Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1. Краткие исторические данные 9
2.2. Дифференциация видов бруцелл 10
2.3. Пути заражения бруцеллезом 10
2.4. Распространение бруцеллеза 11
2.5. Клинические признаки бруцеллеза 12
2.6. Патогенез бруцеллеза 13
2.7. Патоморфология бруцеллеза 14
2.8. Иммунитет и специфическая профилактика бруцеллеза животных 15
2.8.1. Антигенные свойства 19
2.8.2. Инактивированные вакцины из штаммов 53Н38 и 45/20 27
2.9. Диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота 36
2.10. Дифференциальная диагностика бруцеллеза 38
2.11. Заключение 42
3. Собственные исследования 43
3.1. Материалы и методы исследований 43
3.2. Результаты исследований 46
3.2.1. Ретроспективное изучение эпизоотического состояния по бруцеллезу крупного рогатого скота в Астраханской области 46
3.2.2. Эффективность мероприятий в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота, проводимых в хозяйствах Астраханской области 67
3.2.3. Изучение эффективности малых доз вакцины из штамма 19 В. abortus при подкожном её введении 88
3.2.4. Оздоровление хозяйства от бруцеллеза КРС с применением вакцины из штамма 19 В. abortus в пониженных дозах 91
3.2.5. Эффективность конъюнктивальной иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 В. abortus 94
3.2.6. Оздоровление ООО «Волга» от бруцеллеза крупного рогатого скота с применением вакцины из штамма 19 В. abortus в пониженных дозах 99
3.3. Результаты исследований штаммов бруцелл, выделенных от абортированных плодов крупного рогатого скота в Астраханской области 100
3.3.1. Изучение свойств штаммов бруцелл 101
4.Обсуждение результатов исследований 112
Выводы 115
Практические предложения 116
Список использованной литературы 117
- Дифференциация видов бруцелл
- Иммунитет и специфическая профилактика бруцеллеза животных
- Ретроспективное изучение эпизоотического состояния по бруцеллезу крупного рогатого скота в Астраханской области
- Эффективность конъюнктивальной иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 В. abortus
Введение к работе
1.1. Актуальность темы. Бруцеллез - инфекционное заболевание,
которым заражаются практически все виды сельскохозяйственных и многие
виды диких животных, а также человек.
С момента открытия возбудителя Брюсом и Бангом до наших дней проведено огромное количество исследований в разных странах и изучено много вопросов, относящихся к бруцеллезу животных и человека. И в настоящее время интерес к изучению данной инфекции не ослабел, так как заболевания людей и животных бруцеллезом еще наблюдаются во многих странах мира.
Бруцеллез представляет собой мировую проблему, как для здравоохранения, так и для сельского хозяйства. Он является одной из наиболее сложных и в то же время опасных для людей антропозоонозных инфекционных болезней.
В настоящее время в Российской Федерации оздоровление хозяйств от бруцеллеза животных ведется при помощи противобруцеллезных вакцин. Используемые в нашей стране живые вакцины создают значительные неудобства. Самым главным из них является то, что у животных, привитых этими вакцинами в крови длительно сохраняются специфические антитела, что затрудняет определение эпизоотического состояния стад по бруцеллезу, то есть, отличить привитых животных от естественно больных бруцеллезом пока не представляется возможным.
Многие исследователи положительно оценивают роль подкожной и конъюнктивальной иммунизации и реиммунизации телок и взрослого крупного рогатого скота вакциной из агглютиногенного штамма 19 В. abortus в пониженных дозах (3-5 млрд.м.к.). В то же время нет единого мнения об эффективности указанных методов в борьбе с бруцеллезом животных.
1.2. Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась
изучение эффективности противобруцеллезных мероприятий в
сравнительном аспекте и их научно-обоснованное совершенствование.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
-
Изучить динамику заболеваемости бруцеллезом крупного рогатого скота в различных регионах Астраханской области;
-
Провести мониторинг эпизоотического процесса бруцеллеза крупного рогатого скота, определить территориальные и популяционные границы с различной степенью риска в Астраханской области;
-
Усовершенствование общих и специальных ветеринарно-санитарных мероприятий при бруцеллезе крупного рогатого скота в районах эпизоотического риска Астраханской области;
-
Провести сравнительное изучение эффективности схем подкожной иммунизации стандартной (80 млрд.м.к.), подкожной и конъюнктивальной реиммунизации пониженными дозами (3 и 5 млрд.м.к.) крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 В. abortus в лабораторных экспериментах и в хозяйствах, не благополучных по бруцеллезу крупного рогатого скота;
5) Идентификация и дифференциация культур бруцелл, выделенных от абортированных плодов крупного рогатого скота в хозяйствах Астраханской области.
Научная новизна работы. Впервые проведен анализ и обобщены результаты диагностической и профилактической работы ветеринарной службы Астраханской области по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота с I960 по 2006 год. Изучена эпизоотологическая эффективность противобруцеллезных мероприятий с применением вакцин из штаммов 19 и 82 В. abortus в Астраханской области. Установлена эффективность применения вакцины из штамма 19 в полной и малых дозах при подкожном и конъюнктивальном методах введения.
Практическая ценность. Установлено, что эпизоотологический мониторинг является определяющим в прогнозировании эпизоотического процесса при бруцеллезе крупного рогатого скота, который позволяет своевременно планировать и проводить с высокой эффективностью комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, направленных на борьбу с бруцеллезом.
В результате исследований была создана основа по совершенствованию противобруцеллезных мероприятий с использованием специфических средств защиты и предложены рекомендации по применению вакцин из штаммов 19 и 82 В. abortus для профилактики и борьбы с бруцеллезом крупного рогатого скота. Рекомендуются подкожный и конъюнктивальный методы введения вакцины из штамма 19 в малых дозах.
Основные положения и результаты, выносимые на защиту:
-
Анализ статистических данных ветеринарной отчетности по заболеваемости крупного рогатого скота бруцеллезом в Астраханской области за период 1960 по 2006 год.
-
Результаты сравнительной эффективности противобруцеллезных мероприятий с применением вакцин из штаммов 19 и 82 В. abortus против бруцеллеза крупного рогатого скота в Астраханской области.
-
Выделение культур бруцелл от абортированных плодов крупного рогатого скота. Изучение основных биологических свойств этих культур, их идентификация и дифференциация;
-
Эффективность подкожного и конъюнктивального методов применения высокоагглютиногенной вакцины из штамма 19 В. abortus в малых дозах в борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Л.Р.Коваленко (ВИЭВ) в 2007-2009 г.г.
Публикация. По материалам диссертационной работы опубликовано 4 статьи в научных журналах.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа представлена в одном томе состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических предложений. Диссертация изложена на 151 страницах компьютерного текста, иллюстрирована таблицами.
Список использованной литературы включает 148 наименований, в т.ч. 30 иностранных авторов.
Дифференциация видов бруцелл
По данным некоторых исследователей (104, 106) бруцеллез чаще всего регистрируется среди взрослых животных, а у молодняка, полученного от больных бруцеллезом матерей, отмечается наличие иммунологической толерантности.
Большинство исследователей считают, что источником возбудителя бруцеллеза являются зараженные животные, которые выделяют бруцелл с секретами и экскретами, загрязняя ими объекты окружающей природной среды, активизируя механизм передачи возбудителя (12, 130 и др.).
В инфицированной внешней среде бруцеллы сохраняют жизнеспособность до трех месяцев, создавая длительно действующий источник инфекции. Бактерии передаются через контакт с зараженными фекалиями, мочой, молоком и мясом. Животные могут заражаться алиментарным путем, через кожу или слизистые оболочки.
Известно, что бруцеллез человека и животных распространен довольно широко. В последнее время он регистрируется в 28 странах Европы, в 18 -Америки, в 12 - Азии, в 21 стране в Африке и в 3 странах Океании.
В Российской Федерации наиболее неблагополучными по бруцеллезу крупного рогатого скота являются Северный Кавказ, Ростовская, Астраханская, Волгоградская области, Республика Бурятия, Дагестан, Северная Осетия - Алания, Ставропольский край.
В докладе Международного эпизоотического бюро к странам, свободным от бруцеллеза, относятся Австралия, Великобритания, Дания, Канада, Кипр, Нидерланды, Новая Зеландия, Норвегия, Финляндия и Швеция (96).
Многие исследователи изучающие характер эпизоотического процесса бруцеллеза, отмечают, что распространение болезни во многом зависит от уровня развития агропромышленного комплекса, состояние противоэпизоотического обеспечения животноводства, разработки и своевременной реализации нормативных прогнозов сдерживания эпизоотии этой болезни.
Были случаи одновременного проявления бруцеллезной инфекции у животных нескольких видов в одном и том же эпизоотическом очаге: крупного рогатого скота, овец и коз - во Франции (119), крупного рогатого скота и овец - в Португалии.
По виду колоний и вирулентности различают гладкие, слизистые и шероховатые колонии. Типичные вирулентные бактерии образуют гладкие, прозрачные колонии (S-форма), которые имеют тенденцию трансформироваться в слабовирулентные (шероховатые) R-формы (12).
Из существующих шести видов бруцелл стабильно в R-форме находятся только В. ovis и В. canis. Остальные могут диссоциировать или реверсировать в ту или другую форму в зависимости от условий (56).
По данным отдельных ученных распространение бруцеллеза в неблагополучных стадах происходит, в основном, в стойловый период, а занос возбудителя болезни в благополучные стада - в пастбищный период (102).
По данным М.К. Юсковца (118) распространение бруцеллеза имеет характер энзоотии, иногда охватывающий значительное количество восприимчивых животных и даже всё поголовье хозяйства.
Бруцеллы обладают значительным диапазоном изменчивости (16,55,142). Переход к развитию сельскохозяйственного производства на основе разнообразных форм собственности и рыночных отношений, разукрупнение колхозов и совхозов, создания фермерских хозяйств и увеличения скота у населения на фоне общего ухудшения экологических условий, обусловливающие снижение общей резистентности организма животных, повысили экономическую, социальную и эпизоотологическую значимость проблемы бруцеллеза животных и человека в Российской Федерации.
У крупного рогатого скота основным клиническим признаком является аборт. Бурситы, гигромы и абсцессы наблюдается крайне редко.
Известно, что коровы после бруцеллезного аборта приобретают иммунитет к этой болезни и повторные выкидыши бывают редко.
У больных бруцеллезом коров наблюдаются маститы (80). По данным П.А. Вершиловой вследствие ряда эндогенных и экзогенных факторов инфекционный процесс при бруцеллезе, может формироваться без каких бы то ни было клинических проявлений. В таких случаях эволюция процесса будет проявляться лишь иммунологической перестройкой организма. В других случаях формирование инфекционного процесса и отдельные его патогенетические фазы сопровождаются свойственной для каждой стадии процесса ответной реакцией, которая проявляется клиническими симптомами.
Инкубационный период при бруцеллезе составляет 2-3 недели (17). По данным А.А. Хоча, Е.С. Слепцова (107) у больных бруцеллезом быков-производителей (северные олени) часто поражаются семенники. При этом происходить увеличение их объема в 2-3 раза.
Бруцеллез северных оленей характеризуется проявлением у больных животных клинических признаков. Наиболее часто наблюдаются поражение опорно-двигательного аппарата, семенников у быков-производителей, вымени у важенок, аборты и яловость.
Иммунитет и специфическая профилактика бруцеллеза животных
Установлено, что основой ликвидации инфекционных болезней является система общепрофилактических мероприятий. Однако, не менее важное значение имеют и специфические средства профилактики с применением которых значительно упрощается и облегчается предупреждение и ликвидация энзоотии не только в отдельно возникшем очаге инфекции, но и более широких масштабах.
Вакцинация сельскохозяйственных животных различными противобруцеллезными вакцинами имеет большую давность.
Многие работы, опубликованные в мировой литературе, показывают, что при бруцеллезе, как и при ряде других инфекционных болезней, метод специфической профилактики может быть использован с успехом. В настоящее время установилось почти единое мнение, что эффективность живых бруцеллезных вакцин из штаммов с ослабленной вирулентностью более высокая по сравнению с убитыми вакцинами.
В то же время данные о том, что при бруцеллезе в процессе самоизлечения возникает постинфекционный стерильный иммунитет, принципиально обосновали возможность воспроизведения иммунитета к бруцеллезу с помощью инактивированных вакцин.
До недавнего времени представление о характере иммунитета при бруцеллезе неправильно ограничивалось признанием лишь инфекционного нестерильного иммунитета, связанного с наличием в организме возбудителя (состояние премуниции по Сержану и Парро).
Работами Е.С. Орлова (82), Р.А. Циона и СМ. Овчинникова (108), В.А. Николаева (71), П.П. Самойлова (91), З.И. Кострулиной (50), Х.С. Котляровой (55), А.И. Кочурина (56) и др. было доказано, что в преобладающем числе случаев бруцеллезная инфекция у сельскохозяйственных животных заканчивается самоочищением организма от бруцелл. Согласно современному представлению о фазности иммунитета при бруцеллезе, развитым П.Ф. Здрадовским (38,39), инфекционному или нестерильному иммунитету соответствует период заселения организма бруцеллами (сепсис). Нестерильный инфекционный иммунитет постепенно усиливаясь превращается в стерильный постинфекционный иммунитет.
Положение об относительности иммунитета при бруцеллезе показано в работах многих ученых (23,130,141а и др.). Следует так же отметить, что при бруцеллезе отчетливо выражен перекрестный иммунитет. Работами ряда авторов (12,18,78 и др.) доказано, что инфицирование животных одним каким-либо видом бруцелл вызывает иммунитет не только к данному виду возбудителя, но и к возбудителям бруцеллеза других видов. Однако ряд авторов (36,40,131 и др.) указывает на преимущество типового иммунитета перед перекрестным.
Положительную оценку вакцинации крупного рогатого скота живыми вирулентными бруцеллами дали многие исследователи. В последующем метод прививки живыми вирулентными культурами был внедрен в широкую практику в Дании, Англии, Германии, Бельгии, Голландии, Швеции,
Франции, Австрии, Швейцарии, США и применялся свыше 20 лет для борьбы с абортами, пока не были установлены вредные последствия такой вакцинации.
К мнению, что прививки живой культурой ведут к резкому увеличению бруцеллоносителей и бруцелловыделителей, пришли ряд ученых (30,139). Многочисленными опытами показано, что иммунитет к бруцеллезу можно воспроизвести как живыми, так и убитыми вакцинами.
Проверка убитых корпускулярных вакцин, приготовленных из различных видов бруцелл, у большинства исследователей показала низкую их иммуногенную эффективность (12,77,132,140). Для изготовления вакцин некоторые исследователи стали применять штаммы с ослабленными свойствами.
Ряд авторов положительно оценивают иммуногенную эффективность различных убитых вакцин (9,36,44) и утверждают, что они предохраняют привитых животных не только от абортов, но и в значительной мере от заражения.
Тем не менее, большинство исследователей, проверявшие различные корпускулярные убитые вакцины, дали отрицательный, основанный на научных исследованиях, отзыв об их эффективности (3,25,43).
В то же время в ряде зарубежных стран для вакцинации животных рекомендуются убитые вакцины из корпускулярных антигенов. Из этих вакцин наибольшего внимания заслуживают две: вакцина, приготовленная"К-штамма В. abortus 45/20 и убитая вакцина из культуры В. melitensis Н-38 (129,133,138 и др.).
Ретроспективное изучение эпизоотического состояния по бруцеллезу крупного рогатого скота в Астраханской области
В Астраханской области бруцеллез сельскохозяйственных животных впервые был установлен в 1931-1932 годы. Однако вопросы эпизоотологии до настоящего времени недостаточно изучены.
Постановлением Совета министров СССР от 19 ноября 1949 года побудило проведение массовых профилактических и специальных мероприятий против бруцеллеза сельскохозяйственных животных. На основании этого постановления составлялись планы, где предусматривалось в течение короткого времени проведение поголовного обследования крупного рогатого скота с целью выяснения эпизоотического состояния животноводства области по бруцеллезу, определения перспективликвидации этой болезни. Эпизоотическая обстановка по бруцеллезу в области была сложной. Так, в 1960-е годы по бруцеллезу крупного рогатого скота насчитывалось 180 неблагополучных пунктов, заболеваемость людей бруцеллезом составляла до 13 человек в год (таблица 1). Таблица 1. В 1960 году, в период начала изучения нами эпизоотической ситуации по бруцеллезу сельскохозяйственных животных в Астраханской области крупный рогатый скот исследовался по реакции агглютинации (РА), реакции связывания комплемента или реакции длительного связывания комплемента (РСК/РДСК), кольцевой реакцией (КР) и роз бенгал пробой (РБП).
Положительно реагирующих животных концентрировали в бруцеллезных изоляторах. Колхозы и совхозы по экономическим соображениям не могли сокращать маточное поголовье. Организовалось летне-лагерное содержание скота, проводилась очистка и дезинфекция животноводческих помещений. Однако весь этот комплекс противобруцеллезных мероприятий не оказался эффективным в борьбе с бруцеллезом.
В Астраханской области до 1974 года для оздоровления хозяйств от бруцеллеза на крупном рогатом скоте применялась вакцина 19 В. abortus. В наставлении по проведению предохранительных прививок крупному рогатому скоту против бруцеллеза сухой живой вакциной из штамма 19 от 24 мая 1971 года рекомендовалось применять ее молодняку и взрослому скоту в хозяйствах, где при неоднократных исследованиях не прекращается выделение больных бруцеллезом животных, имеются аборты бруцеллезного происхождения и отсутствуют условия для изолированного выращивания молодняка.
В условиях Астраханской области еще со дня организации колхозов и совхозов практиковалось пополнение дойных гуртов нетелями. Молодняк содержался группами в приспособленных помещениях зимой, летом в лагерях, а после случки обязательно распределялся каждой доярке.
Таким образом, система ведения животноводства из-за отсутствия условий игнорировала изолированное выращивание молодняка и формирование из них отдельных здоровых гуртов. Поэтому применение вакцины из штамма 19 с учетом местных условий Астраханской области сталкивалось со многими неясными вопросами. Прежде всего, как определить состояние по бруцеллезу гуртов, пополняемых привитым молодняком, вакцинировать ли взрослый крупный рогатый скот, какие сроки и кратность вакцинации и ревакцинации и в соответствии с этим оценка реагирующих в отдаленные сроки после вакцинации, длительность применения прививок, применение малых доз и т.д. Требовалось также изучить, что даст вакцинация животных личного пользования, без чего в ряде районов нельзя было обойтись.
Для изучения хронологии эпизоотической ситуации по бруцеллезу крупного рогатого скота в Астраханской области рассмотрим, как проводилась оздоровление от бруцеллеза неблагополучных хозяйств с применением противобруцеллезной вакцины из штамма 19.
По отчетным данным Службы ветеринарии Астраханской области, областной ветеринарной лаборатории и районных ветеринарных станций и лабораторий с 1960 по 1974 годы в Астраханской области для оздоровления от бруцеллеза сельскохозяйственных животных применяли вакцину из штамма 19. Вакцина применялась в 180 пунктах, неблагополучных по бруцеллезу с общим поголовьем 151 тыс. крупного рогатого скота. При этом определялась динамика серологических и аллергических реакций у иммунизированных животных в хозяйствах с различным состоянием по бруцеллезу (таблица 2).
Иммунизация крупного рогатого скота вакцинами из штаммов 19 и 82 В. abortus, движение неблагополучных по бруцеллезу пунктов и эффективность применения вакцин в период 1960-2006 годы показано на рисунках 2, 3, 4, 5, 6, 7.
С целью выяснения безопасности животных, реагирующих положительно через 18-24 месяцев после вакцинаций их оставляли в гуртах, сроком на 6-12 месяцев при отсутствии клинических проявлений бруцеллеза. Ревакцинацию крупного рогатого скота проводили через 2 года, а иногда и через год и раньше при появлении абортов бруцеллезного происхождения в стаде, этот скот исследовался через 24-96 месяцев. Кратность или длительность прививок определялась исходя из эпизоотической ситуации хозяйства и данного района по бруцеллезу. Меры в отношении реагирующих после вакцинации определялись с учетом эпизоотологического и эпидемиологического состояния хозяйств и большой необходимостью в то время сохранением маточного поголовья.
Серологические и аллергические реакции применялись у животных по общепринятой методике. Хозяйство признавалось благополучным при получении двукратных отрицательных результатов исследований.
Климат Астраханской области умеренного пояса (атлантико-континентальный), для него типичен жаркое лето и холодная зима. В структуре валового регионального продукта сельское хозяйство занимает 5,5%. В животноводстве выделяется мясомолочное скотоводство и верблюдоводство. Сельскохозяйственные угодья составляют 64,0%) всех земель области, пашни - 7,2%.
Однако эти угодья распределились на территории области неодинаково. Так, в районах Приволжский, Камызякский и Володарский имеются большие массивы пастбищ и сенокосов, которые в избытке обеспечивают потребности животноводства. В Енотаевком, Харабалинском -наоборот, животные пасутся на ограниченных участках, расположенных в большинстве случаев, вблизи селений.
Эффективность конъюнктивальной иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 В. abortus
Профилактическая иммунизация крупного рогатого скота против бруцеллеза с использованием живых агглютиногенных вакцин при подкожном их введении в установленных наставлением дозах, как правило, сопровождается длительной серопозитивностью, которая не позволяет дифференцировать больных животных от привитых.
По сообщениям ряда исследователей исправить данный недостаток позволяет новый способ вакцинации. Это иммунизация животных путем аппликации вакцины на конъюнктиву глаз.
В 6-ом докладе Объединенного комитета экспертов по бруцеллезу ФАО/ВОЗ указывается, что конъюнктивальная иммунизация крупного рогатого скота вакциной из штамма 19 в дозах 5-10 млрд. живых бруцелл с интервалом 4-8 месяцев, создает напряженный иммунитет при слабо выраженном и быстро проходящем серологическом ответе.
В связи с указанным дальнейшее изучение конъюнктивального метода иммунизации крупного рогатого скота агглютиногенными вакцинами против бруцеллеза, несомненно, представляет интерес, как в научном, так и в практическом отношении.
С учетом изложенного выше, мы поставили перед собой задачу провести сравнительное испытание разных схем иммунизации и реиммунизации крупного рогатого скота вакциной из агглютиногенного штамма бруцелл конъюнктивальным методом. Опыт поставили на 15 телках 3-5-месячного возраста. Животных по принципу аналогов разделили на три группы и иммунизировали вакциной из штамма 19 В. abortus согласно схеме опыта, представленной в таблице 15.
После вакцинации серологические исследования подопытных телок на бруцеллез проводили в РБП, РА и РСК через 5, 10, 20, 30 дней и в последующем - ежемесячно. В эти же сроки исследовали животных контрольной группы.
При изучении динамики показателей гуморального иммунного ответа отмечена определенная закономерность сроков появления, угасания и уровня специфических антител в зависимости от дозы вакцины и способа ее введения.
При исследовании сывороток крови телок, привитых подкожно, агглютинины в РА обнаружены через 5 дней, а у вакцинированных конъюнктивально - через 15. Пик агглютининов приходился на 15-й день, а снизились они ниже диагностического уровня у привитых подкожно через 4 месяца, а у вакцинированных конъюнктивально - через 62 дня после иммунизации.
Комплементсвязывающие антитела были выявлены на 7-й день после вакцинации у животных, привитых подкожно, а у телок, иммунизированных конъюктивально - только на 30-й день. С 62-го дня у животных второй группы они полностью исчезли и не появились до конца наблюдения (390-й день). У животных же первой группы комплементсвязывающие антитела улавливались до 91-го дня включительно. На 15-й и 30-й сутки после вакцинации все животные этой группы реагировали в РСК положительно.
Таким образом, незначительный подъем уровня антител и быстрое их угасание отмечены у телок, иммунизированных конъюнктивальным способом.
Через 15 месяцев после прививки всех подопытных телок 1-й и 2-й групп реиммунизировали конъюнктивально вакциной из штамма 19 в дозе 5 млрд.м.к. Через 2 месяца после ревакцинации телок контрольной и подопытных групп осеменили искусственно спермой здорового быка.
После реиммунизации животных исследовали на бруцеллез серологически (РБП, РА, РСК) через 15, 30 дней, далее ежемесячно до 340-го дня. Исследования показали, что уровень агглютининов и процент реагирующих животных после ревакцинации, как и при первичной иммунизации, зависел от срока исследования и метода введения вакцины.
Так, антительный ответ у животных 1-й группы, привитых первично полной дозой вакцины из штамма 19 подкожно, ревакцинированных этой же вакциной конъюнктивальным методом в дозе 5 млрд.м.к., был значительно сильнее, чем у телок группы 2, дважды иммунизированных конъюнктивально этой же вакциной в дозе 5 млрд.м.к.. Если средние титры агглютининов по 1-й группе на 15, 30, 60-й и 90-й дни после реиммунизации составили соответственно 37,3; 30; 12,3 и 11,3, то по группе 2 эти показатели были в 2-4,5 раза ниже и равнялись 11,7; 7,0; 3,4 и 7,0 МЕ/мл. соответственно.
Телки 2-й группы после ревакцинации в диагностических титрах в РА не реагировали ни в одном случае, а комплементсвязывающие антитела начиная с 30-го дня после ревакцинации и до конца наблюдения (340 дней) не выявлялись ни у животных 1-й группы, ни у 2-й.
Через 11,5-12 месяцев после ревакцинации одна нетель из - 1-й группы, 3- из 2-й группы и одна из числа контрольных нормально отелились.
С целью проверки иммунитета через 340 дней после ревакцинации 10 подопытных (группы 1 и 2) и 5 контрольных (не вакцинированных) нетелей (группа 3), имеющих к этому времени 8-8,5 месяцев стельность, были заражены вирулентной культурой В. abortus 54 в дозе 11 млн.м.к., что составляет 44 инфицирующих доз.
После заражения животных в течение 45 дней 2 нетели из контрольной группы абортировали, а одна отелилась нормально. Все остальные нетели из групп 1 и 2 (10 голов) также нормально отелились. Все абортированные плоды и околоплодная жидкость были подвергнуты бактериологическому исследованию.
