Содержание к диссертации
Введение
1. Эпизоотологические особенности фасциолеза 9
2. Диагностика гельминтозов 16
2.1 Копроскопическая диагностика 16
2.2 Серологическая диагностика 20
2.3 Аллергическая диагностика 28
3 Лечение при фасциолезе 35
1 Материал и методы 44
2. Результаты исследования 49
2.1 Эпизоотологическая ситуация по фасциолезу крупного рогатого скота в республике Татарстан 49
2.2 Совершенствование прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота 59
2.2.1 Изучение диагностической эффективности различных гельминтоовоскопических методов 59
2.2.2 Совершенствование серологической диагностики фасциолеза 71
2.2.3 Аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота 92
2.3 Сезонная динамика и продолжительность сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота 98
2.4 Эффективность некоторых антгельминтиков при фасциолезе крупного рогатого скота 102
2.5 Индукция противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота на фоне спонтанного фасциолеза. 109
Обсуждение результатов исследований 114
Выводы 138
Практические предложения 140
Список литературы 141
Приложение 163
- Эпизоотологические особенности фасциолеза
- Серологическая диагностика
- Совершенствование прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота
- Сезонная динамика и продолжительность сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота
Введение к работе
Актуальность проблемы. В результате проведения оздоровительных мероприятий в ряде областей и республик Российской Федерации в последние годы достигнуты определенные успехи в снижении заболеваемости сельскохозяйственных животных гельминтозами. Однако, ущерб, наносимый животноводству инвазионными заболеваниями, продолжает оставаться значительным.
Одним из широко распространенных в Республике Татарстан гельминтозов в популяции крупного рогатого скота является фасциолез. В ряде хозяйств вовлеченность крупного рогатого скота в паразитарную систему фасциолезной инвазии достигает 40 и более процентов с развитием тяжелых, а порой необратимых форм патологии. При остром течении болезни нередко отмечают гибель, а при хроническом - снижение упитанности, прироста массы тела, молочной продуктивности животных (Н.В. Демидов, 1965; 1979; A.M. Сазанов, 1974; Я.Г. Гаджиев, 1983; СП. Убираев, 1995).
В литературе имеется достаточное количество работ по изучению гельминтологической ситуации в популяциях различных видов животных в хозяйствах Республики Татарстан (А.В. Ефимов, М.Т. Нигматуллин, 1936; И.П. Горшков, 1936; В.Г. Эвранова, 1942, 1957; М.Х. Лутфуллин, Ф.М. Шакурова и др., 1996; А.Х. Волков, 1997; М.Х.Лутфуллин, Д.Г. Латыпов и др., 1999; А.Х. Волков, Т.С. Садыков и др., 2000). Однако, ряд вопросов, касающихся эпизоотологического надзора, совершенствования методов прижизненной диагностики паразитарной системы фасциолеза, требуют дальнейшего изучения.
Основным методом борьбы с фасциолезом в настоящий период является дегельминтизация. Однако решающее значение в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при этом паразитозе имеет своевременная и безошибочная диагностика. Традиционные методы копрологической
диагностики гельминтозов, в том числе и фасциолеза, которые существуют в настоящее время (последовательного промывания, Демидова, Вишняускаса и др.) требуют совершенствования, так как не позволяют выявлять ранние (начальные) стадии заболеваний. Поэтому в настоящее время настойчиво предпринимаются попытки диагностики заболеваний на ранней, личиночной стадии развития возбудителя путем использования различных иммунологических реакций (РСК, РНГА, реакция преципитации, аллергическая проба, ИФА и т.д.). Однако иммунологические методы диагностики разработаны недостаточно.
Поэтому разработка новых более чувствительных копрологических, а также иммунологических методов диагностики фасциолеза в ранних стадиях его развития в организме животных остается актуальной проблемой.
Цель и задачи исследований. Целью нашей работы является совершенствование методов прижизненной диагностики фасциолеза.
Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:
изучить распространение и сезонную динамику паразитарной системы фасциолеза в популяции крупного рогатого скота в Республике Татарстан;
усовершенствовать методы копрологичекой диагностики фасциолеза крупного рогатого скота;
разработать и изготовить соматические антигены фасциол для реакции связывания комплемента (РСК), иммуноферментного анализа (ИФА), изучить их специфичность и активность;
в сравнительном аспекте изучить разрешающую способность РСК, ИФА, при диагностике фасциолеза;
изучить антгельминтную эффективность некоторых препаратов (вермитан, роленол, сантел, альбамелин, клозальбен) при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота;
- определить роль фасциол в возникновении неспецифических реакций при бруцеллезе.
Научная новизна. Впервые выявлены условные зоны распространения фасциолеза в условиях Республики Татарстан и усовершенствован гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.
Разработан оригинальный способ изготовления высокоэффективного диагностикума из F. hepatica для постановки реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа.
Определена разрешающая способность серологических реакций при диагностики острого фасциолеза крупного рогатого скота.
Установлено гетерогенное воздействие фасциол на индукцию противобруцеллезных антител у крупного рогатого скота в хозяйствах, благополучных по бруцеллезу.
Практическая ценность. Изучена эпизоотическая ситуация фасциолеза крупного рогатого скота в Республике Татарстан и определены зоны с различной степенью экстенсивности инвазии. Разработан и предложен более эффективный гельминтоовоскопический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота.
Предложен метод объективной оценки эпизоотологической ситуации при остром фасциолезе (в период миграции молодых фасциол в печени), а также определение антгельминтной эффективности препаратов с помощью реакции связывания комплемента с фасциоловым антигеном.
В хозяйствах, неблагополучных по фасциолезу, с целью дифференциации положительно реагирующих на бруцеллез животных необходимо исследовать в РСК с фасциоловым антигеном.
Внедрение исследований. Приготовленные антигены для серологической диагностики испытаны и внедрены в республиканской ветеринарной лаборатории и районных ветеринарных лабораториях
Республики Татарстан с целью дифференциации неспецифических реакций у коров, положительно реагирующих на бруцеллез.
На основании проведенных исследований разработаны следующие нормативно-технические документы:
Временная инструкция по изготовлению и контролю фасциолового антигена для РСК. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.
Временное наставление по постановке и учету РСК с фасциоловым антигеном. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.
Технические условия (ТУ) на изготовление, контроль и применение экспериментальных серий фасциолового антигена. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.
Методические указания по дифференциации зараженного фасциолезом крупного рогатого скота от реагирующих положительно на бруцеллез животных. - Утв. ГУВ КМ РТ 10 сентября 2001 г.
Результаты проведенных исследований, сформулированные в диссертации, внедрены в учебный процесс на кафедре паразитологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на республиканской научно-производственной конференции (Казань, 1999, 2001); международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000); секции паразитологии второго съезда ветеринарных врачей (Казань, 2000); на объединенных сессиях координационного совета по ветеринарной гельминтологии (Москва, 2000-2001); научно-техническом совете Казанской государственной академии ветеринарной медицины (Казань, 2001); всероссийской научно-производственной конференции (Казань, 2002); расширенном заседании сотрудников кафедр паразитологии, эпизоотологии, патологической анатомии,
анатомии, физиологии, акушерства, фармакологии, хирургии и биохимии КГАВМ (Казань, 2003).
Основные положения, выносимые на защиту:
Фасциолез как инвазионная паразитарная система (распространение и сезонная динамика);
Усовершенствованный метод копрологической диагностики фасциолеза - наиболее эффективный метод прижизненной диагностики этой патологии;
Способ получения антигенов для серологической диагностики фасциолеза оказался эффективным и востребованным;
Комплекс методов прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота обеспечивает своевременное и надежное распознавание этой патологии;
Антгельминтная эффективность различных препаратов при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота, возможно оценивать по продолжительности специфического антителообразования;
Спонтанный фасциолез в ряде случаев является причиной индукции противобруцеллезных антител в популяции крупного рогатого скота.
Публикации. По материалам диссертации опубликованы 12 научных работ и получено удостоверение на рационализаторской предложение (№ 423-02 за 2002).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 167 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 5 рисунками. Включает введение, обзор литературы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и приложение. Списк ипользованной литературы включает 202 источника (в том числе 40 иностранных авторов).
Эпизоотологические особенности фасциолеза
Возбудителя фасциолеза в Российской Федерации являются трематоды двух видов Fasciola hepatica (Linnaeus, 1758) и Fasciola gigantica (Cobbold, 1885) из сем. Fasciolidae. Половозрелые трематоды паразитируют в желчных ходах печени. В Нечерноземной зоне у животных паразитируют лишь один вид F. hepatica.
Дефинитивными хозяевами F. hepatica являются представители более 40 видов млекопитающих, относящихся к двум классам, пяти отрядам и 16 семействам (К. И. Скрябин, 1948; Н. В. Давыдов, 1965). Fasciola hepatica - паразит, встречающийся во всех частях света. Он особенно часто наблюдается там, где имеются благоприятные условия для его развития, то есть болота и низменные луга, где обитает промежуточный хозяин - малый прудовик.
В некоторых районах из-за постоянных вспышек фасциолеза сильно страдают овцы. Но и в местах, относительно благополучных по фасциолезу, время от времени вспыхивают опустошительные эпизоотии. Это чаще всего бывает в годы, особенно богатые осадками (К.И. Скрябин, Р. Шульц, А. Метелкин, П. Попов, 1934; К.И. Скрябин, В.Г. Эвранова, 1952). D. Babalola, Т. Schillhorn van Veen (1976) на мясокомбинате г. Баучи (Северо-восточной Нигерии) исследовали 14 270 печеней крупного рогатого скота на зараженность Fasciola gigantica. Пик зараженности (около 70 %) отмечали в марте-апреле и сентябре-октябре. Экономический ущерб только от выбракованных печеней составил за год 19 375 наир.
По сообщениям А. Петкова и др. (1977), научно-производственным объединением «Ветеринарное дело» проведен анализ статистических данных о распространении и сезонной динамике фасциолеза у крупного рогатого скота и овец в Болгарии за 1966-1976 гг. Наиболее сильно фасциолез распространен в высокогорных районах и на Дунайской равнине, а так же в равнинных районах Южной Болгарии с высоким уровнем подпочвенных вод. Экстенсинвазиро-ванность и интенсинвазированность животных значительно увеличиваются в осенне-зимние месяцы, причем в октябре-ноябре и в январе-феврале фасциолез выявлен у многих животных 4-5 недельного возраста.
В.Н. Баягин (1976) также отмечает, что фасциолез мелкого и крупного рогатого скота широко распространен в Узбекистане и наносит большой ущерб, особенно ощутимый в Хорезмской области. Возбудителем фасциолеза здесь является Fasciola gigantica.
Ш.А. Азимов и Б.С. Салимов (1977) отмечают, что в Узбекистане крупный рогатый скот является основным источником распространения фасциолеза. Преимагинальные формы фасциол обнаруживаются в течение всего года. У крупного рогатого скота минимальное количество неполовозрелых фасциол отмечают в феврале-марте. В остальные периоды года они встречаются в печени животных довольно часто, причем в наибольших количествах в конце осени. Ш.А. Азимов, Т.В. Катайцев, М.Б. Бабаева (1989) изучили распространение фасциолеза в Ташкентской, Сырдарьинской и Джизакской областях. Исследование проводили методом гельминтологических вскрытий печени от животных различных районов 3-х областей. Вскрывали печень от 176 и частично исследовали - от 1463 животных. Максимальную интенсивность инвазии фасциол выявили у крупного рогатого скота Сырдарьинской области 190 экз., в Джизакской области 197 экз., у овец - 8 экз.
Согласно сообщениям А. Алиева (1981) за 1976-1978 гг. пораженность крупного рогатого скота фасциолами в отдельных хозяйствах Азербайджана достигала 82,5 - 100 %. Основной причиной широкого распространения фасциолеза явилось осуществление крупных ирригационных и мелиоративных мероприятий, что отразилось на увеличении численности пресноводных моллюсков, являющихся промежуточными хозяевами фасциол. A.M. Атаев (1989) изучал распространение и особенности профилактики фасциолеза овец при различном содержании в Дагестанской АССР. При стационарно-пастбищном содержании овец наиболее интенсивнее их заражение адолескариями происходит с июля по ноябрь. При отгонно-пастбищном содержании поголовья инвазирование начинается в октябре, ноябре, иногда в декабре и январе.
По данным Д.К. Карабаева (1962) в условиях Юго-Востока и Юго-Запада Казахстана фасциолез крупного и мелкого рогатого скота является весьма распространенным заболеванием. Вызывается он двумя видами: фасциолой обыкновенной и фасциолой гигантской. При исследовании печени 1675 голов крупного рогатого скота установлено, что наибольшая инвазированность фасциолезом отмечалась в декабре, наименьшая - в марте. Р.Н. Самигуллин (1977), Х.В. Аюпов, Х.Г. Нурмухаметов (1983) изучили эпизоотологию фасциолеза жвачных в Башкирской Республике, где фасциолез зарегистрирован в 224 хозяйствах, из них 182 - находилось в лесостепной, 26 - степной, 16 - горно-степной зонах. Е. Шакиев (1978) сообщает, что в хозяйствах Каракалпакской АССР у жвачных животных паразитируют фасциолы гигантские, обуславливающие более тяжелое течение инвазии с губительными последствиями; интенсивное заражение животных происходит в период наибольшей пораженности моллюсков партенитами паразита (в конце лета и осенью). По данным И.П. Яворского (1989) в Предкарпатье фасциолез распространен широко. Площади опасные в отношении этой трематоды составляют 25-30 %. Промежуточным хозяином является малый прудовик. Источником инвазии являются неупорядоченные природные пастбища. По данным П.Г. Романенко, И.С. Дахно, Г.Ф. Дахно и др. (1991) инвазированность крупного рогатого скота фасциолезом в Сумской области составляет 55-100 %. Инвазированность крупного рогатого скота фасциолезом в Удмуртской республике составляет 68,8-86,7 % (А.В. Малахов, 1991). По данным А.И. Коваленко, Л.М. Коваленко и др. (1995) на территории Сумской области основными трематодозоми жвачных животных являются фасциолез и дикроцелиоз и очень редко парамфистоматоз, а зараженность ими составляет соответственно 64,7 %, 80,0 % и 36,3 %. Авторы делают вывод о том, то фасциолез и дикроцелиоз жвачных чаще протекает как самостоятельная инвазия и реже в ассоциативной форме. В нашей стране фасциолезом в некоторых местностях поражено 80-100 % овец и крупного рогатого скота. К ним относятся некоторые районы Московской области, многие районы Поволжья, Северного Кавказа, почти вся Ивановская область, Северный край, Ленинградская область (К.И. Скрябин, Р.С. Шульц, А. Метелкин, Н.П. Попов, 1934; Х.В. Аюпов, 1968;Н.В. Демидов, Б.В. Яхонтов, 1968; В.В. Горохов, 1983; М.И. Акбаев, 2000). Д.И. Панасюк, В.И. Фетисов (1977), В.В. Кузмичев (1985), М.С. Мамедов, В.П. Крайнева, Л.В. Смирнова (1991) приводят сведения по распространению фасциолеза в различных регионах Нечерноземной зоне Российской Федерации на основании данных мясокомбинатов и собственных эпизоотологических исследований за 1974-1990 годы. Так, в Северо-Западном районе зоны крупный рогатый скот поражен фасциолезом на 7,52-11,7%, Центральном - 18,8-19,3 %, Волго-Вятском - 11,9 - 13,4 %, Уральском - 7,4 - 8,9 % и Псковской области — 33,3 %.
Серологическая диагностика
В литературе имеется значительное количество сообщений о возможности использования различных иммунобиологических методов диагностики гельминтозов. Из них заслуживают внимания реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментный анализ (ИФА), аллергическая проба и другие методы. К числу первых иммунологических методов относится РСК, которая впервые в гельминтологии была апробирована в 1911 году Strobel.
Реакцию связывания комплемента при гельминтозах изучали многие исследователи (А.А. Маркарян, 1960; П.Ф. Полуэктова, 1972; О.Г. Полетаева, Э.Г. Заточкина, 1974; С.Н. Белозеров, Т.С. Подседловская, 1985; А.Я. Сапунов, 1995; Т.А. Козлова, 1999; T.C. Золоткова, М.Д. Новак, 2000; I.C. Petithory, 1973; R. Tiner, 1975; В. Pesson, N. Leder, G. Madulo - Leblond, 1979 et al).
А.И. Маркарян (1960) применил иммунологические реакции для ранней диагностики и определения сроков заражения аскаридозом детей. Им установлено, что чувствительность реакции агглютинации с кармином не много уступает реакции микропреципитации на личинках. Эозинофилия является далеко не постоянным показателем аскаридоза. П.Ф. Полуэктова (1972) изучала динамику накопления гуморальных антител у экспериментально суперинвазированных аскаридами поросят с помощью РСК. В качестве антигена использовала обезжиренные цельные солевые экстракты половозрелых аскарид и их маток, приготовленные по методике, описанной В.К. Бережко (1969) в модификации автора. Установлено, что в РСК антитела выявлялись на 7-10-й день после первичного заражения поросят аскаридами. При суперинвазировании антитела достигали высокого уровня в период между 21-42-м днем и снижались до 0 к 117-132 дню инвазии. О.Г. Полетаева, Э.Г. Заточкина (1974) использовали реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА) для определения длительности сезона заражения в очаге аскаридоза. РИГА с аскаридным диагностикумом автор рекомендует в целях определения риска заражения и длительности эпидемического сезона. А.Я. Сапунов (1995) показал реальную возможность и целесообразность использования серологических методов исследования (РИФ, РЭМА и др.) для изучения в свиноводческих хозяйствах эпизоотической ситуации по паразитоценозам, выявления и последующего удаления из стада не пригодных для воспроизводства инвазированных животных. Г. А. Козлова (1999) разработала тест-систему для диагностики трихинеллеза свиней иммуноферментной реакцией с антигеном, очищенным моноклональными антителами. Динамика иммунного ответа у свиней, зараженных личинками Т. pseudospiralis при применении тест-системы испытуемым и контрольным антигенами, характеризовалась появлением специфических антител на 25-38 и их максимальным уровнем на 85-100 дни после заражения.
К настоящему времени накопилось большое количество фактического экспериментального материала, свидетельствующего об эффективности иммунобиологических диагностических методов. По данным Н.В. Демидова (1965), в некоторых странах (Югославия, Япония, Франция, страны Латинской Америки и др.) антигены из фациол уже применяются в практике медицины и ветеринарии для диагностики фасциолеза.
Наличие специфических антител в крови овец, зараженных фасциолезом, впервые было доказано одновременно Вейнтбергом и Пикканаро (1909). Впервые опыты по иммунобиологической диагностике фасциолеза провел в 1921 году Сервенти, используя в качестве антигена алкогольный экстракт из половозрелых фасциол (по Демидову, 1965).
На современном этапе изучения фасциолеза многими отечественными и зарубежными исследователями (Л.Д. Мартыненко, А.И. Понамарева, A.M. Сухоруков, 1981; I. Frada de Azevedo (1965), P. Ambroise - Thomas, Kien Truong Thai, et al (1967), G. Kagan Irving (1974), J. Kadhmin, al-Attar M (1974), A. Locatelli, T. Simonic (1974), K. Gladusz - Pawiak (1977), E. J. Ruitenberg, A. Capron, D. Bout, F. Knapen (1977), D. Berden, N. Hammet (1978), G. AR. Marrero, N. Santiago, G. V. Hillyer (1988), С Arriada de Morilla, R. Paniagua, A. A. Ruiz - Navarrete (1989), F. Ibarra, N. Montenego, Y. Vera, et al (1998), рекомендованы серологические методы диагностики этой инвазии.
М.А. Бабянскас (1962) установил, что у крупного рогатого скота при фасциолезе в среднем диагностическая точность копрологических показателей равна 37,5 %, аллергических - 74,5 %, а серологических - 87,5 %. На основании проведенных опытов можно утверждать, что для более ранней и точной прижизненной массовой диагностики фасциолеза животных в производственных условиях не следует пренебрегать иммунобиологическими реакциями, которые являются в производственных условиях менее трудоемкими, более ранними и точными, чем копрологические, и не требуют лабораторного оборудования.
Авторы J. Fraga de Azevedo, Coe-Iho Rombert Palmira (1965), J. Crestian (1980) утверждают, что наиболее приемлемой реакцией для серологической диагностики фасциолеза является реакция иммунофлуоресценции. Опыты показали, что у 73 % обследованных фасциолезных животных реакция была положительной и только у 10 % контрольной группы животных отмечено слабое флуоресцирование.
Авторы J. Coudert, Garin J. P., P. Ambroise - Thomas, Kien Truong Thai, J. Despaignis, M.A. Pothier (1967) указывают, что реакция иммунофлюорес-ценции оказалась чувствительней, чем реакция электрофореза, где в качестве антигена использовали микротомный срез свежемороженой фасциолы, после высушивания которых фиксировали и обезжиривали ацетоном. К. Чуперлович (1971) изучал динамику комплементсвязывающих антител у кроликов, экспериментально зараженных F. hepatica. В качестве антигена использовал обезжиренный экстракт половозрелых фасциол, собранных из печени овец через 5 месяцев после экспериментального заражения. Установлено, что иммунологическая реактивность кроликов к заражению трематодой сопровождалась интенсивным образованием комплементсвязывающих антител. По мнению автора, реакция очень удобна для исследования. J. Kadhim, al-Attar М (1974) сообщают, что метод иммунодиффузии в геле приемлем для диагностики фасциолеза овец.
Була п Мирсо, Лалип PadoMHp, MoBcejan Миодраг, Чуперлович Коста (1977) изучили сравнительную эффективность иммунобиологических реакций, предложенных для диагностики фасциолеза. Ими было установлено, что секреторно-экскреторный антиген из фасциол является наиболее удобным для иммунодиагностики фасциолеза у людей и животных. Реакция связывания комплемента и двойной диффузии в агаровом геле являются чувствительными реакциями. Реакция непрямой флуоресценции антител является очень чувствительной и удобной в случаях, когда в качестве антигенов используют срезы половозрелых фасциол или их мирацидии. J. Ecket et al (1977) при исследовании крупного рогатого скота на фасциолез методом непрямой иммунофлуоресценции в модификации Хесса (1974) установили, что у копрологически положительных животных титры флюоресцирующих антител колебались от 1:20 до 1:640, у копрологически отрицательных не превышали 1:10.
Изучена пригодность реакции агглютинациии с латексом для диагностики фасциолеза крупного рогатого скота (К. Gladysz — Pawiak, 1977). Антиген получали гомогенизацией половозрелых фасциол, с последующим многократным замораживанием и оттаиванием, диализацией, центрифугированием и сбором супернатанта. По мнению авторов, этот метод позволяет выявить до 81,7 % инвазированных животных. При интенсивной инвазии и хроническом течении результат был более высоким 90,5 - 91,8 %, а при низкой интенсивности и ранней инвазии - 68,5 — 76,8 %.
Совершенствование прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота
Основой профилактики гельминтозов являются профилактические и лечебные дегельминтизации, целесообразность проведения которых определяется результатами гельминтокопрологических исследований животных.
В практических условиях для гельминтоовоскопических исследований при трематодозах (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистоматоз) у крупного рогатого скота, в основном, применяют метод последовательных смывов. По данным многих авторов и по нашим исследованиям диагностическая эффективность этого метода сравнительно низкая, он не всегда выявляет наличие в организме животных половозрелых трематод, особенно при слабой интенсивности инвазии (ИИ).
Для гельминтовоскопии при трематодозах предложены многочисленные флотационные и комбинированные методы. Однако данные исследований разных авторов о диагностической эффективности того или иного метода в некоторых случаях противоречивы. Имеются сообщения о том, что растворы отдельных солей с увеличением их удельного веса и насыщенности увеличивают флотационную способность по отношению к яйцам трематод, растворы же других солей с увеличением их удельного веса, напротив, задерживают подъем яиц гельминтов. Исходя из вышеизложенного, перед нами была поставлена задача — дать сравнительную оценку эффективности существующим методам диагностики фасциолеза, используя стандартизированные методы исследований.
В целях сравнительной оценки эффективности предложенных методов для диагностики фасциолеза испытывали существующие флотационные и комбинированные методы Щербовича, Вереты, Маллори, Котельникова-Хренова, Вишняускаса, Вольфа, Сафиуллина, Котельникова-Вареничева и Демидова. В качестве контроля использовали седиментационный метод последовательных промываний. Для стандартизации исследований в работе использовали один и тот же материал и идентичную посуду (стаканчики объемом 30 мл, центрифужные пробирки объемом 10 мл). Отстаивание и центрифугирование проб проводили в течение одного и того же времени. Удельный вес приготовленных флотационных растворов определяли с помощью денсиметра при температуре окружающей среды 20 С.
Собранные из маток гельминтов яйца фасциол закладывали в количестве 100 экз. в пробы фекалий крупного рогатого скота, равные 1 г, которые были свободны от яиц трематод. Всплывшие яйца диагностировали путем снятия их из поверхностной пленки с помощью металлической петли и подсчитывали их сначала в одной капле, а затем в 1 мл флотационной жидкости. Работали петлями с диаметром кольца 0,9 мм, подсчет яиц вели с использованием сетки Акбаева, внося на нее 0,2 мл (5 капель) поверхностной пленки. Каждую пробу исследовали 5 раз, внося в общей сложности 25 капель (1 мл) поверхностного слоя пленки. Зная количество заложенных в пробах фекалий яиц трематод, оценку осуществляли количественным методом. Все исследования проводили в десяти повторностях, а полученные результаты подвергали статистическому анализу.
Данные о сравнительной эффективности различных гельминтоовоско-пических методов диагностики трематодозов крупного рогатого скота с искусственной закладкой яиц показаны в таблице 5. Из таблицы 5 видно, что флотационные методы Щербовича с нитратом натрия, Маллори оказались не эффективными при диагностике фасциолеза у крупного рогатого скота. С помощью флотационного метода Котельникова-Хренова с нитратом свинца удалось обнаружить 1,5 % яиц фасциол. Метод Вереты в комбинации солей нитрата аммония с хлоридом натрия диагностировали в среднем 0,7 % яиц фасциол, а методом Вишняускаса - 0,5 % трематод.
Несколько выше была диагностическая эффективность комбинированных методов Щербовича и Вольфа. Так, при использовании в качестве флотационной жидкости сульфата магния методом Щербовича было обнаружено в среднем 2,1 % яиц фасциол, а при использовании тиосульфата натрия - 2,8 %. Метод Вольфа с карбонатом калия выявил в среднем 2,2 % яиц фасциол.
Наиболее высокую диагностическую эффективность проявили те гельминтоовоскопические методы, у которых в состав флотационной жидкости входит хлорид цинка. Так, метод Сафиуллина с использованием комбинированной флотационной жидкости, в состав которой входят насыщенные растворы хлорида цинка и хлорида натрия в соотношении 1:2 способствовал обнаружению в среднем 14 % заложенных яиц фасциол. Диагностическая эффективность комбинированного метода Котельникова Вареничева была намного выше по сравнению с другими методами. При использовании его выявлено в среднем 20 % яиц фасциол в 1 мл поверхности взвеси. Широко применяемый на практике для диагностики трематодозов седиментационный метод последовательных смывов проявил сравнительно низкую диагностическую эффективность, им выявлено в среднем 1,0 ±0,03 % яиц фасциол. Аналогичные результаты получили и при использовании комбинированного метода Демидова, при котором выявлено в среднем 1,4±0,05 % яиц фасциол.
Сезонная динамика и продолжительность сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота
Из рисунка видно, что животные в июне и июле были свободны от фасциол. Об этом свидетельствовали результаты проведенных комплексных исследований. Комплементсвязывающиеся антитела, улавливаемые с фасциоловым антигеном, начали выявляться при исследовании в августе месяце. В этот период реагировали 2 теленка из 35, что составляет 5,7 %, а титры антител у них равнялись 1:5. При последующем исследовании в сентябре количество реагирующих животных увеличилось до 11,2 % (4 гол.), а титры антител равнялись 1:5 - 1:10. В октябре последовало дальнейшее увеличение реагирующих на фасциолез животных и составило 14,3 % (5 гол.). В ноябре интенсивность заражения животных продолжала нарастать, причем диагноз в этот период был установлен и копроовоскопически. В фекалиях у 3 голов (8,6%) были обнаружены яйца фасциол. Комплементсвязывающиеся антитела выявлены у 8 (22,8 %) телят, что на 8,5 % больше, чем в октябре месяце. Количество зараженных животных увеличивалось до января месяца. В этот период количество больных животных, выявленных серологическим методом и гельминтоовоскопией, равнялось 34,4 % (11 гол.) и 25,7 % (9 гол.) соответственно. В феврале отмечали тенденцию не к увеличению, а к незначительному снижению. У телят контрольной группы на протяжении опыта фасциолез не был установлен. Сопоставление результатов серологического и гельминтоовоско-пического исследований показывает, что комплементсвязывающиеся антитела в сыворотке крови начали выявляться уже в августе месяце, а яйца фасциол были обнаружены только в ноябре, причем количество таковых животных, выявленных этим методом в этот период было меньше на 14,2 %, а в декабре на 9,3 % по сравнению с РСК. Как уже отмечалось, максимальное количество зараженных фасциолезом животных было в январе, причем у 8,5 % (3 гол.) животных в крови были обнаружены антитела, а в феврале месяце интенсивность инвазии начала снижаться, об этом свидетельствовали данные как серологического, так и копроовоскопического исследования. Следовательно, у 5 телят фасциолы еще не достигли половозрелой формы и не выделяли яйца фасциол.
С практической точки зрения представлял интерес вопрос о продолжительности сохранения фасциол в организме крупного рогатого скота при естественном их заражении. Для изучения этого вопроса в период с октября 1999 года по март 2001 года проводили опыт на 200 коровах в КП «Кунгер» Атнинского района. В данном хозяйстве животные были хорошо обеспечены кормами, а рацион их сбалансирован по основным питательным веществам. Коровы также получали в стойловый период витамины и минеральные добавки. Хозяйство было неблагополучным по фасциолезу. Об этом свидетельствовали данные, полученные при убое животных на мясокомбинате. В желчных протоках печени у 5 % животных были обнаружены фасциолы (1-12 экз.). В последние 5 лет коров не дегельминтизировали. В период наблюдений за животными (1999-2000 гг.) в хозяйстве резко уменьшилась популяция промежуточного хозяина - малого прудовика, в связи с тем, что эти годы были сильно засушливыми. За время опыта животные подвергались копрологическим и серологическим исследованиям. Пробы фекалий исследовали по методу последовательных промываний. В сыворотке крови определяли комплементсвязывающиеся антитела с фасциоловым антигеном в РСК. Первое исследование животных проводили в октябре 1999 года. Результаты копрологических и серологических исследований отражены на рис.4. При гельминтоовоскопическом исследовании крупного рогатого скота в октябре месяце 1999 года яйца фасциол не были выявлены, однако в сыворотках крови у 38 коров (19 %) были обнаружены комплементсвязывающиеся антитела.
В феврале 2000 года положительные показания РСК сохранили 17 животных, но яйца фасциол выделялись только у 9 голов (4,5 %). При этом методом последовательных промываний диагностировали яйца фасциол у 7 животных. результаты серологического исследования __ результаты копрологического исследования Рис. 4 Динамика угасания антител и выведения из организма крупного рогатого скота фасциол при спонтанном заражении Перед выгоном на пастбище в конце апреля 2000 года из числа ранее реагирующих, РСК с фасциоловым антигеном была положительной у 12 голов, а яйца фасциол обнаружили только у 6 коров (3 %). В конце июля 2000 года в РСК позитивные показания сохранили 9 голов, а яйца продолжали выделяться только у 3-х животных. В октябре этого же года в РСК реагировали положительно 5 голов, а яйца фасциол выделялись только у 2-х ранее инвазированных животных. В январе 2001 года позитивные показания РСК сохранили 2 головы, а яйца фасциол были выявлены у одной коровы. В конце марта 2001 года у всех животных результаты копрологического исследования были отрицательными, но положительные показания РСК с фасциоловым антигеном сохранились. Таким образом, для объективной прижизненной оценки эпизоотической ситуации по фасциолезу в стаде необходимо использовать серологический метод, потому что не все молодые фасциолы попавшие в организм достигают половозрелой формы и выделяют яйца фасциол. Кроме того, исследования показали, что при слабой инвазированности коров фасциолами возможно самовыздоровление. Организм крупного рогатого скота освобождается от половозрелых гельминтов в различные сроки, начиная от 3-х до 17 месяцев. Возможно, это обусловлено преждевременным выделением или гибелью фасциол под воздействием защитных реакций организма хозяина (А.И. Маркарян, 1960).
