Введение к работе
Актуальность темы. Фасциолез крупного рогатого скота - зооноз, который характеризуется течением болезни без проявления специфических симптомов с преимущественным поражением печени и желчевыводящих путей. Данный биогельминтоз широко распространен на территории РФ. Однако степень его распространения и поражения животных неоднозначна в различных природно-климатических зонах нашей страны (Н.А. Яременко, И.Ф. Кленова, В.В. Горохов, Н.П. Сорокина, И.А. Молчанов, 2005). На основании научных публикаций (И.Ф. Кленова, Н.А. Яременко, В.В. Горохов, У.Г. Тайчинов, А.Н. Воличев, B.C. Любавин, 2002; А.А. Атаев, 1990; М.М. Бочарова, 1996; Н.И. Кошеваров, 2006; В.В. Репетун, 2004) можно утверждать, что в отдельных регионах до 30 % и более поголовья скота заражены фасциолезом. В связи, с чем фасциолезная инвазия наносит значительный экономический ущерб скотоводству России, экономические потери при этом складываются из сокращения удоев молока, часто снижения его качества, уменьшения привесов и утилизации ценного пищевого продукта - печени. Актуальность разработки тест-системы для прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота на основе дот-ИФА обусловлена необходимостью создания биологической безопасности среды засчет своевременного выявления больных животных и проведения оздоровительно-профилактических мероприятий в хозяйствах. Копрологическими методами диагностики на сегодняшний день фасциолез можно выявлять только через 3-4 месяца после начала инвазии. К этому времени фасциола уже является болезнетворным агентом, который вызывает тяжело протекающий воспалительный процесс в печени, переходящий в хронический гепатит по пролиферативному типу, что ведет к патологическому состоянию организма и снижает продуктивность крупного рогатого скота. Данная патология обуславливает плохое откармливание и ухудшение качества получаемой от животных продукции, а также сокращение сроков хранения продуктов убоя.
Цели и задачи исследования. Основной целью работы было разработать иммуноферментную тест-систему на основе дот-ИФА для эффективной прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
-
Получить водно-солевые экстракты фасциол и испытать их в качестве диагностического антигена.
-
Разработать метод очистки антигенов фасциол на основе аффинной хроматографии.
-
Отработать режимы постановки дот-ИФА при различной степени инвазии у фасциолезных животных.
-
Провести испытания дот-ИФА и ИФА с различными антигенами при фасциолезе крупного рогатого скота.
5. Дать оценку сравнительной диагностической эффективности тестов на основе дот-ИФА, ИФА и копрологических методов.
Научная новизна. Научная новизна заключается в разработке диагностической тест-системы на основе дот-ИФА с помощью аффинно очищенного антигена для обнаружения антител в крови к возбудителю фасциолеза крупного рогатого скота Fasciola hepatica и определении ее сравнительной диагностической эффективности с другими методами прижизненной диагностики.
Практическая значимость. Разработанный тест на основе иммуноферментной реакции (дот-ИФА) может использоваться органами ветеринарного контроля для оценки эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота и закупочными организациями для формирования благополучных сырьевых баз. Он экономичен по затратам, прост в исполнении и перспективен для массовых обследований в полевых условиях, так как позволяет диагностировать данную болезнь уже через 3-4 недели после начала инвазии, что дает возможность разработать эффективные меры по борьбе с фасциолезом в хозяйствах. Результаты исследований использованы при разработке «Методических рекомендаций по иммунодиагностике фасциолеза крупного рогатого скота реакцией дот-ИФА», одобренных секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины РАСХН 21.05.2010.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы были доложены на международной научно-практической конференции «Биотехнология. Вода и пищевые продукты» (Современный метод диагностики хронического фасциолеза продуктивных животных, Москва, 2008), XVI московском международном ветеринарном конгрессе (Диагностика фасциолеза крупного рогатого скота иммуноферментной реакцией, Москва, 2008).
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Экстенсивность и интенсивность фасциолезной инвазии при послеубойном обследовании.
-
Антигены фасциол и их диагностическое значение.
-
Разработка диагностической тест-системы на основе дот-ИФА при фасциолезе крупного рогатого скота.
-
Сравнительный анализ эффективности классических копрологических исследований и серологических тестов на основе ИФА и дот-ИФА. Личный вклад соискателя. Представленная диссертационная работа
является результатом четырехлетних научных исследований аспиранта. Основная экспериментальная часть исследований по разработке диагностической тест-системы на основе дот-ИФА при фасциолезе крупного рогатого скота выполнена автором лично. Работа выполнялась под руководством доктора ветеринарных наук, профессора кафедры инфекционных и паразитарных болезней ГОУ ВПО МГУПБ И.Г. Гламаздина, который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и анализе
полученных результатов. В четырех совместных публикациях личный вклад автора составлял не менее 75 %.
Публикации. По теме диссертации и результатам исследований опубликовано 6 научных статей, в том числе 2 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов по кандидатским диссертациям: в Российском паразитологическом журнале (№ 3, 2010), журнале «Овцы, козы и шерстяное дело» (№ 4, 2009). Результаты научных исследований также опубликованы в материалах международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (2007, 2008, 2010) и XVI московского международного ветеринарного конгресса (2008).
Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 120 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение, заключение, а также выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы содержит 182 источника, из них 49 отечественных и 133 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 7 рисунками.
