Введение к работе
1.1 Актуальность темы. По данным международных организаций МЭБ и ВОЗ, ежегодно в мире регистрируется свыше 500 тыс. очагов инфекционных заболеваний, экономические потери от болезней животных составляют до 20% стоимости продукции в промышленно развитых странах и до 40% - в развивающихся. Несмотря на достигнутые успехи в профилактике инфекционных болезней, в том числе бешенства, болезни Ауески (БА) и бруцеллеза, эпизоотическая обстановка по данным инфекционным заболеваниям в Российской Федерации остается напряженной.
Последнее диктует необходимость разработки и внедрения в широкую практику эффективной научно обоснованной системы мероприятий с использованием наиболее совершенных средств диагностики и специфической профилактики.
Большой вклад в изучение указанных инфекционных болезней внесли многие отечественные и зарубежные ученые (Сочнев В.В., 1987; Груздев К.Н. и др., 2000; Иванов А.В., Юсупов Р.Х. и др., 2000; Непоколонов Е.А., 2000; Хисматуллина Н.А., 2000; Макаров В.В. и др., 2004; Сергеев В.А. и др., 2007; Гулюкин М.И. и др., 2008; Смирнов A.M., 2009; Донник И.М., 2009; Самуйленко А.Я., Федоров Ю.Н., Клюкина В.И., 2010; Beran G.W., Davies P.V., 1980; Lustofson D.P., 1986; Corbel M.J., 1997, Boschiroli M.L. e.a., 2001; Sauret I.M. e.a., 2002; Ts. Zakaria e.a., 2003; Ergonul O. e.a., 2004; Karabay O. e.a., 2004; Getinkaua Z. e.a., 2005; Alim A., Tomul Z.D., 2005).
В большинстве регионов России эпизоотическая ситуация по бешенству чрезвычайно сложна - резко активизировались природные очаги этой инфекции, увеличилось число случаев заболеваний среди диких плотоядных, домашних и сельскохозяйственных животных, ежегодно регистрируются случаи заболеваний людей с летальным исходом. Научно обоснованные противоэпизоотические и противоэпидемические мероприятия, должны основываться на изучении особенностей краевой эпизоотологии этого зооноза, своевременном выявлении возбудителя бешенства и изучении его биологических свойств, а также контроле за иммунным состоянием животных, вакцинированных против бешенства (Авилов В.М. и соавт., 1998; Полюшкина Г.С. и соавт., 1998).
Среди инфекционных болезней домашних и диких свиней важное экономическое значение имеет болезнь Ауески (БА). Международный опыт показывает, что искоренение заболевания возможно при применении стратегии борьбы, включающую выявление инфицированных животных и их выбраковку, а также реализацию комплекса санитарно-эпидемиологических и других мер. Выявление инфицированных животных проводится с использованием маркированных вакцинных штаммов вируса БА и дискриминирующих тестов, позволяющих дифференцировать поствакцинальный и постинфекционный иммунитет (Моренков О.С, 2002; Komaromi М., 2005). При этом дискриминирующие тесты основаны на использовании гликопротеинов или моноклональных антител, что определяет высокую себестоимость соответствующих исследований.
Бруцеллез представляет собой мировую проблему для медицинского и ветеринарного здравоохранения. Наиболее широко бруцеллез распространен в странах Средиземноморья, Малой Азии, Юга и Юго-Восточной Азии, Африки, Центральной и Южной Америки. В 90-е годы истекшего столетия резко обострилась эпизоотическая и эпидемическая ситуация по бруцеллезу в странах СНГ и России. Актуальными остаются вопросы профилактики и дифференциальной диагностики данного заболевания (Салмаков К.М. и др. 2010; Скляров О.Д., 2010 и др.).
1.2 Цель и задачи исследований. Цель исследований - анализ
эпизоотический ситуации и разработка средств диагностики бешенства,
болезни Ауески и бруцеллеза.
Для достижения поставленной цели ставились следующие задачи:
-
Изучить эпизоотическую ситуацию в Российской Федерации по заболеваемости животных бешенством, болезнью Ауески и бруцеллезу, в том числе по рабической инфекции в Республике Татарстан (РТ);
-
Изучить иммунобиологические свойства эпизоотических изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории Республики Татарстан, эффективность вакцинопрофилактики сельскохозяйственных животных против бешенства;
-
Разработать и внедрить высокоэффективные средства диагностики бешенства на основе МФА и ИФА;
-
Изучить чувствительность культур клеток к штаммам вируса болезни Ауески, эффективность вакцинопрофилактики в свиноводческих хозяйствах Республики Татарстан;
-
Разработать диагностические наборы на основе штаммов «ВГНКИ» и делепионного по гликопротеину gE штамма «ВК» вируса болезни Ауески;
6. Изучить антигенные и иммуногенные свойства живых, гамма-
инактивированных и гамма-инактивированных в сочетании с
иммуномодулятором тиосульфатом натрия противобруцеллезных вакцин из
слабоагглютиногенного штамма В. abortus 82 и агглютиногенного штамма В.
melitensis Рев-1;
7. Разработать и внедрить тест-систему для дифференциальной
серологической диагностики бруцеллеза и контроля иммунного ответа крупного
рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 82.
1.3 Научная новизна. Представлена эпизоотологическая характеристика
по бешенству, болезни Ауески, бруцеллезу в РФ; проведен анализ
распространения рабической инфекции на территории Республики Татарстан за
1970-2012 гг.; установлен уровень заболеваемости сельскохозяйственных,
диких и домашних животных в разрезе муниципальных районов; разработаны
карты эпизоотологического районирования территории; изучена периодичность
и сезонность проявления рабической инфекции; изучены некоторые
биологические свойства изолятов вируса бешенства, выделенных на
территории республики и установлено их антигенное сходство с вакцинным
штаммом. Изучена чувствительность культур клеток к штаммам вируса
болезни Ауески, эффективность вакцинопрофилактики в свиноводческих
хозяйствах Республики Татарстан. Впервые разработана технология изготовления эритроцитарного диагностикума на основе делеционного по гликопротеину gE вируса болезни Ауески, обеспечивающий дифференцированное выявление поствакцинальных и постинфекционных антител при указанной инфекции. Изучены антигенные и иммуногенные свойства живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин, разработан метод оценки иммуногенности вакцинных штаммов бруцелл, усовершенствована система специфической профилактики и ликвидации бруцеллеза крупного рогатого скота с применением живых вакцин из штаммов слабоагглютинногенного В.abortus 82 и инагглютинногенного В.abortus R-1096. Новизна полученных данных подтверждена Патентами РФ на изобретения: «Препарат против бешенства» (№2420309 от 10.06.2011 г.); «Способ оценки иммуногенности противобруцеллезных вакцинных штаммов» (№2419096 от 20.05.2011г.).
1.4 Теоретическая и практическая ценность работы заключается в том,
что на основе проведенных научных исследований, разработаны и
усовершенствованы средства эпизоотологического и иммунологического
мониторинга бешенства, болезни Ауески и бруцеллеза, которые
зарегистрированы в РФ, внедрены и востребованы производством:
«Флуоресцирующий антирабический глобулин»; «Набор препаратов для
лабораторной диагностики бешенства животных методом иммуноферментного
анализа (ИФА)»; «Набор препаратов для определения в РИГА специфических
антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески»; «Набор
препаратов для дифференциальной диагностики в РИГА специфических
антител у свиней, вакцинированных против болезни Ауески маркированной
вакциной из штамма «ВК»; «Набор для дифференциальной серологической
диагностики бруцеллёза и контроля иммунного ответа крупного рогатого скота,
иммунизированного вакциной из штамма В.abortus 82».
Разработаны и внедрены в производство 11 нормативных документов, в том числе методические указания по лабораторной диагностике бешенства, рекомендации по диагностике и профилактике бешенства, болезни Ауески и бруцеллеза животных, утвержденных в установленном порядке.
Результаты исследований используются на курсах повышения квалификации по специальности ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология и иммунология в ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».
1.5 Основные положения, выносимые на защиту:
характеристика эпизоотической ситуации по бешенству, болезни Ауески и бруцеллезу в РФ;
характеристика эпизоотической ситуации по заболеваемости бешенством в Республике Татарстан за 1970-2012 гг. и биологические свойства эпизоотических изолятов вируса бешенства, циркулирующих на территории республики;
разработка на основе МФА и ИФА усовершенствованных средств диагностики бешенства;
характеристика чувствительности культур клеток к вирусу болезни Ауески;
разработка диагностических наборов на основе штаммов «ВГНКИ» и делепионного по гликопротеину gE штамма «ВК» вируса болезни Ауески;
характеристика антигенных и иммуногенных свойств живых и гамма-инактивированных противобруцеллезных вакцин;
разработка набора препаратов для дифференциальной серологической диагностики бруцеллеза и контроля иммунного ответа крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной из штамма В. abortus 82.
1.6 Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и
одобрены на ежегодных отчетных научных сессиях ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по
итогам НИР за 2006-2012 гг.; Международной научно-практической конференции
«Актуальные проблемы здоровья скота, завозимого в Россию в рамках
национального проекта «Развитие агропромышленного комплекса»» (Казань,
2008); Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию
ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными,
экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных»
(Покров, 2008); Международной научно-практической конференции «Наука и
образование для целей биобезопасности» (Пушино, 2008); Международной научно-
практической конференции «Роль неправительственных научно-общественных
организаций в решении проблем, связанных с разработкой и внедрением
инновационных технологий» (Казань, 2009); Международной научно-практической
конференции «Инновации РАН» (Казань, 2010); Московской международной
научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов»
(Москва, 2010); Международной научно-практической конференции
«Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней»
(Екатеринбург, 2010); Международной научно-практической конференции
«Биотехнология: токсикологическая, радиационная и биологическая безопасность»,
посвященной 50-летию ФЦТРБ-ВНИВИ (Казань, 2010); Московской
международной научно-практической конференции «Биотехнология: состояние и
перспективы развития» (Москва, 2011); Международной научно-практической
конференции «Научные основы производства и обеспечения качества
биологических препаратов для АПК» (Щелково, 2012); Научно-практической
конференции «Микробиология в современной медицине» (Казань, 2013).
-
Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 68 научных работ, в том числе 12 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ, получено два патента РФ, в которых отражены основные положения и выводы диссертации.
-
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 318 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 33 таблицами и 13 рисунками. Список литературы включает 398 источников, в том числе - 112 зарубежных авторов.
