Введение к работе
Актуальность работы.
Несмотря на существенную роль клонорхоза в краевой патологии Приамурья, до сих пор не удаётся установить надёжный контроль за эпидситуацией, наладить систему своевременного выявления заболевших. Одной из причин этого являются трудности в диагностике обычными методами копроовоскопии. Достаточно сказать, что в течение десятилетий в годовых отчётах санитарно-эпидемиологической службы Хабаровского края фигурировали единичные случаи клонорхоза, тогда как целенаправленные исследования показали значительную поражён-' ность коренного населения - от 8 до 30%, а общее число больных достигает 2,5 - 3 тысяч человек ( К.И.Скрябин и соавт.,1929; Б.А. Астафьев,I960; Л.И.Синович, 1964; П.С.Посохов,1984 ).
Практически во всех работах, посвященных клонорхозу, прямо или косвенно обсуждается необходимость совершенствования диагностики, разработки новых методов, в частности, серологических ( П.С. Посохов и соавт.,1987; В.А.Фигурнов и соавт.,1986, 1991; 0.П.Сорокопуд и соавт.,1990; Э.Л.Щенников и соавт.,1991; В.Н.Кораблёв,1991).
Решение проблемы клонорхоза осложняется и неблагоприятной динамикой природных и социальных процессов: загрязнением среды, нарушением экологического баланса, усилением миграции населения, смещением акцентов в традициях питания у пришлого контингента дальневосточников, доступностью рыбных запасов Амура. Расширение неиммунной прослойки среди населения ведёт к увеличению числа клинически тяжёлых случаев заболевания на ранних стадиях. Отмечен рост заболеваемости у пришлых групп населения ( В.Н.Кораблёв,1991).
Актуальность всестороннего изучения клонорхоза усиливается и тем обстоятельством, что данный гельминтоз является высокопатогенным трематодозом, обусловливающим тяжёлые сдвиги в состоянии
здоровья человека, нередко приводящие к инвалидносаи, а иногда и к смерти больных (П.С.Посохов и соавт.,1987; Л.В.Круглякова и со-авт.,1987). Возбудитель клонорхоза, стимулируя пролиферативные процессы в эпителии желчных протоков, является одним из сильных биоканцерогенов, провоцирующих развитие первичного рака печени,
В условиях Хабаровского края даже при низкой интенсивности инвазии более 80$ инвазированных имеют клинически выраженное течение заболевания, проявляющееся в форме болевых, диспепсических и неврологических симптомов и обычно сопровождающееся изменениями со стороны периферической крови (В.Н.Дроздов и соавт.,1971,1973).
Традиционным методом диагностики клонорхоза до настоящего времени является копроовоскопия - метод толстого мазка по Като, иногде дополняемый микроскопией дуоденального содержимого. Данные диагностические приёмы имеют объективные, но существенные ограничения: невозможность паразитологического подтверждения в ранней стадии заболевания до начала репродуктивной деятельности паразита и в связи с нерегулярной яйцепродукцией в хронической стадии и снижением выделения яиц, вплоть до полного прекращения, при длительно текущей инвазии; маловероятность нахождения яиц паразита в случаях . низкой интенсивности инвазии (обычно именно такой уровень поражения преобладает в эндемичных районах Приамурья). В случаях суперинвазии, при которой наблюдается полное отсутствие выделения яиц, копроовоскопия также малоэффективна.
В настоящее время в паразитологии всё прочнее завоёвывают позиции иммунологические методы диагностики, в частности, иммунофер-ментный анализ на твёрдой фазе ( ELISA ). Так, для диагностики описторхоза создано несколько модификаций тест-систем (В.А.Золотухин и соавт.,1989; И.А.Клебановская и соавт.,1990; О.Ю.Старостина и соавт., 1990). Учитывая филогенетическую близость ШпоКт S(fiCni&
и (JpisUiOxehiH jtuntus і мы предположили возможность аналогично высокой чувствительности и специфичности данного метода и в диагностике клонорхоза. Л тому же опыт использования гомологичного и гетерологичного антигенов в иммуноферментном анализе для диагностики .члонорхоза на материале из Вьетнама дал обнадёживающие результаты ( Г.А.Гицу и соавт.,1991).
Всё вышеперечисленное и обусловило выбор данной темы, разработка которой открывает возможности внедрения в практику здравоохранения современного эффективного метода диагностики.
Цель исследования. Разработка и внедрение в практику лечебно-профилактических учреждений иммуноферментного теста для определения антител к антигенам клонорхиса.
Задачи исследования:
разработать методику проведения иммуноферментного анализа для определения антител к антигенам клонорхиса;
вычислить диагностическую границу и разработать диагностический критерий иммуноферментного теста для визуальной и инструментальной оценки результатов;
оценить диагностическую эффективность разрабатываемой тест-системы ( определить чувствительность, специфичность, достоверность результатов) при использовании теста на эндемичных территориях;
применить иммуноферментный анализ для диагностики клонорхоза в очаге заболевания в Нанайском районе и изучить особенности серо-эпидемиологии клонорхоза на этой территории.
Научная новизна.
Впервые приготовлен соматический антиген из Приамурской популяции клонорхисов, основные параметры и показатели реакции адаптированы к условиям применения в Приамурском очаге клонорхоза.^
Разработана иммуно<ї>ерментная тест-система для определения антител к антигенам клонорхиса, отвечающая современным требованиям, и проверена на практике её эффективность.
Впервые иммуноферментный тест применён при массовом обследовании населения эндемичной территории Нанайского района Хабаровского края, что позволило дать оценку эпидситуации на основе серологических исследований.
Осуществлён опыт организации одновременного исследования сывороток крови на клонорхоз, вирусный гепатит, ВИЧ-инфекцию, содержание иммуноглобулинов различных классов, иммунных комплексов и некоторые другие биохимические показатели, что позволило сократить трудозатраты и избежать повторных манипуляций, связанных с внутривенным забором крови.
Практическая значимость.
Использование иммуноферментного анализа позволяет выявлять больных на ранних стадиях заболевания, контролировать эффективность лечения, избавиться от субъективности в лабораторной работе, более качественно и оперативно контролировать состояние эпидситуации в очагах клонорхоза различной напряжённости, а также приблизиться к созданию единой комплексной иммунологической системы диагностики, охватывающей паразитарные заболевания и инфекции (в т.ч. ВИЧ-инфекцию).
Внедрение б практику.
На основе проведённой разработки составлены методические рекомендации для медицинских работников .Хабаровского края по использованию иммуноферментной тест-системы для диагностики клонорхоза (Хабаровск, 1992).
Разработанная методика проведения ИФА для диагностики клонорхоза внедрена в ряде лечебно-профилактических учреждений Дальнего
Востока: в Хабаровском краевом центре государственного санитарно-эпидемиологического надзора, в Хабаровской краевой клинической больнице № І, в Хабаровском краевом противотуберкулёзном диспансере, в Дальневосточном региональном центре по борьбе со СПИД.
В результате применения ИФА для диагностики клонорхоза, по данным Хабаровского краевого центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора, количество обследованных на клонор-хоз увеличилось в сотни раз, установлена серопозитивность до 40% в некоторых сёлах Нанайского района.
Данные сероэпидемиологических исследований в очагах клонорхоза на территории Хабаровского края используются в учебном процессе на кафедрах медицинской биологии и пропедевтики внутренних болезней лечебного факультета Хабаровского медицинского института и Хабаровского базового .училища повышения квалификации среднего медицинского персонала.
Публикации.
По теме диссертации выпущены методические рекомендации, опубликована I статья, сдана в печать I статья, опубликованы .тезисы докладов на 2-х конференциях, выпущено информационное письмо.
Апробация работы.
Материалы диссертации доложены на заседании общества эпидемиологов и микробиологов (г.Хабаровск, 1993 г.), на конференции по проблемам трематодозов (г.Сумы, 1992 г.), на конференции (г.Новосибирск, 1993г.).
Работа апробирована на заседании кафедры медицинской биологии Хабаровского медицинского института (апрель 1994 г.) и на заседании комиссии по предварительной экспертизе диссертаций, представляемых в Специализированный Совет при ИМПиТМ им.Е.И.Марциновского
t (16.05.94).
Объём и структура диссертации.
Диссертация изложена на 115 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, материала и методов, собственных исследований, выводов, заключения и материалов внедрения. Список использованной литературы включает 105 названий ( 70 отечественных и 35 зарубежных авторов), таблиц 9, рисунков
Положения, выносимые на защиту:
- разработанная иммуноферментная тест-система для определения
антител к антигенам клонорхиса пригодна для использования
в лабораторной диагностике клонорхоза,
показатели диагностической эффективности иммуноферментного ана лиза (чувствительность и специфичность) свидетельствуют о хоро шей дифференцирующей способности теста,
иммуноферментный анализ для определения антител к антигенам клонорхиса может быть использован при массовых обследованиях населения и в эпидемиологической практике в очагах заболевания
