Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 6
1.1 . Современная теория развития кариеса 6
1,2. Роль микрофлоры в развитии кариозного процесса 14
1.3.Современные методы профилактики и лечения кариеса зубов... 19
1.4. Перспективы применения фотодинамической терапии для лечения кариеса зубов 25
Глава 2. Материалы и методы исследования 35
2.1. Общая характеристика клинического материала 35
2.2. Методы обследования пациентов 36
2.2.1. Методика микробиологического исследования 36
2.2.2. Общеклинические методы 39
2.2.3. Методика рентгенологического исследования 39
2.2.4. Методика лазерной допплеровской флоуметрии 40
2.2.5. Электрометрический метод оценки качества краевого прилегания реставраций 43
2.3. Методика лечения 45
2.4.Методы статистического анализа результатов исследования...50
Глава 3. Результаты исследования 51
3.1. Результаты микробиологического исследования 53
3.2. Клиническая оценка результатов проведенного лечения 59
3.3. Результаты функционального исследования 69
3.4. Результаты электрометрического исследования 79
Глава 4. Обсуждение результатов исследования 83
Выводы 95
Практические рекомендации 96
Указатель литературы 97
- Современная теория развития кариеса
- Роль микрофлоры в развитии кариозного процесса
- Общая характеристика клинического материала
- Результаты микробиологического исследования
Введение к работе
Актуальность темы
Несмотря на определенные успехи в решении проблемы лечения кариеса зубов, поиск новых средств и методов терапии остается актуальным. В последние годы, в медицине с успехом используется метод фотодинамической терапии (ФДТ), который основан на взаимодействии фотосенсибилизатора с тканью после активации лазерным излучением. Особенности данного метода заключаются в том, что необходима конкретная длина волны излучения источника лазерного света (640-660 Нм), конкретный режим излучения - непрерывный и мощность излучения. Смысл фотодинамической терапии состоит в избирательном повреждении патологически измененных клеток, обработанных фотосенсибилизатором и активированных лазерным излучением.
Не так давно показания к применению ФДТ существенно расширились. Причиной тому послужило экспериментальное обоснование возможности использования энергии фотохимических реакций для воздействия на патогенную микрофлору инфекционного очага [Гельфонд Б.Р., 2001; Яшунский Д.В., 2002; Maisch T. et al., 2005]. Первые положительные результаты были получены при лечении гнойных ран, трофических язв [Странадко Е.Ф. с соавт., 2000; Корабоев У.М., 2001] и синуситов [Емельяненко Л.А., Блоцкий А.А., 2001]. Чуть позже была доказана возможность применения ФДТ для лечения язвенной болезни желудка, в этиопатогенезе которой, согласно современным представлениям, основная роль принадлежит микроорганизму Helicobacter pylori [Заблодский А.Н. с соавт., 2003].
В литературе приводятся данные об эффективности различных вариантов фотодинамической терапии в отношении различных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. По существу, ФДТ – это новое поколение антимикробной и антибактериальной терапии, которая уже сейчас успешно конкурирует с традиционными антибиотиками [O,Neill J.F. et al., 2002, 2003; Moritz A. еt al., 2006].
Таким образом, фотодинамическая терапия может стать в ближайшем будущем реальной альтернативой традиционным методам антибактериального воздействия. Полученные экспериментальные и клинические данные позволяют утверждать о возможности и эффективности применения ФДТ в клинике терапевтической стоматологии. К сожалению, данных по применению ФДТ в отечественной стоматологической практике крайне мало. Учитывая, что в возникновении и развитии кариеса инфекционный фактор имеет определяющее значение, актуальность изучения аспектов фотодинамической терапии в этом приложении, на наш взгляд, не вызывает сомнений.
Публикации об использовании фотодинамической терапии при лечении кариеса зубов единичны и не носят научно обоснованного подхода. В связи с этим, проведение исследования по изучению эффективности использования фотодинамической терапии при данной патологии актуально и своевременно.
Цель исследования
Повышение эффективности лечения кариеса зубов с использованием метода фотодинамической терапии.
Задачи исследования
-
Изучить микробную обсеменённость кариозной полости анаэробной
флорой методом полимеразно цепной реакции до и после воздействия ФДТ. -
Изучить микробную обсемененность кариозной полости кариесогенными стрептококками до и после воздействия ФДТ.
-
Изучить состояние микроциркуляции сосудов пульпы после
воздействия фотодинамической терапии методом лазерной допплеровской
флоуметрии. -
Оценить вероятность возникновения рецидивирующего кариеса после пломбирования в сроки 6, 12, 18, 24 месяцев после лечения с использованием фотодинамической терапии.
-
Разработать рекомендации по использованию фотодинамической
терапии при лечении кариеса зубов.
Научная новизна
Впервые научно обоснована, разработана методика и определена клиническая эффективность применения фотодитазина при фотодинамической терапии для лечения кариеса зубов.
Впервые изучено состояние патогенной флоры кариозной полости после воздействия ФДТ, где в качестве фотосенсебилизатора используется фотодитазин и выявлена его высокая эффективность применения в качестве антисептической обработки.
Впервые изучено состояние микроциркуляции сосудов пульпы после воздействия фотодинамической терапии, которая активизирует микроциркуляцию в пульпе зуба, что ведет к нормализации кровотока в микроциркуляторном русле.
Практическая значимость
Разработана новая высокоэффективная методика использования фотодинамической терапии при лечение кариеса зубов. Доказана эффективность применения фотодинамической терапии с временем экспозиции 60 секунд, что позволяет рекомендовать данную методику для использования в широкой терапевтической практике при лечении кариеса зубов.
Положения выносимые на защиту
-
Методом ПЦР-диагностики определен видовой состав микробной обсемененности кариозных полостей, с выявленным доминированием Candida albicans.
-
Фотодинамическая терапия является высокоэффективным методом воздействия на подавление активности патогенной микрофлоры кариозной полости, способствуя предотвращению развития рецидивирующего кариеса.
-
Фотодинамическая терапия при лечении кариеса зубов усиливает регуляторное влияние на микрососуды пульпы зуба, способствуя нормализации кровотока.
3. Внедрение результатов исследования
Предложенная методика внедрена в практику отделения кариесологии и эндодонтии ФГУ « ЦНИИС и ЧЛХ» Минздравсоцразвития России и на кафедре терапевтической стоматологии РМАПО.
Апробация работы
Предзащитное обсуждение диссертационной работы проведено на совместном заседании сотрудников отделений кариесологии и эндодонтии, заболеваний слизистой оболочки полости рта, парадонтологии, профилактики стоматологических заболеваний, функциональной диагностики и лаборатории микробиологии ФГУ «ЦНИИС и ЧЛХ» Минздравсоцразвития России.
Публикации в научных изданиях
По теме диссертации опубликовано 2 печатные работы, из них 1 – в центральной печати.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 120 страницах машинописи, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа содержит 14 таблиц и 10 рисунков. Указатель литературы содержит 128 отечественных и 97 иностранных авторов.
Современная теория развития кариеса
Кариес зубов во всем мире относится к числу самых распространенных стоматологических заболеваний. За последнее столетие проблеме кариеса зубов посвящено огромное множество прикладных и фундаментальных научных работ. В то же время, несмотря на постоянно возрастающий уровень знаний и оснащенность стоматологии, распространенность кариеса зубов среди населения нашей страны по-прежнему остается весьма высокой без явной тенденции к снижению [Кузьмина Э.М., 1995, Леонтьев В.К., Солнцев А.С., 1998; Давыдов Б.Н. с соавт., 2002].
О том, что проблема окончательно не решена, свидетельствует также большое число рецидивов кариозного процесса и случаев развития вторичного кариеса [Солнцев А.С., 1995; Хромцова И.В., 2002]. По поводу вторичного и рецидивного кариеса осуществляется около 40% всех стоматологических мероприятий, связанных с лечением зубов, на которые расходуется треть рабочего времени стоматолога [Okida R.C. et al., 2008]. Именно на предупреждение вторичного и рецидивного кариеса нацелены современные разработки пломбировочных материалов и техник реставрации зубов [Леонтьев В.К., 2006; Петрикас А.Ж., 2007; Vanderas А.Р., Skamnakis J„ 2003].
Успех лечения кариеса тесно связан с этиологией и патогенезом данного заболевания. На протяжении последних ста лет выдвигались различные теории, касающиеся причин возникновения и развития кариеса зубов, благодаря которым в настоящее время достигнуты значительные успехи в изучении этих вопросов. По современным представлениям, кариесогенные микроорганизмы полости рта при соответствующем восполнении субстрата (низкомолекулярные углеводы) вырабатывают органические кислоты. При их длительном воздействии твердые ткани зуба подвергаются деминерализации [Хельвиг Э. с соавт., 1999; Боровский Е.В. с соавт., 2001].
Качество питания человека, количество и частота приема пищи -важные факторы в развитии кариеса. При рассмотрении роли питания в развитии кариеса зубов учитывают два аспекта: системное и местное влияние. Ранее наиболее важным считалось системное (общее) влияние характера питания на состояние зубов. Однако предположения о том, что белковая недостаточность, дефицит витаминов А, С и D влияют на возникновение кариеса, в ходе многочисленных исследований не подтвердились. Хотя состав пищи и может влиять на минерализацию и структуру твердых тканей зубов в период развития, однако лишь грубые нарушения питания в течение длительного времени могут быть связаны с повышенной поражаемостью кариесом [Персии Л.С., 2003].
Решающим фактором возникновения кариеса является частое употребление углеводов (сахарозы, глюкозы, фруктозы, лактозы и крахмала), которые образуют питательную среду для микроорганизмов зубного налета. Большинство микроорганизмов наддесневой бляшки развиваются благодаря продуктам распада низкомолекулярных углеводов, в процессе которого образуются органические кислоты. Вследствие этого уровень рН значительно снижается, что и приводит к деминерализации тканей зубов [Румянцев В.А., 1990; Сунцов В.Г. с соавт., 2001].
Особое значение в этом процессе имеет сахароза. Она легко диффундирует в зубной налет и быстро растворяется, образуя два моносахарида (фруктозу и глюкозу), которые могут расщепляться в клетках бактерий. Кроме этого, при расщеплении альфа-гликозидных соединений сахарозы выделяется энергия, вновь используемая для образования полисахаридов, в частности внешнеклеточных водорастворимых полисахаридов типа глюкана (10%) или же водонерастворимых резервных углеводов [Бокая В.Г., 1993; Леонтьев В.К., Круглова Л.Н., 1995].
Клейкие декстрины препятствуют доступу слюны к поверхности зубов, что затрудняет нейтрализацию кислот буфером слюны. Необходимо подчеркнуть, что к повышенному риску возникновения кариеса приводит не высокое содержание углеводов в пище, а частый прием Сахаров, легко вступающих в обмен веществ при наличии налета. При частом поступлении сахарозы, и, соответственно, возрастающем образовании кислот, стимулируется селективный рост кислотоустойчивых элементов, образующих полисахариды, что способствует возникновению кариеса [Леонтьев В.К. с соавт., 1988, 1991; Ainamo I.J., 1980; Biswas S.D., 1982; Newbrun Е., 1982; Brudevold F. et al., 1983; Jensen M.E., Wefel J.C., 1986].
Крахмал является менее кариесогенным продуктом, чем сахар, однако в процессе варки или выпекания крахмал приобретает растворимую форму, в которой он может быстрее расщепляться амилазой слюны на моносахариды. В обычном состоянии молекулы крахмала из-за значительных размеров не могут диффундировать в бляшку, а расщепленный крахмал подвергается метаболическим изменениям бактериями налета. Поэтому употребление сырого крахмала незначительно снижает уровень рН в бляшке, тогда как подогретый крахмал снижает показатель рН до уровня, который существенно не отличается от такового после приема сахара [Рединова Т.Л., 1991].
В отличие от углеводов, жиры, содержащиеся в пище, обладают полезными свойствами. Жир покрывает тонким слоем поверхность зуба, создавая противокариозную защиту. Значение других элементов в этом процессе изучено недостаточно. Есть доказательства того, что увеличенное содержание карбонатов в эмали способствует возникновению кариеса [Румянцев В.А., Вальнюк И.И. , 1991; Хельвиг Э. с соавт., 1999; Birkhed D., 1984].
На возникновение кариеса влияют также второстепенные (вторичные) факторы: скорость секреции и состав слюны, показатель рН, буферная емкость, продолжительность и частота поступления субстрата для питания бактерий, нарушения прикуса и зубные аномалии, влияющие на образование зубного налета. Сформированные борозды и углубления на поверхностях зубов более подвержены кариесу, чем совершенно плоские поверхности [Кузьмина Э.М., 1980; Водолацкая A.M., 1988].
Неоднозначно оценивается кариесрезистентность зубов и степень их минерализации. Существуют различные взгляды на это явление, однако большинство авторов считают, что полноценная минерализация обеспечивает большую устойчивость эмали зуба к кислотам и, наоборот, недостаточная минерализация создает предпосылки для быстрой деминерализации и возникновения кариозного дефекта [Леонтьев В.К., 1978; Вершинина О.Г., 1979; Парпалей Е.А., 1989;НазукинаИ.Г., 1993].
Доказано, что основной прирост кариеса постоянных зубов и быстрое его прогрессирование отмечается в течение нескольких лет после прорезывания зубов и происходит, в основном, в 6-7 и 11-13 лет. Это объясняется тем, что постоянные зубы прорезываются в полости рта с незаконченной минерализацией эмали [Удовицкая Е.В., Парпалей Е.А., 1989; ЛуцкаяИ.К., 1989;ПадалкаИ.А., 1992; Cate J.M.., 1992].
.Е.В. Позюкова [1985] установила накопление кальция и фосфата в эмали зуба после прорезывания, что раскрывает сущность процесса, получившего в литературе название "созревание эмали". В течение двух лет после прорезывания минерализация зубов протекает довольно быстро, затем наступает ее замедление почти до полного прекращения. СВ. Удовицкая, С.А. Парпалей [1989] считают важным условием формирования устойчивой эмали в период ее созревания, что означает совокупность возрастных изменений эмали зуба, основным среди которых является уровень ее минерализации. Им удалось показать, что с возрастом происходит увеличение содержания кальция в поверхностном слое эмали с 361,69±12,08 нг/мкг у 6-летних до 405,15±5,89 нг/мкг у 14-летних детей.
Роль микрофлоры в развитии кариозного процесса
Зубной налет - это ключевой фактор в этиологии кариеса [Левицкий А.П., Мизина И.К., 1987; Marsh P.D., Bradshaw D., 1990; Riethe P., 1994]. Существенным обстоятельством развития патогенных процессов в полости рта является способность бактерий к адгезии на поверхности зубов за счет связанных с клетками полисахаридов, синтезированных из сахарозы под воздействием микробной гликозил-трансферазы [Jenkins V., 1978].
Микробная бляшка образуется в несколько этапов. Сначала на поверхности зуба образуется бесструктурированная бесклеточная пленка. Эта пленка (0,1-1 мкм) состоит из протеинов слюны (кислые, обогащенные пролином протеины, гликопротеины, сывороточные белки, энзимы, иммунглобулины), которые могут электростатически связываться. Пленка представляет собой полупроницаемую» мембрану, т.е. она в некоторой мере управляет процессами обмена между средой полости рта; налетом и тканями зуба. Она также увлажняет зуб и защищает его во время? еды от стирания [Румянцев В;А., 1990; Воложин А.И. с соавт., 1991; Сунцов B.F. с соавт., 2001] В последующем к мембране в течение нескольких часов прикрепляются грамположительньте кокки (Streptococcus sangius) и актиномицеты, затем стрептококки, вейлонеллы и филаменты, преобладающие в 4-7 дневной зубной бляшке. Налет увеличивается за счет адгезии и когезии, путем деления или аккумуляции бактерий. Со временем микробныйсостав налета приобретает анаэробный характер-[Левицкий А.П., МизинаИ:К, 1987J:
Мягкий зубной: налёт имеет пористую структуру, что обеспечивает проникновение внутрь его: слюны жидких компонентов пищи. Это мягкое аморфное вещество, плотно прилегающее к поверхности зуба. Накопление в налёте конечных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов и-минеральных солей замедляет эту диффузию, так как исчезает пористость. И это уже новая субстанция - зубная бляшка, удалить которую можно только механическим способом, но и то не полностью [Габер О.Г., Недосеко В;Б., 1992]. Под зубной бляшкой происходит накопление органических кислот -молочной, пировиноградной, муравьиной, масляной, пропионовой и других, являющихся продуктами расщепления Сахаров большинством бактерий в процессе их роста. Именно этим кислотам принадлежит основная роль в появлении на ограниченном участке эмали деминерализованного участка. Нейтрализации этих кислот не происходит, так как наблюдается ограничение диффузии как в зубной налёт, так и из него [Румянцев В.А., 1990].
Зрелый налет состоит из плотного слоя бактерий (60-70% объема), образующих матрикс бляшки. В этом состоянии бляшка не смывается слюной, устойчива к полосканию рта. Если на начальной стадии в налете преобладают аэробные бактерии, то в дальнейшем подавляющее большинство составляют анаэробные бактерии, такие как Actinomyces, Fuso-bacterium и Veillonella. Снижение рН приводит к увеличению Streptococcus mutans, Lactobacillus и Veillonella dispar, которые становятся доминантными типами. Следует отметить, что состав бактерий зависит как от места расположения в полости рта, так и от места на поверхности зубов. Состав матрицы также изменяется под влиянием состава слюны, типа питания и способности к синтезу бактерий слюны [МизинаМ.К., 1980; Riethe Р., 1994].
Целесообразно более подробно рассмотреть роль бактерий в образовании зубного налета. Кариесогенные микроорганизмы наиболее полно представлены различными типами стрептококков и лактобацилл, продуцирующих в результате ферментации углеводов молочную и уксусную кислоты [Мельниченко Э.М. с соавт., 2001; Geddes D.A.M. et al., 1986; Oliveby A. et al., 1990], которые снижают рН полости рта и создают условия для диффузии кальция и фосфатов из минералов зуба.
Наибольшее значение в этом процессе имеют стрептококки, а особенно Streptococcus mutans. Это исключительно кариесогенные бактерии. Streptococcus mutans может образовывать из сахарозы лактат. Это происходит в процессе разложения двусахаридов, образующаяся при этом глюкоза способствует, в результате дальнейших химических реакций бескислородного гликолиза, образованию лактатов [Вершинина О.Г., 1979; Боровский Е.В. с соавт., 2001; Featherstone J.D.B., Rodgers В.Е., 1982].
Streptococcus mutans, благодаря энзимам, может также синтезировать внеклеточные адгезионные полисахариды. Вследствие клейкости они слипаются между собой и связываются с поверхностью зубов так сильно, что их не удается устранить очисткой. Исследованиями многих авторов установлено, - что полисахариды мягкого зубного налета адсорбируют попадающую в ротовую полость сахарозу. Значительная длительность процесса утилизации сорбированной сахарозы обеспечивает достаточно продолжительный контакт тканей зуба с ацидогенными растворами, что способствует возникновению кариесогенной ситуации [Вершинина ОТ., 1979].
Streptococcus mutans не только образуют органические кислоты, но и толерантны к ним. Эти микроорганизмы могут существовать в кислых условиях бляшки, при которых гибнут другие микробы полости рта (рН 5,5) [Леонтьев В.К., Круглова Л.Н., 1995; Geddes D.A. et al., 1986].
Современные исследования подтверждают, что Streptococcus mutans не принадлежат к нормальной бактериальной флоре полости рта. Как и другие возбудители инфекции, эти микроорганизмы передаются от человека к человеку, в частности посредством слюны, что необходимо учитывать при выборе профилактических мер [Белый Ю.А. с соавт., 2003].
Общая характеристика клинического материала
Клиническое исследование проводили на базе отделения, кариесологии и эндодонтии отдела терапевтической стоматологии ФІГУ «ШНИИС и ЧЛХ». Под клиническим наблюдением находились 92 пациентам возрасте от 17 до 65 лет,, которым было проведено лечение 118 зубов; с кариесом дентина. Критериями исключения из исследования являлись: - наличие злокачественных новообразований;: - заболевания крови и кроветворных органов; - заболевания сердечно-сосудистой системы в стадии декомпенсации; - резко выраженный атеросклероз;; - нарушение мозгового кровообращения; - беременность; - тяжелое общее состояние пациента; - лихорадочные состояния, инфекционные заболевания; - токсические состояния; - индивидуальная непереносимость физического, агента или лекарственного вещества; - нежелание проведениялечения самим пациентом. В зависимости от методики антисептической обработки кариозной полости все пациенты:, включенные в исследование, были разделены на 3 группы (таблица 1). В группах №1; ш №2 проводилась обработка зубов с применением фотодинамической терапии,, в группе №3 (контрольной) -традиционная антисептическая обработка кариозной! полости 0,12 % раствором хлоргексидина .,. Остальные этапы лечения кариеса во всех группах были одинаковыми.
При постановке диагноза кариеса пользовались общепринятой классификацией МКБ-10. При обследовании пациентов нами применялись общеклинические, рентгенологические, функциональные (лазерная допплеровская флоуметрия), лабораторные (микробиологические) и электрометрический методы.
Забор материала для первичного микробиологического исследования проводили после раскрытия кариозной полости и механического удаления нежизнеспособного дентина. Область исследуемого зуба изолировали при помощи коффердама. Сбор материала производили путем соскобов дентина со стенок кариозной полости стерильным стоматологическим, экскаватором №2.
Повторное взятие материала осуществляли в группах №1 и №2 после проведения фотодинамической терапии, в контрольной группе — после обработки- кариозной полости раствором хлоргексидина. Таким образом, получали две группы образцов дентинных опилок, взятые до и. после антисептической обработки кариозной полости.
Полученные образцы дентинных опилок помещали в пробирку типа Eppendorf, содержащую 500 мкл физиологического раствора, перемешивали и отправляли в микробиологическую лабораторию.
Использовали- молекулярно-генетический метод исследования анаэробной микрофлоры - ПЦР - диагностика. Для выявления в материале маркерных фрагментов ДНК бактерий Fusobacterium spp., Enterococcus faecflis, Candida albicans, Veilonella spp.,. Prevotella intermedia применяли метод мультиплексной ПЦР, позволяющий исследовать 2 и более праймеров нескольких возбудителей.
Выбор данного метода был обусловлен несколькими факторами: он обладает высокой чувствительностью, позволяет выявлять единичные молекулы специфичной ДНК, не требует специальных сред и условий для транспортировки клинического материала, которые обычно необходимы для сохранения анаэробных бактерий, позволяет получить результаты анализа в течение одного дня. ПЦР-анализ образцов включал в себя три основных этапа: пробоподготовка (выделение ДНК из клинического материала), амплификация (умножение фрагментов ДНК) регистрация результатов. На первом этапе из клинических образцов, доставленных в лабораторию, выделяли ДНК по прилагающейся методике. Во избежание разрушения ДНК ферментами, высвобождающимися при гибели бактерий, обработку проб производили в максимально короткие сроки после их забора (60-90 мин). Следующий этап - амплификация — представляет собой многократно повторяющиеся циклы синтеза специфической области нуклеиновой кислоты при помощи термостабильного фермента ДНК-полимеразы. Поскольку в каждом цикле удваивается число копий амплифицируемого участка, то за 30-40 циклов происходит накопление, коротких специфических фрагментов в количестве, достаточном для их дальнейшего определения с помощью электрофореза в агарозном геле, путем гибридизации со специфическим олигонуклеотидным зондом или с использованием метода масс-спектрометрии.
Анализ проводили в амплификаторе PCR-sprint (Hybaid LTD) с использованием пластиковых одноразовых пробирок объемом 500 мкл, в каждой из которых содержалось 20 мкл Taq IX Master Mix (BioLabs, USA) с соответствующей матрицей ДНК. Условия реакции: начальная денатурация при 94С в течение 2 мин, затем 30 циклов, включающих в себя денатурацию в течение 30 с при 94 С, отжиг праймеров в течение 2 мин при 55 С, синтез фрагмента ДНК - 2 мин при 68 С.
Полученные ампликоны анализировали в агарозном буфере (1% агароза в ТАЕ-буфере) в сравнении с тестовым набором ДНК-фрагментов. Аппарат для электрофореза (ISCO-493) создавал поле 120 мА на протяжении 40-60 мин. Гель окрашивали бромистым этидием и проявляли при УФ-свете. Затем определяли относительную частоту идентификации различных видов бактерий в процентах.
Результаты микробиологического исследования
На основании проведенного ПЦР анализа микрофлоры при кариесе дентина было установлено, что до начала лечения у 59 (74,7%) пациентов было обнаружено ДНК пигментообразующих бактерий. При этом у 16 (20,2%) пациентов обнаружено два вида, а у 43 (54,4%) - один вид микроорганизмов. Лишь у 20 (25,3%) пациентов проба не содержала ДНК микроорганизмов.
Такое различие среднего количественного показателя обсемененности микроорганизмами кариозной полости , на наш взгляд объясняется различным клиническим течением кариеса и индивидуальной иммунологической реактивностью организма пациента.
В процессе ПЦР-анализа при кариесе дентина наиболее часто выявляли генетические маркеры ДНК пяти видов наиболее вирулентных анаэробных бактерий: Prevotella intermedia- в 10 (7,4 %) случаев, Fusobacterium spp.-в 17 (12,6 %),Enterococcus Faecalis- в 23 (17 %),Veilonella spp.-в 29 (21,5 %), Candida albicans- в 56 (41,5 %) случаев , (таблица 2).
Результаты микробиологического исследования после антисептической обработки кариозной полости.
В группе №1 после обработки кариозной полости методом фото динамической терапии с облучением светом лазера в течение 30 с Fusobacterium spp. не были выявлялены, процент обнаружения Prevotella intermedia снизился в 3 раза, Enterococcus faecalis - в 3,5 раза , Veilonella spp. в 5, Candida albicans -в 8 раз. ( рис.9).
В группе №2, где проводили обработку кариозных полостей методом фотодинамической терапии с облучением светом лазера в течение 60 с анаэробные микроорганизмы в исследованных пробах не были выявлены.
В группе №3 (контрольной) после обработки кариозной полости раствором хлоргексидина частота обнаружения бактерий Prevotella intermedia уменьшилась, по сравнеию с исходным уровнем, на 5,3%; Fusobacterium spp- на 26,3%; Enterococcus faecalis - на 36,9% ; Veilonella spp. -на 25,6%; Candida albicans -на 38,7%.(рис. 5). Данные показатели значительно уступают показателям групп №1 и №2.
Таким образом, после обработки кариозной полости методом фотодинамической терапии частота обнаружения патогенных анаэробов была значительно меньше, чем после традиционной обработки раствором хлоргексидина. Результаты исследования убедительно демонстрируют, что методика фотоактивируемой дезинфекции успешно уничтожает анаэробные бактерии при правильном сочетании фотосенсибилизатора и адекватной дозы энергии и контакте как фотосенсибилизатора, так и света с бактериями.
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что разработанная нами методика фотодинамической терапии при лечении пациентов с различными формами кариеса является высокоэффективным и патогенетически обоснованным методом лечения, обеспечивающим значительное снижение количества факультативных и облигатных видов пределах 10 -10 . Титр Streptococcus mutans был ниже на 1-2 порядка.
После проведения фотодинамической обработки кариозной полости в течение 30 секунд частота выделения стрептококков и их количество
микроорганизмов. Это может служить хорошим прогностическим фактором для более длительного срока службы реставраций.
Ведущее значении в развитии кариеса зубов принадлежит кариесогенным стрептококкам к которым, в первую очередь, относят Streptococcus mutans, Streptococcus sanguis, Streptococcus salivarius. Для определения воздействия фотодинамической терапии на кариесогенные стрептококки было проведено определение частоты высеваемости и количества стрептококков кариозной полости.
