедрения в ветеринарную практику новый
диагностикум для дифференциации поствакцинальных и постинфекционных
антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной
вакциной из штамма «ВК». По результатам исследований разработаны и
утверждены:
1. Инструкция по применению «Набора препаратов для определения в
РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни
Ауески», утв. Россельхознадзором РФ 25.04.2008 г.
2. Инструкция по применению «Набора препаратов для
дифференциальной диагностики в РНГА специфических антител у свиней,
вакцинированных против болезни Ауески маркированной вакциной из
штамма «ВК», утв. директором ФГУ «ФЩРБ-ВНИВИ» профессором
А.В.Ивановым 22.10.2009 г.
1.5 Основные положения диссертации выносимые на защиту.
- адаптация вакцинного штамма «ВК» вируса болезни Ауески
делеционного по гликопротеину gE к культуре клеток.
- технология изготовления диагностического набора препаратов для
РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески.
-экспериментальное подтверждение дифференциации
поствакцинальных и постинфекционных антител при болезни Ауески, с помощью разработанного диагностического набора.
1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены,
обсуждены и одобрены на ежегодных научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ -
ВНИВИ» по итогам НИР за 2006 - 2009 гг., на научно-практических конференциях молодых ученых и специалистов ФГУ «ФЦГРБ - ВНИВИ» (г. Казань, 2007-2008 г.). Результаты основных этапов работы подтверждены внутрилабораторными комиссионными испытаниями с положительной оценкой.
1.7 Публикация результатов исследований. Основные положения
диссертации изложены в. 5 научных работах, которые отражают содержание
диссертации, в том числе 1 статья в рекомендованных ВАК РФ издании.
1.8 Объем и структура диссертации, Диссертация изложена на 117
страницах компьютерного включает общую характеристику, обзор
литературы, собственные исследования, результаты собственных
исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические
предложения, приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами .Список
литературы включает 262 библиографических источника в том числе 104 -
зарубежных авторов.
Иммунитет и вакцинопрофилактика при болезни Ауески
Образование иммунитета при болезни Ауески - очень сложный процесс. После вакцинации животных гуморальный и клеточный иммунитет проявляется на 7-10 день, достигает пика через 30 дней, сохраняясь в течение 5-6 месяцев (Юсупов Р.Х., 1984;Сергеев В.А., 1993; Chen Y. et. al., 1997).
Переболевшие свиньи приобретают напряженный иммунитет, сыворотки их содержат вируснейтрализующие антитела в титре 1: 232 - 1: 256, начиная с 3-го месяца, которые иногда сохраняют до 4-5 лет (Карандашев И.Г., Госманов Р.Г., 1980; Сюрин В.Н. и др., 1998). Длительное сохранение иммунитета у свиней, перенесших заболевание, объясняется персистенцией вируса болезни Ауески в организме животных (Качанова СП., 1985).
Антитела иммунных свиноматок не проникают через плаценту в плод, поэтому у поросят при рождении антител к вирусу болезни Ауески в сыворотке крови отсутствуют (Виноградова В.И. и др., 1980; Мс Caw M.B.et. al., 1997). У поросят, родившихся от иммунных свиноматок, в течение 24 часов после сосания молозива формируется колостральный иммунитет с наличием в сыворотке крови высокого титра вируснейтрализующих антител (Константинов А.В., и др., 2000). Колостральные антитела представлены в основном IgG с небольшим количеством IgM. У животных, имевших на момент прививок колостральные антитела, выработка активного иммунитета подавляется (Попов В.И., 1992; ValicekL. et.al., 1987).
Нейтрализующие антитела являются одним из основных средств защитного иммунитета, развивающегося в результате вакцинации или инфицирования.
Переболевшие свиньи приобретают напряженный иммунитет, сыворотки их содержат вируснейтрализующие антитела в титре 1:32 - 1:256, начиная с третьего дня, которые иногда сохраняются до 4,5 лет.
При болезни Ауески помимо гуморального имеет место и клеточный иммунитет. Факторы его развиваются на несколько дней раньше гуморальных; стимуляция лимфоцитов и появление ингибирования миграции макрофагов отмечены уже на 4-е сутки. Вирусспецифический клеточный иммунитет наблюдается на 4-е сут. после заражения. Антитела обнаруживаются только на 7-е сутки.
В начале на 6-8 сут. появляются IgM. Титр специфических IgM антител достигает максимального уровня на 10-12 сутки. Через 21 день после инфицирования специфические IgM обычно уже не выявляются. При интраназальном инфицировании БВА - специфические IgA появляются в различных мукозных секретах на 6-10 сут и обнаруживаются в течение 1-3 месяцев (Chinsakchai S. et.al., 1994). IgG 1 и IgG 2 выявляются через 8-10 сут после начала инфицирования и достигают максимума через 21 сутки. Концентрация IgG антител достигает максимального уровня на 17-21 сутки. IgM, IgG 1 и IgG 2 могут нейтрализовать вирус; при этом вирус -нейтрализующая активность сывороток существенно возрастает в присутствии комплемента и в отдельных работах наблюдалась через 2 года после инфицирования. Кроме вирус-нейтрализующей активности, антитела способствуют элиминации вирус-инфицированных клеток, участвуя в цитотоксических реакциях, опосредуемых комплементом и в реакциях клеточной цитотоксичности, в зависимости от антител (Chinsakchai S. et.al., 1994; Mettenleiter Т.С., 1996; Gustafson P.D., 1979; Wittman G. et.al., 1989).
Переболевшие свиньи на некоторое время устойчивы к реинфицированию. После этого периода, при реинфицировании у таких животных не наблюдают клинических признаков заболевания, не выделяется вирус, не наблюдается вторичного IgM, не выражен и запоздалый IgA ответ и не превышают титры IgG 1 и IgG 2 антител.
Разработка технологии изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для РНГА на основе делеционного по гликопротеину gE штамма "ВК" вируса болезни Ауески
Получение специфических сывороток крови кроликов и крыс осуществляли путем иммунизации их различными вакцинами против болезни Ауески. Для этого животных каждого вида по принципу аналогов разделили на 4 группы по 10 голов в каждой. I группа животных получала вирусвакцину ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов"; II группа животных получала эпизоотический радиоинактивированный вирус Б А, штамм " Производственный"; III группа животных получала маркированный (делеционный по гликопротеину gE) штамм "ВК" вируса БА; IV группа - интактные животные (контроль). Лиофилизированный вирусный антиген ресуспендировали в стерильном физиологическом растворе и вводили подопытным животным (крысам и кроликам) по 0,5 см подкожно в область спины.. Доза составляла 30 мг/кг. Иммунизацию проводили двукратно с интервалом 14 дней. В дальнейшем полученные сыворотки использовались для определения активности и специфичности диагностикума, изготовленного на основе делеционного по гликопротеину gE при определении специфических антител. Для изготовления эритроцитарного реагента использовали 0,15 М фосфатно-буферные растворы (ФБР) и рН 6,4 и 7,2. Процесс изготовления эритроцитарного диагностикума для РНГА для определения антител в сыворотке крови животных включает в себя 3 этапа: 1 этап. Подготовка формалинизированных эритроцитов: - получение эритроцитов барана; - формалинизация эритроцитов; - контроль формалинизированных эритроцитов. 2 этап. Танизация формалинизированных эритроцитов: - приготовление рабочего раствора танина; - обработка эритроцитов танином; - контроль танизированных эритроцитов. 3 этап. Сенсибилизация антигеном формалинизированных танизированных эритроцитов. Для приготовления антигенного эритроцитарного диагностикума исходным материалом служили эритроциты барана. В качестве доноров для получения эритроцитов использовали баранов в возрасте 1-2 лет, полученных из благополучного по инфекционным болезням хозяйства. Карантинирование и исследование животных на инфекционные заболевания проводили согласно действующих инструкций о порядке исследования продуцентов. Кровь, для получения эритроцитов, брали из яремной вены здорового барана во флакон, до половины наполненный раствором Олсвера следующего состава: 2,05 г сахарозы, 0,8 г лимоннокислого натрия, 0,42 г натрия хлористого, 0,005 г лимонной кислоты, 100 мл дистиллированной воды. Раствор, разлитый во флаконы до половины объема, предварительно стерилизовали при 80 С по 30-40 минут в течение 3 дней (рН 6,1). На 1 этапе изготовления диагностического препарата осуществляли формалинизацию эритроцитов. Для этого к 100 мл смеси крови барана с рас-твором Олсвера добавляли 40 см 18,5 %-ного раствора формалина, свежеприготовленного на физиологическом растворе. Смесь выдерживали в течение 1.5-2 часов в водяной бане при (37±0,5) С, помешивая через каждые минут. Формалинизированные эритроциты должны иметь коричневый цвет и жидкую консистенцию. Эритроциты осаждали центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 мин и ресуспендировали в 100 мл физиологического раствора натрия хлористого. Эту процедуру повторяли трижды. Полученный осадок ресуспендировали в 200 мл физиологического раствора и оставляли на 2 суток при 4 С, а из осадка готовили 10%-ную взвесь по объему в ФБР с рН 7,2, хранили при температуре (4±2) С. Для контроля формалииизированных эритроцитов на спонтанную агглютинацию из 10%-ной взвеси эритроцитов готовили 3%-ную взвесь в ФБР с рН 7,2. В лунки микропанелей вносили по 0,05 мл растворителя, добавляли по 1 капле 3%-ной суспензии формалииизированных эритроцитов, тщательно перемешивали смесь и оставляли на 1,5-2 час при комнатной температуре. Для изготовления эритроцитарного антигенного диагностикума пригодными считались формалинизированные эритроциты не обладающие самоагглютинацией, оседающие на дно лунки в виде компактной точки. Полуфабрикат использовали в работе в течение 1 года со дня изготовления при хранении в условиях температуры (4±2) С. На 2 этапе изготовления эритроцитарного диагностикума осуществляли танизацию формалииизированных эритроцитов. С этой целью готовили рабочее разведение танина непосредственно перед обработкой эритроцитов, для этого брали 0,05 г танина и растворяли в 1000 мл буферного физиологиеского раствора. Перед танизацией формалинизированные эритроциты одно-двукратно отмывали, готовили 3%-ную суспензию на ФБР с рН 7,2, сме-швали поровну с рабочим разведением танина. Смесь выдерживали в водяной бане при (37±2) С в течение 20 минут, эритроциты дважды отмывали ФБР с рН 7,2. Из осадка готовили 3%-ную суспензию эритроцитов на консерванте без сыворотки, которую затем хранили при (4+2) С. Контроль на оседание танизированных эритроцитов ставили через 24-48 часов после их приготовления по вышеописанному методу. В случае незначительной агглютинации танизированных эритроцитов (+ или ++) суспензию дополнительно выдерживали при 4 С в течение 2-3 суток, затем снова повторяли контроль. Если эритроциты обладали зонтикообразной агглютинацией, оседали в лунках в виде пленки, покрывающей все дно лунки (++++), то их считали непригодными для изготовления эритроцитарного диагности-кума и выбраковывали, готовили новую серию эритроцитов.
Испытание активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов в условиях хозяйства, с целью дифференциации поствакцинальных антител у свиней
Для определения активности и специфичности эритроцитарных диагностикумов на свиньях использовали 120 поросят 2-6 месячного возраста, полученных из благополучных по инфекционным болезням хозяйств. Поросята были от свиноматок, вакцинированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов". Перед проведением иммунизации маркированной вакциной против ВБА, делеционной по gE (ВНИИЗЖ, г.Владимир) у поросят брали кровь для исследования сывороток крови на наличие антител к вирусу болезни Ауески с помощью: - «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески", утвержденным МСХ РФ 12 мая 2008 г. - Диагностического набора, изготовленного на основе маркированного (делециошюго по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА. Все пробы показали отрицательный результат на наличие антител в сыворотке крови, т.е. титр антител не превышал 1:4. Далее животных по принципу аналогов разделили на 3 группы по 40 голов в каждой. -1 группа животных получала вирусвакцину ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов"; - II группа животных получала вирусвакцину против болезни Ауески свиней и овец сухую культуральную из маркированного штамма «ВК»; - III группа - интактные животные (контроль). Схема иммунизации включала двукратную иммунизацию с интервалом в 14 дней. Клиническое наблюдение и определение антител в крови вели в течение от 3 до 14 дней после I иммунизации и от 3 до 180 дней после II иммунизации животных. Животных 1 -й и 2-й группы иммунизировали вирусвакцинами согласно наставлению внутримышечно. Результаты исследования сывороток крови в РНГА с использованием различных диагностических наборов представлены в таблице 11.
Результаты испытаний показали, что титры антител в РНГА у поросят, иммунизированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов", находились в пределах 1:8 и выше при использовании как «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески", утвержденный МСХ РФ 12 мая 2008 г., так и диагностического набора, изготовленного на основе маркированного (делеционного по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА. Научно обосновано, что поголовье свиней может быть защищено от возникновения болезни Ауески при наличии в стаде 84% и более вакцинированных животных, положительно реагирующих в РНГА в титре 1:8 и выше. Однако сыворотки крови поросят, иммунизированных gE-негативной вакциной, давали отрицательные результаты в РНГА с использованием «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески", утвержденный МСХ РФ 12 мая 2008 г., но давали титры 1:8 и выше в тестах с использованием эритроцитарного диагностикума на основе маркерного антигена, что свидетельствует о возможности выявления антител, направленных против gE, что позволяет дифференцировать поствакцинальный и постинфекционный иммунитет.
Сопоставительный анализ результатов РВН с данными, полученными при использовании диагностического набора на основе маркированного штамма вируса болезни Ауески штамма «ВК» при определении антител в сыворотках крови иммунизированных животных
Среди факторов гуморального противовирусного иммунитета основная роль принадлежит специфическим вируснейтрализующим антителам. Внедрение в вирусологических лабораториях многих современных методов изучения биологической активности вируса и напряженности иммунитета, не уменьшает значимости методов, применяемых ранее для диагностики болезни Ауески. Одним из таких серологических тестов является постановка РВЫ. В основе реакции лежит способность специфических иммунных сывороток нейтрализовать инфекционное действие вирусов на чувствительной системе (лабораторных животных, культурах клеток). РВН ставили на культуре клеток НГУК-1, выращенных в пенициллиновых флаконах (первоначальный рассев во флаконы был 1,2 мл суспензии клеток во флакон) при постоянной дозе вируса болезни Ауески равной 100 ТЦД50/0,1 см3 по ГОСТу 257.53. Для постановки реакции вируснейтрализации брали 100 ТЦД50/о,і смз доз вируса, штамм «Производственный», (первоначальный титр вируса составлял 6,25 lg ЩЦ5о/смз) В качестве специфических сывороток использовали сыворотки крови двукратно иммунизированных поросят 2-6 месячного возраста: - иммунизированных вирусвакциной ВГНКИ против болезни Ауески производства ФГУП "Покровского завода биопрепаратов"; - иммунизированных вирусвакциной против болезни Ауески свиней и овец сухую культуральную из маркированного штамма «ВК»; В качестве контроля использовались сыворотки крови интактных животных (контроль). Разведения сывороток крови готовили на поддерживающей среде для культуры клеток НГУК-1 (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32).
Сыворотки в каждом разведении в объеме 0,5 мл соединяли с 0,5 мл вируса и ставили на контакт в термостат. Для каждого разведения сыворотки крови, контактируемой с вирусом, готовили по 4 флакона с выращенными клетками НГУК-1. Далее в каждый флакон вводили по 0,2 мл компонента сыворотка-вирус и по 0,8 мл поддерживающей среды, предварительно вылив из флаконов с культурой клеток ростовую среду. В качестве контроля оставляется: 4 флакона с культурой клеток, в которую вносится поддерживающая среда; - 4 флакона с культурой клеток, в которую вносится постоянная доза вируса (0,1 мл вируса на 0,9 мл поддерживающей среды). Параллельно с постановкой РВН сыворотки крови подвергали исследованию на определение антител с помощью диагностического набора, изготовленный на основе маркированного (делеционного по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА и «Набора препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески» утвержденного МСХ РФ 12 мая 2008 г. Результаты исследования представлены в таблице 12. Как видно из представленных данных, сыворотки крови иммунизированных как традиционной, так и маркированной вакцинами животных содержат антитела против вируса болезни Ауески в титрах 19,2±7,2 и 18,9±7,2, что обеспечивает защиту от заболевания болезнью Ауески. Научно обосновано, что минимальный титр антител в сыворотке крови, определяемый в РВН, предохраняющий от заражения вирусом болезни Ауески, составляет 1:8. При этом в контрольной культуре клеток, зараженной вирусом БА, штамм «Производственный», ЦПД на 4 креста (++++) наблюдалось через 18-24 часа, тогда как в контрольной культуре клеток, не зараженной вирусом монослой полностью сохранился.
Титры же антител в сыворотках крови, иммунизированных как традиционной, так и маркированной вакцинами, при исследовании с помощью диагностического набора, изготовленного на основе маркированного (делеционного по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА, составляют 4б,5±1.8 и выше. При этом титр антител в сыворотках крови иммунизированных традиционной вакциной животных, выявленных с помощью «Набора препаратов для определения в РИГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески», составил 46,7±2,4, тогда как титр антител в сыворотках крови иммунизированных маркированной вакциной животных, составил 3,8±1,4. Результаты показывают, что с помощью диагностического набора, изготовленного на основе маркированного штамма "ВК" вируса БА можно дифференцировать, вакцинировано поголовье маркированной вакциной, либо вакцинировано традиционной вакциной или инфицировано полевым вирусом. В настоящее время широко применяется термин - иммунологический мониторинг, под которым следует понимать систему непрерывного контроля за иммунологическим состоянием животных, а также циркуляцией возбудителя с определением их антигенных свойств. Иммуномониторинг включает два основных подраздела: 1 - раннюю диагностику, ориентированную на быструю индикацию возбудителей инфекционных болезней и их специфических антигенов; при этом индикация возбудителя рассчитана на самые ранние сроки инфекционного процесса, вплоть до инкубации, которая также предполагает обследование объектов внешней среды с целью специфической индикации биологических агентов; 2- ретроспективную диагностику, направленную на определение антител - специфической реакции организма в процессе инфицирования или вакцинации. Для определения эффективности вакцинопрофилактики используются реакция вируснейтрализации (РВН) по общепринятой методике, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА), иммуноферментный анализ (ИФА). В этой связи диагностикумы для РНГА («Набор препаратов для определения в РНГА специфических антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески» утвержденный МСХ РФ 12 мая 2008 г. и диагностический набор, изготовленный на основе маркированного (делеционного по гликопротеину gE) штамма "ВК" вируса БА) нами, совместно с сотрудниками лаборатории использованы в условиях свиноводческих комплексов, таких как ОАО СГЖ «Звениговский» Республики Марий Эл, ОАО СКП «Озерный» Высокогорского района РТ. Результаты представлены в актах приложения.
