Разработка и совершенствования средств и методов экстренной постэкспозиционной защиты центральной нервной системы животных от вируса бешенства Лебедько Евгений Иванович

Введение к работе

1. 1. Актуальность темы.

   Бешенство или гидрофобия (Rabies - лат., Lyssa - греч., Tollwut - нем., La Rage - франц., Rabies- англ., La Rabbia- итал.) – древнейшая неизлечимая, нейровирусная болезнь человека и животных, с раневым механизмом передачи вируса от животных к животным и от животных к человеку. (Груздев К.Н., Недосеков В.В., 2001; Knobel D.L. et al, 2005).

   Ежегодно в мире за антирабической помощью обращается более 12 млн. человек. Более 50 тыс. человек и 1 млн. животных погибают после укусов бешеными животными. Для более 3 миллиардов людей существует угроза подвергнуться нападению бешеных животных (Rotivel V. Et al, 1998; WHO technical report series, 2004; Бюл. ВОЗ 7.12, 2007).

   В РФ ситуация по бешенству также продолжает оставаться напряженной, с тенденцией к ухудшению эпизоотической и эпидемиологической обстановки. (Бешенство в РФ. Информационный билютень, Москва, 2006; Хисматуллина Н.А. с соавт., 2005; Мовсесянц А.А., 2005).

   Защищенность людей от этой смертельной вирусной инфекции во многом определяется частотой случаев бешенства среди животных, живущих рядом с человеком, а защищенность самих животных – от эффективности их иммунизации антирабическими вакцинами.

   Согласно действующим инструкциям, антирабические вакцины, в частности из штамма Щелково-51, применяются не только для профилактической (предэкспозиционной), но и при вынужденной (постэкспозиционной) иммунизации, которую начинают проводить не позднее 48 часов после возможного инфицирования животных. Фактически её осуществляют во время инкубационного периода болезни, продолжительность которого позволяет создавать, при своевременной двукратной вакцинации, состояние невосприимчивости ЦНС к вирусу бешенства, до его проникновения в этот орган. Однако, при несвоевременном обращении за помощью, а также при многочисленных укусах опасной локализации существует угроза опережающего продвижения возбудителя болезни к ЦНС и развития последствий, в результате которых жертвы перед гибелью становятся опасными источниками инфекции.

   Такая возможность обуславливает необходимость разработки и совершенствования средств и методов экстренной (постэкспозиционной) защиты ЦНС ценных и редких животных от вируса бешенства. Целесообразность проведения исследований в этом направлении признана и экспертами ВОЗ по бешенству. Актуальным признается и вопрос о механизме защиты «забарьерного органа» - ЦНС от вируса бешенства.

   1. 2. Цели и задачи исследований

      Цель исследований:

      1. Разработать и совершенствовать технологию получения и применения специфических средств экстренной защиты ЦНС животных от вируса бешенства;

      2. Определить перспективы применения неспецифических противовирусных препаратов для экстренной защиты ЦНС животных от возбудителя бешенства;

      3. Провести поиск нетрадиционных экспериментальных подходов к решению проблемы экстренной защиты ЦНС животных и человека от вируса бешенства.

      Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

      разработать доступный рациональный способ получения высокоактивной, стабильной при хранении стандартизированной антирабической сыворотки;

      определить время проявления её протективной активности на уровне ЦНС, при подкожной и внутримышечной инокуляции животным;

      определить уровень защиты ЦНС животных от вируса бешенства, в зависимости от дозы вводимых им подкожно вируснейтрализующих антител;

      изучить влияние сывороточных антирабических антител на развитие поствакцинального иммунитета при двукратной вакцинации животных в зависимости от дозы и времени введения антител;

      изучить динамику проявления иммуногенности отечественной антирабической вакцины «Рабикан» в процессе её пятикратной (в 0-ой, 3-ий, 7-ой, 14-ый, 30-ый день) инокуляции белым крысам и мышам, предварительно иммунизированных в 0-вой день антирабической сывороткой;

      исследовать эффективность комбинированного и раздельного применения коммерческих неспецифических противовирусных препаратов амиксина и рифампицина для защиты ЦНС животных от возбудителя бешенства;

      изучить влияние амиксина и рифампицина на развитие антирабического поствакцинального иммунитета;

      исследовать эффективность комбинированного применения неспецифических (амиксина и рифампицина) и специфических (антирабической вакцины) средств при экстренной защите ЦНС животных от вируса бешенства;

      исследовать возможность дистантного воздействия антирабической сыворотки на репродукцию вируса бешенства в чувствительных клетках in vitro.

      3. Научная новизна

      Впервые, с применением отечественных антирабических вакцин из вируса бешенства шт. «Щелково - 51», разработан эффективный способ получения стабильной при хранении стандартизированной сухой антирабической сыворотки крупного рогато скота, обладающей выраженной вируснейтрализующей in vitro и протективной активностью на уровне ЦНС.

      Впервые получены и представлены данные характеризующие динамику проявления позитивных и негативных последствий пассивной иммунизации на развитие поствакцинального иммунитета и защищенность ЦНС животных от вируса бешенства.

      Впервые показано, что экстренная защита ЦНС от вируса бешенства может проводиться по схеме, предусматривающей интрацеребральное введение животным отечественной инактивированной антирабической вакцины «Рабикан» и подкожную инокуляцию им коммерческих неспецифических препаратов – амиксина и рифампицина.

      1. 4. Практическая значимость работы

            1. Разработан доступный экономичный способ получения высокоактивной антирабической сыворотки крови крупного рогатого скота и изготовления из неё стандартизированного стабильного при хранении сухого антителосодержащего антирабического препарата, обладающего выраженной вируснейтрализующей - in vitro, и протективной – in vivo, активностью.

            2. Полученные результаты нашли своё отражение в:

            технических условиях на референс – сыворотку антирабическую сухую (ТУ 9388-131-00494189, согласованных с заместителем руководителя Россельхознадзора 3 марта 2008 года);

            инструкции по изготовлению референс – сыворотки антирабической сухой, утвержденной директором ВНИТИБП 12 ноября 2007 г.;

            инструкции по применению референс – сыворотки антирабической сухой, утвержденной заместителем руководителя Россельхознадзора 3 марта 2008 г.

            1.5. Основные положения, выносимые на защиту

            1.5.1. Предложенная нами технология позволяет получать сухую антирабическую сыворотку крови крупного рогатого скота, которая является однородным, высокостабильным вируснейтрализующим препаратом, обладающим выраженной протективной активностью на уровне ЦНС в первые часы и дни после её подкожного введения животным в комбинации с антирабической вакциной, изготовленной из вируса бешенства штамм Щелково – 51, или без нее.

            1.5.2. Экстренную постэкспозиционную иммунизацию животных целесообразно проводить по схеме рекомендованной ВОЗ для людей, предусматривающей однократную инъекцию антител и пятикратное введение антирабической вакцины.

            1.5.3. Экстренная защита животных от бешенства может основываться на интрацеребральном введении им антирабической вакцины «Рабикан», подкожной инокуляции амиксина и рифампицина, и последующей вакцинации согласно действующим наставлениям.

            1.5.4. Антирабическая сыворотка крови крупного рогатого скота может воздействовать дистантно на накопление антигена вируса бешенства в монослойной культуре клеток ВНК-21.

            1.6. Апробация

            Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчетах ГНУ ВНИИТБП за 2006-2009 гг. Материалы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИТБП (2006-2009 гг.), а также на Международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» 20-21 декабря 2007 года (Щелково, 2007 г.), на конференции молодых ученых Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, 17 марта 2008 года (Москва, 2008 г.)

            1. 7. Публикации

               По теме диссертационной работы опубликовано 4 статьи, в том числе 1 публикация в журнале, рекомендованном ВАК РФ «Ветеринарная медицина» №2 - 3.

               1. 8. Объем и структура работы

                  Похожие диссертации на Разработка и совершенствования средств и методов экстренной постэкспозиционной защиты центральной нервной системы животных от вируса бешенства

                  Средства, методы лечения, профилактики и иммунокоррекции при инфекционных болезнях крупного рогатого скота смешанной этиологииАлексеева, Ирина Геннадьевна

                  

                  Экспертная оценка прямых и косвенных методов определения границ эпизоотического проявления паразитарных системСуворин Вячеслав Владимирович

                  Тест-система [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакцииБобоев, Гиёсиддин Юнусович

                  Разработка тест-системы для выявления антител к бактериям Moraxella bovis методом иммуноферментного анализа : ИКК-СеротестСаттарова, Наталья Валерьевна

                  

                  Разработка ассоциированной вакцины и иммуноферментных тест-систем на основе антигенов парво-, рео-, герпесвирусов и вируса вирусной диареи крупного рогатого скотаЕфимова Марина Анатольевна

                  

                  Иммунобиологические свойства штамма ERA G333 вируса бешенства для изготовления оральной антирабической вакциныБаньковский, Денис Олегович

                  Эпизоотологический мониторинг и разработка средств диагностики бешенства, болезни Ауески и бруцеллезаЧернов, Альберт Николаевич

                  Эпизоотологический мониторинг и разработка средств диагностики бешенства, болезни ауески и бруцеллезаЧерно Альберт Николаевич

                  Разработка и совершенствование методов молекулярно - генетической диагностики аденоматоза легких овецШобогоров, Николай Михайлович

                  

                  Туберкулез собак и кошек и меры борьбы с ним: эпизоотология, совершенствование методов диагностики и разработка специфической профилактикиСафина, Чулпан Маратовна