Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1 1. Эффективность препаратов на основе авермектинов при гиподерматозе крупного рогатого скота 9
1.2. Переносимость и влияние препаратов на основе авермектинов на физиологический статус сельскохозяйственных животных 14
1.3. Фармакокинетика и выделение с молоком препаратов на основе авермектинов и милбемицинов у сельскохозяйственных животных 19
1.4. Переносимость препаратов на основе клозантела у жвачных 31
2. Собственные исследования 35
2.1. Материалы и методы 35
2.2. Результаты исследований 41
2.2.1. Оценка эффективности аверсекта-3 различного компонентного состава при ранней и поздней химио терапии гиподерматоза крупного рогатого скота 41
2.2.2- Влияние аверсекта-3 на биохимические и гематологические показатели у коров 45
2.23. Сравнительное изучение фармакокинетики аверсекта-3 у коров и телят 55
2.2.4. Изучение выделения аверсекта-3 с молоком укоров 57
2.2.5. Оценка болевой реакции и местного раздражающего действия у крупного рогатого скота и овец при введении 10% клозантина 62
2.2,6, Сравнительное исследование влияния 10% клозантина, 10% сантела и 5% роленола на молочную продуктивность коров 67
Обсуждение 74
Выводы 84
Практические предложения 86
Список литературы 87
Приложение
- Переносимость и влияние препаратов на основе авермектинов на физиологический статус сельскохозяйственных животных
- Фармакокинетика и выделение с молоком препаратов на основе авермектинов и милбемицинов у сельскохозяйственных животных
- Оценка эффективности аверсекта-3 различного компонентного состава при ранней и поздней химио терапии гиподерматоза крупного рогатого скота
- Оценка болевой реакции и местного раздражающего действия у крупного рогатого скота и овец при введении 10% клозантина
Введение к работе
Актуальность проблемы. Паразитарные б олезни, в том числе гипо-дерматоз и фасциолез, наносят большой ущерб животноводческим хозяйствам, У инвазированных оводами и фасциолами животных снижается продукция молока, мяса, качество шкур и т.д. В нашей стране распространение двух этих инвазий носит, как правило, массовый характер.
Своевременное проведение регулярных противопаразитарных мероприятий позволяет снизить ущерб и получать продукцию высокого качества в большем объеме. Последнее должно обеспечиваться применением высокоэффективных и безопасных препаратов как для животных, подвергающихся лечению ими, так и человека - потребителя потенциальных продуктов животноводства.
Аверсект-3 на основе авермектинов (НБЦ «Фармбиомед») является новым препаратом для лечения гиподерматоза крупного рогатого скота. Его уникальное свойство заключается в том, что в силу определенного соотношения авермектинов А и В, он в значительно меньшей степени, чем другие препараты этой группы выделяется с молоком, Это позволяет широко применять его на дойном стаде. В силу того, что это совсем новый препарат, многие вопросы по его характеристике нуждаются в оценке и изучении, В частности, имеется возможность оценить эффективность образцов аверсекта-3 с различным соотношением А- и В-компонентов и при этом установить активность отдельных авермектинов в отношении возбудителя гиподерматоза крупного ро-
гатого скота. Кроме того, необходимо оценить переносимость препарата у крупного рогатого скота при исследовании биохимических и гематологических показателей, а также подтвердить саму идею создания аверсекта-3, т.е. определить характер его выделения с молоком коров,
Клозантин (НБЦ «Фармбиомед») представляет новый фасциолоцид на основе клозантела. Известно, что побочным действием препаратов на его основе является болевая реакция и раздражающее действие в месте инъекции. Оригинальный состав клозантина позволяет устранить эти недостатки.
Все это определяет актуальность выбранной темы и указывает на необходимость проведения соответствующих исследований-
Цель и задачи исследовании Целью исследований была оценка эффективности аверсекта-3 различного компонентного состава при гиподерма-тозе, и изучение некоторых вопросов безопасного применения аверсекта-3 и клозантина на крупном рогатом скоте.
Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
Оценить терапевтическую эффективность образцов аверсекта-3 различного компонентного состава при ранней и поздней химиотерапии гипо-дерматоза крупного рогатого скота (Hypoderma bovis).
Оценить влияние аверсекта-3 на биохимические и гематологические показатели у крупного рогатого скота.
Определить остаточные количества аверсекта-3 в молоке.
Определить фармакокинетические параметры аверсекта-3 у телят и коров.
Оценить местное раздражающее действие 10% клозантина у крупного рогатого скота и овец,
Оценить стрессовую реакцию у дойных коров при введении 10% клозантина.
Научная новизна.
Впервые в сравнительном аспекте оценено действие А- и В-авермек-тинов на Hypoderma bovis.
Проведена объективная оценка переносимости аверсекта-3 у крупного рогатого скота с исследованием большого набора биохимических и гематологических показателей.
Установлено минимальное выделение аверсеіега-3 с молоком, что позволяет использовать его для обработки лактируюших животных.
Изучены фармакокинетические параметры аверсекта-3, а также отдельных компонентов, входяших в его состав, у различных возрастных групп крупного рогатого скота.
Установлено отсутствие местного раздражающего действия и минимальная стрессовая реакция у коров при введении 10% клозантина.
Практическая значимость. Результаты проведенных исследований использованы в материалах для регистрации аверсекта-3 и клозантина (про-
ектах наставления и инструкции по применению, заявке на регистрацию), а также в заявке № 2003104229 на патент «Противопаразитарное средство».
Апробация работы. Результаты исследований были представлены на отчетных научных конференциях ВИГИС и научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями».
Публикации. По материалам диссертации опубликованы две научные статьи.
Основные положениЯі выносимые на защиту.
Эффективность аверсекта-3 с различным соотношением А- и В-ком-понентов против Hypoderma bovis.
Влияние аверсекта-3 на биохимические и гематологические показатели у крупного рогатого скота.
Кинетика выделения аверсекта-3 с молоком у коров.
Особенности фармакокинетических параметров аверсекта-3 у телят и коров,
Оценка местного раздражающего действия и стрессовой реакции у коров при введении 10% клозантина.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 98 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы собственных исследований, заключения, выводов, практических предло-
жений, списка литературы и приложения- Список литературы включает 134 источника, в том числе 38 отечественных и 96 иностранных. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 13 рисунками.
Переносимость и влияние препаратов на основе авермектинов на физиологический статус сельскохозяйственных животных
Препараты на основе авермектинов были тщательно оценены на переносимость у сельскохозяйственных животных различных видов, из них наиболее изученным является ивомек. Крупный рогатый скот. Определяли острую токсичность ивермектина при подкожном введении в дозе до 8 мг/кг. При введении препарата в этой дозе животные стали менее подвижными, у них развилась атаксия. Один из 3 опытных телят пал. Имелись изменения следующих биохимических и гематологических показателей крови: глюкозы, концентрации натрия, калия, мочевины, щелочной фосфатазы, лактатдегидрогеназы, а также гематокрита и гемоглобина. Было характерно резкое снижение концентрации железа, однако, через 7-10 суток наблюдали восстановление этого показателя у оставшихся в живых телят (Leaning W.H.D., Roncalli R.A., Brokken E.S., 1983). Brem J.J., Balman G.M. (1986) оценивали влияние ивомека при введении в терапевтической дозе (0,2 мг/кг) на гематологические и биохимические показатели у коров через 1 и 7 суток после введения. Изменения отсутствовали за исключением повышения уровня эритроцитов, возможно, за счет дегельминтизации животных. При введении препаратов на основе ивермектина для перорального и подкожного введения соответственно в дозе 4 мг/кг (20-кратная терапевтическая доза) у животных отмечали угнетение и атаксию на первый день после введения, правда, авторы связывают эти эффекты с пропиленгликолем, входящим в состав лекарственных композиций (Leaning W.H.D., Roncalli R.A,, Brokken E.S., 1983). Ивомек в двукратной терапевтической дозе не оказывал эмбриотоксиче- ского и тератогенного действия на стельных коровах при введении в различные периоды эмбриогенеза (Leaning W.H.D., Roncalli R.A., Brokken E.S., 1983), Интересно отметить, что побочные реакции в результате применения ивомека у крупного рогатого скота могут возникнуть в результате несвоевременного лечения или массовой гибели личинок Hypoderma bovis и нематод (Berry G.W., Ernst J.V., Crawly R,R., 1983; Campbell W,C, Benz G.M., 1984). В Австралии имеется инъекционная форма на основе авермектина В і (абамектина). Проведено 21 исследование по ее переносимости на 477 головах- Доза колебалась от 0,3 мг/кг (терапевтическая) до 8 мг/кг. Уже в дозе 1 мг/кг появлялись первые признаки токсикоза (угнетение и атаксия), и эта доза была признана, как максимально переносимая, В дозе 0,3 мг/кг препарат не обладал репродуктивной токсичностью (Seaman JT., Eagleson J,S., Carri-ganMXetal., 1987). Овцы и козьи После введения овцам ивомека в дозе 8 мг/кг наблюдали картину отравления, которая выражалась в отсутствии координации, атаксии и т.д.; через 3 суток состояние овец нормализовалось. Гематологические и биохимические показатели не изменились после обработки препаратом (Hotsonl.K., 1983), Введение овцам ивомека в дозе, превышающей терапевтическую в 25 раз, не вызывает у них выраженного клинического проявления токсикоза.
При двукратной подкожной инъекции ивомека с интервалом 14 суток в дозе 0,2 мг/кг у овец не происходило количественных изменений форменных элементов крови, белкового и азотистого обмена. Препарат не оказывал отрицательного влияния на содержание аскорбиновой кислоты и активности глутатиона, ферментов переаминирования и лейцинаминопептидазы в крови (Ремез В.И.» Золотухина Л.З.» Овсянникова Ю.П., 1989). В Новой Зеландии на 136 суягных овцематках было оценено возможное эмбриотоксическое и тератогенное действие ивомека; препарат вводили в различные периоды с 0 по 43 день суягности. Эмбриотропное действие во всех случаях отсутствовало (Hotson I.K., 1983). У коз при внутримышечном введении ивомека в дозе 2 мг/кг наблюдали признаки выраженной болевой реакции во время и сразу же после инъекции, однако симптомы проявления системного действия отсутствовали- При замене внутримышечного введения на подкожное у коз по-прежнему наблюдали боль в течение 1-2 минут после инъекции, однако признаки токсикоза отсутствовали в дозах 0,4; 0,8 и 1,6 мг/кг (Njanja J.C., Bell J,F., Wescott R-B., 1985). Свиньи. Признаки токсикоза после введения ивомека наблюдали у свиней в дозах в 10; 50 и 100 раз превышающих терапевтическую дозу. Картина отравления выражалась в угнетении и атаксии, В дозе 30 мг/кг имело место изменение следующих биохимических показателей: щелочной фосфа-тазы, холестерина, триглицеридов, глюкозы, фосфора, калия, креатинина, прямого билирубина и мочевины. У некоторых поросят имел место лейкоцитоз и нейтрофилия» правда, последнее авторы расценивают, как последствие местной воспалительной реакции на введение препарата в большом объеме. Концентрация железа снизилась на 8-14 сутки после введения (Campbell W.C.,BenzG.WM1984).
Фармакокинетика и выделение с молоком препаратов на основе авермектинов и милбемицинов у сельскохозяйственных животных
В результате широкого применения препаратов на основе авермектинов и милбемицинов для лечения многих паразитарных заболеваний у различных сельскохозяйственных и домашних животных большое внимание было уделено изучению их всасывания, распределения, выделения и метаболизма. При внутривенном введении крупному рогатому скоту период полувыведения составил 2,8 суток с очень большим объемом распределения, равным 1,9 л/кг, что можно объяснить высокой липофильностью препарата (Wilkinson РЛС., Pope D.a, Baylis F.P,, 1985). Schnitzerling H.J. и Nolau J. (1985) установили примерно такой же период полувыведения у коров, равный 3 суткам. При подкожном введении ивермектина крупному рогатому скоту в дозе 0,3 мг/кг период полувыведения составил 70 ч (Jacob Т.АМ Buks R.P., Carlin J.R.etaL, 1983). Определяли фармакокинетические параметры ивермектина при внутривенном введении и при введении в сычуг и рубец у овец. В первом случае препарат элиминировал очень медленно при величине периода полувыведения, равного 178 ч и объеме распределения 5,3 л/кг. При введении в сычуг ивермектин всасывался очень быстро, так, максимальная концентрация, рав-ная 60,6 нг/мл, достигалась уже через 4,4 ч при 100% биодоступности Однако при введении в рубец ивермектин в крови детектировался в значительно меньшей концентрации (17,6 нг/мл через 23,5 ч), а биодоступность составила только 25%. Кроме того, предварительно было установлено, что ивермектин может метаболизироваться в сычуге (Prichard R.K., Steel J-W., Lacey E, et al., 1985). У овец период полувыведения составил 2,7 суток, т.е. очень близкий к данному показателю у крупного рогатого скота. Однако значительно различался объем распределения, так у овец он составил 4,6 л/кг, в то время как у крупного рогатого скота он был значительно меньше (1,9 л/кг) (Fink D.W,, PorrasA.a, 1989).
Изучали фармакокинетику ивермектина на шести лактирующих овцах. Препарат вводили однократно подкожно в дозе 0,2 мг/кг массы тела. Наблю дался большой разброс в значениях параметров между отдельными живот ными. У одного животного была установлена максимальная концентрация в плазме крови (21,7 мкг/л) и молоке (44,9 мкг/кг) на первый день после введе ния препарата. Соотношение содержания препарата в молоке/плазме соста вило 1,67±0,50 в течение первых 7 суток. В среднем 0,7% дозы выделилось с молоком. Представляет интерес показать отдельные фармакокинетические параметры tma„ С , 1\а и AUC для плазмы и молока соответственно: 1,70±0,65 суток; 11,88±6,96 мкг/л; 2,85±1т97 суток; 63,99±28,34 мкг.сутки/л соответственно и 1,28±1,07 суток; 22,67±18,27 мкг/л; 3,56 2,01 суток и 114,60±60,41 мкг.сутки/л (Cerkvenik V., Grabnar I.f Scubic V. et ah, 2002). Лактирующим овцам вводили [Нэ]-меченный авермектин В1а через рот в дозах 0,005; 0,05 и 1,0 мг/кг в каждом случае в отдельности. После введения в третьей дозе наблюдали максимальные концентрации в фекалиях, моче и молоке. Большая часть введенной дозы (89-99%) выделялась с фекалиями и только 1% — с мочой или молоком, Неизмененный авермектин Ви составлял 70-95% от общих остатков. Основной метаболит — продукт гидроксилиро-вания в 24-ом положении — 24-(гидроксиметил)авермектин В]а (Maynard M.S., Wislocki P.G., Ku С.С., 1989), Исследователи не обошли своим вниманием даже таких экзотических животных, как буйволы и ламы, Ивермектин вводили подкожно буйволам в дозе 0,2 мг/кг массы тела и определяли его распределение в плазме и молоке. Ивермектин достигал максимальной концентрации в плазме крови (28,5±10,7 нг/мл) и молоке (23,6±2,6 нг/мл) через 2,4±0,32 и 2,8±0,44 суток соответственно. Отношение концентрации ивермектина в плазме/молоке составило 1,12±0Д6. Ивермектин обнаружили в сыре, полученном из молока, отобранном через 1, 3, 4 и 20 суток после введения. Интересно, что наиболее высокое содержание (81,4±3,26 нг/мл) установили в сыре, произведенном на 3 сутки, и оно было в 4 раза выше, чем в молоке (Anastasio A,, Esposito Мм Amorena М. et ah, 2002).
Оценка эффективности аверсекта-3 различного компонентного состава при ранней и поздней химио терапии гиподерматоза крупного рогатого скота
Выше уже отмечалось, что состав аверсекта-3 был специально адаптирован для применения на лакгирующих коровах. Однако при общей тенденции к снижению основного интенсивно выделяющегося с молоком компонента Bj содержание этой и других фракций может колебаться довольно в широких пределах. Кроме того, в данном случае представляло интерес определить чувствительность Hypoderma bovis к отдельным авермектинам. Состав трёх образцов по общему содержанию А- и В-компонентов представлен в таблице 2.2.1.1. и на рисунке 2.2.1.1. Как из них следует, соотношение А- и В-компонентов колеблется в довольно широких пределах: в обраще Кк 1 преобладают авермектины їрушш В, н образце ДЬ 2 -- напротив авермектмпм трутшы Л н, наконец, в образце № 3 - примерно одмнаковое количество ішерме&іш-шв обоих видов. Содержание ш ермектнна В, во всех ш oyxve-мых образцах пе превышало 14%. Проанализируем данные таблицы 2.2.1.4., как отражающие в целом полученные данные. Все три образца проявили вполне удовлетворительную эффективность как при ранней химиотерапии (осенью), так и при поздней химиотерапии (весной) гиподерматоза крупного рогатого скота.
В последнем случае несколько более низкую. При ранней химиотерапии, эффективность трёх препаратов по ЭЭ колебалась в пределах 90-95%, а ИЭ - 92-98%. Причём, наиболее высокие результаты наблюдались при использовании образца № 2 с высоким содержанием авермектинов А - соответственно 95 и 98,6%, Напротив при поздней химиотерапии данный образец оказался наименее эффективным: ЭЭ и ИЭ составили соответственно 77% и 88%, а наилучшие результаты показал образец № 3 (ЭЭ = 90% и ИЭ = 94%), Следует отметить, что и при осенней обработке он был достаточно эффективным (ЭЭ = 90% и ИЭ = 92,0%). Таким образом, на основе полученных данных можно высказать минимум три интересных предположения: возможно личинки Н. bovis обладают различной возрастной чувствительностью к авермектинам групп А и В: так, если личинки 1-го возраста чувствительны ко всем авермектинам и даже несколько более чувствительны к авермектинам группы А, то личинки ІЬго и Ш-го возраста более чувствительны к авермектинам группы В; авермектины группы А, обладая положительным воздействием на иммунную систему и занимая доминирующие положение в образце № 2, делают его наиболее эффективным при профилактической (осенней обработке), в то время, как авермекгины группы В в основном оказывают лечебное действие в отношении #. bovis. Широкий ряд используемых биохимических показателей позволяет утверждать, что в данном случае оценивалось влияние аверсекта-3 на различные стороны обмена и функциональное состояние органов и систем у коров. Препарат вводили в двух дозах: ранее рекомендованной терапевтической до-зе, т.е. из расчета 1 мл на 50 кг массы тела (Головкина JLIL, Дрнняев В.А., Сивков ПС, 2000; 2001; Головкина Л.П., Сивков ГЛ., Шевкопляс В Л. и др., 2002; Дриняев ВА, Мосин В.А., Головкина Л.П. и др., 2002) и в два раза превышающей ее дозе. Результаты определения биохимических показателей крови у коров до и после введения аверсекта-3 представлены в таблице 2.2.2.1. Необходимо отметить, что в данном исследовании была дана оценка довольно большому числу показателей, характеризующих белковый, углеводный и жировой обмен, а также функциональное состояние различных органов. При этом исследовались как первичные реакции на введение препаратов, т.е., например, на 1 и 3 сутки, так и в более поздние, т.е. на 5 и 10 сутки.
Оценка болевой реакции и местного раздражающего действия у крупного рогатого скота и овец при введении 10% клозантина
Еще одним интересным фрагментом работы, входящим в задачи наших собственных исследований, было определение фармакокинетических параметров аверсекта-3. Их первой отличительной особенностью была оценка фармакокинетики отдельных анализируемых компонентов, входящих в состав препарата, а именно Ва и В2а- Установленный период полувыведения Ва и В2а У коров и телят, находящийся в пределах 3-5 суток, близок к аналогичному показателю ивермектина, равного 2,8 суткам (Jacob Т,А., Buks R.P-, Carlin J.R. et Ва и В2а в зависимости от возраста животных. Так, оба авермектина всасываются медленно при подкожной инъекции, но у взрослых животных несколько быстрее, чем у телят. У коров отмечается более высокая биодоступность обоих авермектинов по сравнению с телятами, а Ва выделяется у первых медленнее (t равен 113,41 ч по сравнению с 73,39 ч у телят). На наш взгляд, первое и второе связано с большим количеством жировой ткани у коров, что определяет распространение и удерживание липофильных авермектинов, особенно Віа, в организме. 10% клозантин был еще одним препаратом, входившим в объем наших исследований,
В разделе 1.4. «Обзора литературы» уже упоминалось о побочных эффектах, свойственных препаратам на основе клозантела, в число которых входят как системные, так и местные реакции. Наши исследования были направлены на последнее. Целый ряд авторов отмечает, что при внутримышечном и подкожном введении препаратов этой группы овцам и крупному рогатому скоту у животных отмечается болевая реакция и раздражающее действие в месте инъекции- Несмотря на имеющиеся отдельные сообщения, на наш взгляд, этот вопрос не дооценивается, видимо, в силу коммерческих соображений. Хотя, даже в инструкциях по применению роленола, сантела, клозантекса и других лекарственных средств указывается на возможность возникновения припухлости в месте инъекции.
В задачи наших исследований входила оценка болевой реакции и раздражающего действия в месте инъекции 10% клозантина, разработанного с целью снятия этих отрицательных проявлений у животных. Причем, в данном случае мы распространили свои исследования и на овец. Подробно их результаты описаны в разделе.2,2,5. Во избежание повторения только отметим, что 10% клозантин в плане проявления отмечетшых побочных реакций имеет явные преимущества по сравнению с санталом, роленолом и клозантином, что делает его качественно иным препаратом, поскольку болевая реакция и местная реакция помимо этических соображений приводят к проявлению стресса у животных.
Последнее вызывает пусть и кратковременные, но ощутимые изменения в поведении и продуктивности животных. В последнем случае мы попытались оценить молочную продуктивность в ответ на введение трех препаратов на основе клозантела: клозантина, сантела и роленола. Хорошо известно, что в результате длительного выделения клозантела с молоком, препараты на его основе не применяются на дойном стаде. Однако в данном случае изменения суточных удоев молока мы использовали как критерий проявления стрессовой реакции у коров. Все три препарата, включая и клозантин, привели к временному снижению суточных удоев, но к наибольшему падению этого показателя привел сантел, вероятно, этот препарат вызывает наиболее выраженную стрессовую реакцию. Падение молочной продуктивности для всех трех препаратов носило кратковременный характер. Не останавливаясь на некоторых особенностях, характерных для каждого препарата, в целом к 5-м суткам имело место ее восстановление до контрольного уровня. На наш взгляд, снижение молочной продуктивности при введении препаратов на основе клозантела служит еще одним серьезным предостережением для ветеринарных врачей: не использовать данные лекарственные средства на лактирующих животных.
Таким образом, в своей работе мы выяснили некоторые интересные особенности противогаподерматозного действия авермектинов А и В, подтвердили хорошую переносимость аверсекта-3 и его слабое выделение с молоком, выявили особенности фармакоки нетики авермектинов Bia и Вга по сравнению друг с другом и в зависимости от возраста животных, а также оценили хорошую мест ную переносимость клозантина. Все вышесказанное имеет не только большой научный интерес, но также служит предпосылками для широкого применения новых перспективных препаратов аверсекга-3 и клозантана в ветеринарии с гарантией безопасности как для животных, подвергающихся лечению ими, так и для потребителей продуктов питания от животноводства. Основные результаты проведенных исследований в конкретной и лаконичной форме приведены в последующем разделе «Выводы».
