Введение к работе
1.1 Актуальность темы. Инфекционный кератоконъюнктивит (ИКК) крупного рогатого скота бактериальной этиологии в последние годы приобрел широкое распространение во всем мире. В настоящее время сформировалось общее представление о том, что ведущая роль в возникновении ИКК крупного рогатого скота принадлежит бактериям Moraxella bovis (Иванов А.В., 2005; Гаффаров Х.З. с соавт., 1998, 2007; Angelos J. A., 2001; Postoma G. C, 2008).
Заболевание наносит значительный экономический ущерб сельскохозяйственному производству за счет снижения продуктивности, потерь живой массы, иногда падежа, а также расходов на дорогостоящее лечение.
Особое место в мероприятиях по борьбе с кератоконъюнктивитом занимает диагностика и специфическая профилактика (Bishop B., 1982; McConnel C.S., 2008). Мировая ветеринарная наука за последние годы достигла значительных успехов в вопросе диагностики, профилактики и лечения ИКК крупного рогатого скота. Для специфической профилактики ИКК крупного рогатого скота используются ряд вакцин, отличающихся по принципам получения и по методу проведения вакцинации (Hughes D. E., 1976; Pugh G.W., 1977; Lepper A.W. et al., 1995; Burns M. J., 2008; O’Connor A.M., 2011).
В ФГБУ "ФЦТРБ-ВНИВИ" разработана и широко используется в различных регионах РФ ассоциированная вакцина против инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота (ИКК КРС) на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа 1 (Иванов А.В., Гаффаров Х.З. и др., 2008; Спиридонов Г.Н., 2008).
С целью разработки более эффективных и адекватных методов диагностики требуются новые методические подходы, основанные на достижениях биологической науки и научно-технического прогресса в целом. В связи с этим одним из главных направлений ветеринарной диагностики является создание простых в использовании и надежных иммунохимических методов.
В лабораторной диагностике многих болезней широкое применение находит иммуноферментный анализ (ИФА) (Васильев Д. А., 1998; Хисматуллина Н.А., 2002). Использование ИФА может иметь важное значение и для серологического мониторинга инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота, а также изучения иммунного статуса в регионах, где проводилась вакцинация.
Метод иммуноферментного анализа универсален, обладает высокой специфичностью и чувствительностью, не требует сложного оборудования, и приемлем для проведения анализов в массовых количествах.
В настоящее время в Российской Федерации не разработаны методы серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота. Исходя из этого, проведение исследований по разработке отечественных иммуноферментных тест-систем для выявления специфических антител к бактериям Moraxella bovis является актуальной задачей, имеющей научное и практическое значение.
1.2 Цель и задачи исследований. Целью работы явилась разработка «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)», предназначенного для серологической диагностики инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота и иммунологического мониторинга вакцинированного поголовья. Для выполнения вышеуказанной цели были поставлены следующие задачи:
1. Провести эпизоотологический мониторинг и изучить иммунобиологические свойства выделенных бактерий Moraxella bovis - возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота;
2. Разработать технологию изготовления компонентов тест-системы ИФА, предназначенной для серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота и определения уровня поствакцинальных антител и стандартизировать условия ее проведения;
3. Провести оценку активности, специфичности и воспроизводимости иммуноферментной тест-системы путем тестирования сывороток крови, полученных от вакцинированных и больных инфекционным кератоконъюнктивитом крупного рогатого скота;
4. Определить диагностическую ценность иммуноферментной тест-системы в лабораторных и производственных условиях, а также провести серологический мониторинг в отношении ИКК крупного рогатого скота в хозяйствах регионах Среднего Поволжья и Предуралья.
1.3 Научная новизна работы. Впервые в РФ разработан «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)». Оптимизированы условия проведения иммуноферментного анализа. В ходе исследований установлена чувствительность, специфичность и воспроизводимость иммуноферментной тест-системы.
Положительные результаты лабораторных испытаний тест-системы подтверждены в производственных условиях.
1.4 Практическая значимость работы. Внедрение разработанной иммуноферментной тест-системы в практику ветеринарных лабораторий РФ позволит решить проблему как серологической диагностики ИКК крупного рогатого скота, так и оценки напряженности поствакцинального иммунитета.
Разработаны нормативные документы, регламентирующие изготовление, контроль и применение данной тест-системы, в частности:
технические условия на «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)», ТУ 9388 – 009-00492374-2013 (утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласованы ГУВ КМ РТ 7 июня 2013 г);
инструкция по применению «Набора препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)» (утверждены директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», согласованы ГУВ КМ РТ 7 июня 2013 г);
инструкция по изготовлению и контролю «Набор препаратов для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа (ИКК-СЕРОТЕСТ)» (утверждена директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» 7 июня 2013 г).
1.5 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Эпизоотология ИКК в регионах Среднего Поволжья и Предуралья. Характеристика иммунобиологических свойств выделенных бактерий Moraxella bovis - возбудителя ИКК крупного рогатого скота;
2. Технология изготовления специфических компонентов тест-системы ИФА для серологической диагностики ИКК КРС и определения уровня поствакцинальных антител к бактериям Moraxella bovis;
3. Диагностическая ценность иммуноферментной тест-системы, анализ и интерпретация результатов испытания набора;
4. Результаты серологического мониторинга ИКК крупного рогатого скота в хозяйствах Среднего Поволжья и Предуралья.
1.6 Апробация работы.
Материалы диссертации доложены и получили положительную оценку на: ежегодных заседаниях Ученого совета ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» при обсуждении отчетов о НИР за 2008-2012 гг.; Международных и Всероссийских научно-практических конференциях (Самара, 2009; Владимир, 2010; Краснообск, 2010; Москва, 2011; Казань, 2008, 2011, 2013).
1.7 Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в т.ч. 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
1.8 Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах компьютерного текста и включает разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы и приложения, содержит 272 источника, в том числе 144 иностранных авторов и приложения. Диссертация содержит 13 таблиц и иллюстрирована 5 рисунками.
