Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы
2.1 Инфекции смешанной этиологии у свиней 10
2.2. Эпизоотическая ситуация по КРБС в странах 14
2.3. Эпизоотическая ситуация по ЮРБС в Российской Федерации 15
2.4. Энзоотическая пневмония свиней 19
2.5. Репродуктивный и респираторный синдром свиней 22
2.6. Респираторная коронавирусная инфекция свиней 24
2.7. Цирковирусная инфекция свиней 25
2.8. Болезнь Ауески 29
2.9. Ротавирусная инфекция свиней 31
2.10. Метод иммуноферментного анализа в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний 34
2.11. Эпизоотологические исследования 38
2.11.1. Методы исследований в популяции 38
2.11.2. Определение объёма выборки 39
2.11.3. Принцип отбора проб для расчета превалентности 44
2.12. Методы поиска этиологических факторов болезни 45
2.13. Заключение по обзору литературы 48
3 Собственные исследования 52
3.1 Материалы и методы 52
3.1.1. Материалы 52
3.1.2. Методы 54
3.1.2.1. Методы анализа данных 55
3.1.2.2. Формирование выборки 58
3.3. Результаты собственных исследований 59
3.3.1. Разработка тест-систем на основе ИФА 59
3.3.1.1 Разработка непрямого варианта ИФА для выявления антител к ротавирусу свиней в сыворотках крови методом одного разведения 59
3.3.1.1.1. Применение разработанного варианта ИФА 65
3.3.1.2. Разработка непрямого варианта ИФА для определения антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней 66
3.3.1.2.1. Применение разработанного варианта ИФА 68
3.3.2. Изучение серопревалентности возбудителей болезней свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ 70
3.3.2.1. Характеристики применённых тест-систем 73
3.3.2.2. Серопревалентность исследуемых возбудителей в группах доращивания хозяйств ЦФО РФ 77
3.3.2.2.1. Серопревалентность возбудителя РРСС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 81
3.3.2.2.2. Серопревалентность M.hyopneumoniae в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 88
3.3.2.2.3. Серопревалентность РКВС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 95
3.3.2.2.4. Серопревалентность цирковируса 2 типа в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 99
3.3.2.2.4.1 Серопревалентность парвовируса в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 103
3.3.2.2.5. Серопревалентность ротавируса в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ 105
3.3.3. Распространение комплекса респираторных болезней Свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ 108
3.3.3.1. Диагностическая значимость проведённого исследования 109
3.3.3.2. Модель факторного взаимодействия РРСС, ЦВС, M.hyopneumoniae, РКВС 114
3.3.3.3. Анализ количественной связи РРСС, ЦВС, M.hyopneumoniae, РКВС с клиническими проявлениями респираторных расстройств 118
3.3.3.4. Объединённая модель факторного взаимодействия РРСС, ЦВС, M.hyopneumoniae, РКВС при комплексе респираторных болезней свиней в ЦФО РФ у поросят групп доращивания 120
4. Обсуждение полученных результатов 122
5. Выводы 133
6. Практические предложения 134
7. Список литературы 135
Приложения 162
- Эпизоотическая ситуация по КРБС в странах
- Разработка непрямого варианта ИФА для выявления антител к ротавирусу свиней в сыворотках крови методом одного разведения
- Серопревалентность возбудителя РРСС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
- Серопревалентность РКВС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
Введение к работе
Актуальность темы. Свиноводство - развитая отрасль сельского хозяйства России, существенное влияние на эффективность которой оказывают инфекционные болезни. Средства и методы борьбы и предупреждения особоопасных и карантинных болезней разработаны и имеют своё применение. В тоже время, заболеваемость свиней в хозяйствах может принимать катастрофические масштабы вследствие возникновения факторных болезней [А.Г Шахов с соавт., 2004; В.В. Макаров, 2009].
Эпизоотическая ситуация в свиноводстве характеризуется распространением ряда инфекционных болезней, в том числе респираторно-репродуктивного синдрома свиней (РРСС) [С.А.Кукушкин, 2008; D.Maes, 2008], цирковирусной инфекции свиней (ЦВС-2) [Т. Дрю, 2005], гриппа свиней типа А (ГС) [R.DroIet, 2003; R.Zell, 2008], респираторной коронавирусной инфекции свиней (РКВС) [C.Chae, 2000; Y.Usami, 2008 ]. Не потеряли своей актуальности и микоплазмоз свиней [A. Cleveland-Nielsen, 2002], болезнь Ауески [А.А.Щевцов, 2008; L.Grau-Roma, 2007], ротавирусная инфекция свиней (РВС) [О.П. Бьядовская, 2005, А.И. Егорова, 2002], КЧС [S.Rossi, 2005; С. Terpstra, 2000] и трансмиссивный гастроэнтерит свиней (ТГС) [О.С. Пузанкова, 2003; Н.М. Know, 1998]. Экономическая значимость инфекционных болезней обусловлена высокими показателями заболеваемости, смертности и расходами при ликвидации возникшей вспышки [А.Я. Самуйленко с соавт., 2006; А. А. Сидорчук, 2004]. Серологический мониторинг данных инфекций наиболее востребован ввиду простоты и удобства применения средств серодиагностики, а разработка методов серологической диагностики, удовлетворяющих целям ведения мониторинга весьма актуальна.
Для промышленного свиноводства экономическую значимость представляют не столько отдельные возбудители, как их ассоциации, при которых патогенность возбудителей проявляется в полной мере, а ущерб
2 порой может достигать уровня особо опасных инфекций [L.A. Babiuk, 1988; P.M. Dorr, 2007].
Большое внимание уделяется комплексу респираторных болезней свиней (КРБС) [Б.Г. Орлянкин, 2006,2009], имеющему полиэтиологическую природу. Из возбудителей, причастных к КРБС в качестве первичного патологического фактора выступают вирусы РРСС, ЦВС-2, гриппа свиней типа A (H1N1, H3N2), РКВС, ВБА и бактериальные патогенны: Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica [Б.Г. Орлянкин, 2006; P.G. Halbur, 1998]. Также, как первичный патоген, весомую долю в этиологии КРБС занимает Mycoplasma hyopneumoniae, которая вместе с несколькими бактериальными патогенами (Pasteurella multocida, Haemophilus parasuis, Streptococcus suis, Actinobacillus suis, Actinomyces pyogenes и др.) вызывает более тяжелое заболевание - «энзоотическую пневмонию» [D. Maes, 1996].
Невозможность адекватного толкования этиологии конкретной вспышки, вызванной смешанной инфекцией, ведёт к низкой эффективности проводимых мероприятий. Причина заболеваемости - основной вопрос большинства эпидемиологических работ [S.A. Dee, 2000; M.Kundi, 2006; M.Susser, 1977]. Взаимосвязь причины и следствия на основе описательных и полевых наблюдений спорный вопрос, требующий перехода к аналитическим методам эпидемиологии [С.А. Дудников, 2004; S.E. Norell, 1995]. Выход из сложившейся ситуации заключается в использовании данных эпизоотологического обследования, клинического осмотра и результатов лабораторных исследований достоверно отобранных проб [A.R. Cameron, 1999; D.U. Pfeiffer, 2002].
Цели и задачи исследования. Основной целью исследования являлась разработка тест-систем для серологического мониторинга ротавирусной инфекции свиней и болезни Ауески и на основании серологического исследования определение степени распространения ротавирусной инфекции и возбудителей комплекса респираторных болезней (РРСС, ЦВС-2, РКВС, ГС и M.hyopneumoniae) в группах доращивания свиней в хозяйствах
з Центрального Федерального округа Российской Федерации (ЦФО РФ). Для достижения поставленных целей, было необходимо решить следующие задачи:
-
разработать методику для определения титра антител к возбудителю болезни Ауески в сыворотках крови свиней с помощью непрямого варианта иммуноферментного анализа (ИФА);
-
разработать методику для обнаружения антител к ротавирусу свиней в сыворотках крови с помощью непрямого варианта ИФА и установить серопревалентность ротавируса свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ;
3. изучить серопревалентность возбудителя репродуктивно-
респираторного синдрома свиней, гриппа свиней типа A (H1N1),
респираторного коронавируса свиней, цирковируса свиней 2 типа и
Mycoplasma hyopneumoniae у свиней групп доращивания в хозяйствах ЦФО
РФ;
4. определить основных возбудителей смешанных респираторных
болезней у свиней групп доращивания в хозяйствах ЦФО РФ используя
факторный анализ по Ротману [KJ.Rothman, 1976, 2005] и общую модель
факторного взаимодействия в форме диаграмм Венна.
Научная новизна исследований. Разработаны отечественные методики для выявления антител к ротавирусу в сыворотках крови свиней в непрямом варианте ИФА при тестировании проб в одном разведении и по определению титра антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней в непрямом варианте ИФА.
Проведен анализ данных ИФА, полученных при серологическом мониторинге свинопоголовья с использованием разработанных тест-систем и сравнительная оценка результатов исследований сывороток крови свиней с использованием разработанных иммуноферментных тест-систем, реакции микронейтрализации и коммерческих иммуноферментных наборов зарубежного производства.
Определены показатели превалентности антител к возбудителям ротавирусной инфекции свиней, РРСС, РКВС, ЦВС-2, M.hyopneumoniae на репрезентативной выборке свиней групп доращивания в хозяйствах ЦФО РФ.
Впервые на репрезентативной выборке поросят групп доращивания в условиях хозяйств ЦФО РФ с использованием факторного анализа по Ротману и общей модели факторного взаимодействия определены основные возбудители смешанных респираторных болезней свиней.
Практическая значимость работы. По материалам работы подготовлены, прошли комиссионные испытания, одобрены Ученым Советом и утверждены директором ФГУ «ВНИИЗЖ» следующие методики и методические указания:
«Методика определения титра антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней в непрямом варианте иммуноферментного анализа» (2006 г.)
«Методика выявления антител к ротавирусу в сыворотках крови свиней в непрямом варианте иммуноферментного анализа при тестировании проб в одном разведении» (2007 г.)
«Методические указания по выявлению антител к ротавирусу в сыворотках крови свиней в непрямом варианте иммуноферментного анализа при тестировании проб в одном разведении» (2008 г.)
«Методические указания по определению титра антител к вирусу болезни Ауески в сыворотках крови свиней в непрямом варианте иммуноферментного анализа» (2008 г.)
Результаты исследований сывороток крови от репрезентативной выборки поросят групп доращивания в хозяйствах ЦФО РФ и определения основных возбудителей смешанных респираторных болезней свиней с использованием факторного анализа по Ротману и общей модели факторного взаимодействия могут быть использованы при разработке и проведении
5 мероприятий по профилактике комплекса респираторных болезней свиней в хозяйствах ЦФО РФ.
Основные положения, выносимые на защиту:
данные по выявлению антител к вирусу болезни Луески в сыворотках крови свиней в разработанном непрямом варианте ИФА. Определение относительной чувствительности и специфичности разработанного варианта ИФА по сравнению с ИФА-набором CHEKIT-Aujeszky (Bommeli-IDEXX);
данные по выявлению антител к ротавирусу свиней в сыворотках крови свиней с помощью разработанного непрямого варианта ИФА при тестировании проб в одном разведении. Сравнения результатов тестирования проб в коммерческом наборе Ingezim rotavirus (INGENASA, Испания) и разработанном непрямом варианте ИФА;
результаты исследования серопревалентности ротавируса свиней в группах доращивания в хозяйствах ЦФО РФ;
результаты серологического исследования превалентности антител к возбудителям РРСС, ГС (H1N1), РКВС, M.hyopneumoniae, ЦВС-2 в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ;
- результаты определения основных возбудителей смешанных
респираторных болезней у свиней групп доращивания в хозяйствах ЦФО РФ
с использованием факторного анализа по Ротману [K.J.Rothman, 1976, 2005]
и общей модели факторного взаимодействия в форме диаграмм Венна.
Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Отдельные этапы исследований выполнены совместно с к.в.н. С.А. Дудниковым, к.б.н. О.П. Бъядовской, вед. биол. О.Г. Андреевой, к.б.н. С.Н. Колосовым, за что автор выражает им искреннюю благодарность.
Апробация работы. Основные результаты исследований доложены и опубликованы в материалах научных конференций: «Диагностика профилактика и лечение болезней животных» (Новосибирск, 2008), «Достижения молодых ученых в ветеринарную практику», посвященная 50-
6 летию создания ФГУ «ВНИИЗЖ» (Владимир, 16-18 апреля 2008), а также на заседаниях учёного совета ФГУ «ВНИИЗЖ» 2005-2008 гг.
Публикация научных исследований. По теме диссертационной работы опубликованы 8 научных статей в журналах и материалах научных конференций, 4 из них в изданиях рекомендованных ВАК РФ.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 166 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 24 таблицами и 14 рисунками. Список литературы включает 235 источников, в том числе 183 -иностранных.
Эпизоотическая ситуация по КРБС в странах
Случаи КРБС отмечены на свинофермах во многих странах мира. Наиболее часто выделяемые патогены - это вирус РРСС, М.hyopneumoniae, вирус ГС, ВБЛ, ЦВС-2, A.pleuropneumoniae и H.parasuis [30,76,117,121,122,135]. При этом вирус РРСС и вирус гриппа свиней явились главными первичными вирусными патогенами респираторного симптомо-комплекса свиней на среднем Западе США, которые к тому же показали ассоциативное инфицирование свиней вместе с различными бактериальными патогенами. В частности, установлено одновременное появление новых подтипов вируса гриппа свиней [162,166,183]. Из 636 случаев респираторной болезни с участием ВГС, 321 (50,1%) типировали как H3N2, в 304 (47,8%) как H1N1, и 11 (1,7%) как HIN2 [76]. Проведенные Markowska-Daniel и Stankevicius (2005) исследования 2088 свиней из 36 ферм Польши и 647 свиней из 11 ферм Литвы показали наибольшее распространение подтипа H1N1. Уровень антител зависел от возраста животных. К подтипам H1N1, H1N2 и H3N2 в Польше уровень антител в группе отъема был у 12,4%, 5,6% и 3,5% животных, в Литве - 8,6%, 2,6% и 0% животных, соответственно. В группе откорма эти данные составили: в Польше - у 16,9%, 6,7% и 4% животных; в Литве - у 5,8%, 4,7% и 0% животных, соответственно [151].
Gutierrez-Martin в марте 1998 г установлено, что серопозитивными к А. pleuropneumoniae оказались 89,9% поросят, из которых 44,9% имели антитела к серотипам А и В возбудителя, в т. ч. 38,4%) - только к серотипу А и 6,6% только к серотипу В. Антитела к вирусу РРСС обнаружены в 88,6% исследованных сывороток крови. Положительными к ВБА были 73% животных. Положительные титры к вирусу гриппа выявлены у 30,6% животных, причем 28% из них имели антитела к подтипу H1N1 и только 6,6% - к подтипу H3N2. Двойную инфекцию обнаруживали с частотой 0,5%-12,1%, а тройную - 1,1%-40,9%. Одновременно к 4 возбудителям антитела зарегистрированы у 15,6% животных, и только 1 особь оказалась серонегативной по всем тестам. При учете клинических признаков устанавливались одышка, кашель, носовые истечения. Связи между респираторными нарушениями и наличием антител к какому-либо возбудителю не установлено [204].
Из проб патологического материала отобранного от 105 поросят Южной Кореи с признаками поражения респираторного тракта, в 80,9% случаев выделили ЦВС-2, в 62,9% вирус РРСС, парвовирус свиней в 57,1%, вирус гриппа свиней в 13,3%. При этом моноинфекция была обнаружена лишь у 23,8% животных, тогда 76,2% образцов патологического материала содержали патогенны в различных комбинациях [136].
Сероэпидемиологическое исследование респираторных инфекций в 150 откормочных стадах свиней в Бельгии было проведено D.Maes с соавторами. Увеличение серопревалентности к респираторным патогенам было связано с плотностью свинопоголовья в хозяйстве и в округе, а также с интенсивностью закупок животных. Наблюдалась положительная связь между серопрсвалентностью к различным подтипам вируса ГС, и отрицательная связь между ВБА и ГС (MINI). Уровни серопревалентности внутри стад к подтипам ГС увеличивались и в случаях повышения плотности стад, а процент серопозитивных к ВБА свиней возрастал при более плотной посадке животных [121]. Федерации
В Российской Федерации основная эпизоотологическая информация о респираторных болезнях свиней может быть получена из нескольких источников, которыми среди прочих являются: результаты текущих мониторинговых работ по определённому ряду болезней и научные работы, проводимые в рамках полевых исследований, также обращения владельцев животных. Однако, вся полученная информация изначально будет являться вторичной и не соответствовать текущим целям анализа в силу высокой разнородности источников данных и отсутствия качественной и/или количественной репрезентативности [13,208].
В ФГУ «ВНИИЗЖ». (2000-2005г.г.) было проведено исследование более 500 проб патологического материала от свиней с респираторной патологией, полученных из хозяйств различных регионов России, при этом наибольший процент (78,3%) проб положи тельных по ЦВС-2 было выявлено в группе доращивания (2-4 мес). Серологическое исследование 2000 проб полученных из 60 хозяйств различных регионов российской федерации, свидетельствовало о крайне широком распространении ЦВС-2 в хозяйствах РФ (96,6%). Серопозитивность среди поросят 2-4 месячного возраста была 31,1%, 4-6 мес. 42,2%о, а у ремонтного молодняка 40,5% [43].
Исследование 2500 проб патологического материала из свиноводческих хозяйств РФ в 1997-2006 г.г., проведённое в ФГУ «ВНИИЗЖ» показало, что в пробах патологического материала, взятого от больных и павших поросят с признаками поражения респираторного тракта, наиболее часто присутствовали цитомегаловирус свиней (70%), лимфотропный герпесвирус (61%), ЦВС-2 (69%), вирус РРСС (54%), H.parasuis (42%), P.multocida (28%), A.pleuvopneumoniae (11%), M.hyorhinis (38%), M.hyopneumoniae (24%) и ряд других. В течение 2004-2006 г.г. в 15 свиноводческих хозяйствах с различной численностью поголовья свиней были проведены исследования на базе ФГУ «ВНИИЗЖ» и районных и областных ветеринарных лабораторий. При этом респираторный симптомо-комплекс был широко распространён в хозяйствах России, а наиболее часто-выделяемыми при нём патогенами были вирус РРСС, ЦВС-2, H.parasuis, P.multocida, M.Hyopneumoniae, M.hyorhinis [17,51].
Разработка непрямого варианта ИФА для выявления антител к ротавирусу свиней в сыворотках крови методом одного разведения
Для выявления антител и определения их концентрации в сыворотках крови используется непрямой вариант ИФА методом одного разведения, который в последнее время получил наибольшую актуальность при проведении скрининговых исследований ввиду упрощения процедуры и простоты использования [169,207]. На основе ИФА в различных модификациях, использующих метод одного разведения, разработаны различные тест-системы. Этот же подход был использован в нашей работе для диагностики ротавирусной инфекции, поскольку при определении уровня антител, а также для изучении широты распространения данного вируса в свиноводческих хозяйствах, возникла необходимость исследования большого количества образцов сыворотки крови. Рядом авторов были предложены различные способы преобразования значений абсорбции, измеренной в отдельном разведении сыворотки, в титр антител. Широкое распространение получил метод регрессионного анализа, в котором используется линейная зависимость lg Т от lg S/P. Эта зависимость описывается формулой (7) [ 189]: LgT =А+В Lg(S/P) (7). В работе использовали инактивированный концентрированный антиген ротавируса свиней группы А серотииа G4 Р7 (штамм «KR-47»), полученный в монослойных перевиваемых культурах клеток RSK и MARK-145. Вирусную суспензию подвергали замораживанию и оттаиванию с последующим центрифугированием при 3000g 15 минут для освобождения от клеточного детрита. После этого проводили концентрирование с помощью осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ 6000) и центрифугирования при 6000g и HOOOg с последующим ультрацентрифугированием через слой 30%-ного раствора сахарозы при 55000g в течение 80 минут. Степень очистки контролировали электронно-микроскопическим методом. Титр антигена определяли в непрямом сэндвич-варианте ИФА. При проведении непрямого варианта ИФА все компоненты реакции вносили в объёме 50 мкл/лунку. Разведения антигена готовили на 0,05М карбонатно-бикарбонатном буфере, рН-9,5-9,6. В качестве блокирующего буферного раствора применяли трис-буферный раствор (ТБР) рН-7,4-7,6 с 10% сыворотки крови лошади. Для разведения исследуемых проб сыворотки крови и конъюгата использовали 3% раствор лошадиной сыворотки на промывочном буфере. Промывочный буфер готовили из трис-буферного раствора (ТБР) с добавлением 0,05% Tween-20. Между этапами реакции несвязавшиеся компоненты удаляли путём промывания лунок планшета 3-4 раза промывочным буфером. Для выявления связавшихся антител использовали препарат антител против иммуноглобулинов свиньи, меченных пероксидазой хрена (ИЭиМ им. Н. М. Гамалеи, Москва). Индикацию проводили с помощью добавления хромоген-субстратного раствора АБТС (2,2 -азшіо-ди[3-зтил]бензтиазолинсульфоновая кислота) (Sigma). Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре «Униплан» (г. Москва) при длине волны 405нм. Разведения сывороток готовили с двукратным шагом от 1:20 до 1:2560. В качестве положительного контроля использовали сыворотку крови свиней, специфичную к ротавирусу, с титром в непрямом варианте ИФА 1:160-640. В качестве отрицательного контроля использовали полевую сыворотку крови свиней, не содержащую антител к ротавирусу, с титром в непрямом варианте ИФА меньше, чем 1:20. Исследуемые сыворотки крови свиней были также протестированы в тест-системе Ingezim rotavirus (INGENASA, РІспания). Результаты анализа выражали в виде титра сыворотки. Титром сыворотки считали ее максимальное разведение, при котором величина оптической плотности в 2 раза превосходила оптическую плотность в лунках с отрицательной контрольной сывороткой. Положительными считали пробы сывороток крови с титром 1:160 и выше. Для определения оптимального разведения сыворотки предварительно в непрямом варианте ИФА методом последовательных разведений тестировали сыворотки крови свиней с различным уровнем антител к ротавирусу свиней (60 сывороток). Для разведений 1:80, 1:160, 1:320 вычисляли значения S/P: S/P 80, S/P 160, S/P 320 по формуле: S/P = (ОП - NC)/(PC - NC), где ОП - оптическая плотность образца, NC - оптическая плотность отрицательной сыворотки, PC — оптическая плотность положительной сыворотки. Полученные результаты для соответствующих разведений подвергали статистической обработке, которая позволила рассчитать значения коэффициента корреляции (г), стандартную ошибку и построить линию регрессии для каждого выбранного разведения (табл. 3).
Серопревалентность возбудителя РРСС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
Относительно серологического профиля возбудителя РРСС, по ряду литературных данных известно, что антитела к вирусу могут быть выявлены уже через 7-14 дней после заражения, и уровни антител достигают максимальных титров к 30-50 дню. Некоторые свиньи могут стать серонегативными за 3-6 месяцев, но остальные остаются серопозитивными намного дольше. Нейтрализующие антитела вырабатываются медленно и не достигают высоких титров. Они могут быть обнаружены с 3 по 4 неделю после заражения, и сохраняются в течение 1 года или более. Обширного исследования относительно продолжительности действия титров антител после заражения еще не было проведено. Время полу-жизни материнских антител составляет 12-14 дней, а титры материнских антител, в общем, могут выявляться до 4-8 недель после рождения, в зависимости от титра антител свиноматки при рождении. В зараженной популяции, у свиней, рожденных от серопозитивных самок, может активно проходить сероконверсия с возраста 3-6 недель [8,19].
В среднем по ЦФО внутри стад уровень серопревалентности РРСС составил 43,51%, при этом в серопозитивных стадах среднее значение было 64,12%, а между стад ЦФО на уровне 67,86%.
Согласно методике использованного теста (IDEXX Herd Chek PRRS test kit (IDEXX laboratories)), оценили серопозитивность проб к РРСС посредством S/P (серопозитивновсти проб в ИФА (СП)).
Как видно из представленной выше табл.14, основной массив (364 из 367) позитивных проб лежит в интервале S/P (серопозитивновсти проб в ИФА (СП)) от 0,4 до 3,4, а оставшиеся 3 позитивные пробы попадают в интервал 0,20 СП =0,40, т.е в пограничный интервал положительного значения теста. При этом 246 проб (67,03% позитивных) лежали в интервале 0,80 СП =2,00. Таким образом, практически все позитивные пробы отличались высоким значением S/P в ИФА.
Частотная диаграмма значений S/P проб (серопозитивновсти проб в ИФА (СП)) в гест системе на основе ИФА (IDEXX Herd Chek PRRS test kit (IDEXX laboratories)) также наглядно продемонстрировала концентрирование около значений СП для серопозитивных /серонегативных проб в ИФА в 28 хозяйствах (рис.4). Таким образом, данное концентрирование было свойственно и внутри хозяйств.
В целом по ЦФО внутри серопозитивных стад уровень серопревалентности, без учёта отрицательных выбросов (3,02% и 12,08% в двух стадах Владимирской области) составил 70,78%±19,8 (М±т) при уровне межстадной серопревалентности с учётом исключения двух отрицательных выбросов 60,7%, что указывает на широкое распространение вируса РРСС внутри групп доращивания в стадах ЦФО.
При этом плотности распределения уровней серопревалеитности РРСС внутри стад в серопозитивных хозяйствах ЦФО (при min=:40,82% и тах=100%), исключая отрицательные выбросы, показывают два экстремума (в интервале 50%-60% и 80%-90% (п=4), и практически провал в интервалах от 60% до 80% (п=1 и п=2 соответственно) (табл. 15).
Согласно представленной выше табл.15 распределения плотности серопревалентности в серопозитивных к РРСС хозяйствах, кумулятивный процент хозяйств достигает показателя 41% при достижении интервала =60%, к интервалу =90% уже составляет 82%, а в интервале 60%-80% характеризуется небольшим приростом (около 17%) по сравнению с переходом в интервал 80%-100% (около 41%). Таким образом, среди серопозитивных хозяйств ЦФО по уровню серопревалентности внутри стад выделяются две группы: с уровнем внутристадной серопревалентности от 40% до 60% и от 80% до 100%, т.е. бимодальность для хозяйств вошедших в выборку, подтверждает, что распределение не является нормальным.
Анализ показателей серопревалентности внутри стад среди различных по численности поголовья хозяйств (3 категории: «большое» ( 30 тыс. гол.) «среднее» (до 15 тыс. гол.) и «малое» ( 5 тыс.гол.)) указал на неоднородность уровней для данных категорий (при значении р=0,06997). При этом проведённый корреляционный анализ показал положительную слабую связь между уровнем сероконверсии к вирусу РРСС и размером хозяйства (значение г =0,4373 при р=0,02).
Для серопозитивных к РРСС хозяйств трёх категорий (п=16) среднее значение серопревалентности внутри стад составило 64,12%±27,39% (М±га), а без учёта отрицательного выброса в двух случаях (3,02% и 12%) 70,78%±19,6% (М±т) (табл. 16).
Как видно из табл.16, среди больших по численности поголовья (п-8) серопозитивных к вирусу РРСС хозяйств (87,5% стад, п=7) значение серопревалентности внутри стад в среднем составило 74,00%±21,7% (М±т), а дисперсионный анализ указывает на относительно низкую вариацию показателя для данной категории (F F0.95, 9,85 4,75).
Среди попавших в категорию хозяйств с поголовьем до 15 тыс.голов (п=9) серопозитивных к вирусу РРСС хозяйств (66,66%) стад, п=5) значение серопревалентности внутри стад в среднем без учёта отрицательного выброса(3,02% в одном случае) 69,5±21,3% (М±т), среди серопозитивных хозяйств данной категории. Дисперсионный анализ в данной категории указывает на относительно высокую вариацию уровня серопревалентности (F F0.95, 17,50 4,49).
Для хозяйств, попавших в категорию 5 тыс.гол. (п=11) разброс показателей серопревалентности РРСС внутри стад наиболее велик ((М±т) 25,00±34,47%), среди серопозитивных стад (36,36% стад, п=4, без учёта отрицательного выброса 12,8%) 66,6±18,7% (М±т). Дисперсионный анализ в данной категории среди серопозитивных хозяйств показал достаточную неоднородность (F F095, 12,74 » 5,98).
Серопревалентность РКВС в группах доращивания свиней в хозяйствах ЦФО РФ
Респираторная коронавирусная инфекция свиней в последние годы в России, всё чаще рассматривается как неотъемлемая часть импортируемого ремонтного молодняка [3]. Острые дебаты о вреде и/или пользе РКВС для товарных свиноводческих хозяйств не прекращаются и по сей день. Определённые сложности РКВС внёс в серологическую диагностику ТГС, что ознаменовалось разработками тест-систем для дифференцирования антительного ответа у свиней на РКВС от такового на вирус ТГС.
Меж тем, отсутствие данных о серопревалентности РКВС в стадах свиней РФ, явилось ещё одним из аргументов в пользу выяснения актуальности данного респираторного патогена для свинопоголовья хозяйств ЦФО РФ.
Для респираторного коронавируса свиней показатель серопревалентности между стад в среднем по ЦФО была на уровне 53,57%. Внутри серопозитивных стад ЦФО показатель достиг уровня 63,17%. Однако имелись большие различия в показателях уровней серопревалентности внутри отдельных хозяйств ЦФО РФ. Из четырёх областей, для которых число кластеров внутри области было больше грех (п 3) для хозяйств Белгородской области заметны проявления частотного максимума около значения внутристадной серопревалентности 100%. А частотное распределение хозяйств Смоленской области показывает, что серопозитивиые стада сконцентрированы вблизи показателя внутристадной серопревалентности РКВС 5%. Для хозяйств Воронежской области мы наблюдали отсутствие серопозитивных к РКВС стад, с чёткой концентрацией серонегативных.
Среди серопозитивных к РКВС стад ЦФО не все стада имели одинаковый уровень серопревалентности РКВС (63,17%±46,55% (М±т)), и хотя циркуляция вируса было присуща не всем стадам в равной мере, показатели серопревалентности стремятся к однородности (F Fo.9s; 7,43 4,23), а мода показателя серопревалентности в нутри се ропозитивных стад равна 100% (7стад из 15серопозитивных) (рис.8) .
При этом к возбудителю трансмиссивного гастроэнтерита свиней все поросята (847 проб) были серонегативны.
Как представлено на диаграмме (рис.8), из 15 поражённых хозяйств 9 имели уровень серопревалентности РКВС внутри стад свыше 90% (60% поражённых стад), в 5 стадах уровень находился в диапазоне 0% Тр 10%, а в одном стаде показатель был равен 31,54%.
Таким образом, для дальнейшего анализа мы разбили серопозитивные стада на 2 группы. В первую группу «тотально-пораженных» стад вошли 9 хозяйств с уровнем серопревалентности РКВС не ниже 90%, а во вторую группу «незначительно-поражённых» 5 хозяйств с уровнем до 10%.
Так в группе «тотально-пораженных» стад уровень серопревалентности был достаточно стабилен 99,48±1,26% (М±т), а в группе «незначительно-поражённых» разброс был достаточно велик 4,14±3,18% (М±т).
Дисперсионный анализ свидетельствовал о большой вариации серопревалентности внутри трёх категорий хозяйств (по численности поголовья) и между категориями (при р»0,05). Что было следствием попадания стад трёх категорий как в группу «тотально-поражённых», так и в группу «незначительно-поражённые».
В категории до 5 тыс.гол. среди серопозитивных хозяйств в среднем серопревалентность между стад была на уровне 55,62±48,40% (М±т), при этом 2 стада попали в группу «незначительно-поражённых» (40,00% в группе), и 3 стада в группу «тотально-пораженных» (33,33% в группе), одно хозяйство (с уровнем серопревалентности 31,54%) не вошло ни в одну из групп. Серопревалентность РКВС между стад в данной категории составила 54,55%.
В категории «среднее» в каждую группу вошло по 2 серопозитивных хозяйства, за счёт чего средний уровень серопревалентности внутри серопозитивных стад категории сильно варьировал 52,45%±54,99% (M±m), а в группах доля стад категории до 15 тыс.гол. составила 40,00% и 22,22% для «незначительно-поражённых» и тотально-пораженных» соответственно. Между стад категории показатель серопревалентности был равен 44,44%).
Для категории 30 тыс.гол. в среднем уровень серопревалентности внутри серопозитивных стад составил 80,79%±42,43% (М±т), а без учёта отрицательного выброса в одном случае (4,90%) был относительно стабилен 99,77% ±0,46% (М±т). При этом в группу «незначительно-пораженных» попало лишь одно хозяйство, а в группе «тотально-поражённых» хозяйства категории 30 тыс.гол. превалировали (44,44%) в группе) над хозяйствами остальных категорий.
