Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы б
2.Собственнные исследования 23
2.1. Материал и методы 23
2.2. Результаты исследования 25
2.2.1.Состав микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у агельминтного, клинически здорового крупного рогатого скота 25
2.2.2. Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота при фасциолезе 53
2.2.3 Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота после освобождения их от фасциол 78
2.2 Акомплексная терапия животных при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий 82
Заключение 101
Выводы 105
- Результаты исследования
- Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота при фасциолезе
- Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота после освобождения их от фасциол
- Акомплексная терапия животных при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий
Введение к работе
Актуальность темы, В связи с изменением экономической системы в Российской Федерации значительно уменьшилось поголовье крупного и мелкого рогатого скота, что снизило интенсивность использования пастбищ. Тем не менее все еще во многих регионах РФ широко встречаются гельминтозы, в частности фасциолез (В.В. Кузьмичев, 1997; О.Р. Еремеева, 2002; Н.Н. Багманова, 2003; М.В. Курочкина, 2003 и др.)
Работами зарубежных (М. Ardehali, Н. Derakschan, 1975; A. Damm, 1971 и др.) и отечественных (Д.И. Панасюк, 1978-1984; Ю.Ф. Петров, 1988-2003; И.Б. Сорокина, 1987; В.В. Кузьмичев, 1998; О.Р. Еремеева, 2002 и др.) исследователей установлено, что под влиянием гельминтов в организме хозяина формируется паразитоценоз, сочленами которого являются гельминты на различных стадиях развития, бактерии, грибы и простейшие, в результате чего возникают ассоциативные болезни. Однако данный вопрос при фасциолезе крупного рогатого скота слабо изучен.
Широкое распространение ассоциативных болезней гельминто-протозойно-бактерийной этиологии требует разработки комплексной терапии животных. В данном направлении весьма перспективные работы проведены Ю.Ф. Петровым (1988-2003), В.В. Кузьмичевым (1997-1998), ЗА. Янгуразовой (1998), 0,Р. Еремеевой (2002) и др.
Цели и задачи исследований. Огромный ущерб, причиняемый животноводству ассоциативными болезнями, вызываемыми паразитированием фас-циол и бактерий, требует разработки комплексной терапии животных, для чего необходимо знать динамику формирования паразитоценозов в организме хозяина. Для решения данного вопроса мы считали необходимым выполнить следующие задачи:
определить количественный и качественный состав микрофлоры кишечника агельминтного крупного рогатого скота 13-20-месячного возраста;
определить динамику микрофлоры тонкого и толстого отделов кишечника при экспериментальном и спонтанном фасциолезе в зависимости от интенсивности инвазии;
определить динамику обсемененности паренхиматозных органов бактериями при экспериментальном и спонтанном фасциолезе;
определить динамику микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов после освобождения животных от фасциол;
разработать комплексную терапию крупного рогатого скота при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий.
Научная новизна. Установлено, что микрофлора тонкого и толстого кишечника крупного рогатого скота в 16-20-месячном возрасте стабилизируется, здесь индигенная микрофлора составляет 95-97,5%, факультативная - 2,5 - 5%.
Выявлено, что мигрирующие молодые фасциолы инокулируют в печень животных стрептококков, стафилококков, E.coli, реже протей и клостридий, которые здесь интенсивно развиваются, в результате чего возникает ивазионно-инфекционной этиологии гепатит, холангит, холецистит. Установлено, что в
кишечнике инвазированных фасциолами животных интенсивно развивается факультативная микрофлора (патогенные стрептококки, стафилококки, E.coli, протей, клостридии, грибы), но угнетается индигенная микрофлора (лактоба-циллы, бифидобактерии, бактероиды, непатогенные кокковые формы). Отмеченные изменения микрофлоры характерны для дисбактериоза кишечника.
Выявлено, что процесс восстановления микрофлоры кишечника после дегельминтизации является длительным (более 90 дней). Нами разработан комплексный метод лечения животных при ассоциативной болезни, включающий дегельминтизацию, применение пробиотиков и иммуностимуляторов, который позволяет значительно сократить сроки выздоровления животных и повысить их продуктивность.
Практическая ценность. Разработан и внедрен в производство комплексный метод лечения животных при ассоциативной болезни гельминто-бактерийной этиологии, состоящий из трех этапов: дегельминтизация + дача животным пробиотиков + инъекция иммуностимуляторов.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и одобрены на: научных конференциях ВОГ РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (М., 2001, 2002, 2003, 2004), научно-практических конференциях Ивановской ГСХА (Иваново, 2002, 2004), Костромской ГСХА (Кострома, 2002,2003,2004).
На защиту выносятся следующие положения:
-динамика микрофлоры кишечника агельминтного, клинически здорового крупного рогатого скота 13-20-месячного возраста;
-динамика формирования паразитоценозов в печени, тонком и толстом кишечнике крупного рогатого скота при экспериментальном и спонтанном фасциолезе;
-динамика микрофлоры кишечника крупного рогатого скота после освобождения их от фасциол;
-комплексный метод лечения животных при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий.
Результаты исследования
У жвачных животных микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника представлена индигенной (лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды, непатогенные кокковые формы и др.) и факультативной микрофлорой (протей, клостридии, стрептококки, стафилококки, кишечные палочки, грибы и др.). Причем, соотношение индигенной и факультативной микрофлоры кишечника у здоровых животных составляет 95-97,5%:5-2,5% (H.W. Smith, 1965; А.В. Сизова, 1974 и др.). В наших опытах у контрольного, агельминтного, клинически здорового крупного рогатого скота 13-20-месячного возраста общее число бактерий и грибов Б тощей кишке колеблется в пределах 16,8+0,06 - 24,5+0,17 Logio КОЕ микробных тел в 1 г содержимого, в том числе стафилококков 2,2+0,31-2,9+0,28; стрептококков - 2,5+0,22 - 3,7+ 0,41; кишечных палочек - 1,5+ 0,34 -3,0± 0,23; протея - 0,1 +0,01 - 0,1 +0,31; лактобацилл - 3,8+ 0,32 - 5,3±0,24; бифидобактерии - 4,8+0,33 - 6,4+0,21; бактероидов 0,5+ 0,05 - 1,5± 0,11; клостридий - 0,1+0,05 - 0,2+0,03; грибов - 1,3+0,07 - 1,4+0,23 Logio КОЕ/г. Наименьшее число микроорганизмов в тощей кишке содержится у животных 13-16-месячного, максимальное число - у животных 17-20-месячного возраста (табл.1, рис. 1-18). В ободочной кишке у клинически здоровых, агельминтных животных общее количество бактерий и грибов колеблется в пределах от 26,7 +0,34 до 32,4 ±0,23 Logio КОЕ микробных тел в 1 г содержимого, в том числе стафилококков 3,7+0,21- 4,5+0,11; стрептококков - 2,2+0,23 - 2,8+ 0,23; кишечных палочек - 3,9± 0,03 - 5,0+ 0,11; протея - 0,1 +0,01 - 0,2 +0,12; лактобацилл - 7,0+ 0,31 - 7,6+0,34; бифидобактерии - 6,4+0,32 - 7,8+0,14; бактероидов - 2,0+ 0,05 - 2,6± 0,02; клостридий - 0,1±0,01 - 0,3+0,02; количество грибов и дрожжеподобных грибков - 1,3+0,04 - 1,6+0,21 Logio KOE/r (табл.2, рис. 1-18 ). Следовательно, наименьшее число микробов в ободочной кишке регистрируется у животных 13-15-месячного, умеренное - у 16-18-месячного, наибольшое - у 19-20- месячного возраста. Эти показатели соответствуют физиологическим нормам для крупного рогатого скота при рационе, состоящем из сема, сенажа, силоса и концентратов (H.W. Smith, 1965; А.В.Сизова, 1974). Облигатная (индигенная, нормальная) микрофлора в кишечнике клинически здоровых животных представлена бифидобактериями, лактобациллами, бактероидами, непатогенными кишечными палочками, которая составляет от 95,0% до 97,5% от общего числа бактерий. В зависимости от возраста меняется процентное соотношение отдельных групп микробов. Наименьшее число бифидобактерий, лактобацилл, бактероидов содержится в кишечнике у агельминтного крупного рогатого скота 13-16-месячного, максимальное - 17-20-месячного возраста. Причем, содержание лактобацилл, бактероидов, бифидобактерий в толстом отделе кишечника - в 1,5-2 раза превышает таковое тонкого отдела кишечника.
Число стафилококков, непатогенных кишечных палочек в тонком и толстом отделах кишечника с возрастом животных существенно не меняется. Факультативная микрофлора кишечника клинически здорового крупного рогатого скота представлена условнопатогенными стафилококками, стрептококками, эшерихиями, протеем, клостридиями и грибами. Ее количество с возрастом существенно не меняется и составляет от 2,5% до 5% от общего числа бактерий. С возрастом животных происходят существенные сдвиги в качественном составе микрофлоры. Так, с возрастом меняется соотношение между общим числом стафилококков, с одной стороны, и стафилококков, образующих токсины и патогенных для белых мышей, с другой. Общее количество патогенных стафилококков в кишечнике агельминтного крупного рогатого скота не превышало 35%. Наименьшее число токсинообразующих стафилококков содержалось в кишечнике у животных 13-15-месячного (25-27%), умеренное - у 16-17- месячного (28-30% от общего количества их), наибольшее - у жвачных 18-20-месячного возраста (34,2%). При бактериологическом исследовании из кишечника клинически здоровых, агельминтных животных нами было выделено и изучено 100 культур стафилококков. Чаще мы выделяли следующие виды стафилококков: Staphylococcus cereus flavus (происследовано 30 культур), Staph.saprophyticus (30), Staph.epidermidis (20), реже были изолированы Staph.albus (6), Staph.citreus (9), Staph.aureus (5). Из них наиболее патогенными были Staph.citreus (100% изученных культур вызывали гибель белых мышей), Staph.aureus (80% культур вызывали гибель мышей), Staph.albus (50% культур)(табл.З). Вид Staph.epidermidis был слабо патогенным (только 15% изученных культур вызывали гибель белых мышей), Staph.cereus flavus, Staph.saprophyticus - были непатогенными для белых мышей. Из кишечника здоровых, агельминтных животных нами было всего изолировано и изучено 115 культур стрептококков. Чаще из тонкого и толстого отделов кишечника мы изолировали Streptococcus jodophilus (15 культур), Str.faecium (17 культур), Str.faecalis (16), Str.lactis (28), реже Str.acidominus (2), Str.casei (1), Str.citrovorus (2), Str.equinus(l), Str.termophilus (4), Str.cinereus(3), Str. equi (2), Str.bovis(5), Str.epidemicus(6), Str.pyogenes (4), Str.haemoliticus (3), Str.inulinaceus (2), Str.viridans (4).Streptococcus jodophilus, Str.faecium, Str.faecalis Str.acidominus, Str.casei, Str.citrovorus, Str.equinus, Str.termophilus, Str.cinereus, Str.lactis не обладали гемолитическими свойствами, а у остальных семи видов они были хорошо выражены.
Наибольшее число гемолитических стрептококков изолировали у животных 13- 14-месячного (22,3-23,1%), умеренное-у 15-17- месячного (10,1-10,5%), наименьшее - у 18-20- месячного возраста (8,7-8,9%). Общее количество гемолитических видов в тощей и ободочной кишке колебалось от 21,9% до 22,3%. Из них наиболее патогенными были Streptococcus bovis, Str. equi и Str.pyogenes (100% изученных культур вызывали гибель белых мышей), умеренной патогенностью обладали Str.inulmaceus (50% культур вызывали гибель лабораторных животных) и Str.haeraoliticus (33% культур), слабой патогенностью обладали Str.epidemicus(25%), Str.viridans (25%). Остальные культуры (10 видов) при внутрибрюшинном заражении лабораторных животных не вызывали гибель мышей (табл.4). Численный состав эшерихий в кишечнике агельминтного крупного рогатого скота является относительно стабильным. Из кишечника агелъминтных животных мы изолировали и изучили 100 культур E.coli, которых по О-антигену отнесли к серовариантам 08, 09, 015, 078, 0101, 0117, 0141, 086. Серогруппы 08, 09, 078, 086, 0117 были патогенными для белых мышей (табл.5). Общее число патогенных для лабораторных животных Escherichia coli составило 24% от общего числа патогенных палочек. Наиболее патогенными были следующие серогруппы E.coli: 08, 09, 078, 086 (100% гибель белых мышей); слабой патогенностью обладала E.coli 0117 (20% гибель лабораторных мышей). Серогруппы 015, 0101, 0141 оказались непатогенными. Наибольшее число патогенных серогрупп E.coli мы регистрировали у бычков 13-15-месячного возраста (19,1-20,1%), умеренное - у 16-17-месячного (17,3-17,5%), наименьшее - у 18-20- месячного возраста (15%). В наших опытах у агелъминтных животных численный состав протея (Proteus vulgaris) и клостридий (Clostridium) с возрастом значительно не менялся. Из кишечника клинически здоровых бычков нами чаще были изолированы непатогенные Cl.butyricum, Cl.pygmeum, реже - патогенные Cl.perfrmgens. Состав грибов (рода Aspergillus, Penicillum, Candida) в кишечнике агельминтного крупного рогатого скота является достаточно стабильным. Количество грибов с возрастом не меняется и колеблется в тощей кишке в пределах 1,3+0,07 - 1,4+0,23 Logio КОЕ/г, в ободочной - 1,3+0,04 - 1,б±0,21 Logio КОЕ/г. Таким образом микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника у крупного рогатого скота 16-20-месячного возраста стабилизируется, где индигенная микрофлора составляет 95 - 97,5%, а факультативная - 5-2,5%. В наших опытах паренхиматозные органы у агельминтных, клинически здоровых животных 13-20-месячного возраста в основном были свободны от микробов. Из исследованных 24 бычков лишь у двух из желчи мы изолировали единичные экземпляры Staphylococcus cpidermidis (1 культура), Staph.albus (1), E.coli (1 культура 086)(табл.б). Изолированная культура стафилококков Staph.epidermidis была непатогенна для белых мышей, a Staph.albus вызывала 50%-ную гибель мышей. E.coli серогруппа 086 при внутрибрюшинном введении суточной культуры по 500 млн микробных тел вызвала гибель лабораторных животных на вторые сутки (100%-ная гибель).
Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота при фасциолезе
Для изучения динамики микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов при фасциолезе мы провели два опыта. В первом опыте использовали 39 агельминтных бычков 13-месячного возраста, их разделили на 2 группы, по 18 голов в каждой. Бычкам первой группы скормили однократно по 150 адолескариев фасциол, 18 бычков второй группы были контрольными, они адолескариев трематод не получали. Через 90 дней инвазии бычков опытной группы дегельминтизировали (фенбендазолом однократно по 40 мг/кг по ДВ). Убой животных (по 3 головы) из опытной и контрольной группы проводили до инвазии, на 30- 60- 90 сутки инвазии, на 30- 60- 90 сутки дегельминтизации. В нашем опыте у животных опытной группы (150 адолескариев), убитых на 30 сутки инвазии, в тощей кишке общее число бактерий и грибов по сравнению с показателями контрольных, агельминтных бычков увеличилось в 1,02 раза (Р 0,05), в том числе стрептококков - в 1,3 раза (Р 0,05), кишечных палочек - в 1,29 раза, протея - в 10 раз, клостридий - в 10 раз, грибов - в 1,5 раза, но уменьшилось количество стафилококков - в 1,2 раза (Р 0,05), лактобацилл - в 1,57 раза, бифидобактерий - в 1,19 раза, бактероидов - в 1,5 раза. В дальнейшем состав микрофлоры тощей кишки у больных животных существенно ухудшился. Так, на 60-90 сутки инвазии в тощей кишке больных животных общее количество бактерий и грибов увеличилось соответственно в 1,08 (Р 0,05) и 1,1 раза, в том числе стрептококков - в 1,5-1,75 раза, кишечных палочек - в 1,5-1,78 раза, протея-в 15-21 раз, клостридий - в 14-21 раз, грибов - в 1,23-1,35 раза, но уменьшилось количество стафилококков - в 1,4-1,6 раза, лактобацилл - в 1,8-2,1 раза, бифидобактерий - в 1,21-1,7 раза, бактероидов - в 1,6-1,8 раза (таблица 7 , рис. 1-18). Аналогичные изменения произошли со стороны микрофлоры ободочной кишки у инвазированных фасциолами животных. Так, на 30 сутки инвазии в ободочной кишке больных животных общее число бактерий и грибов увеличилось по сравнению с контролем в 1,01 раза (Р 0,05), в том числе стрептококков - в 1,31 раза, кишечных палочек - в 1,25 раза, протея - в 18 раз, клостридий - в 19 раз, грибов - в 1,3 раза, но уменьшилось количество стафилококков в 1,2 раза, лактобацилл - в 1,6 раза, бифидобактерий - в 1,23 раза, бактероидов - в 1,3 раза. На 60-90 сутки инвазии общее число бактерий и грибов увеличилось соответственно в 1,05 и 1,1 раза (Р 0,05), в том числе стрептококков - в 1,6-1,8 раза, кишечных палочек - в 1,4-1,6 раза, протея - в 26-35 раз, клостридий - в 27-40 раз, грибов в 1,4-1,5 раза, но уменьшилось количество стафилококков - в 1,4-1,6 раза, лактобацилл - в 1,7-2,1 раза, бифидобактерий - в 1,52-1,71 раза, бактероидов - в 1,5-1,7 раза (таблица 8, рис.1-18 ).
Факультативная микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника у больных фасциолезом животных представлена стрептококками, кишечной палочкой, клостридиями, протеем, грибами, а индигенная микрофлора -лактобациллами, бифидобактериями, бактероидами и непатогенными кокковыми формами. У контрольных, агельминтных животных соотношение индигенной и факультативной микрофлоры кишечника составила соответственно 95-97,5 % на 2,5-5 %, тогда как у больных фасциолезом животных на 30 сутки инвазии она составила 90-92,5 % на 7,5-10 %, на 60 сутки - 88,5-90 % на 10-11,5 %, на 90 сутки 87,5-89 % на 11-12,5 %. Из кишечника больных животных мы изолировали и изучили 163 культуры стафилококков, которых отнесли к видам: Staphylococcus aureus -41 культура, Staph, citreus -36 культур, Staph, albus - 36 культур, Staph, saprophyticus -22 культуры, Staph, epidermidis - 19 культур, Staph, cereus flavus - 9 культур. У бычков, убитых на 30 сутки патогенные стафилококки составили 44%,на 60 сутки-66%,на 90 сутки-76%. Из изученных культур наиболее патогенными были Staph, citreus (вызывали 100% гибель мышей), Staph, albus (74-100%), Staph, aureus (100%). Вид Staph, epidermidis обладал умеренной патогенностью (20-45% гибель мышей). Виды Staph, saprophyticus и Staph, cereus flavus были непатогенными для белых мышей (табл.9). Следует отметить, что наименьшее число токсинообразующих стафилококков мы изолировали из кишечника животных на 30 сутки инвазии (56,7%), умеренное число - на 60 сутки (69,2%), наибольшее - на 90 сутки (84,3%). Из кишечника больных фасциолезом животных изолировали и изучили 212 культур стрептококков, которых отнесли к следующим видам: Streptococcus faecal is - 8 культур, Str. faecium - 16 культур, Str. lactis - 18 культур, Str. cinereus - 1 культура, Str. bovis - 28 культур, Str. equi - 16 культур, Str. inulinaceus - 20 культур, Str. viridans - 21 культур, Str. pyogenes - 37 культур, Str. jodophilus - 7 культур, Str. epidemicus — 25 культур, Str. termophilus - 2 культуры, Str. haemolyticus - 13 культур. У бычков, убитых на 30 сутки инвазии, патогенные стрептококки составили 73 %; на 60 сутки - 75,1%; на 90 сутки - 89,2 %. Патогенными были Str. bovis, Str. equi, Str. pyogenes (вызывали 100 % гибель мышей), Str. haemolyticus (75-100%), Str. inulinaceus (75-100%), Str. viridans, Str, epidemicus (50-100% гибель), умеренной патогенностью Str. faecium (20%). Остальные культуры были не патогенны для белых мышей (табл.10).
Следует отметить, что наименьшее количество стрептококков, вызывающих гемолиз, мы изолировали из кишечника животных на 30 сутки инвазии - 54%, наибольшее - на 60-90 сутки-80,1-89,9%. Из тощей и ободочной кишок больных фасциолезом животных мы изолировали и изучили 132 культуры Е. coli, которых по О -антигену отнесли к серовариантам 015, О101, 0141, 0117, 08, 09, 078, 086. Серогруппы 0117, 08, 09, 078, 086 вызывали гибель белых мышей, остальные три (015, О101, 0141) были непатогенны. У бычков убитых на 30 сутки инвазии, патогенные кишечные палочки составили 29, 1 %, на 60 сутки - 44%, на 90 сутки -61% (табл.11). В наших опытах у больных фасциолезом животных численный состав протея (Proteus vulgaris) и клостридий (Clostridium) на 30-60-90 сутки инвазии резко увеличивался. Из кишечника больных животных, кроме непатогенных CI. butyricum, CI. pygmeum, нами были изолированы на 30-60-90 сутки инвазии CI. perfringens. У шести животных, убитых на 30-60 сутки инвазии, из паренхимы печени изолировали соответственно 166 и 163 экземпляров молодых фасциол (в матке отсутствовали яйца), а у трех убитых животных на 90 сутки инвазии из желчного пузыря и желчных ходов выделили 148 экз. половозрелых фасциол. Следовательно, приживаемость фасциол в нашем опыте составила 35, 33%. На 30 сутки инвазии в 1 мл желчи больных животных содержалось 91,1±0,33 тыс. микробных тел (в том числе Е. coli - 47,6±0,01, стафилококков 37,4±0,12, стрептококков 6,1±0,2 тыс. микробных тел), на 60 сутки инвазии общее количество микроорганизмов составило 467,8±0,32 тыс. микробных тел (Е. coli - 127,1±0,2, стафилококков 309,1±0,01, стрептококков 31,7±0,11 тыс. микробных тел); на 90 сутки общее количество микроорганизмов составило 979,7±0,43 тыс. микробных тел (Е. coli -318,1 ±0,21, стафилококков 581,2±0,01, стрептококков 80,1±0,17 тыс. микробных тел). Следовательно, по мере нарастания морфофункциональных изменений со стороны печени и желудочно-кишечного тракта у больных фасциолезом животных происходит усиление обсемененности желчи бактериями при одновременном нарастании видового состава микробов (табл.12, рис.28 ). Во втором опыте мы использовали 80 коров 5-7-летнего возраста, из которых 65 были спонтанно инвазированы фасциолами в различной степени интенсивности инвазии. Опыт проводили в декабре-январе в хозяйствах Комсомольского района. В нашем опыте у свободных от фасциол животных в тощей кишке общее число бактерий и грибов 16,1+0,5 log )0 КОЕ/г, в том числе стафилококков 2,5±0,22, стрептококков 2,2 ± 0,31, E.coli 1,5±0,34; протея 0,1 ±0,01; лактобацилл 3,8±0,32; бифидобактерий 4,8±0,33; клостридий
Динамика микрофлоры кишечника и паренхиматозных органов у крупного рогатого скота после освобождения их от фасциол
В разделе «Материал и методы исследований» мы отмечали, что спустя 90 дней после одноіфатной инвазии по 150 адолескариев фасциол подопытных животных дегельминтизировали фенбендазолом (по 40 мг/кг по ДВ однократно с кормом, индивидуально). Работами А.Ю. Большаковой (1994); А.Ю. Гудковой (1999); З.Р. Мухаммедова (2002); О.Р. Еремеевой (2002); Ю.Ф. Петрова (2003) и других доказано, что применение фенбендазола не вызывает изменений качественного и количественного состава микрофлоры кишечника у млекопитающих. В нашем опыте у опытных животных, убитых через 30 дней после дачи фенбендазола, в печени отсутствовали живые фасциолы, но в некоторых средних и крупных желчных ходах мы находили яйца и фрагменты погибших трематод. В тощей и ободочной кишках опытных животных за 30 дней после освобождения от фасциол произошли существенные изменения количественного и качественного состава микрофлоры. Так, в тощей и ободочной кишках переболевших животных по сравнению с предыдущим периодом (через 90 дней инвазии) количество стрептококков уменьшилось соответственно в 1,2 и 1,3 раза, кишечных палочек - 1,2 раза, протея в 1,75 и 2,9 раза, грибов - в 1,1 и 1,05 раза, клостридий - 1,9 и 2,7 раза, но увеличилось число стафилококков в 1,2 и 1,1 раза, лактобацилл - в 1,6 и 1,5 раза, бифидобактерий 1,1 и 1,15 раза, бактероидов - в ltl и 1,2 раза. Несмотря на существенные изменения количественного и качественного состава микрофлоры кишечника у переболевших животных он все еще отличается от показателей контрольных, интактных животных (табл. 15,16.). В кишечнике переболевших животных индигенная микрофлора составляет 90,2%, факультативная 9,8%. На 60 сутки лечения у переболевших фасциолезом животных состав микрофлоры стабилизировался. Тем не менее у дегельминтизироваиных животных в тощей и ободочной кишках число стафилококков было соответственно в 1,2 и 1,1 раза, лактобацилл - в 1,1 и 1,2 раза, бифидобактерий - в 1,1 и 1,2 раза, бактероидов - в 1,3 и 1,2 раза меньше, а стрептококков было в 1,01 и 1,1 раза, кишечных палочек в 1,2 и 1,1 раза, протея - в 7 и 4,5 раза, клостридий в 7 и 5. раз, грибов - в 1,1 и 1,12 раза больше показателей интактных, контрольных животных (табл. 15,16.). В кишечнике переболевших животных индигенная микрофлора составляет 90,5%, факультативная 9,5%.
На 90 сутки лечения микрофлора кишечника переболевших фасциолезом животных приблизилась к показателям интактных бычков. Тем не менее количественный состав индигенной и факультативной микрофлоры тонкого и толстого кишечника по некоторым показателям все еще отличается от контрольных животных (табл. 15,16.). В кишечнике переболевших животных индигенная микрофлора составляет 93,5%, факультативная 6,5%, Таким образом, после освобождения от фасциол микрофлора кишечника переболевших животных постепенно улучшается. Однако на 90 сутки лечения микрофлора кишечника по некоторым показателям все еще отличается от таковых интактных животных. Данные таблицы 12 свидетельствуют, что после освобождения от фасциол постепенно снижается обсемененность желчи бактериями. Так, на 30 сутки дегельминтизации в 1мл желчи из желчного пузыря переболевших животных мы нашли 387,36±0,25 млн. микробных тел, на 60 сутки 105,61±0,13 млн./мл, на 90 сутки 8,9±0,03 млн./мл. Следовательно, на 90 сутки лечения полного освобождения печени от бактерий не происходит. 2.2.4. КОМПЛЕКСНАЯ ТЕРАПИЯ ЖИВОТНЫХ ПРИ АССОЦИАТИВНОЙ БОЛЕЗНИ, ВЫЗВАННОЙ ПАРАЗИТИРОВАНИЕМ ФАСЦИОЛ И БАКТЕРИЙ. Данные литературы (Ю.Ф. Петров, 1988; И.Б. Сорокина, 1987; В.В. Кузьмичев, 1988; О.Р. Еремеева, 2002 и др.) и результаты наших собственных исследований, изложенных в разделах 2.2.1. - 2.2.2. - 2.2.3., свидетельствуют, что при инвазии фасциолами в организме млекопитающих формируется микропаразитоценоз и возникает ассоциативное заболевание гельминто-бактерийной этиологии. У больных ассоциативной болезнью животных в желудочно-кишечном тракте возникает дисбактериоз, наблюдается сильная сенсибилизация организма хозяина, вследствие чего угнетается иммунная система (В.В. Саушкин, 2000; Э.И. Рехвиашвили, 2002; Н.Н. Багманова, 2003; М.В. Курочкина, 2003 и др.). Для лечения животных, больных ассоциативной болезнью гельминто-бактерийной этиологии, первая группа авторов (И.Б. Сорокина, 1987; Ю.Ф. Петров, 1988; В.В. Кузьмичев, 1997 и др.) рекомендует использовать антимикробные препараты (сульфаниламиды, нитрофурановые, антибиотики), антгельминтики и пробиотики, а вторая группа авторов (А.Ю. Гудкова, 1999; О.Р. Еремеева, 2002; и др.) - антгельминтики и пробиотики, тогда как третья группа (В.В. Саушкин, 2002; Э.И. Рехвиашвили, 2002 и др.) -антгельминтики и иммуностимуляторы. Учитывая результаты исследований вышеперечисленных авторов, мы решили разработать комплексный метод лечения животных при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий, включающий применение иммуностимуляторов, антгельминтиков и пробиотиков. Для чего в двух хозяйствах Комсомольского района провели два опыта. В первом опыте использовали 100 дойных коров, 5-7-летнего возраста, из которых 25 животных были свободны от трематод. У остальных 75 коров в 1 г фецес содержалось в среднем 24,8 ± 0,12 экз. яиц фасциол, минимальное число — 4 экз., максимальное - 54 экз.
Инвазированных животных разделили на 3 группы (по 25 голов). 25 животных второй группы были инвазионным контролем, их не дегельминтизировали, они пробиотики и иммуностимуляторы не получали. 25 животных третьей группы, инвазированные фасциолами, дегельминтизировали фенбендазолом (с кормом однократно по 40 мг/кг по ДВ), на 3-4-5-6-7-8-9-10-11-12 сутки им давали проби отик бифидобактерин по 0,2 г/кг массы тела, а на 10 и 17 сутки им подкожно вводили иммуностимулятор полиоксидоний по 10 мг на 1 кг массы тела. 25 коров четвертой группы (больные фасциолезом) дегельминтизировали фенбендазолом, но они пробиотики и иммуностимуляторы не получали. В нашем опыте средняя живая масса коров первой, контрольной агельминтной группы составила 423 ± 10,6 - 425 ± 9,2 кг, среднесуточный удой за 120 дней опыта (с 20 декабря 2001 года по 20 марта 2002 года) - 7,2 - 7,5 кг, содержание гемоглобина - 11,66 ± 0,15 - 12,54 ± 0,22 г%, эритроцитов - 11,68 ± 0,27 - ! 2,18 ± 0,31 млн/мкл, лейкоцитов - 9,18 ± 0,18 - 9,44 ± 0,30 тыс/мкл, общего белка - 7,96 ± 0,23 - 8,37 ± 0,33 г%, бактерицидная активность сыворотки крови - 60,8 ± 1,32 - 61,4 ± 1,38 мкг/мкл, лизоцимная активность сыворотки крови - 1,62 ± 0,17 - 1,72 ± 0,22 мкг/мкл, р-лизинная активность сыворотки крови - 16,6 ± 0,27 - 17,01 ± 0,12% (табл.17, рис.3 0-37). Отмеченные показатели не выходят за пределы физиологических границ для коров данной породы. Все 25 коров второй группы были инвазированы фасциолами, в 1 г фецес их содержалось в среднем по 12,4± 0,44 - 14,8 ±0,12 экз. яиц фасциол. Средняя живая масса коров данной группы была на 0,71 - 0,95% (Р 0,05), среднесуточный удой - на 8,22 - 12% (Р 0,05) меньше показателей первой, агельминтной группы. Кроме того, у больных коров в крови содержалось гемоглобина на 12,69 - 20,06%, общего белка - на 11,9 - 15,3% меньше, а количество лейкоцитов - на 48,94 - 57,52%, бактерицидная активность сыворотки крови- на 9,7 - 15,11%, лизоцимная активность сыворотки крови - на 9,88 - 17,9%, р-лизинная активность сыворотки крови - на 12,29 - 14,88% больше показателей контрольной агельминтной группы (табл.17, рис.30-37).
Акомплексная терапия животных при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий
Что же касается коров четвертой опытной группы (дегельминтизированы фенбендазолом, но пробиотики и иммуностимуляторы не получали), то у них живая масса, среднесуточный удой, концентрация гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего белка, бактерицидная, лизоцимная и р-лизинная активность сыворотки крови постепенно улучшалась. Тем не менее, на 90 сутки лечения по многим показателям все еще отличалась (Р 0,05) от таковых контрольных, агельминтных коров, а также показателей третьей группы (подвергнутых комплексному лечению). Второй опыт провели также в одном из хозяйств Комсомольского района. Для опыта взяли 3 коровника (расположенных в 20 м друг от друга). Все коровы в летний период выпасались на одном неблагополучном по фасциолезу пастбище. 10 животных были контрольными, их не дегельминтизировали, комплексному лечению не подвергали. 75 коров второй группы дегельминтизировали фенбендазолом (по 40 мг/кг по ДВ однократно). 75 коров третьей группы вначале дегельминтизировали фенбендазолом, после чего на 3-12 сутки им ежедневно скармливали бифидобактерин из расчета 0,2 г/кг массы тела, а на 10-17 сутки им подкожно вводили полиоксидоний из расчета 10 мг на 1 кг массы тела. Наблюдения (за 150 дней опыта) показали, что животные контрольной группы в течение всего опыта были иивазированы фасциолами, среднесуточные удои у них были худшими (5,4 - 6,0 кг), а показатели крови существенно выходили за пределы физиологических границ (табл.18,рис.ЗО-37). У коров второй группы после проведенной дегельминтизации фенбендазолом среднесуточные удои постепенно нарастали, одновременно у них улучшались гематологические показатели (табл.18,рис.30-37). Наилучшие показатели были у коров третьей группы (дегельминтизированы фенбендазолом, на 3-12 сутки получали бифидобактерин, на 10-17 сутки -полиоксидоний). На основании полученных данных следует заключить, что при ассоциативной болезни, вызванной паразитированием фасциол и бактерий, животных следует подвергать комплексному лечению, включающему дегельминтизацию, скармливание пробиотиков и инъекции и мму н остимуляторов.
За последние 30 лет в литературе появилось много работ, в которых освещены вопросы патогенеза гельминтозов, показаны характер инокуляции и активизации условнопатогенной и патогенной микрофлоры и простейших, влияние гельминтов на облигатную микрофлору хозяина (М. Ardehali, Н. Derakschan, 1975; A. Damm, 1971; Д.И. Панасюк, 1978-1984; Ю.Ф. Петров, 1988-2003; И.Б. Сорокина, 1987; М.Ш. Акбаев, 1986; Е.Ф. Мужжавлев, 1994; В.В. Кузьмичев, 1997; А.КХ Гудкова, 1999; О.Р. Еремеева, 2002 и др.). Выявлено, что под влиянием гельминтов в организме животного формируется паразитоценоз, сочленами которого являются гельминты на различных стадиях развития, патогенные и условнопатогенные бактерии, простейшие и грибы, в результате чего возникают ассоциативные болезни гельминто-протозойно-бактериальной этиологии. Лечебно-профилактические мероприятия, рекомендованные для борьбы с так называемыми «чистыми гельминтозами» без учета видового и качественного состава формирующихся в организме хозяина паразитоценозов, не дают ожидаемого результата, так как ассоциативные болезни гельминто-протозойно-бактериальной этиологии требуют комплекного подхода к организации этих мероприятий (Ю.Ф. Петров, 1988, 1994, 1997; А.Ю. Гудкова, 1999; В.В. Саушкин, 2001; Э.И. Рехвиашвили, 2002 и др.). В условиях эксперимента и производства установлено, что при фасциолезе у животных угнетается функциональная активность аденогипофиза и щитовидной железы, усиливается функция надпочечников и внутренняя секреция поджелудочной железы, возникает острый и хронический гепатит, холангит и холецистит, угнетается секреторная активность тонкого и толстого кишечника. Отмеченные морфофункциональные изменения органов и систем приводят к нарушению белкового, углеводного, жирового, водного и минерального обмена, что, в конечном итоге, нередко заканчивается гибелью инвазированного животного (И.Б. Сорокина, 1987; Ю.Ф. Петров, 1988; В.В. Кузьмичев, 1998; О.Р. Еремеева, 2002 и др.). Наши исследования, проведенные как при экспериментальном, так и при спонтанном заражении, показывают, что при фасциолезе в результате инокуляции мигрирующими молодыми трематодами в печени и желчи интенсивно развиваются патогенные стрептококки, стафилококки, E.coli, протей, иногда и CI. perfringens, что приводит к развитию инвазионно-инфекционной этиологии гепатита, холангита и холецистита. Известно, что в норме в пищеварительном тракте у клинически здоровых, агельминтных животных обитают разнообразные микроорганизмы, которые представлены облигатной (индигенной, резидентной) микрофлорой, представителями которых являются лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды, кокковые формы, и случайной (факультативной, временной, транзитной) микрофлорой, состоящей из протея, клостридий, стрептококков, стафилококков, грибов и др. Микрофлора животного представляет микробную экосистему, состав которой определяется видом и возрастом животного, микрофлорой окружающей среды (почвы, воды и кормов), физико-химическими условиями среды (H.W. Smith, 1962, 1965, 1971; В.И. Орловский и др., 1971; А.В. Сизова, 1974 и др.) Наши исследования свидетельствуют, что у крупного рогатого скота микрофлора тонкого и толстого отделов кишечника стабилизируется к 16-20-месячному возрасту и она состоит из 95-97,5% индигенной (лактобациллы, бифидобактерии, бактероиды, кокковые формы) и из 2,5 -5% факультативной микрофлоры (стрептококки, стафилококки, E.coli, протей, клостридий, грибы и др.).
Следует отметить, что у агельминтного, клинически здорового крупного рогатого скота в кишечнике состав гемолитических стрептококков колеблется в пределах 21,9%-22,3% от общего числа их, патогенных стафилококков 35%, патогенных E.coli 24%. Патогенные E.coli представлены серогруппами 08,09, 078,086. Наши исследования, проведенные на экспериментально и спонтанно зараженных животных свидетельствуют, что при фасциолезе в желудочно-кишечном тракте инвазированного животного формируется микропаразитоцсиоз, состав сочленов которого как в количественном, так и в качественном отношении существенно отличается от таковых показателей агельминтных, клинически здоровых животных. Эти изменения характеризуются: - во-первых, у зараженных фасциолами животных в тонком и толстом отделах кишечника в сотни и тысячи раз возрастает число факультативной микрофлоры, особенно протея и клостридий, и в меньшей степени патогенных стрептококков и E.coli; - во-вторых, по мере развития морфофункциональных изменений органов и систем, в кишечнике инвазированных животных начинают преобладать гемолитические стрептококки, токсинообразующие стафилококки и патогенные для белых мышей серогруппы E.coli; - в-третьих, в кишечнике инвазированнных фасциолами животных в десятки раз снижается общее число индигенной микрофлоры, в основном за счет уменьшения лактобацилл и бифидобактерий; - в-четвертых, по мере углубления морфофункциональных изменений органов и систем, у инвазированнных фасциолами животных в остром периоде болезни (1-60 сутки) соотношение индигенной, с одной стороны, и факультативной микрофлоры кишечника, с другой, составляют 88,5-90%:10-11,5%, в хроническом периоде болезни (90 и более сутки), то соответственно 87,5-89%: 11-12,5%. Отмеченные выше изменения количественного и качественного состава микрофлоры кишечника инвазированных фасциолами крупного рогатого скота характерно для дисбактериоза. Литературные (И.Б. Сорокина, 1987; Ю.Ф. Петров, 1988; В.В. Кузьмичев, 1998; и др.) и наши данные свидетельствуют, что дегельминтизация животных способствует постепенному освобождению печени от бактерий и нормализации количественного и качественного состава микрофлоры кишечника. Однако, данный процесс является длительным (более 90-120 дней, срок наблюдений), что существенно сказывается на продуктивности животных.
